鼠尾肌腱胶原蛋白的提取及凝胶的制备

为了探索鼠尾肌腱胶原蛋白在实验医学中的应用，用简单的方法溶解新鲜大白鼠鼠尾肌腱，从中提取较纯的胶原蛋白，制成胶原凝胶。将提取的胶原蛋白液进行定性、定量鉴定。结果：提取液主要为Ⅰ型胶原蛋白；72小时37℃恒温培养箱内培养无细菌生长；紫外分光光度计测定，吸收高峰为230nm；氨基酸成分主要为甘氨酸：占40％．辅氨酸：14．3％。显微镜下见：相互交织的胶原原纤维结构组成的网状结构；纤维均匀．有规则横纹。胶原蛋白液在37℃恒温下，可制成凝胶，用于培养细胞；用磷酸液冲洗胶原蛋白凝胶可成固体片状，制成胶原膜，用作医用材料。

外周血来源内皮祖细胞三维血管新生模型的建立及其特性分析

目的观察内皮祖细胞(EPC)在血管新生中的作用及其生物学特性。方法取大鼠外周血分离出EPC,观察其在体外的培养和扩增情况,对培养的EPC进行检测,同时建立三维立体模型并分析。结果成功分离出外周血中的EPC,在平面培养时,各时间点经VEGF诱导的EPC(实验组)其增殖情况均优于无VEGF诱导的EPC(对照组),P<0.01。在由鼠尾胶原凝胶制成的三维基质中EPC向胶原基质内生长,1d内即可出现向胶原内的出芽及浸润,并逐渐形成分支样结构;实验组生长快,向胶原基质内浸润速度快、出芽快,管状结构粗大;而对照组生长慢、出芽慢,管状结构细小,向胶原内浸润的深度浅,网状结构稀疏,不完整;实验组各时相三维基质中新生血管数目均多于对照组(P<0.01)。结论鼠尾胶原凝液可以诱导EPC参与血管新生的迁移、增殖、发芽等步骤;EPC三维基质模型可用于新生血管的研究。VEGF能动员和诱导EPC促进血管新生。

人胎肝细胞分离与培养技术的研究

目的 探讨分离及培养人胎肝细胞的最佳方法。方法 比较两种灌流消化法对分离人胎肝细胞的效果 ,观察不同条件对体外培养人胎细胞生长及生存时间的影响。结果 经腹主动脉及脐静脉双灌流消化法分离人胎肝细胞效果明显优于单纯经脐静脉灌流消化法 ,前者肝细胞获得率为 (5.97± 1 .81 )× 1 0 8/kg体重 ,后者肝细胞获得率为 (4 .1 2± 2 .3 1 )× 1 0 8/kg体重 (P <0 .0 5)。促肝细胞生长素对体外培养的人胎肝细胞生长和生存时间无明显影响 ,均在培养第 1 0～ 1 4天开始变性、坏死。鼠尾胶可延长体外培养人胎肝细胞的生存时间达 2 0～ 2 8d。与球体细胞培养方法相结合 ,人胎肝细胞在体外生存时间延长至 3 0～ 3 8d。结论 人胎肝细胞的分离应首选经腹主动脉及脐静脉双灌流消化法。人胎肝细胞在体外生存时间受培养条件的影响。