白曲霉Aspergillus Kawachii工程菌转化酒精废液的研究

将白曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ Ｋａｗａｃｈｉｉ基因工程菌株ＴＲ１２，用于添加了少量的ＮＨ４ＮＯ３以补充氮源酒精废液的转化，经过３ｄ的分批好氧发酵，得到糖化酶活较高的发酵液．

耐酸性木聚糖酶在清酒酿造中的作用

从华根霉 (RhizopuschinensisY92 )发酵液中通过离子交换色谱和凝胶过滤色谱分离纯化获得一种耐酸性木聚糖酶R ,将它和另外 2种耐酸性木聚糖酶 :米曲霉 (AspergillusoryzaeRIB12 8)木聚糖酶B和白曲菌 (AspergilluskawachiiIFO43 0 8)木聚糖酶C分别应用于清酒酿造中 ,结果表明 ,木聚糖酶B可以促进米细胞的溶解 ,对于原料米的利用率有明显的提高 。

白曲耐酸性α-淀粉酶的分离和纯化

从白曲霉菌A .Kawachii的米曲粗抽出液中 ,通过乙醇沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析等方式 ,获得了两个耐酸性α -淀粉酶比活性极高的组分 ,经SDS -PAGE分析 ,推断其组分A分子量为 85 ,0 0 0 ,组分B分子量为10 4 ,0 0 0。两组分均为糖蛋白 ,且能被枯草杆菌蛋白酶 (Subtilisin)适度降解。其N -末端 10 - 12残基的氨基酸序列与黑曲霉A .niger的耐酸性α -淀粉酶N -末端氨基酸序列极为相似。借此推断 ,A .Kawachii的白曲中至少有两种以上的耐酸性α

新型耐酸性液化糖化酶的分离提取及其特性

白曲霉基因工程菌TR12在液体培养基中32℃摇瓶培养96h,粗提酶液经进一步分离提取,得到同时具有液化和糖化两种酶活力的新型酸制剂,最适pH值为4.6。耐酸性α-淀粉酶活性的最适温度为60℃,糖化酶活性的最适温度为50℃。在pH4.6酸性条件下,该液化糖化酶在50℃保温1h,仍具有原酶活性。Ca^(2+)对该耐酸性液化糖化酶有激活作用,Fe^(3+)、Al^(3+)等金属离子对该酶活力有一定的抑制作用。

新型耐酸性α-淀粉酶液态发酵条件的研究

通过基因工程技术导入了产生耐酸性α-淀粉酶和糖化酶的多考贝融合基因而获得的白曲霉基因工程菌株TR12作为试验菌株,分别在摇瓶条件下和2L通气发酵罐上进行耐酸性α-淀粉酶的液态发酵工艺条件的试验研究。正交试验结果表明,优化摇瓶发酵培养基配方A3B3C2D1,即玉米粉4%,玉米浆1.5%,黄豆粉2%,麸皮4%,摇瓶产酶活力81.69u/mL,2L发酵罐的产酶活力达到了83.6u/mL的水平。

新型耐酸性α-淀粉酶液态深层发酵条件的研究

本文采用白曲霉基因工程茵株TR12,该菌株是通过基因工程技术导入了产生耐酸性α-淀粉酶和糖化酶的多拷贝融合基因而获得的。通过正交试验的方法对TR12的液态深层发酵条件进行研究,获得了一最佳摇瓶发酵培养基配方A_38_3C_2D_1。为了验证该理论结果,又利用摇瓶和2L的通气发酵罐进行了放大试验。

白曲霉用于食醋糖化过程的研究

通过正交试验确定了白曲霉SICC3.917三角瓶与糖化曲的最佳培养基成分及最佳培养条件、糖化醪液的最佳制备工艺。结果表明白曲霉的三角瓶最佳培养条件为:麸皮添加量8.5g,玉米粉添加量1.5g,水添加量10.5g,培养温度30℃。白曲霉SICC3.917糖化曲的最佳培养条件为种曲接种量0.5%,熟料含水量52%,培养温度32℃,空气湿度90%。糖化醪液的最佳制备工艺为白曲霉糖化曲的添加量1.3%,大米粉浓度20.7%,糖化温度65℃,糖化时间3h。

白曲酸性蛋白酶在无孢黑曲SH-2中的克隆表达及酶学性质分析

白曲霉酸性蛋白酶在白酒酿造发酵过程中具有溶解发酵原料的颗粒,促进微生物繁殖,分解蛋白质生成香味物质,降解酵母菌体蛋白等多种功能,可以提高白酒风味,因此被广泛应用于白酒生产中。本研究利用经基因工程改造的低内源蛋白背景的黑曲霉宿主SH-2,表达白曲霉酸性蛋白酶基因pepB。通过PCR技术获得pepB以及表达元件糖化酶启动子PglaA、糖化酶终止子TglaA、乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶标记基因pyrG,在pMD18-T载体基础上,构建了pepB表达载体,通过PEG介导转化法转化无孢黑曲酶SH-2。重组菌株经发酵罐发酵240 h,发酵粗酶液酶活达9722 U/mL,是报道的白曲原始菌株酶活的8.5倍,SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为47 ku。酶学性质分析结果表明,该酸性蛋白酶最适反应温度为35℃,最适pH为4.0,Mn^(2+)、Cu^(2+)对酶活有显著地激活作用。最后,探究了在不同发酵初始pH下重组菌株酶活的变化,结果显示,在pH 4.5~6.5范围内,适当提高发酵初始pH,酸性蛋白酶酶活会提高。以上结果表明,本研究成功构建了一株能胞内高效表达白曲酸性蛋白酶的菌株。