虎纹蛙(RANA RUGULOSA)视网膜结构与环境适应性的研究

在光镜和电镜下观察了虎纹蛙 (Ranarugulosa)视网膜的组织结构 ,着重探讨了色素细胞和视细胞的形态结构 .视网膜中三个核层及两个网状层分布均匀 ,无中央凹 .色素细胞内含有大量的脂滴、色素颗粒、髓样体和形状各异的溶酶体等 .视细胞由视杆细胞和视锥细胞组成 ,视杆细胞占多数 .在视网膜中央区 ,视杆细胞数与视锥细胞数之比为1:1;在周缘区 ,两者数量之比为 3:1.视杆细胞外段呈高柱状 ,体积远远大于视锥细胞外段 ,肌样体内有大量的微管 .视锥细胞外段呈矮锥形 ,椭圆体内有一球状小体 .视细胞与节细胞数量之比为 3.6 8:1.结果表明 ,虎纹蛙视网膜结构特征与其生活于田间、山涧等弱光环境和捕食习性是相适应的 .图版 1(图 1～图 10 )表 2参

虎纹蛙（Rana tigerina rugulosa）的食性与繁殖习性的研究

本文研究报道虎纹蛙（ＲａｎａｔｉｇｅｒｉｎａｒｕｇｕｌｏｓａＷｉｅｇｍａｎｎ）的生态习性特点．该蛙性凶猛，蝌蚪以活的小动物为主食，也会互相残杀，成体则喜吃昆虫和蟛蜞；繁殖期为４～８月，高峰期为４月下旬～５月中旬；属于一年多次产卵类型；卵群形态为小片状，沿着水域的岸边分布；个体发育迅速，春末夏初产卵发育而成的雄蛙，在当年冬眠之前可达性成熟．

pH值和温度对虎纹蛙消化系统蛋白酶活力的影响

采用福林-酚试剂法,就pH值和温度对虎纹蛙(Ranarugulosa)消化系统蛋白酶活力的影响进行了研究.结果表明,虎纹蛙食道、胃、前肠、后肠、直肠和胰脏蛋白酶的最适pH值分别为1.5、1.5、7.4、7.4、7.4和9.6,最适温度则均为50℃.文中对蛙类的人工养殖提出了几点建议.

黑斑蛙、虎纹蛙和牛蛙皮肤的比较组织学

应用H.E和V.G胶原染色法对黑斑蛙(Rana nigromaculata)、虎纹蛙(Rana rugulosa)和牛蛙(Rana catesbeiana)皮肤进行了组织学观察和参数测量与比较.结果表明:三种蛙皮肤组织结构相似,但皮肤厚度、各组织层相对厚度及腺体密度存在较明显的种间差异和部位差异.虎纹蛙的皮肤最厚(0.44-0.68mm),牛蛙其次(0.28-0.60mm),黑斑蛙最薄(0.19-0.38mm);在三种蛙中,黑斑蛙躯体多数部位表皮相对厚度为15.1%-22.6%,较虎纹蛙(10.9%-17.7%)和牛蛙(9.9%-21.8%)厚.虎纹蛙和牛蛙皮肤胶原纤维层相对厚度分别为59.9%-68.7%和51.6%-75.3%,较黑斑蛙(44.4%-69.0%)厚;黑斑蛙和虎纹蛙躯体多数部位的颗粒腺密度(4.5-23.1个/mm2;8.9-25.3个/mm2)和粘液腺(54.1-152.2个/mm2;68.6-127.5个/mm2)较牛蛙(1.4-10.8个/mm2;16.8-39.3个/mm2)高.研究结果可供蛙类皮肤的合理开发利用参考.

虎纹蛙消化道两种内分泌细胞的免疫组织化学定位

目的:研究虎纹蛙消化道5-羟色胺和生长抑素兔疫阳性细胞的形态与分布。方法:免疫组织化学技术。结果:5-羟色胺免疫阳性细胞在消化道各段均有分布。十二脂肠密度最高,直肠其次,食道最低。生长抑素免疫阳性细胞主要分布于胃幽门部和胃体,小肠各段亦有少数分布,直肠和食道中没有。结论:虎纹蛙消化道5-HT和SS免疫阳性细胞的分布和形态特点与多种动物相似。

棘胸蛙、虎纹蛙、黑斑蛙血细胞的比较

应用Giemsa染色法对棘胸蛙、虎纹蛙和黑斑蛙的血细胞进行显微观察和各形态参数测定, 并对各类细胞作了图示和描述。结果表明, 红细胞和白细胞的形态和数量比例有一定属和种的特征, 并与其生长环境和进化地位有一定联系。

虎纹蛙白内障病病原的分离鉴定及其免疫防治

本文报道了海南养殖虎纹蛙白内障病的病原及其免疫学防治方法。对该典型患病个体进行病原分离并鉴定表明 ,被分离出的病原为脑膜炎败血黄杆菌。在所实验的 2 0种抗菌药物中 ,该菌只对万古霉素敏感 ,对头孢哌酮中度敏感 ,而对其他 18种药物均不敏感。通过筛选该病原强毒株制备甲醛灭活疫苗 ,对健康虎纹蛙进行免疫接种后 ,可明显提高其对该病的抵抗能力 ,表明在生产上用免疫学方法防治该病是可行的。

虎纹蛙的早期胚胎发育

报道了虎纹蛙的早期胚胎发育. 自受精卵期至鳃盖完成期共分25 时期, 其发育进程及各期胚胎的形态特征与一般蛙科种类基本相似, 但其受精卵期和8 细胞期有明显的特异之处. 在水温18～23℃下, 其胚胎发育的全过程历时约126 h.

虎纹蛙消化道肥大细胞类胰蛋白酶免疫组化研究

研究采用小鼠抗人肥大细胞类胰蛋白酶单克隆抗体AA1,应用ElivisionTM plus免疫组化染色法对虎纹蛙(Rana tigrina rugulosa)消化道组织中类胰蛋白酶阳性肥大细胞存在的可能性进行研究。研究发现单克隆抗体AAl可与中性缓冲福马林液固定的虎纹蛙组织的肥大细胞获得良好的交叉反应,类胰蛋白酶阳性细胞胞浆染成棕黄色,证实虎纹蛙肥大细胞胞浆颗粒中也存在类胰蛋白酶。虎纹蛙组织中AA1免疫染色阳性细胞的分布,与AB/SO和改良甲苯胺兰染色阳性细胞的分布存在较大的差异:虎纹蛙类胰蛋白酶阳性细胞数量很少,且阳性反应比人胃癌间质肥大细胞弱,主要见于黏膜型肥大细胞(MMC)分布区域,如消化道黏膜上皮下方和固有层,少量分布于肠绒毛基底部及食管腺和胃腺周围。而在结缔组织型肥大细胞(CTMC)分布区域,如消化道黏膜下层结缔组织中却未见类胰蛋白酶阳性细胞。AB/SO和改良甲苯胺兰染色阳性细胞数量多,广泛分布于消化道黏膜固有层、黏膜下层、腺体之间、肌间及外膜结缔组织,说明并不是所有的虎纹蛙肥大细胞都含有类胰蛋白酶。很有可能是虎纹蛙MMC中含有类胰蛋白酶,而CTMC中不含类胰蛋白酶。虎纹蛙类胰蛋白酶阳性细胞数量很少,且阳性反应比人胃癌间质肥大细胞弱,说明虎纹蛙肥大细胞胞浆颗粒类胰蛋白酶含量较少,虎纹蛙属于低等脊椎动物,可能与生物进化水平较低有关,有待进一步研究。

虎纹蛙病毒体外培养及其理化特性

从发病濒死的虎纹蛙(Rana tigrina rugulosa)蝌蚪中分离到一种病毒。在25℃条件下,该病毒能在鲤鱼表皮瘤细胞系(EPC),胖头肌肉细胞系(FHM)和草鱼性腺细胞系(CO)三种鱼类细胞上产生空斑状的细胞病理变化(CPE)。该病毒对氯仿,热(56℃,30min)和酸(pH3)敏感。其体外培养的适合增殖温度范围为20～30℃。 电镜下观察,病毒为对称的二十面体,切面正六边形,对角直径125nm左右。

金华地区虎纹蛙消化道形态解剖学观察

对金华地区虎纹蛙消化道各部进行了形态解剖学观察.结果表明:虎纹蛙消化道较为明显地分为口咽腔、食道、胃、十二指肠、空肠、回肠、直肠和泄殖腔.同时,对其主要的消化腺肝脏和胰脏进行了观察与测量.观察分析表明虎纹蛙消化道的结构与其食性是相适应的.

中国虎纹蛙与泰国虎纹蛙的遗传多样性比较

本文应用RAPD技术,研究了中国虎纹蛙(Rana tigrina rugulosa)和泰国虎纹蛙(R.tigrina cantor)的种内种间遗传多样性及种质特异性分子标记,结果表明:中国虎纹蛙和泰国虎纹蛙多态位点比例(P)分别为53.77%和70.79%;遗传多样性指数(H)分别为0.1345和0.1780;种间的遗传相似系数(S)为0.4238,遗传距离(D)为0.6613。两种虎纹蛙遗传多样性都较丰富,但中国虎纹蛙的遗传变异程度较泰国虎纹蛙低。在OPA、OPF、OPP、OPZ几个系列随机引物的扩增中得到了可用于鉴别两种蛙的12条特异性谱带。

虎纹蛙视觉器官组织学研究

用光镜和电镜观察了虎纹蛙 (Rana rugulosa)眼球的组织结构 ,同时测量了其眼球的一些视参数 .虎纹蛙眼球呈圆球形 .角膜内未见前界膜 ;虹膜内可见少量括约肌 ,但未见扩瞳肌纤维 ;虹膜的内侧面有许多突起 ;巩膜有完整的半球形软骨 ;晶状体环垫薄 ,因而视觉调节能力很弱 .视网膜中视细胞由视杆细胞、视锥细胞组成 ,其中视杆细胞占多数 .视细胞与神经节细胞数量之比为 3 .68∶ 1 .

虎纹蛙和大树蛙肾细胞超微结构及其与环境适应性的关系

用透射电镜比较了大树蛙和虎纹蛙肾细胞的超微结构 .大树蛙近曲小管上皮细胞具发达的质膜内褶迷路 ,虎纹蛙近曲小管上皮细胞无此结构 ;大树蛙远曲小管上皮细胞含丰富的质膜内褶 ,虎纹蛙远曲小管上皮细胞的质膜内褶较少 ;两种蛙的集合管上皮细胞都有质膜内褶迷路 .结果表明 ,虎纹蛙和大树蛙之间肾细胞超微结构特征的差异是与它们不同的栖息环境和生态习性相适应的 .图版 1参

酸胁迫对虎纹蛙红细胞及血红蛋白的影响

采用室内水族箱培养方法,研究了不同酸梯度对虎纹蛙(RanatigerinarugulosaWiegmann)红细胞和血红蛋白的影响。结果表明,在pH3.5～pH5.0之间,酸胁迫对虎纹蛙的红细胞数量及血红蛋白含量具有较明显的剂量效应,其中pH3.5条件下对虎纹蛙红细胞和血红蛋白产生了较强的毒害作用,并且随着时间的推移对红细胞及血红蛋白的影响呈现逐渐加重的趋势。随着pH值的上升,其红细胞数量和血红蛋白含量也逐渐增大。pH值≥pH5.5可能是虎纹蛙较为适宜的水体环境。试验表明,酸胁迫可对虎纹蛙造成较为严重的危害,可将虎纹蛙红细胞数量和血红蛋白含量的变化作为检测水体酸污染的指标和手段。

环境因素对虎纹蛙胚胎发育的影响

就温度、盐度、p H值及水中溶氧四个环境因素对虎纹蛙胚胎发育的影响进行了系统研究。结果表明 :其适宜的孵化水温为 2 0～ 30℃ ,在此温度范围内 ,随着温度的升高 ,胚胎发育速度加快 ,水温在 (30± 1)℃时 ,胚胎发育到鳃盖完成期需 58.8h,孵化率为 84 .2 % ;水温 (2 0± 0 .5)℃时 ,需 2 0 3.9h,孵化率为 89.0 % ;水温 (2 5± 1)℃时 ,需时 84 .0 h,孵化率最高 ,达 94 .5%。盐度对虎纹蛙胚胎发育影响很大 ,盐度越高 ,胚胎畸形率越高 ,且发育经历时间越长 ,孵化水体的盐度应在 1.9以下 ,最适宜用淡水孵化。p H过高或过低都对胚胎发育不利 ,孵化水体的 p H值以 6 .5～ 8.5为宜。虎纹蛙胚胎发育的不同阶段对水中溶氧量要求不同 ,在肌肉效应期、鳃血循环期和鳃盖完成期 ,水中溶氧的半致死浓度分别为0 .57mg/ L、1.13mg/ L和 0 .4 0 mg/ L。

虎纹蛙四个Sox基因的克隆及序列分析

参照人SRY基因HMG box保守区的序列 ,设计一对兼并引物 ,扩增了虎纹蛙的Sox基因 ,并对扩增产物进行了克隆和测序。结果在雌雄个体中共筛选出四个不同的Sox基因 ,其序列与人相应SOX基因的相似性分别为92 %、94%、98%和 98%。本研究为探索虎纹蛙的性别决定机制提供了分子资料。

GnRH对虎纹蛙LH和FSH分泌活动的调节作用

通过在体和离体实验，研究了ｍＧｎＲＨ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ对生殖前期虎纹蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的合成与分泌的影响．结果表明：在体条件下，ｍＧｎＲＨ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ都能极显著刺激♀蛙和♂蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的释放，也能显著升高♀蛙垂体ＬＨ的含量，但对♂蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的含量无明显影响；ｃＧｎＲＨ－Ⅱ能极显著升高♀蛙垂体ＦＳＨ的含量．在刺激♀蛙垂体ＬＨ的合成、释放以及♂蛙垂体ＦＳＨ的释放方面，ｍＧｎＲＨ的作用显著强于ｃＧｎＲＨ－Ⅱ．离体实验中，０．１ｎｇ／ｍＬ的ｍＧｎＲＨ和１ｎｇ／ｍＬ的ｃＧｎＲＨ－Ⅱ都能极显著刺激离体♀蛙垂体碎片ＬＨ的释放．

泰国虎纹蛙与中国虎纹蛙早期胚胎发育比较研究

比较了泰国虎纹蛙与中国虎纹蛙在控温条件下的胚胎发育过程。结果表明:两亚种蛙在右鳃封闭期与鳃盖完成期之间有明显的"角质颌出现"的特征,因而在传统分期的基础上增加了一个"角质颌出现期",从而将两者自受精卵开始到鳃盖完成期为止划分为26个时期;两亚种蛙大部分发育时期外形特征基本相同,但八细胞期细胞的排列方式,两亚种蛙神经褶期的神经沟形状、纤毛出现期的神经褶棱高度等均不同;泰国虎纹蛙的发育速度较快,自受精卵期到鳃盖完成期共耗时70.4h,中国虎纹蛙在相同的条件下则需92.5h,但在四细胞期、八细胞期、神经管期和尾芽期,泰国虎纹蛙的发育速度却较中国虎纹蛙慢。

基于RAPD的SCAR分子标记技术鉴定虎纹蛙及引进种

为了对引进种泰国虎纹蛙加强种质监测,本文对泰国虎纹蛙和中国虎纹蛙进行了SCAR标记研究。在对2种蛙随机扩增多态DNA(RAPD)标记研究的基础上,选用随机引物OPP5和OPZ19对2种蛙进行扩增,将2个特异性扩增片段OPP5-471bp和OPZ19-512bp回收、克隆和测序,并根据序列信息设计两对SCAR引物SP5和SZ19。利用两对SCAR引物对2种蛙基因组DNA扩增的结果显示:SP5显示了其特异性,在对中国虎纹蛙的扩增中出现了单一SP5-388bp特异片段,而在泰国虎纹蛙中没有扩增产物;SZ19在对2种虎纹蛙的扩增中出均出现了单一条带,但片段大小不同,在中国虎纹蛙中为SZ19-456bp,在泰国虎纹蛙中为SZ19-497bp。3个分子标记都可作为基于RAPD成功转化后的SCAR分子标记对2种虎纹蛙进行鉴定。