一测多评法测定异叶青兰中4种化学成分

目的:采用一测多评法(QAMS)同时测定异叶青兰中4个化学成分含量。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)建立绿原酸(CA)、木犀草苷(L1)、迷迭香酸(RA)和木犀草素(L2)的相对校正因子(f_(s/i)),并在不同色谱柱和色谱仪上考察4种成分相对校正因子的稳定性和耐用性,比较QAMS和外标法(ESM)测定结果的差异。结果:4个成分的f_(s/i)分别为f_(CA/RA)=1.148、f_(L1/RA)=1.004、f_(L2/RA)=0.689,f_(s/i)在3种HPLC色谱仪及3个不同品牌C18色谱柱的相对标准偏差(RSD)范围为2.95%~3.61%、在不同柱温(25℃、30℃、35℃)RSD范围为0.90%~1.28%,不同体积流量(0.9 mL/min、1.0 mL/min、1.1 mL/min)下的RSD范围为1.24%~2.21%,表明相对校正因子的耐用性良好。分别采用ESM法和QAMS法对12批异叶青兰药材4个化学成分进行含量测定,结果无显著性差异。结论:使用QAMS法测定异叶青兰中4个化学成分含量准确可靠,能为异叶青兰的质量提高提供参考。

异叶青兰挥发性化学成分研究

采用毛细管气相色谱 -质谱联用法对异叶青兰挥发性化学成分进行了研究 ,经毛细管色谱分离出 184多个峰 ,共确认了其中 154种成分 ,所鉴定化合物的含量占全油的 83.52 %。用气相色谱面积归一化法测定了各成分的相对百分含量 ,其主要化学成分为 4 -甲基噻唑、6,6-二甲基 -二环 [3,3,1]-庚 - 2 -烯 - 2 -甲醇 ,4 - ( 1-甲基乙基 ) -苯甲醇、十六酸乙酯等。

异叶青兰总黄酮对高血压大鼠心肌肥厚的影响

目的观察异叶青兰总黄酮对肾性高血压大鼠心肌肥厚的影响。方法左肾动脉狭窄(2K1C)法建立高血压大鼠模型,术后第6周随机分为5组:假手术组(Sham);模型组(Model);异叶青兰总黄酮高剂量组(DHBFH)、低剂量组(DHBFL);卡托普利组(Captopril)。灌胃给药6周后进行超声心动图、心肌病理学检测,白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA的测定。结果给药6周后,模型组大鼠左心室室壁厚度、心肌细胞大小及左心室心肌间质纤维化程度较假手术组明显升高,IL-1β、TNF-α明显升高(P<0.01),MMP-9、TIMP-1 mRNA的相对表达量明显升高(P<0.01),给予DHBFH后,左心室肥厚及心肌纤维化较模型组明显降低,IL-1β、TNF-α明显降低,MMP-9、TIMP-1 mRNA的相对表达量明显降低(P<0.01)。结论异叶青兰总黄酮能改善高血压大鼠心肌肥厚及心肌纤维化程度,可能与其能够降低血压,降低IL-1β、TNF-α水平,调节MMP-9/TIMP-1的表达有关。

用毛细管GC/MS和GC/FTIR研究挥发油的化学成分

本文用毛细管GC/MS和GC/FTIR对异叶青兰和鼠曲草两种植物挥发油的化学成分进行了研究,讨论了两种方法分析挥发油化学成分的优点和局限性。

异叶青兰挥发油成分分析

目的:对维族、藏族传统用药异叶青兰挥发油成分进行分析研究。方法:用水蒸汽蒸馏法提取异叶青兰挥发油并通过气相色谱/ 质谱技术对其进行分析鉴定。结果:已鉴定出86 种成分,含有大量萜类化合物。并对其药效进行初步分析。挥发油中具有平喘,镇咳、杀菌等功效的药用成分约占总量的60 % ,其中香茅醇含量高达50-7% ,其次为芳樟醇、香茅醛、桉油精、石竹烯等。结论:异叶青兰不仅具有重要的药用价值。

异叶青兰总黄酮片剂制备及处方优化

目的设计并优化异叶青兰总黄酮片剂处方工艺。方法以药物浸膏、预交化淀粉、微晶纤维素湿法制粒,并借助辅料具有的功能复合特性,仅添加微量硬脂酸镁即可成片。再通过正交实验,以颗粒休止角、片剂硬度和崩解时间评价处方配比,获得最优处方工艺。结果最佳制粒处方比例为异叶青兰总黄酮浸膏-预交化淀粉-微晶纤维素(17∶25∶60),在颗粒中再添加1‰硬脂酸镁后制片。结论实验确立的最优处方工艺:处方简单、工艺易行;经中试实验验证,所制片剂质量考察合格,转化实际生产时可行性大,为消费者提供一种新的剂型选择。

异叶青兰化学成分研究

采用大孔树脂、硅胶、MCI及Sephadex LH-20色谱法对异叶青兰全草进行分离，应用光谱法对所得化合物进行了结构鉴定。从异叶青兰中分离得到5个化合物，分别鉴定为乌苏甲酯（methylursolate，1）、熊果酸（ursolic acid，2）、3β-羟基-齐墩果烷-3—O-β-D-葡萄糖甙（3β-hydroxy—oleanane-3—O-β-D—glucopyranoside，3）、木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖甙（1uteolin-7-O-β-D-glueopyranoside，4）、木樨草素（luteolin，5）。五个化合物均为首次从该植物中分离得到。

维药异叶青兰醇提物对肾性高血压大鼠的影响及机制研究

目的探讨异叶青兰醇提物对肾性高血压大鼠血压的影响及其降压机制。方法利用肾动脉狭窄法建立两肾一夹高血压大鼠模型;将成模的高血压大鼠随机分为假手术组、模型组、异叶青兰高剂量组(DHBE-H)、异叶青兰低剂量组(DHBE-L)、卡托普利组;灌胃给药5w,每周无创尾套法测量大鼠尾动脉血压;5w后用颈总动脉插管测血流动力学指标,采用硝酸还原酶法测定心肌组织中一氧化氮(NO)水平,化学比色法测定心肌组织中一氧化氮合成酶(NOS)水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定心肌组织中内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(AngII)水平。结果与模型组相比,异叶青兰醇提物能使肾性高血压大鼠尾动脉收缩压明显降低;颈动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、左室收缩压(LVSP)、降低左室舒张末期压(LVEDP)均显著降低,室内压对数值最大变化速率(±dp/dtmax)/LVSP和收缩指数(CI)升高,NO水平升高,ET水平降低;AngII水平降低。结论异叶青兰醇提物能降低肾性高血压大鼠血压,增强心脏舒缩功能。

异叶青兰总黄酮对去甲肾上腺素诱导大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的观察异叶青兰总黄酮(DHBF)对去甲肾上腺素(NE)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,并探讨其作用机制。方法体外培养SD乳鼠的心肌细胞,实验分为正常对照组,模型对照组(给予2μmol·L-1NE造模),哌唑嗪组(NE造模后给予哌唑嗪50μmol·L-1),DHBF低浓度组(NE造模后给予DHBF 10μmol·L-1),DHBF中浓度组(NE造模后给予DHBF 25μmol·L-1),DHBF高浓度组(NE造模后给予DHBF 50μmol·L-1)。用NE诱导心肌细胞肥大,DHBF和哌唑嗪分别对其进行干预,CCK-8法观察心肌细胞活性,RT-PCR技术检测心肌的原癌基因(c-jun)和肥大基因脑钠肽(BNP) mRNA的表达水平,Western blotting蛋白检测心肌细胞钙调素蛋白酶(Ca N)、T细胞核活化因子-3(NFAT-3)蛋白的表达水平;激光共聚焦法检测心肌细胞的表面积,观察上述干预因素对心肌细胞肥大的作用。结果与正常对照组比较,模型对照组可使心肌细胞相对生存率明显下降,心肌肥大标志物基因c-jun和BNP的mRNA表达明显上调,Ca N和NFAT-3的蛋白表达明显增加,相对表面积明显增大(P<0.05);给予不同浓度的DHBF对NE引起的心肌细胞生存率下降,表面积增大产生拮抗作用,对NE诱导的c-jun和BNP mRNA表达的增加产生拮抗作用,同时对Ca N和NFAT-3的蛋白表达增加也具有一定拮抗作用(P<0.05)。结论 DHBF能改善NE诱导的心肌细胞肥大的生存率,下调原癌基因c-jun和心肌肥大因子BNP的mRNA表达,降低心肌细胞内Ca N和NFAT-3的蛋白表达水平,减小由NE诱导的心肌细胞的表面积。

异叶青兰中黄酮和多糖连续提取工艺研究

[目的]采用正交试验法对异叶青兰中黄酮和多糖进行连续提取。[方法]以提取温度、料液比、提取时间、提取次数为因素,用正交试验法优化黄酮提取工艺;用提取黄酮后的异叶青兰滤渣,通过水提、醇沉的方法提取多糖。[结果]异叶青兰中黄酮的最佳提取工艺条件为乙醇浓度为70%,料液比1∶50,提取时间2 h,提取2次;用70%乙醇提取黄酮后的滤渣提取的多糖含量最高。[结论]该试验结果可靠,方法简便,最佳条件适合批量生产该药材的提取。

异叶青兰对高原实验家兔骨髓幼红血岛影响的体视学研究

本文应用体视学方法，对平原移居高原（海拔3900m）实验家兔骨髓幼红细胞造血岛的形态进行了研究，实验动物分子原组，高原给药组和高原对照组。结果发现：高原给药组骨髓幼红细胞造血岛作积密度（Vv）和数密度（Nv）均高于高原对照组；而高原给药组幼红细胞血岛平均层次和体积均低于高原对照组；差别有显著意义（P＜0．01）。这些指标说明用药后红血岛数量增多，体积减小。结果提示，异叶青兰对低氧环境动物骨髓幼红血岛有一定的作用，可使幼红细胞造血岛增殖或减少的变化波动较平缓。

低氧和中草药作用后的家兔肺泡Ⅲ型细胞电镜观察

肺泡Ⅱ型细胞是肺泡上皮中主要细胞之一。随着对其研究的逐渐深入,发现该细胞对正常肺脏功能行使起着举足轻重的作用。至于在高原低氧环境下,Ⅱ型细胞会发生哪些形态结构上的变化,已有人做过一些观察报道。但是,上述文献多属描述性观察报道,缺乏定量分析资料。我们的工作正是为了弥补这方面的不足,同时也为今后的形态定量分析积累一些参考数值,实验中除了观察记录之外,还测量分析了肺泡Ⅱ型细胞的七项指标。实验结果如下:高原实验动物的Ⅱ型细胞体确有增大,微绒毛减少,长度变短,线粒体数量增加(上述几项指标,P值均小于0.05)。另外还发现,抗缺氧药物——异叶青兰对低氧环境下Ⅱ型细胞的结构变化是有影响的,主要表现为,用药后的Ⅱ型细胞内板层体数量减少(P<0.05)。关于低氧和异叶青兰的作用机制还有待深入探讨。

异叶青兰对高原实验家兔红细胞作用的形态计量学研究

本文应用扫描电镜技术及形态计量学方法，对平原移居高原（海拔３９００米）实验家兔外周血红细胞进行了研究。实验分为平原组，高原给药组，高原对照组。结果发现：高原给药组家兔红细胞的直径和体积均小于高原对照组，有显著意义，（Ｐ＜０．０１）。高原给药组的红细胞体积与高原对照组相比，平均减少８．４％左右．高原给药组红细胞直径（Ｙ）与高原对照组红细胞直径（Ｘ）呈正相关，Ｙ＝０．５８，Ｐ＜０．０５。另外高原给药组红细胞直径（Ｙ）与红细胞计数（Ｘ）也呈正相关，ｒ＝０．６７，Ｐ＜０．０５。结果提示异叶青兰不仅可降低由缺氧引起的红细胞体积增大，而且还可降低红细胞的数量，从而降低血液的粘滞性，改善血循环。

异叶青兰指纹图谱的研究

采用高效液相色谱法建立不同来源异叶青兰药材的HPLC指纹图谱，为其快速质量控制提供依据。本实验采用GiminiC18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），甲醇-0．1％冰乙酸溶液进行线性梯度洗脱（柱温25℃，体积流量1．0mL／min，检测波长254nm，记录时间90min）。通过相似度分析处理9批不同产地异叶青兰药材，确立其参照指纹图谱有18个特征指纹峰，并达到较好分离。该分析方法具有很好的精密度，因此本实验建立的HPLC指纹图谱和测定方法为异叶青兰质量控制提供了依据。

异叶青兰总黄酮通过调节RAAS系统抑制高血压大鼠心肌肥厚的研究

目的观察异叶青兰总黄酮(DHBF)对高血压模型大鼠肾素血管紧张素醛固酮系统(RASS)的作用,探讨DHBF降压及抑制心肌肥厚的机制。方法两肾一夹(2K1C)法建立高血压大鼠模型,术后第6周除假手术组外,随机分为4组:模型组(Model);卡托普利组;异叶青兰黄酮高剂量组(DHBF-H)、低剂量组(DHBF-L)。灌胃给药6周后,POWERLAB系统测定血流动力学指标,进行左心室病理学检查,放免法测定血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)的水平,RT-PCR、Westernblot法测定心脏组织中血管紧张素受体1(AT1)、血管紧张素受体2(AT2)mRNA相对表达量及蛋白表达。结果给药6周后,与模型组相比,血流动力学结果显示,DHBF-H组能降低颈动脉收缩压(SBP)、降低左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、校正后室内压最大上升速率(+dp/dt max/LVSP)(P<0.05);延长舒张时间(DD)(P<0.05);DHBF各组心脏AngⅡ分别增高了3.1%和8.1%(P>0.05),DHBF-L组肾脏AngⅡ、ALD分别下降了2.4%和10.8%(P>0.05),DHBF-H组分别下降了6.4%(P<0.05)和27.5%(P<0.01),DHBF-H组ALD明显降低(P<0.01)。结论异叶青兰总黄酮能降低血压,调节高血压大鼠的血流动力学参数,抑制心肌肥厚,与其能够抑制AT1的表达和ALD的含量有关。

异叶青兰对高原家兔血液若干指标的影响

本试验选用纯种日本大耳白兔，随机分为平原组（海拔３９７米），高原组和高原给药组（海拔３９００米），分别检测实验动物外周血液的三项指标。得知；高原给药组的红细胞（ＲＢＣ）计数，明显低于高原组（Ｐ＜０．０５）。此外，高原给药组血红蛋白（Ｈｂ）含量、红细胞比积（Ｈｃｔ）均值都低于高原组。结果提示：异叶青兰对家免造血系统的低氧性改变有肯定的保护作用。

HPLC法测定异叶青兰中迷迭香酸的含量

目的建立异叶青兰中迷迭香酸含量的HPLC测定方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定异叶青兰中迷迭香酸的含量。色谱条件:Kromasil C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-1.5%乙酸水(38∶62),流速为1.0mL/min,检测波长为330nm,柱温25℃。结果迷迭香酸峰面积与进样量在0.305 6～3.972 8μg范围内有良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为98.77%,RSD为1.19%(n=6)。结论 HPLC法操作简单、准确可靠,可用于异叶青兰中迷迭香酸含量的测定。

异叶青兰总黄酮的含量测定及体外抗氧化活性研究

目的测定异叶青兰总黄酮的含量并对其进行体外抗氧化活性研究。方法采用70%乙醇加热回流提取异叶青兰总黄酮,采用硝酸铝比色法测定其总黄酮含量。以维生素C为阳性对照,检测异叶青兰总黄酮清除DPPH、ABTS自由基能力及总抗氧化能力,评价其体外抗氧化活性。结果异叶青兰总黄酮平均含量为48.6%,得率为3.6%。其对DPPH和ABTS自由基的清除率可高达82.94%和98.48%,IC50值分别为0.063 mg·mL^(-1)和0.079 mg·mL^(-1),总抗氧化能力达5.81μmol·mL^(-1)。结论该方法简单,重复性好,可用于异叶青兰总黄酮的含量测定。异叶青兰总黄酮具有良好的抗氧化活性。

维药异叶青兰总黄酮对去甲肾上腺素诱导的大鼠心肌细胞肥大的影响

目的研究维药异叶青兰总黄酮(TFDH)对去甲肾上腺素(NE)诱导的心肌细胞肥大的作用,并探讨其作用机制。方法以原代培养的新生大鼠心肌细胞与TFDH 10,25和50μmol·L^(-1)孵育30 min后,加入NE 2μmol·L^(-1)共培养48 h。CCK-8法观察心肌细胞存活率;RT-PCR法检测心肌肥大基因心房利钠肽(ANP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的m RNA表达水平;激光共聚焦法检测心肌细胞的表面积和细胞内钙离子浓度([Ca^(2+)]_i);破碎细胞后酶促反应测定Ca^(2+)-ATP酶的活性;比色法测定一氧化氮(NO)浓度和一氧化氮合酶(NOS)活性。结果与细胞对照组相比,NE 2μmol·L^(-1)刺激心肌细胞48 h,可使心肌细胞相对存活率由细胞对照组的(95±1)%下降至(78±5)%(P<0.05);细胞表面积由(178±29)μm^2显著增加至(274±38)μm^2(P<0.05);ANP和β-MHC m RNA相对表达水平显著上调,分别由细胞对照组的1.00±0.01和1.00±0.02升高至2.76±0.55和2.69±0.31(P<0.05);心肌细胞内[Ca^(2+)]_i显著升高,由细胞对照组的(1.00±0.12)升高至(1.52±0.41)μmol·L^(-1),Ca^(2+)-ATP酶的活性显著下调,由细胞对照组的(1.01±0.14)下降至(0.41±0.06)μmol·L^(-1)(P<0.05);NO浓度由细胞对照组的(1.50±0.14)下降至(1.12±0.05)μmol·L^(-1),NOS活性由细胞对照组的(0.86±0.06)下降至(0.52±0.10)μmol·L^(-1)(P<0.05)。给予TFDH 10~50μmol·L^(-1)能对抗NE引起的心肌细胞存活率下降和表面积增大,对NE引起的ANP和β-MHC m RNA表达增加也有一定抑制作用(P<0.05),同时对心肌细胞内[Ca^(2+)]_i升高、Ca^(2+)-ATP酶活性下降及NO浓度和NOS活性下降也具有一定的对抗作用(P<0.05)。结论TFDH能改善NE诱导的心肌细胞肥大,提高心肌细胞存活率,下调ANP和β-MHC m RNA的表达,减小心肌细胞表面积,其机制可能与促进NO释放、调节细胞内Ca^(2+)浓度和a^(2+)-ATP酶活性有关。

异叶青兰生药学研究

目的:对异叶青兰进行生药学研究。方法:按照中国植物志规范对异叶青兰原植物进行性状鉴别并对叶片、花托、茎等部位进行细致描述,使用BX53生物显微镜对异叶青兰各部位进行粉末显微鉴别,使用HistoCore MULTICUT生物轮转式切片机对异叶青兰进行茎横切和叶横切,并在BX53生物显微镜下对其进行观察及标注各个部位,使用SZX-16体式荧光显微镜对异叶青兰种子进行鉴别并描述,参考2020版中国药典第一册的薄层研究方法对齐墩果酸、迷迭香酸、木犀草素进行薄层鉴别及方法提高。结果:异叶青兰药材性状与现有植物描述一致,显微鉴别特征图片清晰,薄层鉴别结果显示,供试品色谱在与对照品色谱对应的位置显示相同颜色的斑点,且10批异叶青兰成分较为相似,均显示出明显的迷迭香酸,木犀草素,木犀草苷,齐墩果酸斑点。其中,迷迭香酸斑点深浅差别较大。结论:本研究方法能够有效对异叶青兰进行生药学鉴定,为提高异叶青兰质量标准提供参考。