甘蓝型油菜SLG基因片段的克隆及序列分析

通过不同甘蓝型油菜中SLG基因的克隆及序列分析,探索了甘蓝型油菜中是否存在与芸薹属二倍体中相同或相似的S-locus基因。对10个甘蓝型油菜品种和品系中SLG基因的PCR扩增和序列比较分析发现,这些甘蓝型油菜中都存在第2类的SLG基因,而且,同二倍体芸薹属物种一样,第2类SLG基因之间具有较高的同源性;只有5个甘蓝型油菜品种和品系中存在第一类SLG基因,而且这些基因序列之间表现出高度的保守性,即同源性在96%以上,明显高于不同等位基因之间的同源性。这些甘蓝型油菜中的class I SLG基因可能源于同一个自交不亲和单体。

利用S位点多态性快速测定甘蓝自交不亲和性及其S等位基因系

根据Ⅰ类和Ⅱ类SLG基因两端序列合成了特异引物 ,对西南农业大学和HRI (HorticultureResearchInterna tional,Wellesbourne)提供的不同亲和指数的甘蓝 (BrassicaoleraceaL .)材料进行了PCR分析。结果表明 :具Ⅰ类SLG基因的材料是强自交不亲和系 ;具Ⅱ类SLG基因的材料既包括强自交不亲和系 ,也包括弱自交不亲和系。因此 ,Ⅱ类SLG基因的存在可作为区别甘蓝自交亲和系和自交不亲和系的分子标记。进一步用 6种识别 4bp的限制酶对Ⅱ类SLG基因DNA片段进行了RFLP分析 ,HRI的自交不亲和材料和西南农业大学的弱自交不亲和材料具有明显的RFLP多态性 ,被进一步用于鉴定甘蓝弱自交不亲和系内的各S等位基因系。这为利用HRI材料对现有种质进行改良提供了分子依据。

PCR步行法克隆油菜自交不亲和基因

同源序列法与PCR步行法相结合,在油菜中克隆自交不亲和基因SLG和eSRK(extra-cellularSRK)。所克隆的SLG序列长为882bp,克隆的eSRK序列长度分别为1495bp(青海大黄)、1494bp(黄籽沙逊)、1727bp(关中油白菜);其GeneBank登陆号分别为AY448025、AY448026、AY448027、AY448028、AY448029、AY448030。缺失突变可能是导致青海大黄和黄籽沙逊自交亲和的原因。克隆的SLG基因与甘蓝和白菜型油菜的SLG基因有很高的同源性,而eSRK基因与甘蓝和白菜型油菜的SRK基因的同源性较高。同源序列法与PCRwalking法相结合,可以有效地克隆基因;但在克隆SLG基因的两翼序列时遇到了困难,说明PCR步行法仍有待改进。

芸薹属植物自交不亲和性的分子机制

芸薹属植物自交不亲和性受单一位点的复等位基因控制 ,此位点命名为S位点。它决定柱头表面花粉识别的专一性。S位点糖蛋白基因 (SLG)和S受体激酶基因 (SRK)是控制芸薹属植物花柱自交不亲和性的两个关键因子。本文介绍了编码自交不亲和性的S位点的SLG、SRK和花粉S基因的鉴定、结构及功能 ,并对其信号传导途径的可能机制做了简要概述。

羽衣甘蓝不同组织及柱头发育实时荧光定量PCR内参基因的筛选

以羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)S_(13-b)S_(13-b)自交不亲和系为试材,利用实时荧光定量PCR(qRTPCR)技术检测Actin、Cpi6、EF-1β、GAPDH、Tub-α3、Tub-α6、Ubc7候选内参基因在不同组织和5个不同发育时期柱头的表达情况,并运用ge Norm和Best Keeper软件统计分析候选内参基因的表达稳定性。在不同组织中,ge Norm软件统计分析的结果表明Tub-α6和EF-1β的表达较稳定;Best Keeper软件统计分析的结果表明Ubc7和Tub-α6的表达较稳定。在不同发育柱头中,ge Norm软件统计分析的结果表明Actin和Ubc7的表达较稳定;Best Keeper软件统计分析的结果表明EF-1β和Tub-α6的表达较稳定。以筛选到的内参基因Tub-α6和Actin,分别分析羽衣甘蓝柱头S-位点糖蛋白基因(SLG)在不同组织和不同发育时期柱头的表达水平,结果显示出SLG主要在柱头中表达,而且SLG在柱头发育成熟时期表达量达到最高。