雷公藤红素通过调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡

目的探究雷公藤红素(tripterine,TRI)抑制肝癌细胞(hepatocellular carcinoma,HCC)进展的新机制。方法利用不同浓度(0、0.5、2和8μmol·L-1)TRI作用于肝癌细胞,然后利用CCK-8、细胞克隆、Transwell和蛋白免疫印迹等实验方法评估细胞表型和可能机制;再利用siRNA将靶基因GSDME进行干扰,确定GSDME的作用;最后使用移植肿瘤模型验证TRI在体内抑制HCC细胞的生长的机制。结果TRI可抑制HCC细胞增殖、克隆和侵袭,促进细胞焦亡。免疫印迹结果显示,TRI处理后肝细胞癌HepG2或Hepa1-6中GSDME表达均上调,同时cleaved caspase-3和PARP也明显升高。敲除GSDME后可部分逆转TRI诱导的细胞焦亡。同时GSDME敲低后的细胞具有更强的克隆和迁移能力,且与单独的TRI治疗组相比,细胞凋亡率降低。在体内实验中,TRI抑制可HCC肿瘤生长,TRI+siGSDME组小鼠肿瘤生长速度比单独TRI治疗组快。此外,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中p-eIF2a、ATF4均升高。免疫荧光结果显示,TRI刺激后HepG2和Hepa1-6细胞中ATF4阳性细胞数呈剂量依赖性增加。结论TRI抑制肝癌细胞生长和侵袭可能与其调控ATF4/caspase-3/GSDME信号通路促进肝癌细胞焦亡有关。

基于Caspase3探讨余甘子叶提取物对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道高反应、肺泡上皮细胞活性的影响及作用机制

目的 基于胱天蛋白酶(Caspase)3探讨余甘子叶提取物对慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)大鼠气道高反应、肺泡上皮细胞活性的影响及作用机制。方法 选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组、模型(B)组、乙酰半胱氨酸颗粒(富露施,C)组、余甘子叶提取物(D)组、Caspase3抑制剂(Z-DEVD-FMK,E)组、余甘子叶提取物+Caspase3抑制剂(F)组,每组10只,对B、C、D、E、F组采用香烟发生器+脂多糖法建立慢阻肺模型,A组不建立该模型,建模成功后,C组灌胃50 g/kg富露施,D组灌胃50 mg/kg余甘子叶提取物,E组灌胃10μg/kg Z-DEVD-FMK,F组给予余甘子叶提取物联合Z-DEVD-FMK,A、B组同期给予灌胃同体积生理盐水,无创肺功能仪检测气道高反应,干湿重法测定肺体脂数(LBF)、肺含水量(LWC),苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡,免疫组化法检测肺组织中Caspase3蛋白表达。结果 与A组比较,B组气道阻力、LBF、LWC含量、肺泡上皮细胞凋亡、肺组织Caspase3蛋白表达显著升高(P<0.05),肺组织病理形态遭到破坏;与B组比较,C、D、E、F组气道阻力、LBF、LWC含量、肺泡上皮细胞凋亡、肺组织Caspase3蛋白表达明显降低(P<0.05),肺组织病理形态明显改善,且D组较C组变化更显著(P<0.05),E组与D组相比无明显差异(P>0.05),F组较E组变化显著(P<0.05)。结论 余甘子叶提取物可有效改善慢阻肺大鼠气道高反应及肺泡上皮细胞活性,其作用机制可能与抑制Caspase3表达有关。

鸡Caspase3基因的克隆表达、酶活性及生物信息学分析

【目的】构建鸡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(chCaspase 3)基因表达载体,鉴定表达蛋白酶活性,并进行生物信息学分析,为后续研究chCaspase 3功能奠定基础。【方法】以鸡法氏囊组织cDNA为模板,通过PCR扩增chCaspase 3基因,构建chCaspase 3基因的原核和真核表达载体。将原核表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白后利用Western blotting分析chCaspase 3原核表达产物。将真核表达载体以不同剂量(0、0.5、1.0、1.5、2.0μg)转染DF-1细胞进行表达,利用Western blotting和间接免疫荧光技术(IFA)分析chCaspase 3真核表达产物。用Caspase 3活性检测试剂盒分别检测原核和真核表达蛋白的酶活性;利用生物信息学软件分析chCaspase 3的相似性,并预测chCaspase 3蛋白的结构域和三级结构。【结果】chCaspase 3基因CDS区长852 bp,编码283个氨基酸。本研究成功构建了原核pET28a(+)-chCaspase 3和真核p3×Flag-CMV7.1-chCaspase 3重组质粒,原核表达产物分子质量为36 ku,与预期相符;真核表达产物表达量随转染的真核表达载体量的增加而增加。原核和真核表达产物均具有Caspase 3酶活性。生物信息学分析发现,chCaspase 3与其他物种相似性较低,且亲缘关系较远,chCaspase 3蛋白含有Caspase家族的保守五肽QACRG和经典的CASc结构域,其三维结构与人Caspase 3(hCaspase 3)十分吻合。【结论】试验成功克隆并表达了chCaspase 3基因,重组蛋白具有Caspase 3酶活性,生物信息学预测chCaspase 3蛋白与hCaspase 3蛋白有相似的三维结构,为揭示chCaspase 3蛋白的功能及探索其抗病毒天然免疫机制奠定了基础。

银杏内酯A对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其抑制NF-κB信号通路下调p53、Caspase-3表达的机制

目的探讨银杏内酯A(Ginkgolide A,GA)对缺血/再灌注脑损伤小鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebralartery occlusion,tMCAO)模型观察GA(10,20 and 40 mg.kg-1)对小鼠脑梗死范围、脑含水量及神经症状的影响,并进行病理组织学检查;采用实时荧光定量PCR技术检测缺血大脑皮层p53 mRNA的表达;应用Western blot法检测缺血大脑皮层IκBα、pIκBα及Caspase-3蛋白水平的表达。结果 GA对缺血/再灌注小鼠神经症状有明显的改善作用,能明显降低脑梗死范围,降低脑含水量,脑组织病理组织学也显示了GA对神经细胞的保护作用。Western blot结果显示:小鼠脑缺血/再灌后,IκBα蛋白水平明显降低,GA能明显升高IκBα的蛋白水平,降低pIκBα和Caspase-3的蛋白水平。PCR结果表明:小鼠脑缺血/再灌后,p53 mRNA水平升高,GA能下调p53 mRNA的表达。结论 GA对缺血/再灌注小鼠脑损伤有明显保护作用,该作用可能与其抑制NF-κB信号通路,下调p53、Caspase-3的表达有关。

丹参酮ⅡA诱导NB_4细胞凋亡时Caspase_3活性变化

目的 研究 Caspase3在丹参酮 A( Tan A)诱导 NB4细胞凋亡过程中的变化及与凋亡的关系。方法 通过细胞形态学、DNA含量分析及 DNA片段比率 ,证实 Tan A是否可诱导 NB4细胞凋亡 ,用荧光分光光度仪检测 Caspase3活性及 N -乙酰 -天冬氨酸 -谷氨酸 -颉氨酸 -天冬氨酸 - 7氨基 - 4甲基 -香豆素 ( AC- DEVD- AMC)行Caspase3抑制试验探讨细胞凋亡与 Caspase3间的关系。结果 Tan A可诱导 NB4细胞凋亡 ,并伴有 Caspase3活性增高。AC- DEVD-乙醛 ( AC- DEVD- CHO)可抑制 Tan A诱导 NB4细胞凋亡。结论 Tan A诱导 NB4细胞凋亡可通过激活

胃癌组织中Caspase 3、Caspase 9的表达及其临床意义

目的探讨胃癌组织中Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测50例胃癌组织和40例癌旁正常胃黏膜组织中Caspase 3、Caspase9蛋白表达水平,并分析两者表达与胃癌临床病理特征和预后的关系及两者之间的相关性。结果胃癌组织中Caspase3、Caspase 9蛋白表达均低于癌旁正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);Caspase 3和Caspase 9蛋白表达水平与胃癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05),而与浸润深度无相关性(P>0.05)。两者在胃癌组织中的表达呈正相关(rs=0.636,P<0.05)。结论 Caspase3、Caspase 9的异常表达参与胃癌的发生、发展,两者起正协同作用。Caspase 3、Caspase 9与胃癌临床病理特征密切相关,可作为判断胃癌患者病情进展及预后的生物学标志物,有望成为胃癌未来治疗的新靶点。

猫体外循环时心肌caspase3 mRNA表达的变化

目的 :观察猫体外循环 (CPB)时心肌 caspase3m RNA表达的变化。方法 :根据人和鼠 caspase3m RNA基因序列 ,利用 DNASIS软件设计猫 caspase3基因的 PCR引物 ,采用 RT- PCR检测 CPB过程中心肌 caspase3m RNA的表达。结果 :CPB主动脉阻断 (ACC)过程中猫心肌 caspase3m RNA的表达与 ACC前相比未见明显增高 ,再灌注 1 5 min时心肌 caspase3m RNA的表达量较 ACC前明显增加 (P<0 .0 1 ) ,再灌注 90 m in时心肌 caspase3m RNA的表达量为 ACC前的 4倍 ,差异有显著性意义 (P<0 .0 1 )。结论 :CPB中的缺血再灌注损伤可导致心肌 caspase 3基因表达增加 ,而再灌注过程可能是 caspase

大鼠脑缺血再灌注损伤后NF-κB蛋白、Caspase3 mRNA表达及细胞凋亡的研究

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后核蛋白因子 κB(NF κB)蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase3)mRNA表达及细胞凋亡的变化。方法 采用大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型 ,应用免疫组化、原位杂交法检测NF κB蛋白、Caspase3mRNA的表达 ,利用原位缺口末端标记法 (TUNEL)研究凋亡细胞的变化。结果 与假手术大鼠相比 ,脑缺血再灌注后NF κB蛋白、Caspase3mRNA表达明显增强 ;凋亡细胞显著增多 (P <0 .0 1)。结论 大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤引发的神经细胞凋亡可能是与上调NF κB蛋白、Caspase3mR NA表达有关。

葛根散等3首解酒方对急性酒精中毒小鼠Caspase3/8活性的影响

目的探索葛根散等3首解酒方对急性酒精中毒小鼠Caspase3和Caspase8活性的影响。方法以小鼠活动状态和血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)水平为参考指标,制备急性酒精中毒小鼠模型,分别给予葛根散、石膏汤、葛花解酲汤水煎剂灌胃干预,检测小鼠肝组织Caspase3/8活性。结果 (1)所有造模小鼠出现嗜睡、步态蹒跚、活性减少、身子发抖等状态,模型对照组小鼠血清ALT、AST水平较正常对照组显著升高(P<0.01);3首解酒方一定剂量组实验小鼠血清ALT、AST水平明显降低(P<0.01),且具有剂量差异性。(2)急性酒精性肝损伤小鼠肝组织Caspase3/8活性较正常对照组显著升高(P<0.01);3首解酒方一定剂量组小鼠肝组织Caspase3或/和Caspase8活性较模型对照组显著降低(P<0.01),且具有剂量差异性。(3)Caspase3活性以葛根散大剂量组降低幅度最大,而Caspase8活性则以葛花解酲汤大剂量组降低幅度最大。结论急性酒精中毒小鼠肝组织Caspase3/8活性显著升高,葛根散、石膏汤、葛花解酲汤水煎剂分别对其具有明显抑制作用,这可能是各方抑制肝细胞凋亡、防治酒精性肝损伤的部分机制。

益气养阴通络法对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡Bax、Bcl-2、Caspase3表达的影响

目的:观察益气养阴通络法对大鼠心肌细胞凋亡Bax、Bcl-2和Caspase3表达的影响,并探讨其作用机制。方法:健康SD大鼠60只,随机分为6组,正常组、模型组、西药组(盐酸地尔硫卓片)、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。对模型组、中药组、西药组实验动物进行造模,复制急性心肌缺血的模型。西药组及中药组分别给予盐酸地尔硫卓片、中药双参通脉颗粒灌胃2周。采用Western Blotting法检测各组心肌组织中Bax、Bcl-2、Caspase3的表达水平。结果:与正常组比较,模型组Bcl-2表达均显著降低,Bax、Caspase3表达升高(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,各组Bcl-2表达均显著升高,Bax、Caspase3表达均降低(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,中药治疗组中,高剂量组Bcl-2表达明显升高,Bax、Caspase3表达明显降低(P<0.05);西药组与模型组相比,Bcl-2表达明显升高(P<0.01),Caspase3表达明显降低(P<0.05),Bax表达有降低趋势(P>0.05)。中药组高剂量组与西药组相比,Bcl-2表达无明显差异(P>0.05)。结论:益气养阴通络法能够上调急性心肌梗死大鼠心肌细胞Bcl-2表达,下调Bax、Caspase3表达。

顺铂对结肠癌细胞株Caco-2增殖凋亡和Bcl-2、Caspase3、Caspase9蛋白表达的影响

目的:探讨顺铂(顺式二氨二氯铂)(c i sdichlorodiamineplatinum,DDP)对人结肠癌Caco-2细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Caspase9、Caspase3表达的影响.方法:体外培养结肠癌Caco-2细胞;检测不同浓度DDP干预下MTT染色的A值,判定其对人结肠癌细胞恶性增殖的影响;不同浓度D D P对人结肠癌细胞凋亡的影响使用流式细胞仪进行检测,Western blot检测不同浓度DDP对人结肠癌细胞内Bcl-2蛋白的表达;应用分光光度法检测不同浓度DDP对人结肠癌细胞内Caspase9、Caspase3蛋白活性的影响.结果:(1)癌细胞增殖结果显示,在一定的作用时间范围内,Caco-2细胞存活率与DDP浓度呈负相关,具有剂量依赖性,其中4.000、2.000μg/m L干预的各组细胞抑制率最显著,差异均有统计学意义(P<0.05).而低剂量组0.250、0.125μg/m L及对照DMSO干预组细胞存活率比较差异均无统计学意义(P>0.05),其细胞存活率明显高于其他各浓度组,差异有统计学意义(P<0.01);(2)流式细胞仪检测结果显示:DDP能诱导Caco-2细胞的凋亡,其诱导凋亡的效果呈时间和剂量性依赖;(3)Western blot检测结果显示:Bcl-2蛋白在结肠癌Caco-2细胞中低表达,DDP干预Caco-2细胞72 h后,与对照组比较,Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05).Caspase9、Caspase3在Caco-2细胞中低表达,DDP干预Caco-2细胞48、72 h后,与对照组比较,Caspase9、Caspase3表达明显升高(P<0.01).结论:顺铂可以抑制Caco-2细胞增殖、诱导Caco-2细胞凋亡,其机制可能与活化Caco-2细胞中Caspase9、Caspase3蛋白以及抑制Bcl-2蛋白表达有关.

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及叶酸的拮抗机制———Caspase3及其抑制蛋白c-IAP1和c-IAP2的作用

目的 本研究探讨同型半胱氨酸 (Hcy)致内皮细胞凋亡的途径以及叶酸拮抗Hcy的机制。方法 Hcy、叶酸或二者联合处理人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 2 4小时后 ,用AnnxinV染色加流式细胞术及基因组DNA电泳检测DNAladder了解细胞凋亡状态 ;RT PCR和蛋白质印迹技术检测caspase3、c IAP1和c IAP2的mRNA和蛋白质水平。结果 0 3mmol L和 3 0mmol L的Hcy均导致HUVEC凋亡 ,Hcy浓度高时凋亡细胞数较高 ,并伴有caspase3表达和活化增强 ,以及c IAP2的mRNA和蛋白质水平降低 ;叶酸可上调c IAP2的表达。结论 Hcy诱导HUVEC凋亡 ,此种作用可能涉及caspase3相关途径。叶酸可促进c IAP 2表达 ,从而部分拮抗Hcy的作用。

斑蝥酸钠维生素B_6注射液对人肺癌细胞系A549增殖抑制及核因子κB和Caspase3/7的影响

目的探讨斑蝥酸钠(SC)维生素B6注射液对人非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及核因子κB(NF-κB)、凋亡分子Caspase3/7的影响。方法用不同浓度(0、1.0、2.5、5.0 mg/L)的SC维生素B6注射液处理A549细胞,观察光镜及Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态;用噻唑蓝(MTT)比色法检测SC维生素B6注射液对细胞增殖的抑制作用;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;蛋白印迹检测NF-κB P65、I-κB蛋白表达。结果 SC维生素B6注射液对A549细胞的体外增殖有明显抑制作用,细胞形态出现明显凋亡改变,5.0 mg/L组作用A549细胞72 h后,细胞增殖抑制率最大达到67.37%。细胞线粒体膜电位检测结果显示,随着SC维生素B6注射液浓度的增加及时间的延长,线粒体膜电位逐渐减弱,同时Caspase3/7蛋白活性增强;SC维生素B6注射液作用A549细胞后NF-κB P65蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而I-κB蛋白表达水平则无显著变化。结论 SC维生素B6注射液可能通过抑制NF-κB P65表达,激活Caspase-3/7活性,从而抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡。

Genistein调节肝癌HepG2细胞Caspase3蛋白表达诱导凋亡的作用研究

目的探讨三磷酸肌醇(IP3)和Caspase3蛋白表达变化在genistein诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞培养72h为对照组,实验各组以60μmol/L的genistein作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,Westernblotting分析细胞Caspase3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果Genistein作用于肝癌HepG2细胞12、24、48、72h,各时相IP3含量显著低于对照组[(12.0±1.4)pmol/106cells、(7.5±0.8)pmol/106cells、(5.6±0.5)pmol/106 cells、(4.3±0.6)pmol/106 cellsvs(29.2±0.6)pmol/106 cells,P<0.01];24h后Caspase3蛋白的RI显著高于对照组(2.7±0.2,7.4±0.5,7.4±0.5,30.7±1.6vs0.24±0.06,P<0.05);24h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组[(2.7±0.2)%、(7.4±0.5)%、(20.5±2.0)%、(30.7±1.6)%vs(2.6±0.1)%,P<0.01]。结论Genistein能减少IP3生成,上调Caspase3蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡。

补益阳明津气对初老雌性大鼠卵巢Caspase3表达影响的实验研究

目的：探讨“补益阳明津气”延缓初老雌性大鼠卵巢机能衰老的机理，并以此佐证中医传统经典理论“五七，阳明脉衰”在绝经前期生殖轴机能衰老中的重要影响。为促进绝经前期妇女健康，延缓绝经前期卵巢机能衰老，防治相关病症，提供-种新的研究与论治思路，并为研制相关方药提供药效学依据。方法：4～6个月龄雌性大鼠为正常对照组；10～12个月龄，I舛道细胞学表现动情期延长的雌性大鼠作为初老大鼠模型。模型动物随机分为：（1）益胃汤高剂量组；（2）益胃汤中剂量组；（3）益胃汤低剂量组；（4）己烯雌酚组；（5）模型对照组；（6）六味地黄丸组。灌药4周后，断头处死，取左侧卵巢用于检测卵巢Caspase3。结果：与模型对照组比较，使卵巢Caspase3表达减少。结论：实验研究提示益胃汤具有抑制卵巢细胞凋亡的作用，这可能是其延缓卵巢机能衰老的机理之一。

川芎嗪对顺铂诱导的豚鼠耳聋模型耳蜗组织p53及caspase3表达影响

目的:观察顺铂诱导豚鼠耳聋后,耳蜗组织中p53、caspase3表达水平的变化,同时探讨川芎嗪对耳聋豚鼠模型的部分干预机制。方法:40只豚鼠随机分为空白组(B)和模型组(M),每组20只,对M组豚鼠进行耳聋模型复制,模型复制成功后,将B组及M组进行第二次随机分组,各自再次随机分为两组,分别为:空白对照组(B1)、空白+川芎嗪组(B2)、模型对照组(M1)、模型+川芎嗪组(M2),B2及M2组豚鼠均经腹腔注射川芎嗪注射液,剂量为140 mg/kg,每日1次,连续2周。B1及M1组豚鼠经腹腔注射等量生理盐水,每日1次,连续2周。末次给药后1 h,处死豚鼠,采用荧光定量PCR法对各组豚鼠耳蜗组织中p53、caspase3 mRNA表达水平进行检测;采用Western-blot法对各组豚鼠耳蜗组织中p53、caspase3蛋白表达水平进行检测。结果:各组豚鼠耳蜗组织中p53、caspase3 mRNA及蛋白表达水平结果显示,与空白对照组和空白+川芎嗪组比较,模型对照组豚鼠耳蜗组织中p53、caspase3 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.001);与模型对照组比较,模型+川芎嗪组豚鼠耳蜗组织中p53、caspase3 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:顺铂诱导豚鼠耳聋后,耳蜗组织中p53、caspase3 mRNA及蛋白表达水平升高,川芎嗪可下调顺铂诱导的耳聋模型豚鼠耳蜗组织中p53、caspase3 mRNA及蛋白表达水平。

超声对软骨细胞凋亡、caspase-8和caspase-3表达的影响

背景:超声治疗能够缓解疼痛,改善膝骨关节炎患者的运动功能,但目前关于超声治疗的文献缺乏一致性。目的:进一步验证超声治疗的膝骨关节炎有效性。方法:24只兔子随机分为3组,正常组不干预;模型组兔行前交叉韧带离断诱导膝骨关节炎,不接受任何治疗;超声组兔建模后接受超声波治疗10 min/次,1次/d,0.3 W/cm2,1 MHz,共治疗10次。采用苏木精-伊红染色进行兔关节软骨组织学观察,运用免疫印迹和RT-PCR技术检测兔软骨中的caspases3和caspases8的表达,TUNEL技术检测兔膝骨关节软骨细胞凋亡率。结果与结论:正常兔软骨组织软骨细胞呈柱状整齐的排列,模型中软骨层变薄,软骨细胞排列无序而少。超声治疗后软骨细胞重新排列,趋于整齐,细胞数增加。模型组为膝骨关节炎模型;与正常组比较,模型组和超声组改良Mankin评分较高,模型组和超声组软骨细胞凋亡指数更高,模型组高于超声组。与正常组比较模型组和超声组caspase-3和caspase-8表达较高,超声治疗后两项指标表达下降。结果表明,超声可以改善软骨组织结构、降低caspase-3、caspase-8的表达,降低软骨细胞凋亡。提示超声治疗膝骨关节炎是有效的。

羟基喜树碱依赖Caspase3途径诱导人乳腺癌Bcap37细胞凋亡

目的:探讨羟基喜树碱(HCPT)诱导人乳腺癌Bcap37细胞凋亡所涉及的信号转导途径.方法:采用MTT法测定细胞的增殖活力,琼脂糖凝胶电泳观察细胞调亡,流式细胞仪进行细胞周期分析,Western blot法研究细胞调亡途径.结果:HCPT对Bcap-37有明显的生长抑制作用.10～100 μmol·L-1HCPT作用细胞后,琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状条带.Caspase3在细胞凋亡过程中发生降解,Caspase3抑制剂DEVD-CHO可抑制HCPT诱导的Caspase3的降解和细胞凋亡.结论:HCPT对Bcap-37有明显的生长抑制和诱导调亡作用.Caspase3在HCPT诱导人乳腺癌Bcap37细胞调亡中起着重要作用.

同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡caspase3途径作用的机制

目的了解同型半胱氨酸(Hcy)是否通过caspase途径诱导内皮细胞凋亡,以及辛伐他汀是否可以通过调节c-IAP行使其拮抗效应。方法Hcy、辛伐他汀或两者联合处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24 h后,采用Annexin V染色加流式细胞术及TUNEL观察细胞凋亡状态;RT-PCR和蛋白质印迹技术检测caspase3、c-IAP-1和c-IAP-2的mRNA和蛋白质水平。结果0.5 mmol/L和3 mmol/L的Hcy均导致HUVEC凋亡,Hcy浓度高时凋亡细胞数较高,并伴有caspase3表达和活化增强;c-IAP-1、c-IAP-2的mRNA和蛋白质水平降低;辛伐他汀可以上调c-IAP-1和c-IAP-2的表达。结论Hcy诱导HUVEC凋亡作用可能涉及caspase3相关途径;辛伐他汀可促进c-IAP系统的表达,从而部分拮抗Hcy的作用。

雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠神经元caspase3和caspase9蛋白表达的影响

目的 :通过检测海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达,探讨雷公藤内酯抑制神经元凋亡的机制。方法 :结晶紫染色观察海马神经元形态,免疫组化法检测海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平。结果 :结晶紫染色结果显示,海人酸组中,海马神经元变性或丢失,胞体皱缩,形态不规则。雷公藤内酯干预组中海马神经元的数量和形态与对照组相似,胞浆清晰淡染,核仁清楚。免疫组化染色显示,与对照组比较,海人酸组海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平显著增高(P<0.05);与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平显著减少(P<0.05)。结论 :雷公藤内酯可下调海人酸致痫大鼠海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达,从而抑制神经元凋亡。