华支睾吸虫成虫粗抗原及ESP促肝星状细胞活化效果比较

目的研究华支睾吸虫分泌排泄产物(Cs.ESP)及虫体粗抗原(Cs.CA)对小鼠原代肝星状细胞活化的影响。方法分离小鼠原代肝星状细胞,鉴定后进行体外培养。实验分组为Cs.ESP刺激组和Cs.CA刺激组,同时设立空白对照组;采用RT-PCR检测肝星状细胞活化指标Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的mRNA转录水平,采用Western blot检测CollagenⅠ、α-SMA蛋白表达情况。结果Cs.ESP刺激组较Cs.CA刺激组和空白对照组的CollagenⅠ、α-SMA的mRNA转录水平及蛋白表达水平均上调,差异均有统计学意义(P<0.05),而Cs.CA刺激组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Cs.ESP可促进体外培养的肝星状细胞活化,而Cs.CA对其活化无明显作用,为后续华支睾吸虫致肝纤维化的细胞分子机制研究提供参考。

不同旋毛虫粗抗原对BALB/c小鼠体内SP2/0肿瘤抑制作用观察

目的研究不同旋毛虫抗原对BALB/c小鼠体内的SP2/0骨髓瘤的抑制作用。方法对BALB/c小鼠经腹腔和肌肉注射不同抗原,3d后对小鼠荷瘤,30d后观察小鼠体内肿瘤的大小,检测小鼠机体的免疫状态,评价不同旋毛虫抗原对小鼠体内的肿瘤的抑制作用。结果腹腔注射肌幼虫可溶性粗抗原、成虫可溶性粗抗原和新生幼虫可溶性粗抗原组的抑瘤效果略好于肌肉注射组。肌幼虫ES抗原组的抑瘤效果最好,成虫ES抗原组次之,但比3种虫体抗原组的抑瘤效果好,3种虫体粗抗原组的抑瘤效果间没有明显差别。结论不同的旋毛虫抗原都有一定的抑制肿瘤的作用,腹腔注射肌幼虫ES抗原能够很好的抑制小鼠体内肿瘤的生长。

抗弓形虫单克隆抗体的制备鉴定及应用

目的制备抗弓形虫全抗原、天然P30、重组P30的单克隆抗体(McAb),为抗原提纯、弓形虫病诊断及亚单位疫苗的研制奠定基础。方法用弓形虫全抗原、天然P30、重组P30分别免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选稳定分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株。用ELISA法测定McAb亚类和效价;通过SDS-PAGE和Westernblot进行特异性鉴定;Giemsa染色观察杂交瘤细胞的染色体数目;利用电镜及IFAT观察McAb对弓形虫的杀伤作用及其作用位点。结果筛选出3株(4B10、2B3、1H6)特异性较好的杂交瘤细胞株。Westernblot结果显示,2B3、1H6产生的McAb与弓形虫全抗原的阳性反应带均在30kDa处,4B10反应带主要在22kDa处;2B3,1H6,4B10McAb的效价(ELISA)分别为:1∶102400、1∶51200、1∶12800;2B3、1H6为IgM,4B10为IgG2b;3株细胞的染色体数均在100条以上。电镜观察到McAb作用后的弓形虫虫体聚集、肿胀,表面出现缺口和空洞,虫体变形破碎、膜变厚。抗弓形虫全抗原及天然P30的McAb能准确识别重组体pET-30a-ROP2、pET-30a-P30的表达蛋白。结论抗弓形虫全抗原、P30抗原的McAb均对弓形虫具有明显的杀伤作用,能准确识别P30抗原,可应用于弓形虫病诊断、抗原鉴定及亚单位疫苗的研制。

华支睾吸虫成虫虫体与排泄-分泌物抗原在ELISA检测中的评价

目的:探讨华支睾吸虫成虫可溶性抗原和排泄-分泌物抗原ELISA检测的临床诊断价值。方法:分别以虫体可溶性抗原和排泄-分泌物抗原作为诊断抗原,采用间接ELISA检测方法检测感染者(来自流行区,粪便虫卵检测阳性)血清107份和健康人(来自非流行区,粪便虫卵检测阴性)血清50份,计算其敏感性、特异性和符合率,并进行两种诊断抗原间的统计学比较与评价。结果:可溶性抗原的敏感性为58.88%,特异性为98%,符合率为71.34%;排泄-分泌物抗原的敏感性为87.85%,特异性为100%,符合率为91.72%。经统计学分析,两者敏感性和符合率差异具有统计学意义(P<0.05)。特异性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:作为诊断抗原,排泄-分泌物抗原优于可溶性抗原。排泄-分泌物抗原具有较高的敏感性与特异性,对于华支睾吸虫感染具有较高的诊断价值。

棘球蚴感染绵羊并诱发休克期间特异性IgG、IgE抗体对特异性抗原的识别

目的 探讨细粒棘球蚴(E.g.)囊液粗制抗原和B抗原(EgB)识别绵羊感染E.g.后及诱发过敏性休克期间特异性IgG和IgE抗体的特异性反应,并对抗原特性及分子量进行描述。 方法 制备E.g.囊液粗制抗原及EgB,应用免疫印迹技术检测经剖杀证实感染E.g.并诱发过敏性休克的20只绵羊血清特异性IgG和IgE抗体对两种抗原的抗体反应性,并对抗原特性和分子量进行描述。 结果 特异性IgE抗体与耐热、低分子量的EgB(8、12和16 kDa)抗原未见明显的反应条带,而与E.g.囊液粗制抗原在43 kDa处可见明显的反应条带。IgG抗体与E.g.囊液粗制抗原未见明显的反应条带,但与EgB抗原反应后在31、43和66.2 kDa处可见较为明显的反应条带。 结论 EgB可能不是特异性IgE抗体的特异性抗原,而是IgG抗体的特异性抗原。E.g.粗制囊液抗原中含有特异性IgE抗体的特异性抗原组分,其分子量大于43 kDa,可能是导致棘球蚴病患者过敏性休克的主要致敏原。

用ELISA方法检测原头节及EgM免疫犬IgG变化情况

目的用不同的抗原检测免疫犬后的血清,判定所引起的IgG变化和有无与其他虫种的交叉反应。方法在用原头节可溶性粗抗原和EgM家族重组表达蛋白对犬的免疫保护实验中,以原头节可溶性粗抗原、细粒棘球绦虫成虫可溶性粗抗原和多头绦虫可溶性粗抗原包被检测时,通过间接ELISA的方法检测其中的特异性抗体IgG的变化规律及与多头绦虫抗原有无交叉反应。结果原头节可溶性粗抗原检测出相对应免疫组实验犬IgG应答变化情况,同时用细粒棘球绦虫成虫包被抗原亦检测出IgG存在一定差异,但不十分明显,与多头绦虫无交叉反应。检测EgM重组蛋白免疫组IgG时它们存在一定差异,但不十分明显。结论原头节可溶性粗抗原免疫组通过ELISA的方法较为准确地检测出其IgG的应答情况;EgM重组蛋白免疫组的抗体检测仍需进一步完善。

蛔虫粗抗原对人肺腺癌细胞凋亡中白细胞介素6和转化生长因子β分泌的影响

目的探讨蛔虫粗抗原对人肺腺癌细胞株(A549)凋亡,以及白细胞介素(IL-6)和转化生长因子β(TGF-β)分泌的影响。方法收集新鲜蛔虫虫体,制备蛔虫粗抗原。将A549细胞分别与低、中、高浓度的蛔虫粗抗原(蛋白浓度分别为25、125和500μg/ml)共培养,即低浓度组、中浓度组和高浓度组,同时设A549细胞+培养液的阴性对照组和阿霉素阳性对照组。用流式细胞术、ELISA和实时定量PCR(q PCR)分别检测作用1、18和24 h后A549细胞凋亡率和细胞周期,以及IL-6和TGF-β细胞因子水平和m RNA水平。结果 3个浓度的蛔虫粗抗原作用于细胞1、18和24 h后,细胞凋亡率均显著高于同时间点的阴性对照组(P<0.01)。其中,中浓度组作用18 h后细胞凋亡率最高,为(47.10±3.68)%。细胞周期检测结果显示,中浓度组作用18 h后,G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例下降,与阴性对照组间差异有统计学意义(P<0.01)。ELISA检测结果显示,相同作用时间下,A549细胞IL-6水平大多随蛔虫粗抗原作用浓度的增加而升高,TGF-β水平随着蛔虫粗抗原浓度和作用时间的不同,无明显的变化趋势。q PCR结果显示,中浓度组A549细胞的IL-6和TGF-βm RNA水平在作用18 h后达到最高,分别为5.95±0.31和3.43±0.35,且显著高于阴性对照组(P<0.01)。结论蛔虫粗抗原可诱导A549细胞凋亡,并将细胞阻滞在G0/G1期,其调节过程可能有IL-6和TGF-β的参与。

纯化抗原和粗抗原诊断包虫病的效果比较

目的比较纯化细粒棘球蚴囊液抗原和囊液粗抗原诊断包虫病的效果。方法用 Burstein法纯化抗原 ,与粗抗原平行同步检测包虫病病人、健康人及其它寄生虫病病人血清 ,以标化阳性预告值 ( SPPV) ,标化阴性预告值 ( SNPV) ,标准化准确度 ( SAc)等计算综合积分指数 ( SII)。结果两种抗原检测包虫病病人与健康人 ,其 SII值 :纯化抗原为 96 .0 % ,粗抗原为 95 .5 %。包虫病与其他寄生虫病 ,其 SII值 :纯化抗原为 94 .9% ,粗抗原为92 .8%。结论表明 Burstein法纯化抗原在诊断包虫病的质和量上均优于囊液粗抗原。

尖吻蝮蛇舌形虫若虫粗抗原诊断效果及组分分析

目的分析尖吻蝮蛇舌形虫若虫粗抗原的蛋白组成、免疫特性及在舌形虫病诊断中的诊断效果。方法自感染尖吻蝮蛇舌形虫虫卵4个月的小鼠体内取尖吻蝮蛇舌形虫若虫,匀浆,用盐析法制备抗原。以此粗制抗原包被微量反应板,用间接ELISA方法检测尖吻蝮蛇舌形虫病人、感染小鼠及其它寄生虫病人血清中的特异性IgG抗体。用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western Blot)技术分析该粗制抗原的有效抗原蛋白组分。结果 ELISA方法检测尖吻蝮蛇舌形虫病人血清5份,正常人血清17份,感染小鼠、血吸虫病、肺吸虫病、肝吸虫病、囊虫病、旋毛虫病病人血清各20份,蛔虫病、钩虫病、鞭虫病病人血清各10份,发现舌形虫病人和感染小鼠血清均为阳性,其它寄生虫病人血清均为阴性。经SDS-PAGE和Western Blot分析,尖吻蝮蛇舌形虫成虫粗抗原可见5条主带和14条次带(Mr16-200kDa);若虫粗抗原可见9条主带和13条次带(Mr16-150kDa),其中有16条特异性条带可被感染小鼠血清识别,5条特异性条带可被舌形虫病人血清识别,与肺吸虫病、鞭虫病病人血清在约Mr34kDa附近处出现较微弱的交叉反应带,同其它寄生虫病人血清未出现交叉反应带。结论尖吻蝮蛇舌形虫若虫粗抗原同其它寄生虫病的交叉反应较小,可用于尖吻蝮蛇舌形虫病的血清学检测,而其有效的诊断抗原成分需经纯化后再行进一步的分析。

乳酸杆菌粗酶液对浓缩乳蛋白抗原性及过敏原性的影响

利用副干酪乳杆菌H9和植物乳杆菌P8菌株的粗酶液对浓缩乳蛋白在37℃下进行水解,并采用间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)测定水解乳中α-乳白蛋白(α-LA)、β-乳球蛋白(β-LG)、α-酪蛋白(α-CN)和β-酪蛋白(β-CN)4种乳蛋白的抗原性与过敏原性,从而探讨2种乳酸杆菌粗酶液对浓缩乳蛋白的水解作用以及对乳蛋白抗原性及过敏原性的影响。结果表明:副干酪乳杆菌H9和植物乳杆菌P8菌株所产酶液在对浓缩乳蛋白进行水解的过程中,水解度逐渐增大,乳蛋白的抗原性及过敏原性在水解过程中都缓慢降低,抗原性的降低程度大于过敏原性的降低程度。其中效果最为显著的是副干酪乳杆菌H9和植物乳杆菌P8粗酶液水解后使β-LG抗原性分别降低了71.2%和63.1%;副干酪乳杆菌H9粗酶液水解后使α-LA、β-LG过敏原性分别降低了31.0%和41.2%。由此可见,不同菌种所产酶液对不同乳蛋白抗原性和过敏原性的影响有一定的差异。

华支睾吸虫成虫抗原和排泄分泌产物对T细胞的作用研究

目的观察华支睾吸虫成虫抗原(Crude antigen,CA)、排泄/分泌产物(excretory-secretory products,ESPs)对T细胞的作用。方法体外分离小鼠骨髓细胞诱导分化为未成熟骨髓树突状细胞(immature DC,iDC);磁珠分选仪分选小鼠脾脏细胞的初始CD4+T细胞;流式细胞术检测DC、CD4+T细胞的纯度;抗原刺激DC细胞,实验分为PBS阴性对照组,LPS阳性对照组,CA和ESPs刺激组;负载抗原后的DC细胞与分选的CD4+T细胞共培养72h;Real time-PCR检测T-bet、GATA3mRNA的相对表达量;ELISA检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-4细胞因子的表达量。结果与PBS组相比,ESPs刺激组Tbet、GATA3mRNA表达水平升高(P<0.05),而CA刺激组T-bet、GATA3 mRNA表达水平差异不显著;与PBS组相比,ESPs刺激组细胞因子IFN-γ、IL-4的含量均升高(P<0.05),CA刺激组仅IFN-γ的分泌增高(P<0.05),IL-4无明显变化。结论 CA可能诱导宿主产生Th1型免疫应答,ESPs可能诱导宿主产生Th1型、Th2型免疫应答。

葛根粗提物和葛根素对小细胞肺癌H446细胞肿瘤相关蛋白表达水平的影响

目的探讨葛根粗提物(CP)及葛根素(SP)对人小细胞肺癌H446细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、Fas、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK2)、CDK4和p27蛋白表达水平的影响。方法应用免疫组化法检测空白对照组(CO组)、CP组及SP组H446细胞中PCNA、Fas及CDK2表达水平,流式细胞仪检测三组CyclinD1、CDK4和p27蛋白表达水平。结果CP组PCNA、CDK2、CDK4表达水平显著低于CO组(P均<0.05),CyclinD1表达水平显著低于CO组和SP组(P均<0.05),Fas和p27蛋白表达水平显著高于CO组和SP组(P均<0.05);SP组CDK2、CDK4、CyclinD1表达水平显著低于CO组(P均<0.05),Fas和p27蛋白表达水平显著高于CO组(P均(0.05)。结论CP及SP可能抑制H446细胞的增殖,促进其凋亡;CP较SP作用显著。

免疫转印技术一次检测Graves病患者多种自身抗体的探讨

以免疫转印技术检测64例Graves病、14例桥本病、68例其它甲状腺病、34例类风湿性关节炎和70例健康献血员的血清抗甲状腺抗原的特异性抗体。Graves病（46．9％～59．4％）和桥本病患者（42．9％～92．8％）血清可检出分子量为54、52、50、37、36和28ku多肽成分的抗体；Graves病患者（62．5％～92．2％）血清还可检出分子量为59、45、27、14和13ku多肽成分的抗体；献血员血清仅4．3％～8．6％可检出54、52、50和37ku的低滴度抗体；其它甲状腺病和类风湿性关节炎患者血清未测出上述抗体。免疫转印技术还可同时观察患者血清中多种自身抗体，对Graves病的诊断和研究有一定价值。

羊源细粒棘球蚴抗原B的免疫分析

用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对羊源细粒棘球蚴两种抗原 (抗原 B、粗抗原 )蛋白组份进行对比 ,并采用酶联免疫印渍技术 (EITB) ,抗原 B显示三个特异免疫活性组份 (2 3k D、16 k D、12 k D) ,而推测这三个蛋白组份可能是抗原 B诊断继发棘球蚴病鼠有效的特异性抗原组份。

枯草芽孢杆菌固态发酵豆粕效果比较

以豆粕为主要原料,通过测定6株枯草芽孢杆菌固态发酵豆粕的粗蛋白、酸溶蛋白含量,并利用SDS-PAGE对发酵豆粕中的大豆抗原蛋白降解情况进行定性分析,比较枯草芽孢杆菌对豆粕的作用效果,筛选出发酵豆粕优势菌株。试验结果显示,与豆粕相比,6株枯草芽孢杆菌固态发酵豆粕48、72、120 h的粗蛋白和酸溶蛋白含量均有所提高,但提高的程度有所差异;菌株Y6发酵豆粕效果优于其他五株枯草芽孢杆菌,发酵120 h的粗蛋白提高了15.7%,酸溶蛋白含量可达9.85%,抗原完全降解。

用猪囊尾蚴分段抗原对猪囊虫病生前的快速诊断

本试验采用硫酸铵分段沉淀法,将猪囊尾蚴的蛋白质分离为:粗抗原、p25、p25—55、p55—80、s80等五种抗原、采用平板凝集、试管凝集、琼脂扩散等方法,分别进行试验和分析,其结果以p25—55抗原效果为佳,对猪囊尾蚴病的生前诊断具有实用价值。

燕麦来源β-葡聚糖通过Dectin-1增强粗抗原对旋毛虫感染C57BL/6J小鼠的免疫保护作用

将48只雌性C57BL/6J小鼠随机分为4组,即PBS对照组、粗抗原(crude antigen,CA)处理组、β-葡聚糖(BG)+CA处理组和BG+CA+Dectin-1中和抗体(2A11)处理组,每组各12只。PBS对照组仅皮下注射PBS作为对照,CA组、BG+CA组和BG+CA+2A11组每间隔2周进行皮下注射,共计免疫3次,最后1次免疫2周后,所有组经口灌胃等量旋毛虫。感染后7d,统计PBS对照组、CA处理组、BG+CA处理组和BG+CA+2A11处理组成虫荷虫量及感染后35d肌幼虫荷虫量。取感染后7d小鼠小肠组织,qPCR法检测肠道Dectin-1基因表达量;通过间接酶联免疫吸附法测定感染后0~7周IgG滴度变化;使用ELISA检测IFN-γ和IL-4的表达量。结果显示,与CA处理组相比,BG+CA联合免疫小鼠成虫和肌幼虫荷虫量极显著降低(P<0.0001),BG+CA诱导更高水平的IgG免疫反应以及更多的Dectin-1、IFN-γ和IL-4表达;而给予2A11抑制剂小鼠与CA处理组相比荷虫量、IgG滴度以及IFN-γ、IL-4表达量均无显著差异(P>0.05),靶向2A11抗体后显著降低了BG引起的免疫反应。结果表明,Dectin-1与BG触发CA对旋毛虫的保护型免疫反应有关,BG可能是一种有效的免疫佐剂,为旋毛虫疫苗的开发提供参考。

华支睾吸虫成虫抗原致敏树突状细胞诱导免疫应答的研究

目的研究华支睾吸虫成虫虫体抗原(CA)致敏树突状细胞(DCs)诱导免疫应答的类型。方法利用rm-GMCSF诱导分化BALB/c小鼠骨髓细胞获得DCs,倒置显微镜和透射电镜观察DCs形态;CA致敏DCs,检测IL-12p70水平;将致敏后的DCs和淋巴细胞共培养,用CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖,用ELISA试剂盒检测IFN-γ和IL-4水平。结果倒置显微镜和透射电镜下见典型的DCs,CA致敏的DCs分泌高水平IL-12p70;共培养后,淋巴细胞明显增殖,分泌的IFN-γ水平显著升高,IL-4水平与其他各组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论CA刺激后DCs被活化,诱导的免疫应答向Th1方向极化,该应答与华支睾吸虫感染早期的保护性免疫密切相关。

混菌株固态发酵高温豆粕工艺优化

选出最佳的菌种组合黑曲霉、酿酒酵母菌、枯草芽孢杆菌、植物乳酸杆菌后,调整混合菌种比例为2∶2∶1∶1,菌株进行固态发酵高温豆粕的最佳工艺条件:接种量10%,料水比1∶3,发酵时间96 h,发酵温度33℃,p H7.0,Mg SO4·7H2O 0.04 g,Ca Cl20.02 g,KH2PO40.04 g。粗蛋白含量为54.22%,比原料豆粕中的增加了24.36%。抗原蛋白7S球蛋白亚基和11S酸性亚基大部分被混合菌株分泌的酶系降解为分子质量更小的蛋白亚基;氨基酸含量由发酵前的41.53%提高到的48.18%;胰蛋白酶抑制剂(TI)含量由发酵前的16.91 mg/g降到0.20 mg/g,粗蛋白和氨基酸含量大幅度提高,抗原蛋白大部分被降解,TI含量显著降低,营养价值得到了很大改善,且发酵产物有豆香味、黄褐色。

新疆荒漠肉苁蓉粗多糖配伍流感病毒疫苗的抗原节约作用

目的:探究新疆荒漠肉苁蓉粗多糖(crude polysaccharides from Cistanche deserticola Y.C.Ma, CPCD)配伍流感病毒疫苗(influenza virus vaccine,IVV)的抗原节约作用。 方法:一定剂量的CPCD配伍低剂量(0.01 μg)或高剂量(0.1 μg)的IVV皮下途径免疫小鼠,血凝抑制(hemagglutinin inhibition, HI)试验检测血清中HI抗体滴度;间接ELISA法检测血清中特异性抗体及亚型的水平;MTT法检测脾脏淋巴细胞增殖水平;流式细胞术检测脾脏细胞中T淋巴细胞亚群及胞内细胞因子IFN-γ的表达水平。结果:CPCD可以显著增强血清中HI抗体滴度(234.67±47.70 vs 149.33±47.70, P<0.05),促进特异性IgG( A450值:1.16±0.63 vs 0.30±0.21, P<0.05)和IgG1( A450值:1.09±0.60 vs 0.26±0.21, P<0.05)抗体水平的提高,并促进脾脏淋巴细胞增殖( P<0.05)。CPCD还可显著提高CD4 +[(41.97±4.58)% vs (25.43±1.48)%, P<0.05]、CD8 +[(12.67±0.33)% vs (9.02±1.07)%, P<0.05]及CD4 +CD44 +[(11.77±0.69)% vs (8.64±0.71)%, P<0.05]、CD8 +CD44 +[(6.70±0.67)% vs (4.66±0.39)%, P<0.05] T淋巴细胞亚群的比例及胞内细胞因子IFN-γ[CD4 +:(1.36±0.07)% vs (0.87±0.06)%, CD8 +:(2.09±0.20)% vs (1.42±0.08)%, P均<0.05]的分泌水平。CPCD配伍IVV的低剂量组和IVV高剂量组之间差异无统计学意义( P>0.05),显示可以节约10倍IVV抗原用量。 结论:CPCD配伍IVV可以显著增强体液免疫应答和细胞免疫应答,具有抗原节约作用,为IVV新型佐剂的研究提供实验参考,并具有应用于季节性流感和流感大流行防治的潜力。