桑粒肩天牛幼虫肠道菌群的研究

Intestinal flora of 47 Apriona germari(Hope) larvae,collected from fields,had been isolated and identified.The results showed that the predominant bacteria were Staphylococcus.Its viable count was 7.63±0.21,and the detection rate was 100%.Meanwhile,a strain of cellulose-utilizing bacterium was isolated from the fore-midgut fluid of A.germari larvae with the cellulose-congo red agar medium.The bacterium was tentatively identified as Cellulomonas.The detection rate of the cellulolytic bacterium was 23.40%,and the count was 3.84±0.54 approximately.Its contribution to the borer′s cellulose digestion needs further investigations.

牛心朴和苦楝果提取物对桑天牛产卵及卵孵化的抑制作用

使用一定浓度的牛心朴总生物碱苦楝果提取物处理的构树枝条作为天牛成虫的食物 ,比较了其对桑天牛产卵量及卵孵化率的影响。在室温下 ,将成对的天牛放在盖有铁纱网的直径 2 5cm高 2 5cm的塑料桶中进行试验。在 15d试验中 ,用 30 0 μg·mL- 1 的牛心朴总生物碱、10 0 0 μg·mL- 1 的苦楝果提取物处理枝条的两处理组的各 7对天牛其日平均产卵量分别为 3 5 3± 4 18个和 6 73± 3 82个 ,而对照组 7对天牛的日均产卵量为 13 73± 2 90个。经t—检验处理组与对照组之间在日均产卵量方面差异极为显著。 30 0 μg·mL- 1 的牛心朴总生物碱和 10 0 0 μg·mL- 1 的苦楝果提取物对桑天牛卵孵化有显著影响。其影响表现在两方面 :(1)孵化率降低。成虫取食 30 0 μg·mL- 1 牛心朴总生物碱和 10 0 0 μg·mL- 1 苦楝果提取物处理的构树枝条后产的卵最终孵化率分别为 77 36 %、87 12 %。而对照组的最终卵孵化率为 99 5 %。 (2 )其孵化期延长。牛心朴处理组的最终孵化期为 17天、苦楝果处理组的最终孵化期为 15d、而对照组的最终孵化期为 11d。

印楝提取物对桑天牛产卵量及卵孵化率的影响

使用一定浓度的印楝提取物 (NeemEC)处理的构树枝条作为天牛的食物 ,研究了其对桑天牛产卵量及卵孵化率的影响。在室温下 ,将成对的天牛放在盖有铁砂网的直径 2 5cm高的塑料桶中进行实验。用含印楝素 50× 1 0 -6g/mL的印楝提取物处理枝条 ,处理组天牛 ( 7对 )在 1 5d试验中 ,其每天对平均产卵量为2 0 0± 1 56个 ,而对照组每天平均产卵量为 1 0 33± 3 33个。经T—检验处理组与对照组之间差异显著。用含印楝素 1 0 0× 1 0 -6g/mL的印楝提取物处理枝条 ,在 1 5d试验中 ,处理组 7对天牛从第 5d开始死亡 ,至第 8d全部死亡 ,按实际成活天数计算 ,其每天每对平均产卵量为 1 0 0± 1 4 1个 ,而对照每天每对平均产卵量为 1 3 73± 2 90个。经T—检验两者之间差异显著。取食含印楝素 50× 1 0 -6g/mL的印楝提取物处理枝条后天牛产的卵需经 1 9d达到其最终孵化率 ,33 33% ;而对照组 9d达到最终孵化率 98 96%。在进行了 2 4d的选择取食试验中含印楝素 1 0 0× 1 0 -6g/mL的印楝提取物处理枝条 ,1 0对对照组天牛每天每对平均取食量为 3 53± 0 38g,而处理组天牛每天每对平均取食量 3 4 2± 0 60 g。经T—检验两者差异不显著。这说明桑天牛不能分辩含印楝提取物的食物 ,即印楝提取物对桑天牛不具拒食性。?

杨树新品种‘丹红杨’

丹红杨是以美洲黑杨50号杨和36号杨为亲本,通过杂交获得的杨树新品种,雌株;速生,平均年胸径生长量4～8cm;耐桑天牛,感虫率低于20%;干形通直;易生根,成苗率及造林成活率均在95%以上。

桑粒肩天牛肠道纤维素分解细菌的分离和鉴定

为研究天牛消化利用纤维素的机理 ,利用纤维素 -刚果红琼脂培养基 ,从桑粒肩天牛 (A.germari)幼虫中肠分离到一种兼性厌氧纤维素分解菌。菌落为白色圆形 ,边缘比较规则 ,周围溶纤维素透明圈直径一般可达 10 mm～ 2 0 mm,细菌大小为 0 .5～ 0 .8μm× 1～ 3μm,革兰氏染色阳性 ,杆状 ,极生鞭毛 ,无芽孢。结合生化实验结果 ,初步鉴定该菌株为纤维单孢菌属 (Cellulomonas)。

转基因741杨对桑天牛的抗性鉴定

利用树上套笼接虫方法 ,对 18个转Bt基因和凝集素基因的 74 1杨无性系进行了抗桑天牛特性鉴定 ,初步确定了P10、CC11、CC2 5、CC5 3等 4个抗天牛无性系和 1个轻感天牛无性系P2 2。

桑粒肩天牛3种纤维素消化酶的分布

将桑粒肩天牛唾腺匀浆、肠道分段冰冻切片后抽提 ,测定各部分内切 β 1 ,4 葡聚糖酶 (Cx) ,纤维二糖水解酶 (CHB) ,β 1 ,4 葡萄糖苷酶在肠道及唾腺中的酶活与分布。结果发现 97 1 3 %的CX 酶 ,95 7%的 β 1 ,4 葡萄糖苷酶的 97 0 3 %的CHB酶存在于桑粒肩天牛中肠 ,唾腺中没有检测到酶活性 ,结合天牛消化道形态和组织学特征 。

桑粒肩天牛纤维素酶的性质研究

桑粒肩天牛（ＡｐｒｉｏｎａｇｅｒｍａｒｉＨｏｐｅ）幼虫肠道内有完整的纤维素酶系，其中以内切－β－１，４－葡聚糖酶（Ｃｘ酶）活性最强、β－１，４－葡萄糖苷酶次之，外切－β－１，４－葡聚糖酶（Ｃ１酶）最弱、测定了Ｃｘ酶和β－１，４－葡萄糖苷酶的动力学特性以及金属离子对酶活性的影响。二者的最适作用ＰＨ值分别为４．４和５．６；最适作用温区分别为３０℃—４５℃和４５℃—５０℃；Ｃｘ酶经５０℃处理２ｈ酶活性仅下降１８．８％，而β－葡萄糖苷酶活性完全丧失。９种金属离子对纤维素酶都无明显激活作用，相反，除Ｈｇ＋＋和Ｐｂ＋＋对酶活性有强烈抑制作用外，Ｍｎ＋＋和Ｃｕ＋＋即使在０．００５ｍｏｌ／Ｌ低浓度下，对酶活性也有明显的抑制作用，这对今后开发酶抑制剂用于防治天牛等蛀干害虫，具有重要意义。

苦楝果提取物对桑天牛产卵量及卵孵化率的影响

以用一定浓度的苦楝果提取物处理的构树枝条作为天牛的食物 ,研究了其对桑天牛产卵及卵孵化的影响。在室温下用苦楝果提取物 5 0 0mg/kg处理枝条 ,处理组天牛 ( 7对 )在1 5天试验中 ,7对天牛日平均产卵量为 8.5 3± 2 .35个 ,而对照组 7对天牛日平均产卵量为1 5 .80± 0 .98个。经T检验处理组与对照组之间差异极显著。用 2 5 0、1 0 0 0、2 0 0 0mg/kg的苦楝果提取物处理枝条 ,在 1 5天试验中 ,7对天牛日平均产卵量分别为 8.0 6± 2 .90、6.73± 3.82、5 .2 0± 1 .74个 ,而对照组 7对天牛的日平均产卵量为 1 3.73± 2 .90个。经T检验它们与对照之间差异极显著。取食含苦楝果提取物 2 5 0、1 0 0 0、2 0 0 0mg/kg处理枝条后 ,天牛产的卵分别需经 1 2、1 5、1 9d达到其最终孵化率 94.2 1 %、87.1 2 %、43.5 8% ;而对照组 1 1d达到最终孵化率 99.5 0 %。

应用异小杆线虫防治桑天牛的研究

经多年（1992～1995）筛选试验，发现从我国山东土壤诱集的病原线虫Heterorhabditisbacteriophora8406对桑天牛防治效果最佳。在广东地区应用线虫防治桑天牛的最适温度为23±5℃，最佳时间为10～12月份。大田400hm2推广示范结果表明，使用注射量为3×103～4×103条线虫／mL，防治效果达86％～98％。从2年田间应用线虫后桑叶喂蚕的安全性测定表明，与对照相比无显著差异。

利用成虫取食习性防治3种杨树天牛

在野外调查桑天牛、云斑天牛、光肩星天牛成虫取食树种的基础上，试验室内用不同植物对成虫进行了饲养．结果表明，３种天牛成虫期的补充营养植物对成虫取食量、寿命、产卵量都有重要影响．补充营养植物内糖含量的多寡是影响取食与产卵的关键因子．利用桑科、蔷薇科、槭树科木本植物作诱饵分别诱杀桑天牛、云斑天牛和光肩星天牛，可有效地控制天牛灾害．

辐照对桑天牛精子超微结构及生育力的影响

为进一步明确桑天牛辐照不育机制,研究了桑天牛雄虫在20、40、80、120和160Gy的γ射线辐照下其精子超微结构及其生育力的影响。结果表明,健康桑天牛精囊内具有256个成熟精子。精子头部主要是精核,无顶鞘,尾部含线粒体衍生物、附体及9+9+2型的微管系统。受辐照的桑天牛精子间发生粘连现象,在20Gy下粘连百分比为66.67±5.78%,当剂量升高到160Gy时,其比例达到100%。精核直径在40Gy的剂量下膨胀最大,显著高于对照;而160Gy的剂量导致精细胞分裂增加1次,单个精囊内具有512个精子,精子细胞体积显著减小。经40Gy辐照的雌虫与辐照雄虫交尾的桑天牛生育力最低。在其他不同辐照剂量下,辐照雌虫与健康雄虫交尾及健康雌虫与辐照雄虫交尾的生育力也均低于对照。综合分析确定桑天牛成虫辐照不育的最适剂量为40Gy。本研究为开发桑天牛物理控制技术提供了参考,对农林经济的可持续发展意义远大。

灭幼脲对桑天牛成虫的生物活性

用经 5 0 0mg/kg的灭幼脲处理的构树枝条饲养桑天牛成虫后进行交错配对实验 :处理雄虫 (T♂ )×处理雌虫 (T♀ )、对照雄虫 (U♂ )×处理雌虫 (T♀ )、处理雄虫 (T♂ )×对照雌虫(U♀ )、对照雄虫 (U♂ )×对照雌虫 (T♀ ) ,并对各处理组的成虫寿命、产卵量、子代卵孵化率、孵化历期进行测定。结果表明 ,灭幼脲处理桑天牛后成虫寿命比对照成虫缩短 6～ 7d ;处理各组产卵量下降 ,其中T♂×T♀组比对照组降低 2 8.71 % ;T♂×T♀及U♂×T♀两组子代卵的孵化率分别比对照组下降 61 .0 3%和 61 .5 2 % ;灭幼脲处理后子代卵的孵化历期都比对照组子代卵延长 ,分别为 1 2 .38,1 1 .93及 1 1 .64d ,而对照为 1 1 .1

桑粒肩天牛幼虫肠道菌群的种类及分布

对47头野外采集的桑粒肩天牛幼虫肠道进行定性与定量检测,发现了13种菌群。其中葡萄球菌属在前中肠、中中肠、后中肠和后肠中的分离率为100%,是常住菌群。链球菌属、肠杆菌属、埃希氏菌属、志贺氏菌属和芽孢杆菌属在上述4个肠段都能分离到,但分离率较低。而其他菌群只能在某些肠道分离到,为过路菌群。各个肠段菌群菌量分布不同,即后中肠<中中肠<前中肠<后肠。葡萄球菌属菌量在各肠段分布同总的菌群菌量一致。可见葡萄球菌属在桑粒肩天牛生长发育过程中起了积极的作用。

桑天牛成虫神经系统的解剖

桑天牛（Ａｐｒｉｏｎａｇｅｒｍａｒｉ（Ｈｏｐｅ））成虫中枢神经系统由脑、咽下神经节、腹神经索组成，前、中、后脑分化明显。腹神经索包括三对胸神经节、三对腹神经节及纵贯各神经节的神经索。后胸神经节由后胸，第１、２腹节神经节合并而成。第三腹神经节由第５～９腹节神经节合并而成。口交感神经系统由前走神经、上唇神经、额神经节、逆走神经、嗉囊神经节、前肠神经等组成，无脑下神经节。腹交感神经并入腹神经节及其侧神经。尾交感神经源于腹末最后一个神经节，包括１６～１８支侧神经。

在人工接种和自然感虫情况下美洲黑杨后代对桑天牛抗性的研究

Two Populus deltoides clones ( P.deltoides Bartr.cl.‘55/65’ and P.deltoides Bartr.cl.‘2KEN8’)with high resistance to Anoplophora glabripennis (Resistant rate are 96.16%,97.37%,respectively) were used as parents and crossed by artificial controlled pollination,37 among of which F 1 progenies were planted in Shuyang,Jiangsu province and tested for insect resistance with the borer Apriona germari Hope.Under artificial inoculation and natural infestation with Apriona germari Hope,significant variations of oviposition and larval development were observed between progenies.Both artificial inoculation and natural infestation alow the characterization of plant resistance to insect,although insect behavioral responses sometimes differ between free choice (natural infestation) and no choice experiment (inoculation).

印楝提取物及双稠哌啶类生物碱对桑天牛存活及生殖的影响

用１．０μｇ／ｍｍ２剂量的黄华碱和野靛碱处理的构树枝分别喂饲桑天牛，黄华碱不表现拒食作用，但野靛碱表现出显著的拒食作用。同样剂量条件下，两种生物碱均能使桑天牛的产卵量和卵孵化率显著下降，但没有引起死亡。用８．０×１０－２，４．０×１０－２，２．０×１０－２，１．０×１０－２，５．０×１０－３μｇ／ｍｍ２剂量的印楝提取物（含ａｚａｄｉｒａｃｈｔｉｎ１０％）处理的构树枝喂饲桑天牛，前二种剂量引起１００％死亡率，２．０×１０－２μｇ／ｍｍ２剂量引起８０％死亡率并导致雌虫不再产卵，而后两种剂量引起的死亡率为３０％和０％，并导致产卵量和卵孵化率较对照急剧地下降。报道了双稠哌啶类生物碱对昆虫引起产卵量和卵孵化率下降作用及天牛科中印楝提取物抑制产卵和卵孵化的作用。

特异性杀虫基因Bt cry3A在桑粒肩天牛幼虫两种肠道常驻内生菌中的转化和表达

【目的】将特异性杀虫毒蛋白基因Btcry3A转入桑粒肩天牛(Apriona germari Hope,Ag)幼虫肠道常驻内生菌中,构建能在天牛幼虫肠道中定殖并表达特异性杀虫基因Bt cry3A的工程菌。【方法】以传统方法和16S rDNA分子生物学分析等方法分离、鉴定Ag幼虫肠道优势的常驻内生菌,从中筛选出适合转化的候选菌株。利用电转化技术将含有对鞘翅目昆虫具专一性毒力Bt cry3A基因的Escherichia coli-Bacillus thuringiensis穿梭表达质粒pHT305a和pHT7911分别转入Ag幼虫肠道常驻内生菌短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis Ag12,Ag12)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis Ag13,Ag13)中。【结果】从Ag幼虫肠道共分离获得18个不同种的可培养细菌菌株,并从中选取菌株Ag12和Ag13作为出发菌株转入Bt cry3A基因。经质粒稳定性试验、转化子生长特性测试、伴胞晶体电镜检测、毒蛋白SDS-PAGE分析、工程菌定殖性分析以及生物毒力测试,结果显示cry3A基因已经成功转入Ag幼虫的常驻内生菌短短芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌中,并且工程菌Ag12-305a、Ag13-305a、Ag12-7911和Ag13-7911都能在天牛幼虫肠道内稳定生长、繁殖并表达分子量约65kDa的伴孢晶体杀虫蛋白Cry3A。【结论】Bt cry3A基因已成功转入桑粒肩天牛幼虫肠道优势常驻内生菌中,获得了四株能在桑粒肩天牛幼虫肠道内定殖,并能表达目的杀虫基因Bt cry3A的转基因工程菌。

天牛卵长尾啮小蜂生物学研究初报

天牛卵长尾啮小蜂（ＡｐｒｏｓｔｏｃｅｔｕｓｆｋｕｔａｉＭｉｗａｅｔＳｏｎａｎ）是严重蛀干害虫桑天牛（ＡｐｒｉｏｎａｇｅｒｎａｒｉＨｏｐｅ）的重要天敌，此蜂的桑天牛卵内产卵寄生，寄生率高达５０％，经调查发现本寄生蜂的新分布区比记载的［２］由长江流域向北拓宽到长城以北，对长江与长城之间的广大经济林区，具有重要的应用前景。本文较详细地记述了这种寄生蜂的分布、寄生、形态及生活习性等。

球孢白僵菌侵染对桑天牛幼虫解毒酶活性的影响

为明确球孢白僵菌(Beauveria bassiana)对桑天牛(Apriona germari Hope)的致病机制,探讨了球孢白僵菌侵染对桑天牛幼虫解毒酶系的影响,对用球孢白僵菌处理后不同时间桑天牛幼虫体内羧酸酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶和乙酰胆碱酯酶活性进行了测定。结果表明球孢白僵菌对上述3种酶的活性有显著影响,其中对羧酸酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶活性的影响,均表现出先刺激后抑制的作用;而对乙酰胆碱酯酶活性的影响则呈先抑制后激活再抑制再激活的趋势。