Minocycline对rhHGF刺激ECV304细胞株表达MMP9的抑制作用

目的探讨重组人类肝细胞增殖因子(recombinant human hepatocyte growth factor,rhHGF)刺激ECV304细胞株表达基质金属蛋白酶-9(matrjx metalloproteinase-9,MMP-9)的作用及米诺环素(minocycline)的影响作用.方法绘制正常ECV304细胞株生长曲线,明确最适生长浓度及对数生长期;明确rhHGF及minocycline的作用浓度;流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测ECV304细胞株的MMP-9水平.结果①ECV304细胞株的最适生长浓度为1.0E+4/mL,对数生长期为3～5d;rhHCF的作用浓度为8ng/mL,minocycline的作用浓度为1.0E-5mol/L.②对照组MMP-9的表达量为39.74%;培养基中加入rhHGF8ng/mL后,细胞存活率为1.388169±0.102033(P＜0.01),MMP-9的表达量为40.32%;培养基中加入minocycline1.0E5mol/L后,细胞存活率为0.294526±0.076829(P＜0.01),MMP-9的表达量为19.92%.③培养基中加入minocycline 1.0E5mol/L 15min后加入rhHGF 8ng/mL,细胞存活率为0.397291±0.099504(P＜0.01),MMP-9的表达量为22 28%.结论rhHGF可刺激ECV304细胞株增殖,使MMP-9的表达量增加;minocycline可抑制ECV304细胞株增殖,使MMP-9的表达量降低;minocycline可拮抗rhHGF所引起的ECV304细胞株增殖,从而使MMP-9的表达量降低.

舒林酸和吲哚美辛对人血管内皮细胞ECV304的生长抑制作用

目的 体外研究非甾体类消炎药对人血管内皮细胞的生长抑制作用。方法 采用舒林酸和吲哚美辛作用于人脐静脉内皮细胞株ECV30 4 ,并设置不同的作用浓度和作用时间 ,以体外药物敏感实验 (MTT)检测舒林酸和吲哚美辛在不同浓度及作用时间下对ECV30 4细胞的增殖抑制效应 ;以流式细胞仪技术和Hoechst332 5 8荧光染色检测药物作用后细胞有无凋亡改变及其形态学变化。结果 舒林酸和吲哚美辛在体外对ECV30 4细胞均有显著的生长抑制作用 ,并且具有时间和剂量依赖性 ,舒林酸能显著诱导ECV30 4细胞产生凋亡。结论 舒林酸和吲哚美辛在体外具有良好的抑制人脐静脉内皮细胞株ECV30 4生长的作用 ,非甾体类消炎药能够诱导血管内皮细胞产生凋亡而抑制其生长 ,同时也可能存在其他的作用机制。

ECV304内皮细胞株的钙激活非选择性阳离子通道及肿瘤坏死因子-α的抑制作用

目的 研究人脐静脉内皮细胞株 ECV304的钙激活非选择性阳离子通道的特征和肿瘤坏死因子-α (TNF-α )对该通道的调控作用。方法 膜片箝细胞贴附式单通道和全细胞方式记录通道活动。结果 内皮细胞膜的单通道活动可被钙离子激活，通道电导γ =(19.74± 2.35)pS(n=7)，通道平均开放概率 Po=0.260± 0.006(n=5)。通道活动可被 TNF-α抑制，表现为通道电导和开放概率降低，分别为γ 1=(10.69± 4.68)pS(n=5)， Po1=0.230± 0.050(n=5)。用膜片箝的全细胞记录所得结果与单通道记录一致。通道活动还可被氯通道阻断剂蒽 9羧酸 (Anthracene-9-Carboxylic acid, A9C)显著地抑制，将电极液中的 KCl和 NaCl用 K-Aspartate置换，电极液不含氯离子，也记录到单通道活动。其单通道电导为 (18.33± 2.98)pS(n=8)，通道活动也能被 TNF-α和 A9C所抑制，但不能被另一氯通道阻断剂 ZnSO4所抑制。又置换 K-Aspartate为 CsCl未记录到未置换溶液前的结果。 Cs＋难以通过此通道，提示所记录到的通道活动不是钙激活氯通道 ICl(Ca)，而是钙激活非选择性阳离子通道。结论 内皮细胞株 ECV304的非选择性阳离子通道可被肿瘤坏死因子 TNF-α和 A9C所抑制。

血小板对ECV304细胞PTA1表达和PDGF释放的影响

目的:探讨血小板对妊高征患者血清刺激下的ECV304细胞(ECV304)表达人血小板/T细胞活化抗原1(PTA1)和释放血小板衍生生长因子(PDGF)的影响。方法①用间接免疫荧光染色结合流式细胞仪分析观察血小板与妊高征患者血清刺激的ECV304细胞孵育前后PTA1的表达②用ELISA方法检测血小板与妊高征患者血清刺激的ECV304细胞孵育前后PDGF的量。结果:①血小板与妊高征患者血清刺激(24h、48h)的ECV304细胞孵育后PTA1表达的百分率(6.32%、4.13%)明显低于对照组(15.51%、5.64%)(P<0.05)。②妊高征患者血清刺激ECV304细胞8h、24h、48h释放PDGF的量(1593、2625、2175ng/L)明显高于正常孕妇组(235、405、133.5ng/L)差异显著(P<0.01)。③血小板与妊高征患者血清刺激的ECV304细胞孵育后,24h、48h细胞培养上清液中PDGF-B的量又进一步增加(3266、2360ng/L),与对照组比差异显著(P<0.05)。结论:ECV304细胞与血小板之间的黏附可能是通过PTA1分子发挥作用的,同时导致了PDGF的进一步释放。

他克莫思对rhHGF刺激ECV304细胞株表达MMP-9的抑制作用

目的 :探讨重组人类肝细胞增殖因子 (rh HGF)刺激 ECV30 4细胞株表达基质金属蛋白酶 - 9(MMP- 9)的作用及他克莫思 (Tacrolimus,FK5 0 6 )的抑制作用。方法 :绘制正常 ECV30 4细胞株生长曲线 ,明确最适生长浓度及对数生长期 ;明确 rh HGF及 FK5 0 6的作用浓度 ;流式细胞仪 (FCM)检测 ECV30 4细胞株的 MMP- 9水平。结果 :1ECV30 4细胞的最适生长浓度为 1.0 E+ 4 / ml,对数生长期为 3～ 5 d;rh HGF的作用浓度为 8ng/ ml,IC50 为 8.2 7ng/ ml;FK5 0 6的作用浓度为 5 0 ng/ ml,IC50 为 5 1.6 3ng/ ml。 2对照组 MMP- 9的表达量为 39.74 % ;培养基中加入rh HGF 8ng/ ml后 ,细胞存活率为 1.38816 9± 0 .10 2 0 33(P<0 .0 1) ,MMP- 9的表达量为 4 0 .32 % ;培养基中加入FK5 0 6 5 0 ng/ ml后 ,细胞存活率为 0 .39876 4± 0 .0 92 4 76 (P<0 .0 1) ,MMP- 9的表达量为 14 .6 1% ;培养基中加入FK5 0 6 5 0 ng/ ml15 min后加入 rh HGF8ng/ ml,细胞存活率为 0 .76 72 0 3± 0 .0 2 6 39(P<0 .0 1) ,MMP- 9的表达量为 35 .0 8%。结论 :rh HGF可刺激 ECV30 4细胞增殖 ,使 MMP- 9的表达量增加 ;FK5 0 6可抑制 ECV30 4细胞增殖 ,使 MMP- 9的表达量降低 ;FK5 0 6可拮抗 rh HGF所引起的 ECV30 4细胞增殖 ,从而使 MMP-

内皮素受体拮抗剂C2010对内皮细胞系ECV304增殖和凋亡的影响

目的观察内皮素受体拮抗剂C2010对内皮细胞系ECV304的作用,为进一步探讨其抗肿瘤作用提供依据。方法磺酰罗丹明B(SRB)方法评估内皮素受体拮抗剂C2010对内皮细胞系ECV304增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响。结果 C2010在204、0μg/mL给药48 h后对ECV304细胞增殖有剂量依赖的显著抑制作用,抑制率分别为12.67%、43.32%,并能使ECV304细胞凋亡数量增加。结论 C2010对内皮细胞ECV304有抑制增殖作用和诱导凋亡作用。

槲皮素对血管内皮细胞增殖和迁移的抑制作用

本实验研究了槲皮素对人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)增殖和迁移的抑制作用。研究发现 ,槲皮素作用一定的时间后 ,能明显抑制ECV30 4细胞的增殖 (IC50 为 5 0 .0 8μg/ml)和迁移 (IC50 为 7.84μg/ml) ,而且其抑制作用呈浓度依赖性 ;细胞出现凋亡形态学改变 ,琼脂糖凝胶电泳形成DNA条带 ,推测其诱导细胞发生了凋亡。

青蒿琥酯对成纤维细胞和内皮细胞的选择性研究

目的:探讨青蒿琥酯(Art)是否对成纤维细胞增殖有特异的细胞选择作用。方法:选用人胚肺成纤维细胞株(HLF)、人皮肤瘢痕成纤维细胞(HSF)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用免疫组化法鉴别细胞;MTT法检测青蒿琥酯对上述3种细胞存活与增殖的影响;光镜观察青蒿琥酯作用下细胞形态学的改变;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA的变化。结果:青蒿琥酯在30～240mg·L-1浓度范围内作用细胞24h对两种来源的成纤维细胞的增殖都具有明显的抑制作用(P<0.05),对血管内皮细胞增殖抑制作用不明显(P>0.05)。药物作用24h后,HLF、HSF、HUVEC细胞的IC50分别为:64、60、600mg·L-1。光镜下见两种成纤维细胞用药组细胞变圆,突起变短变少,胞浆颗粒增多;而内皮细胞在形态上无明显的变化。琼脂糖凝胶电泳结果显示在240mg·L-1浓度作用24h,两种成纤维细胞的DNA出现梯带状的电泳图谱,而内皮细胞的DNA无梯状条带。结论:青蒿琥酯对来源于肺和皮肤的成纤维细胞的增殖具有抑制作用,而对血管内皮细胞生长增殖无明显的影响。该药还能诱导两种成纤维细胞凋亡,而对脐静脉内皮细胞无明显诱导凋亡的作用。

人类ERMAP基因在不同细胞系中表达的研究

为了探讨人类ERMAP基因在不同细胞系的表达谱和表达量的特点,选择血液肿瘤、实体瘤、正常组织细胞等不同类型的15种细胞系,在培养的12、24、36、48、60、72小时共6个时间点采集细胞,用荧光定量PCR检测人类ERMAP基因表达量。结果发现,K562细胞在培养12、24小时时ERMAP基因表达阳性,其表达量分别为(5.092±2.331)×106cps/μlRNA、(5.328±3.916)×106cps/μlRNA;ECV304细胞在培养24小时时ERMAP基因表达阳性,其表达量为(0.84±0.12)×106cps/μlRNA,其余13株细胞系ERMAP基因表达阴性。结论:首次发现人类ERMAP基因在ECV304细胞系中表达,进一步证实ERMAP在K562细胞系中表达。

猪、熊胆粉主要成分对ECV304细胞缺氧损伤保护作用的比较

目的 比较猪胆粉与熊胆粉中胆酸类主要成分对细胞缺氧损伤保护作用的差别 ,为猪胆粉替代熊胆粉用于中风病治疗提供实验依据。方法 培养的ECV30 4细胞 ,用连二亚硫酸钠造成缺氧损伤 ,并分别以MTT比色法、LDH漏出率和台盼蓝染色法进行检测 .比较猪胆粉与熊胆粉中胆酸类主要成分对细胞缺氧损伤保护作用的差别。结果 应用连二亚硫酸钠造成ECV30 4细胞明显损伤 ,而猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸钠均使ECV30 4细胞的缺氧损伤明显减轻 ,与对照组间有显著差异 ,但三组间没有明显差别。结论 猪去氧胆酸对ECV30 4细胞缺氧损伤具有与牛磺熊去氧胆酸相类似的保护效应 ,提示猪胆粉可替代价格昂贵的熊胆粉用于中风病的治疗。