肿瘤坏死因子α介导内皮素所致人肾小球系膜细胞增殖

目的 :探讨内皮素 1(endothelin 1,ET 1)致人肾小球系膜细胞 (humanmesangialcell,HMC)增殖的介导途径。方法 :用ET 1和抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactorα,TNFα)中和抗体孵育HMC ,3 H 胸腺嘧啶参入法测定HMC增殖 ,Northern杂交方法测定mRNA表达及放射免疫法测定TNFα蛋白质水平。结果 :10 -7mol·L-1ET 1能刺激HMC增殖 ,使TNFαmRNA表达上调及TNFα蛋白质分泌增多 (12、2 4h两组与对照组比较 ,差异有显著性 ) ;抗TNFα中和抗体 (0 .10～ 1.0 0mg·L-1)能部分抑制ET 1所致HMC增殖 ,但对ET 1所致HMCTNFαmRNA表达上调无明显影响。结论 :ET 1能够刺激HMC增殖并使HMC合成和分泌TNFα ;ET

白细胞介素10对人肾系膜细胞的细胞间粘附分子1表达的抑制作用通过核因子κB介导

目的：研究白细胞介素１０对白细胞介素诱导的人肾小球系膜细胞的细胞间粘附分子１表达的影响及其细胞内作用机制。方法：用细胞ＥＬＩＳＡ法检测，ＣＤ５４蛋白水平表达，以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法测定ＣＤ５４的基因表达，采用电泳迁移率变动法观察核因子ｋＢ的活性。

炎症因子内皮素-1对肾小球系膜细胞周期G_1期调控蛋白表达的影响

目的：研究内皮素-1对肾小球系膜细胞周期G1期进展的调控机制。方法：应用免疫组织化学、免疫印迹分析等技术检测系膜细胞在内皮素-1刺激增殖时，细胞内G1期调控蛋白cyclinD1和cdk4表达的变化。结果：正常指数式生长的系股细胞核内表达二种蛋白，在内皮素1刺激下G1期进展中cyclinD1表达增加，cdk4表达变化不明显。结论：cyclinD1是体外培养肾小球系膜细胞针对炎症因子内皮素1刺激时G1期进展的重要调节蛋白。

内皮素反义寡聚脱氧核苷酸抑制肾小球系膜细胞增殖

目的 :应用反义寡核苷酸技术 ,对培养的人肾小球系膜细胞 (glomerularmesangialcells,GMC)进行内皮素 1(endothelin ,ET 1)基因表达的抑制试验 ,探讨ET 1基因表达与GMC增殖效应的关系。方法 :以阳离子脂质体lipofectin介导的基因转移方法 ,将前内皮素原 ppET 1的反义寡聚脱氧核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotide ,As ODN)及其对照序列正义寡聚脱氧核苷酸 (senseoligodeoxynucleotide ,Se ODN)、错配寡聚脱氧核苷酸 (mismatcholigodeoxynucleotide ,Mis ODN)分别导入GMC。通过生物素标记的As ODN显色反应 ,观察寡聚脱氧核苷酸的转移效果 ;用半定量反转录聚合酶链反应 (reversetranscription polymerasechainreaction ,RT PCR)检测寡核苷酸链对GMC的 ppET 1mRNA表达的影响 ;用放射免疫分析 (radioimmunoassay ,RIA)观察寡核苷酸链对GMC的ET 1蛋白分泌的作用 ;用氮蓝四唑盐 (MTT)试验分析寡核苷酸链对GMC增殖的效应。结果 :寡核苷酸链被转移入GMC。10nmol·L-1As ODN抑制了GMC的 ppET 1mRNA表达、ET 1蛋白合成和细胞增殖 (各组P <0 .0 5 )。 结论 :特异抑制GMC的 ppET 1基因表达能够抑制其增殖 ,证实GMC产生的ET 1能刺激GMC自身的增殖 ,ET 1是GMC自分泌炎症介质之一。