基于RAPD技术对大曲芽孢杆菌近似菌株的分类研究

大曲是浓香型白酒酿制过程中最主要的微生物源,大曲中微生物的类型、丰度、新陈代谢活动等均会对浓香型白酒品质产生很大的影响。为了探究大曲中芽孢杆菌的分类及多样性,利用菌株随机扩增多态性DNA标记(random amplified polymorphic DNA,RAPD)分型和16S rDNA序列分析技术,对已分离出的芽孢杆菌进行RAPD分型和16S r DNA序列分析。结果表明,37株芽孢杆菌中有22株枯草芽孢杆菌、9株蜡样芽孢杆菌、3株地衣芽孢杆菌,其中枯草芽孢杆菌又可细分为8类,蜡样芽孢杆菌可细分为3类,地衣芽孢杆菌可分为3类;RAPD分型可以为大曲中芽孢杆菌的快速分型及后续的分类学研究提供理论依据,为研究芽孢杆菌在白酒酿造中的作用奠定基础。

DNA提纯方法对9种菊属植物RAPD的影响

菊属植物组织中所含的多酚类、单宁、色素及多糖类物质是干扰RAPD扩增反应的主要成份。通过比较试验,使用十二烷基硫酸钠(SDS)法提取,DNA,并补加非水溶性聚乙烯吡咯烷酮(insoluble PVP),有效地去除了上述杂质,经纯化的DNA能很好地用于RAPD分析。试验还发现,4月上旬至5月中旬植物材料处于旺盛的营养生长状态时取材提取DNA较为适宜。

克罗诺杆菌的随机多态性扩增DNA(RAPD)基因分型研究

研究了克罗诺杆菌标准菌株和样品中分离菌株的分子特征,为克罗诺杆菌的种间鉴别和分子溯源提供一种有效手段。采用随机引物扩增多态性DNA分析对38株菌株进行基因分型。筛选出1条随机引物,每一菌株可扩增出1～7条DNA片段,片段在400-3500bp,可将8株标准菌株的种间区分开来。以相似性50%为标准,38株克罗诺杆菌按照其遗传差异可以分为8个基因型类群。所建立的RAPD技术可用于克罗诺杆菌的种间鉴别和分子溯源研究。

猕猴桃基因组DNA的提取及其RAPD扩增研究

采用 5种不同的方法提取猕猴桃基因组DNA ,并将 5种方法所得DNA用于RAPD扩增。结果表明 ,改进的CTAB法和氯化苄法提取DNA的得率最高 ,分别达 30 .6 μg/mg干样和 32 .7μg/mg干样 ,是经典CTAB法和高盐低pH法得率的 3倍 ,SDS法得率的 9倍。改进的CTAB法和氯化苄法提取的DNA扩增效果最好。

用RAPD技术对5种经济海胆基因组DNA多态性的研究

利用随机扩增多态DNA技术对紫海胆(Anthocidariscrassispina)、海刺猬(Glyptocidariscrenularis)、马粪海胆(Hemicentrotuspulcherrimus)、光棘球海胆(Strongylocentrotusnudus)和中间球海胆(Strongylocentrotusintermedius)等我国最主要的5种经济类海胆基因组DNA的多态性进行初步研究。经20个随机引物扩增,共得到377条扩增片段,片段长度为200～1600bp。根据片段的共享度计算出平均遗传距离并采用UPGMA和NJ两种聚类分析方法进行处理得到系统树。从聚类图可得知长海胆科与疣海胆科有较近的亲缘关系,球海胆科的光棘球海胆与中间球海胆有较近的亲缘关系,其次是马粪海胆。本研究还讨论了RAPD技术在海胆的遗传学研究中的广阔应用前景以及从分子生物学方法上为海胆传统分类方法提供科学依据。

用随机扩增多态DNA(RAPD)区分青海血蜱与日本血蜱

目的用随机扩增多态DNA(RAPD)技术确定青海血蜱与日本血蜱的分类地位。方法分别提取青海血蜱与日本血蜱的DNA,确定聚合酶链反应(PCR)总体积、反应条件。选取8条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物,进行RAPDPCR扩增反应。将扩增产物制备成DNA图谱,比较青海血蜱与日本血蜱基因组DNA多态性,从DNA水平鉴定这2种蜱。结果2种蜱仅有少部分DNA条带相同,大部分条带不同。结论RAPD技术可准确地鉴别青海血蜱与日本血蜱这2种形态特征十分相似的蜱种。

三系杂交稻亲本随机扩增多态性DNA(RAPD)分析

选用９个随机引物对３１份杂交水稻亲本材料进行了ＲＡＰＤ分析，共检测到６０条多态性带。聚类分析结果表明，所有供试材料可以被明确地区分。在９个随机引物中，有８个具有较高的多态性检测能力。以这８个引物为基础，选用任两个引物即可在任一对材料中检测出多态性的频率在９６１３％以上，而选用任３个引物则该频率在９９２１％以上。这显示了运用ＲＡＰＤ鉴定稻种具有简便、灵敏、高效的优点，在鉴定杂交稻种的实践中有着良好的应用前景。

砀山酥梨基因组DNA提取和RAPD条件优选

分别以砀山酥梨不同品系的成熟叶片、幼叶和芽为材料,采用SDS法提取基因组DNA,比较了不同材料的提取效果,并以此为模板进行RAPD反应,优化了RAPD反应条件。结果表明:用幼叶和芽均能提取高质量的基因组DNA,可直接用于RAPD分析,而用成熟叶片虽能提取到基因组DNA,但不能直接用于RAPD分析;优化的RAPD反应体系为:反应体积50μL,包含80ng左右模板DNA、5μL市售10×PCRBuffer、2.0mmol/LMgCl2、120μmol/LdNTPs、3U的Taq酶、0.5μmol/L随机引物;热循环程序为94℃预变性5min,使模板DNA充分变性,然后进入下列温度循环,94℃变性30s,36℃退火45s,72℃延伸90s,循环数40,最后72℃延伸7min。

水稻孕穗期茎注射野生稻DNA变异株系的RAPD分析

利用野生稻有利基因是培育超高产栽培稻 ( Oryza sativa L,2 n=2 4 AA染色体组型 )的主要技术路线之一。本研究通过穗茎注射法将小粒野生稻 O.minuta( 2 n =4 x=4 8,BBCC染色体组型 )总DNA导入杂交稻当家亲本 V2 0 B,获得了变异株的 3个高世代株系 ;用 RAPD方法对上述 3个株系、供、受体及对照品种明恢 63共 6个材料进行了多态性研究分析。所用 83个 Operon引物均在小粒野生稻与V2 0 B间扩增出多态性产物 ,二者相似系数仅为 2 6.7% ,而明恢 63与 V2 0 B二者的相似系数达 90 .5%。83个引物中有 15个引物在变异株第 7代株系 97C- 77与受体 V2 0 B间扩增出的产物存在差异 ,差异带共有 2 6条 ,占 83个引物在 V2 0 B中扩增出的带数 397的 6.6%。其中 OPB- 18、OPD- 0 3、OPE- 0 9、OPE- 18、OPG- 10及 OPG- 11等 6个引物在 97C- 77中各扩增出 1条只在供体中存在而在受体中不存在的特异带。 2 6条差异带中的 2 4条在共第 3代祖先的第 9代 2个株系 98C- 10 7、 98C- 165与 97C- 77间无差异。因此 ,绝大多数 DNA水平上的变异可能从第 3代起稳定遗传 ;研究结果从 DNA水平证明 ,变异株系中导入了野生稻 DNA,导入野生稻

基因组DNA的提取及RAPD条件优化

提取了木奈基因组 DNA,并以其为模板对影响 RAPD扩增的重要参数进行优化试验 ,以期建立木奈 RAPD反应的优化体系 .结果表明 ,PCR扩增体系最佳条件是 :2 0 μL体积中 ,2 0 0 μmol·L- 1 d NTP、2 .5 mmol· L- 1 Mg Cl2 、0 .2 μmol· L- 1随机引物、2 5 .0 ng·μL- 1 DNA模板、1 -2 U

山药基因组DNA的提取和RAPD反应条件的优化

研究了山药基因组DNA的提取方法;对Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Taq酶用量进行了优化,建立了最佳的RAPD反应体系:在25μL反应体系中Mg2+浓度为2.0 mmol.L-1,dNTPs浓度为0.25 mmol.L-1,引物浓度为20 pmol.L-1,Taq酶1.5 U,模板DNA为200 ng.扩增程序为:95℃预变性7 min;94℃变性30 s,36℃退火45 s,72℃延伸2 min,共35个循环;72℃终延伸10 min.

优化萝卜基因组DNARAPD-PCR反应体系的正交设计法

以CTAB微量提取方法提取10个红萝卜雄性不育系A单株的基因组DNA,等浓度混合成基因池。以其为模板,用正交设计方法论定RAPD-PCR反应体系的各影响因子,用随机引物S42(5'GGACCCAACC3')优化萝卜雄性不育系A基因组DNARAPD-PCR反应体系,16次试验即可获得最佳的RAPD-PCR反应体系。

库尔勒香梨基因组DNA提取及RAPD体系建立

通过比较试验 ,使用 SDS-氯仿 -异戊醇法 ,添加 BME及 Vc,简便、快速地从库尔勒香梨成熟叶中提取大分子量 DNA,有效地去除了梨属植物组织中所含的多酚类、单宁、色素及多糖类物质 ,该 DNA能很好地被酶切并用于

几种小麦族禾草及其杂交后代基因组DNA的RAPD研究

应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术分析蒙古冰草、航道冰草及其种间杂种F1、BC1代和加拿大披碱草、野大麦及其属间杂种F1代的基因组DNA差异性。筛选出能检测各条本及杂交后代间遗传差异的适宜引物；从DNA分子水平验证出亲本加拿大披碱草和野大麦两属间种比亲本蒙古冰草、航道冰草二种间的亲缘关系远；杂种F1代的RAPD图谱有明显偏母本的倾向；随机扩增多态性DNA技术可用于牧草远缘杂种鉴定及遗传育种研究。

栗属植物基因组DNA的提取及RAPD、SSR分析

以中国板栗、茅栗和锥栗的叶片为材料,提取栗属的DNA。针对栗属植物富含多酚类等次生物质的特点对栗属DNA的提取方法进行了改良,采用CTAB-蛋白酶K法加重复抽提,去除栗属植物中的相关次生物质,获得了高质量的DNA。所提取的DNA完全满足PCR、RAPD、SSR等一些分子生物学实验要求。

不同性别类型苦瓜基因组DNA提取及RAPD标记初步研究

采用改良的CTAB法成功地提取了不同性别类型苦瓜品种的基因组DNA,作为PCR扩增反应模板进行RAPD分析。结果表明,从200个10bp随机寡核苷酸引物中筛选到2个引物S30和S66,其可以在全雌性品种X-黑-d-d稳定地扩增出特异性条带,为下一步克隆苦瓜性别决定基因、探索苦瓜性别决定机理提供了试验依据。至于该特异性标记是否与苦瓜雌性性别有关,还有待进一步分析验证。

辣椒基因组DNA提取与RAPD分析

采用液氮－ＳＤＳ法、ＳＤＳ法和氯化苄法对辣椒的ＤＮＡ进行了提取。结果表明：液氮－ＳＤＳ法提取的ＤＮＡ具有典型的天然ＤＮＡ分子的标准紫外吸收光谱，其Ａ２６０／Ａ２８０在１．６０～１．７０之间，Ａ２６０／Ａ２３０在１．５～１．８之间，１００ｍｇ叶子ＤＮＡ产量为６０～９０μｇ。用该法提取的辣椒ＤＮＡ适于进行ＲＡＰＤ分析。ＳＤＳ法、氯化苄法不适于辣椒ＤＮＡ的提取。

褐飞虱不同生物型基因组DNA的RAPD分析

试验了两种DNA提取方法抽提褐飞虱基因组DNA的效果及其用所获得的DNA进行RAPD扩增的技术条件。结果发现,采用蚜虫DNA的提取方法(略有改进)来抽提褐飞虱基因组DNA,并用S系列的随机引物、RAPD的通用反应体系及94℃变性、36℃退火和72℃延伸的扩增条件来对其进行随机扩增,可获得满意的效果,不同致害类群的群体间和同一致害类群的个体间的RAPD多态性均有差异,单雌纯化只能将个体间的差异缩小,对群体间的差异无能为力。

辣椒细胞质雄性不育系与其保持系线粒体DNA的RAPD分析

以辣椒细胞质雄性不育系21A及其相应的保持系21B为试材，从苗龄10～15d的黄化苗中分离纯化线粒体并提取线粒体DNA。线粒体负染后电镜观察发现，分离纯化的线粒体形态完整，呈椭球形，杂质较少。电泳检测提取的线粒体DNA的琼脂糖，结果表明，线粒体DNA纯度较高，无降解现象，浓度为20～50ng／山，可用作RAPD分析。经初步筛选，100个RAPD随机引物中有8个引物表现出多态性，经再次重复筛选，获得了辣椒细胞质雄性不育系21A线粒体DNA与雄性不育性相关的RAPD标记CMSAG3430。

烟草胞质雄性不育系与保持系线粒体DNA的RAPD分析

用124个10碱基随机引物对烟草2对雄性不育系及其保持系线粒体DNA的RAPD分析表明,不育系与保持系间有112个引物未扩增出多态性片段,占引物总数的92.56%,这反映了不育系和保持系线粒体的同源性。同时,在不育系与保持系的线粒体基因组间也发现了明显的差异,这些差异片段与雄性不育的关系还需进一步研究。