少年型亨廷顿病临床与基因突变分析

研究背景亨廷顿病是一种常染色体显性遗传性神经系统退行性疾病,临床主要表现为舞蹈样动作、进行性认知功能减退及精神症状,神经影像学检查显示尾状核和大脑皮质萎缩。其致病基因IT15定位于4p16.3,由67个外显子组成编码亨廷顿蛋白,在其第1个外显子内存在一段多态胞嘧啶腺嘌呤鸟嘌呤(CAG)三核苷酸重复序列,正常范围为6～35次、异常36～250次。亨廷顿病多于成年期发病,具有外显不完全和延迟外显现象,而青少年型亨廷顿病临床较为少见。本研究针对一例少年期发病的亨廷顿病患者临床表型及其家系IT15基因CAG重复动态突变特征进行细致分析。方法采用聚合酶链反应结合荧光标记毛细管电泳片段分析方法,对115例临床拟诊为亨廷顿病家系的先证者进行IT15基因CAG重复次数分析,经pMD18T载体克隆测序验证部分阳性或携带中间重复等位基因的样本。结果经基因分析共发现109例患者携带异常扩展的IT15基因CAG重复序列,其中一例为少年期发病患者,临床以认知功能障碍和运动功能减退为首发症状,其父母临床表型正常。基因片段分析显示,患者IT15基因CAG重复次数为15/68次;其父母分别为17/37次和15/17次。结论 (1)少年期发病的亨廷顿病与成年型临床表型不同,后者临床表现以舞蹈样运动、智能减退和精神异常为主,而少年型患者大多以认知功能障碍发病。(2)IT15基因扩展CAG重复序列在代间传递过程中会出现动态突变,引起发病年龄逐代提前,症状加重,即遗传早现。该家系患者之父携带中间等位基因37次重复,遗传给患者成为68次重复,在代间传递过程中发生了大幅度扩展,使CAG三核苷酸重复次数增加了31次,提示重复序列在父系遗传更不稳定。

脊髓小脑共济失调3型ICARS评分相关因素分析

目的探讨国际协作共济失调评估量表(ICARS)评估脊髓小脑共济失调3型患者的相关因素。方法应用ICARS对29例经基因学检查明确诊断的脊髓小脑共济失调3型家系先证者进行评估,通过统计学方法分析其发病年龄、病程和SCA3/MJD基因胞嘧啶-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)重复数目与ICARS总评分的相关性。结果简单线性回归分析结果显示,ICARS总评分与病程呈正相关关系(r=0.576,P=0.004),回归方程为Y=18.992+2.282X2(病程)(F=10.020,P=0.004)。多重线性回归分析结果显示,ICARS总评分与发病年龄、病程和CAG重复数目呈正相关关系,回归方程为Y=-110.744+0.974X1(发病年龄)+2.310X2(病程)+1.446X3(CAG重复数目)(F=6.690,P=0.002);3项因素的标准化偏回归系数分别为0.681、0.527和0.575。结论脊髓小脑共济失调3型患者的ICARS总评分与发病年龄、病程和CAG重复数目呈正相关关系。ICARS为评估共济失调的严重程度提供了可靠的方法。

基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序在脊髓小脑共济失调动态突变检测中的应用研究

目的探讨基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序在脊髓小脑共济失调(SCA)动态突变检测中的准确性和稳定性。方法采用基于毛细管电泳的片段分析和克隆测序对14例脊髓小脑共济失调患者(包括3例SCA2型、2例SCA7型、7例SCA8型和2例SCA17型)致病基因三核苷酸重复序列进行检测。结果 3例SCA2基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段胞嘧啶-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)重复序列分别为31、30和32次,每例样本取3个菌落进行克隆测序,CAG重复序列分别为37/40/40、37/38/39和38/39/40次;2例SCA7基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段CAG重复序列分别为57和34次,1例取3个菌落进行克隆测序,CAG重复序列为69、74和75次,1例为45次;7例SCA8基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,扩展片段胞嘧啶-胸腺嘧啶-腺嘌呤(CTA)/胞嘧啶-胸腺嘧啶-鸟嘌呤(CTG)重复序列分别为99、111、104、92、89、104和75次,克隆测序分别为97、116、104、90、90、102和76次;2例SCA17基因样本基于毛细管电泳的片段分析显示,短片段/扩展片段CAG重复序列为37/50和36/45次,扩展片段分别取3和2个菌落进行克隆测序,CAG重复序列为51/50/52和45/44次。结论基于毛细管电泳的片段分析在判读重复序列时存在一定偏倚,但可以预估,可重复性佳,不影响基因检测结果的判定;而克隆测序具有明显不稳定性,尤其是SCA2和SCA7基因,可能与其重复序列组成较为单纯有关。克隆测序不适宜作为检测基因动态突变的方法,更不适宜作为判定动态突变序列组成的标准。

CRISPR-Cas13a检测在肺结核诊断中的价值

目的:评价应用CRISPR-Cas13a检测临床样本对肺结核的诊断价值。方法:采用回顾性研究方法,收集首都医科大学附属北京胸科医院2022年9月至2022年12月收治住院的102例经GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert检测”)确诊的肺结核患者的支气管肺泡灌洗液标本,作为结核病组;收集同期收治入院的100例非结核病患者(包括肺癌,细菌性肺炎,支气管扩张,慢性阻塞性肺疾病)的支气管肺泡灌洗液标本,作为非结核病组。所有患者的支气管肺泡灌洗液标本均进行涂片抗酸杆菌染色镜检、培养、Xpert检测及CRISPR-Cas13a检测。以Xpert检测结果为参照,评价CRISPR-Cas13a检测支气管肺泡灌洗液对肺结核的诊断价值。结果:结核病组102份标本中,CRISPR-Cas13a检测阳性为99份(97.1%),涂片阳性40份(39.2%),培养阳性68份(66.7%)。CRISPR-Cas13a检测阳性率明显高于涂片和培养法,差异有统计学意义(涂片:χ^(2)=58.141,P<0.001;培养:χ^(2)=30.250,P<0.001)。与传统检测方法相比,CRISPR-Cas13a比涂片和培养法多检测出28份标本。Xpert检测结核病组阳性率为100.0%;Xpert检测非结核病组阴性率为100.0%。以Xpert检测结果作为参照,CRISPR-Cas13a检测肺结核的敏感度为97.1%(99/102)、特异度为96.0%(96/100),准确度为96.5%(195/202),阳性预测值为96.1%(99/103),阴性预测值为97.0%(96/99)。结论:CRISPR-Cas13a检测与传统方法相比简单、快捷,检测支气管肺泡灌洗液对肺结核的诊断具有较高敏感度及特异度,具有良好的应用前景。

海南岛黎族3个支系人群Y染色体特异性短串联重复序列多态性比较研究

目的:探讨海南岛黎族不同支系的Y染色体特异性短串联重复序列遗传多态与差异。方法:采用PCR扩增Y-27H39基因座,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果。结果:黎族3个支系289个男性个体的Y染色体特异性微卫星Y-27H39基因座发现4种等位基因,等位基因频率分布,在3个支系中均以194bp的频率为最高,分别是0.711、0.855和0.667。统计分析显示:杞黎与黎人群在DYS19位点的等位基因频率有显著性差异,而本地黎与杞黎无显著性差异。结论:本研究为我国人群Y染色体特异性STR的群体遗传学、法医学研究提供了可比性资料。

亨廷顿舞蹈病一家系两例报道并文献复习

亨廷顿舞蹈病(HD)是一种常染色体显性的神经退行性遗传病,由IT15基因外显子CAG三核苷酸重复突变所致,临床表现为不自主运动和认知功能障碍,影像学检查发现有尾状核萎缩,额角扩大,部分伴有皮质萎缩,基因检测是该病重要的诊断方式。对于有明确阳性家族史和典型临床表现,本病的诊断率较高;但对早期或不典型HD的诊断,临床常出现漏诊和误诊。为探讨HD的诊治,本文对1例临床疑似HD患者及2个家族成员进行影像学及IT15基因的CAG重复序列进行分析,并结合最新文献,阐述HD的发病机制及最新治疗进展,以提高对该病的认识。HD目前仍无有效治疗手段,但基因治疗为该病提供了新的方向。

Toll样受体2胞外域及其氨基端和羧基端片段的克隆与序列分析

目的 为研究 TL R2胞外域在肽聚糖诱导的信号转导中的功能 ,构建 TL R2胞外域及其氨基端和羧基端片段真核表达载体 .方法 提取 HL - 6 0细胞总 RNA,以 RT- PCR方法获取了 TL R2胞外域 c DNA片段 ,将其与 p GEM- T Easy载体连接 ,转化 E.coli JM10 9,建立了 TL R2胞外域的 c DNA克隆 ;籍此 ,又相继克隆了胞外域的氨基端和羧基端片段 ,然后将这三个片段克隆到真核表达载体 pc DNA3中 .结果 序列分析表明 ,与 Gen Bank中的人 TL R2全长 c DNA序列比较 ,仅 4个碱基不同 ,同源性为 0 .998.结论 成功获得了HL- 6 0细胞 TL

介绍一种检测蚊虫DNA重复序列的方法

在一般分子生物学方法的基础上,介绍改进了的制备成蚊、幼虫和蛹的基因组DNA,并用限制性核酸内切酶消化基因组DNA,凝胶电泳分离、溴乙锭染色后显示代表重复序列DNA带的一系列方法。本法可直接检测、比较蚊虫DNA重复序列,不受发育阶段、性别的影响,取材方便,简易可行。

变性高效液相色谱法产前诊断18三体综合征

目的用变性高效液相色谱法(DHPLC)分析1例18三体综合征胎儿的双链DNA,快速产前诊断18三体综合征。方法根据所设计的引物对18号染色体D18S1002、D18S51和D18S499共3个短串联重复序列(STR)位点进行PCR扩增,然后在50℃柱温条件下用DHPLC对PCR扩增产物进行检测和分析。结果健康人D18S51的DHPLC峰形呈现两个高低相同的波峰,18三体综合征胎儿D18S51的DHPLC峰形呈现两个高低不同的波峰,其中一个波峰高度接近为另一个波峰的2倍。健康人D18S1002的DHPLC峰形呈现一个波峰,18三体综合征胎儿D18S1002呈现两个高低不同的波峰,其中一个波峰高度接近为另一个波峰的2倍。健康人D18S499的DHPLC峰形呈现一个波峰,18三体综合征胎儿D18S499呈现两个高低不同的波峰,其中一个波峰高度接近为另一个波峰的2倍。结论健康人染色体核型有两条18号染色体,而18三体综合征患者染色体核型则有3条18号染色体,结合3个STR位点的DHPLC波峰数量及波峰高度,即可对患者做出确切的诊断。该方法灵敏度高、特异性强、简便、快捷等,适合广泛应用于18三体综合征的临床诊断。

山西地区汉族人群CSF1PO基因座的多态性研究

用扩增片段长度多态性技术分析短串联重复序列 (STR)基因座的DNA多态性 ,在山西地区汉族人群的CSF1PO基因座中发现 7个等位基因 ,19种基因型 ,群体调查证实该等位基因按孟德尔遗传规律遗传 ,观察的基因型分布符合Hardy -Weinberg定律 ,杂合度为 0 75。本研究显示 ,该基因座灵敏度高 ,易准确判型 ,是一较好遗传标记 ,适用于法医学、人类遗传学及临床医学等研究。

Huntington病两家系基因分析

目的建立准确而快速的IT15基因胞嘧啶-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)重复序列检测方法,并应用于Huntington病患者的基因诊断及症状前诊断。方法应用聚合酶链反应、聚丙烯酰胺凝胶电泳及DNA测序技术对Huntington病两家系中的15名成员进行IT15基因CAG重复数目的检测及分析。结果两家系中共计检出8名成员携带异常的IT15基因,其中2例先证者CAG重复序列存在异常扩增,1例(AⅡ4)出现Huntington病临床表现,其余5例尚未出现Huntington病临床症状与体征。结论IT15基因CAG重复序列的异常扩增是Huntington病的发病基础,应用上述检测方法对IT15基因CAG重复序列进行检测可对Huntington病患者进行准确的基因诊断及症状前诊断。

中华民族D3S1358、vWA基因座的空间地理分布

目的运用地理信息系统(GIS)的理论和方法分析中国87个人群常染色体D3S1358、vWA基因座的空间群体遗传结构,为研究中华民族的起源、人口迁移、考古以及民族融合等群体遗传学和人类学问题提供分子生物学依据。方法应用主成分分析(PCA)方法及GIS中的空间差值分析(SDA)技术,从基因频率矩阵中提取综合指标,并采取可视化技术来反映中国人群2个短串联重复序列(STR)位点的空间群体遗传结构。结果中国人群D3S1358、vWA基因座的主成分空间分析结果划分出三大区域,且显示出从东南向西北递增的趋势,在每个区域内又有不同划分小区域。结论中国人群2个STR位点的空间群体遗传结构呈现明显的地理遗传梯度变异性,不同群体之间存在明显差异。

铜绿假单胞菌280株基因分型及耐药性分析

目的分析临床感染铜绿假单胞菌的基因型别、耐药特点以及对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法收集重庆市沙坪坝区陈家桥医院2011年6月至2017年7月共6年分离的280株铜绿假单胞菌,主要来源于呼吸内科和ICU病房的痰液标本,进行ERIC-PCR(肠杆菌基因间保守重复序列聚合酶链式反应)分型及药敏试验分析,并检测12种主要的碳青霉烯酶基因的携带情况。结果分型结果表明主要存在A、G、H三种优势型别的流行,细菌对抗生素的耐药率普遍低于全国耐药监测数据,对碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南的平均不敏感率分别为10.4%和7.1%。在35株碳青霉烯类抗生素不敏感菌株中,碳青霉烯酶IMP和VIM的携带率分别为8.57%和5.71%。结论肺部感染以及A、G、H三种优势型别细菌是铜绿假单胞感染防控的重点对象,耐碳青霉烯类抗生素菌株中主要携带IMP和VIM两种常见的碳青霉烯酶基因,但阳性率较低。但碳青霉烯类抗生素耐药率逐年升高,仍应引起重视。

FMR1基因突变与女性生殖能力和妊娠结局

近年来原发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency,POI)、不明原因的早期自然流产、复发性流产、胚胎停育等生育能力低下和反复生育失败的疾病越来越多,女性生殖健康也日益受到关注。脆性X智力低下1(fragile X mental retardation 1,FMR1)基因参与胚胎发育的基因调控过程,该基因的突变可引起多种女性生殖健康疾病,且与绝经年龄相关。因此FMR1基因的筛查对协助诊疗女性生殖健康疾病有重要的临床价值,也为疾病的早期预防、诊断和治疗提供了新思路。

Telomerase activity analysis of esophageal carcinoma using microdissection-TRAP assay

OBJECTIVES: To investigate telomerase activity in esophageal squamous cell carcinoma (SCC) and its preneoplasia lesions, and to study the relationships between telomerase activity and cancer differentiation, cancer invasiveness, and lymphatic metastasis. METHODS: Telomerase activity in esophageal SCC tissues, adjacent dysplasia tissues and normal epithelia from the surgical edge were assessed by microdissection-TRAP (telomeric repeat amplification protocol)-silver staining assay. RESULTS: Telomerase activity was detected in 37 (82.2%) of 45 esophageal tumors, 23 (79.3%) of 29 dysplasias, and 2 (5%) of 40 normal epithelia. There was a significant difference in activity between dysplasia and normal epithelium, as well as between tumor and normal epithelium. Twenty-six (92.9%) of 28 tumors with lymphatic metastasis had detectable telomerase activity compared to 11 (64.7%) of 17 non-lymphatic metastasis tumors. These relationships were statistically significant (P

基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法的建立

目的建立基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法。方法以弓形虫基因组中529bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准品。优化PCR反应体系及条件,并验证该方法的灵敏度及特异性。结果所构建的pMD18/Tox529bp重组质粒经测序正确,建立的PCR方法最低可检出10个拷贝的目的基因,除对弓形虫基因组DNA扩增出特异性条带外,用该方法对健康志愿者全血、正常小鼠全血、间日疟原虫、恶性疟原虫及结核杆菌基因组DNA均未扩增出特异性条带。结论已建立了一种具有较高灵敏度和特异性的弓形虫PCR诊断方法 ,有望应用于人和动物弓形虫感染的筛查、临床诊断及流行病学调查。

不同串联重复序列位点组合用于中国结核分枝杆菌基因分型的能力比较分析

目的初步评价不同串联重复序列（VNTR）位点在中国8省市结核分枝杆菌基因分型中的应用，寻找适合中国地区结核分枝杆菌基因分型的位点组合。方法从中国8个省（市、自治区）2800余株结核分枝杆菌临床分离菌株中以简单数字表法随机抽取140株，采用多位点数目可变串联重复序列分析方法（MLVA）对27个数目可变VNTR位点进行基因多态性检测，采用BioNumerics数据库软件进行单位点和不同位点组合的分辨率（Hunter-Gaston指数，HGI）分析，并比较分析其对140株菌的基因分型鉴定能力。同时采用间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）将140株菌分为北京家族和非北京家族，评价上述不同VNTR位点组合在北京家族和非北京家族中的分型能力。结果140株菌主要可分为2个基因群，即北京家族112株，占80％；非北京家族28株，占20％。Spoligotyping分型对140株结核分枝杆菌的HGI为0．4589。MLVA分析结果显示不同位点在不同菌株群存在明显的多态性，不同位点的HGI具有较大差异（0～0．809），对全部菌株、北京家族菌株、非北京家族菌株的HGI达到0．5以上的VNTR位点数分别为8、7和14个。27个VNTR位点进行不同的位点组合：优化筛选的8位点组合、国际推荐的12个、15个和24个位点组合。4个组合的HGI分别为0．9991、0．9882、0．9980和0．9986；在北京家族菌株中，上述组合的HGI依次为0．9987、0．9318、0．9969和0．9975；在非北京家族菌株中分别为1、0．9894、1和1。结论不同的VNTR位点和不同VNTR位点组合在中国8省市结核分枝杆菌中的HGI均存在明显差异；本研究优化的8个位点组合MLVA分型方法在中国结核分枝杆菌流行病学研究可能具有良好的应用前景。

舞蹈病家系临床、影像学特征及基因突变分析

目的明确一个无明显痴呆的舞蹈病家系的临床、影像学特征及IT15、DRPLA、JPH3、TBP基因突变情况。方法对5例已发病患者的临床及脑影像学特征进行分析;用聚合酶链反应技术、8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及直接测序等方法,对18名家系成员的IT15、DRPLA、JPH3、TBP基因的三核苷酸(CAG/CTG)重复序列进行分析。结果5例患者主要表现为舞蹈样不自主运动;3例患者头颅磁共振成像无明显尾状核萎缩,其中1例头颅单光子发射计算机断层显像(SPECT)提示双侧基底节血流受损,比健康人血流灌注减少;检测到9例(5例患者,4例症状前患者)分别有一(CAG)n重复拷贝数大于40次的IT15基因,无DRPLA、JPH3、TBP基因的突变。结论根据临床和影像学特征该家系在临床上不能确诊为亨廷顿舞蹈病,但经基因突变分析确定了IT15基因中(CAG)n重复拷贝数的异常扩展导致该家系发生了亨廷顿舞蹈病。

雄激素受体基因第一外显子CAG重复序列长度多态性与痤疮的相关性

目的探讨人雄激素受体基因第一外显子CAG重复序列长度多态性与痤疮发生之间的关系。方法研究对象为中国东北地区238例痤疮患者和207例健康对照，抽取外周血后分离纯化出基因组DNA，采用微卫星扫描（STRs）方法分析CAG重复序列的多态性。结果男性病例组和对照组的CAG重复均数分别为22．70±3．09和23．48±2．83，两组之间差异有统计学意义（P=0．046）；将对照组中CAG重复次数的中位数23作为分割点分组比较，长／短CAG片段在男性病例和对照中的分布差异有统计学意义，携带有CAG短片段的男性较携带CAG长片段的男性患痤疮的风险性明显增加（OR值2．07；95％可信限为1．21—3．54）。女性病例组和对照组的CAG重复均数分别为23．41±2．87和23．85±0．21，两组之间差异无统计学意义（P=0．115）；按中位数分组比较长／短CAG片段在女性病例和对照中的分布差异有统计学意义，携带有CAG短片段的女性患痤疮的风险性明显增加（P=0．013，OR值2．05；95％可信限为1．18～3．56）。结论雄激素受体基因第一外显子CAG的重复次数与中国东北地区痤疮的发生有关，CAG重复次数少的男性个体患痤疮的风险性增加，雄激素受体基因第一外显子CAG的重复次数可作为痤疮的遗传易感标志之一。

淋球菌mtr系统的IR区基因突变与其多重耐药性的关系

目的探索多传递耐药(mtr)系统反向重复序列(IR)区基因突变与淋球菌染色体介导多重耐药性的关系。方法琼脂稀释法做淋球菌药敏试验,选择耐不同药物的菌株,聚合酶链反应扩增包含 IR区的目的基因,然后对扩增产物测序。结果 2株敏感株及5株仅耐青霉素菌株无IR区基因突变,17 株多重耐药菌株中,1株同时耐青霉素和阿奇霉素的淋球菌有IR区碱基T／A,T／A插入,其余耐药株IR区均有碱基A／T缺失。结论淋球菌染色体mtrR启动子区域的IR区基因突变会引起淋球菌多重耐药株的产生,增加淋球菌对抗生素的抗性。