miR-146a-5p、SMAD4在甲状腺滤泡癌组织中表达变化和对FTC-238细胞系增殖迁移侵袭影响及靶向关系

目的通过观察甲状腺滤泡癌(FTC)组织中miR-146a-5p、SMAD4的表达变化及对细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,分析miR-146a-5p与SMAD4之间的靶向关系,以探讨miR-146a-5p是否通过靶向SMAD4促进FTC增殖、迁移、侵袭。方法收集FTC组织标本30例份,非肿瘤甲状腺或距离肿瘤边缘>2 cm癌旁组织30例份,采用RT-qPCR法检测FTC组织及癌旁组织中miR-146a-5p、SMAD4 mRNA。将FTC-238细胞系分为miR-146a-5p mimics组和阴性对照(miR-NC组)分别转染miR-146a-5p mimics(使细胞过表达miR-146a-5p)及miR-NC。采用CCK8法观察两组培养12、24、48 h时的细胞增殖能力,划痕实验观察两组细胞迁移能力,Transwell小室实验观察两组细胞侵袭能力。分别采用RT-qPCR及免疫印迹法检测两组细胞中SMAD4 mRNA及蛋白。双荧光素酶报告基因实验验证miR-146a-5p与SMAD4的靶向关系。结果与癌旁组织相比,FTC组织中miR-146a-5p相对表达量降低(P<0.05);SMAD4 mRNA相对表达量升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,各个时间点miR-146a-5p mimics组细胞OD值降低(P均<0.05);与miR-NC组相比,miR-146a-5p mimics组细胞迁移、侵袭数目减少(P均<0.05)。与miR-NC组相比,miR-146a-5p mimics组SMAD4 mRNA及蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。miR-146a-5p与SMAD4存在靶向关系。结论FTC组织中miR-146a-5p表达降低、SMAD4表达升高;miR-146a-5p过表达可抑制FTC-238细胞系增殖、迁移、侵袭;miR-146a-5p与SMAD4之间存在靶向关系。miR-146a-5p可能通过靶向抑制SMAD4促进FTC癌细胞的增殖、迁移、侵袭。

绝经后女性患者血清Smad4和Osterix水平与骨密度及骨折发生率的相关性分析

目的分析绝经后女性患者血清Smad同源物4(Smad4)和成骨细胞特异性转录因子(Osterix)水平与骨密度(BMD)及骨折发生率的相关性。方法选取2020年5月至2022年5月西安交通大学第二附属医院收治的157例45~70岁绝经女性作为研究对象,按BMD将患者分为BMD正常组(n=51)、BMD减少组(n=59)、骨质疏松症(OP)组(n=47);根据是否骨折分为骨折组(n=48)和非骨折组(n=109)。检测研究对象血清Smad4、Osterix、β胶原降解产物(β-CTX)、Ⅰ型胶原氨基端延长肽(P1NP)、骨桥蛋白(OPN)及N端骨钙素(N-MID)水平;分析血清Smad4与Osterix的相关性,及血清Smad4、Osterix与骨代谢指标间的相关性,以及影响患者发生OP的因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Smad4、Osterix水平对发生骨折风险的预测价值。结果与BMD正常组比较,BMD减少组和OP组的β-CTX、P1NP、OPN、N-MID依次升高,股骨BMD、腰椎L1-4BMD依次降低(P<0.05);BMD减少组和OP组的血清Smad4和Osterix水平依次降低(P<0.05);OP组骨折发生率显著高于BMD正常组和BMD减少组(P<0.001),BMD减少组骨折发生率显著高于BMD正常组(P=0.027)。骨折组的血清Smad4、Osterix水平显著低于非骨折组(P<0.05)。Pearson分析结果表明,Smad4和Osterix的表达水平呈正相关(P<0.05);Spearman分析结果表明,Smad4表达水平与β-CTX、P1NP、OPN和N-MID呈负相关(P<0.05),与股骨BMD和腰椎L1-4BMD呈正相关(P<0.05);Osterix的表达水平与β-CTX、P1NP、OPN和N-MID呈负相关(P<0.05),与股骨BMD和腰椎L1-4BMD呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析表明,低水平Smad4、Osterix、股骨BMD、腰椎L1-4BMD是影响OP发生的危险因素(P<0.05)。绘制ROC曲线结果显示,血清Smad4预测骨折风险的曲线下面积(AUC)为0.937,血清Osterix预测骨折风险的AUC为0.911,二者联合预测骨折风险的AUC为0.974,二者联合优于血清Smad4和Osterix各自单独诊断(Z联合vs.Smad4=3.843、Z联合vs.Osterix=2.386,P<0.05)。结论绝经后OP患者血清Smad4和Osterix呈低表达,与患者的骨代谢生化指标和BMD密切相关,且是影响OP发生的独立危险因素,二者联合可以更好地预测患者发生骨折的风险。

肺腺癌组织中FNDC1、Napsin A、Smad4表达及临床意义

目的检测肺腺癌中Ⅲ型纤连蛋白结构域1(FNDC1)、天冬氨酸肽酶A(Napsin A)、Smad4的表达及其临床意义。方法回顾性分析2019年12月至2021年12月华中科技大学同济医学院附属协和医院收治的120例肺腺癌患者临床病例资料,收集患者手术切除肿瘤组织和癌旁正常组织。采用免疫组化染色SP法检测肺腺癌组织与癌旁组织中FNDC1、Napsin A、Smad4表达情况,并分析FNDC1、Napsin A、Smad4表达与肺腺癌临床病理特征的关系。随访患者的生存情况,采用Kaplan-meier法绘制生存曲线,生存差异行Log-rank检验;采用Cox风险比例回归模型分析影响肺腺癌患者预后的因素。结果肺腺癌组织中FNDC1阳性表达率为61.67%,高于癌旁组织的20.0%;Napsin A、Smad4阳性表达率分别为41.67%和65.0%,低于癌旁组织的98.33%和90.83%,差异均有统计学意义(P<0.05)。FNDC1、Napsin A、Smad4表达与性别、年龄无关(P>0.05),与TNM分期、病理学分级、肿瘤最大直径、淋巴结转移均有关(P<0.05)。FNDC1阴性表达组患者中位生存时间(OS)为34个月,优于阳性表达组的27个月;Napsin A、Smad4阳性表达组患者中位生存时间分别为30个月和30个月,优于阴性表达组的27个月和25个月;差异均有统计学意义(P<0.05)。单因素Cox风险比例回归模型显示,TNM分期、肿瘤最大直径、淋巴结转移、FNDC1表达、NapsinA表达、Smad4表达是影响肺腺癌OS的因素(P<0.05)。结论肺腺癌组织中FNDC1表达升高,Napsin A、Smad4表达降低,且FNDC1、Napsin A、Smad4表达与临床病理特征、总生存均有关。

miR-1273g-3p调控TGF-β/Smad4信号通路影响结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-1273g-3p调控转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)/mothers against decapentaplegic homolog 4(Smad4)信号通路对结直肠癌细胞生物学功能的影响。方法 采用人结肠上皮细胞株NCM460为对照,对人结直肠癌细胞株HCT116和SW480采用qRT-PCR检测细胞的miR-1273g-3p表达。采用Western blot检测TGF-β和Smad4蛋白的表达。将miR-1273g-3p抑制剂转染至HCT116和SW480细胞中(miR-1273g-3p抑制剂组),并设立转染抑制剂对照剂的空载对照(抑制剂对照组)。采用qRT-PCR验证转染效果。将转染后的HCT116细胞皮下注射至BALB/c裸鼠体内。采用qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中TGF-β和Smad4 mRNA和蛋白的表达。采用细胞增殖和细胞毒性分析(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、划痕实验和transwell小室侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。通过BiBiServ及TargetScan网站预测mi R-1273g-3p与TGF-β的相关性,并用双荧光素酶报告基因实验验证miR-1273g-3p与TGF-β的结合情况。结果 与人结肠上皮细胞NCM460比较,人结直肠癌细胞HCT116和SW480中miR-1273g-3p、TGF-β蛋白和Smad4蛋白均高表达(均P<0.01)。瞬时转染48 h后,与抑制剂对照组比较,miR-1273g-3p抑制剂组miR-1273g-3p表达降低(P<0.01),TGF-β和Smad4的mRNA和蛋白表达均减少(均P<0.01),细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果表明,miR-1273g-3p可以靶向结合TGF-β;SW480细胞中,miR-1273g-3p抑制野生型TGF-β-3’ untranslated region(UTR)质粒转染的荧光素酶活性(P<0.01),而对突变型TGF-β-3’UTR质粒转染的荧光素酶活性无影响(P>0.05)。结论 抑制miR-1273g-3p的表达可抑制结直肠癌细胞HCT116和SW480的增殖、迁移和侵袭能力。此作用可能与TGF-β/Smad4信号通路有关。

麦粒灸对神经根型颈椎病大鼠脊髓及神经根Activin A/ActRⅠ/Smad4表达的影响

目的:通过观察麦粒灸“大椎”穴对神经根型颈椎病大鼠激活素A(Act A)、ActⅠ型受体(ActRⅠ)及受体后信号传导蛋白Smad4表达的影响,探讨麦粒灸治疗神经根型颈椎病(CSR)的镇痛机制。方法:将30只SPF级雌雄各半SD大鼠随机分为空白组、模型组、麦粒灸组,每组10只。采用椎管插线法制备CSR模型。模型组及麦粒灸组均于造模后待伤口恢复7 d,第8天开始干预。空白组正常喂养且不做任何干预措施,模型组仅予腹腔注射1 ml的0.9%氯化钠溶液,麦粒灸组在模型组基础上予麦粒灸“大椎”穴,6壮/次,1次/d。连续干预7 d后,观察各组大鼠步态评分,测量机械痛阈值,采用蛋白免疫印迹检测脊髓及神经根组织Act A、ActRⅠ及Smad4的蛋白。PCR检测脊髓及神经根组织Act A和ActRⅠ的mRNA表达水平,苏木素-伊红染色观察脊髓及神经根组织的形态结构,免疫荧光染色观察Smad4阳性表达水平。结果:与空白组比较,模型组、麦粒灸组大鼠步态评分升高、机械痛阈降低(P<0.05)。与模型组比较,麦粒灸组大鼠脊髓及神经根组织Act A、ActRⅠ及其mRNA表达水平均升高(P<0.05)。Western blotting和免疫荧光结果均显示Smad4表达增加;HE染色观察麦粒灸组脊髓形态损伤较模型组有所减轻,灰质区神经元固缩,尼氏小体减少,神经胶质细胞和毛细血管数量比模型组减少。结论:麦粒灸“大椎”穴能改善CSR大鼠疼痛阈值和运动功能,促进神经元损伤后修复,这与激活Activin A/ActRⅠ/Smad4信号通路有关。

基于BMP2/Smad4信号通路探究蛇床子素对骨质疏松性骨折大鼠愈合过程的影响

目的基于骨形态发生蛋白(BMP)2/Smad4信号通路探究蛇床子素对骨质疏松性骨折(OPF)大鼠愈合过程的影响。方法将90只SD大鼠分成Sham组、OPF组、低剂量组(10 mg/kg蛇床子素)、高剂量组(20 mg/kg蛇床子素)、高剂量+NC组(2μl shRNA)、高剂量+shRNA-BMP2组(2μl shRNA-BMP2),15只/组;摘除大鼠的双侧卵巢以构建骨质疏松(OP)模型,在此模型基础上进行右侧股骨干骨折建立OPF大鼠模型,术后除Sham组及OPF组外其余组灌胃相应剂量蛇床子素,而Sham组及OPF组给予等量生理盐水灌胃,高剂量+NC组、高剂量+shRNA-BMP2组在灌胃第1天于尾静脉注射相应慢病毒,其余组则注射等量生理盐水,灌胃8 w(1次/d);使用双能X线BMD仪检测骨痂部位骨密度(BMD);酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)和碱性磷酸酶(ALP)水平;三点弯曲实验进行股骨生物力学性能检测;Micro-CT扫描股骨骨痂;HE染色观察骨痂组织形态;Western印迹检测骨痂组织成骨细胞特异性转录因子(Osterix)、Runt相关转录因子2(RUNX2)及BMP2/Smad4通路蛋白表达。结果与Sham组比较,OPF组股骨骨痂BMD、ALP水平、RUNX2、Osterix、BMP2、Smad4表达显著降低,股骨刚度及最大载荷、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)显著减小,TRACP水平显著升高,骨小梁分离度(Tb.Sp)显著增大(均P<0.05);与OPF组比较,低、高剂量组BMD、ALP水平、RUNX2、Osterix、BMP2、Smad4表达显著升高,股骨刚度及最大载荷、BV/TV、Tb.Th、Tb.N显著增加,TRACP水平显著降低,Tb.Sp显著减小(均P<0.05);与高剂量组比较,高剂量+shRNA-BMP2组BMD、ALP水平、RUNX2、Osterix、BMP2、Smad4表达显著降低,股骨刚度及最大载荷、BV/TV、Tb.Th、Tb.N显著减小,TRACP水平显著升高,Tb.Sp显著增大(均P<0.05)。结论蛇床子素通过激活BMP2/Smad4信号通路来促进OPF大鼠的骨折处愈合。

异氟醚通过BMP4/Smad信号通路对自发性高血压大鼠脑损伤的作用机制研究

目的:探究异氟醚通过调节骨发生形态蛋白4(BMP4)及其下游Smad蛋白对自发性高血压大鼠(SHR)脑损伤的作用机制。方法:采用随机数字表法将48只SHR分为模型组、异氟醚组、阳性药物组、异氟醚+LDN193189组,健康大鼠作为健康对照组,每组12只。各组大鼠分别放入氧气箱中,健康对照组、模型组、阳性药物组大鼠通入特殊气体(30%O_(2)、70%N_(2))1 h,异氟醚组、异氟醚+LDN193189组通入混杂2%异氟醚的特殊气体1 h,通过麻醉气体检测仪检测异氟醚含量,确保异氟醚浓度始终保持在2%。通气结束后,异氟醚+LDN193189组大鼠腹腔内注射BMP4/Smad通路抑制剂溶液20μL(LDN193189,5 mg/kg),阳性药物组大鼠腹腔内注射缬沙坦溶液20μL(10 mg/kg),健康对照组、模型组、异氟醚组大鼠腹腔内注射等量的生理盐水。氧气箱通气实验及注射每日1次,持续10 d。无创血压检测仪检测尾动脉收缩压变化;神经学行为评分评价行为功能;脑含水量检测脑水肿程度;原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色和尼氏染色观察海马组织病理学变化及神经元损伤情况;荧光定量聚合酶链式反应(PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测海马组织BMP4、Smad2 mRNA及蛋白表达水平。结果:与模型组比较,异氟醚组、阳性药物组、异氟醚+LDN193189组大鼠海马神经细胞凋亡减少,尼氏小体增多,血压、神经学评分、脑组织含水量显著降低,BMP4、Smad2 mRNA及蛋白表达量显著升高(P<0.05);与异氟醚组比较,异氟醚+LDN193189组大鼠神经细胞凋亡增多,尼氏小体急剧减少,血压、神经学评分、脑组织含水量显著升高,BMP4、Smad2 mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0.05);异氟醚组与阳性药物组各项数据差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:异氟醚可通过促进BMP4/Smad信号通路减轻SHR脑损伤。

Smad4慢病毒转染对万古霉素诱导的肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:探究慢病毒介导过表达Smad4或沉默Smad4对万古霉素诱导的肾小管上皮细胞HK-2上皮间质转化(EMT)的影响。方法:设计并包装Smad4沉默或过表达的慢病毒,之后利用所获得的慢病毒瞬时转染HK-2,将HK-2细胞分为万古霉素组、空载体组(转染HBLV-GFP-PURO)、过表达Smad4组(转染HBLV-h-Smad4-GFP-PURO)、沉默Smad4组(转染HBLV-h-Smad4-shRNA-GFP-PURO),另取正常HK-2细胞作为对照组。比较五组细胞迁移能力、上清液中氧化应激指标(TGF-β_(1)、SOD、GSH、MDA)及Smad4、E-cadherin、FN、Vimentin蛋白表达水平。结果:与对照组相比,万古霉素组和空载体组HK-2细胞迁移能力、上清液TGF-β_(1)和MDA含量、Smad4、FN、Vimentin蛋白表达水平升高(P<0.05),SOD、GSH含量、E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达Smad4可提高HK-2细胞迁移能力和氧化应激反应,促进EMT(P<0.05);沉默Smad4可降低HK-2细胞迁移能力和氧化应激反应,抑制EMT(P<0.05)。结论:Smad4调控万古霉素诱导的HK-2细胞氧化应激反应和EMT。

血清SCC-Ag、HE4、SMAD4水平与宫颈癌放化疗敏感性的相关性分析

目的分析血清鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)、人附睾分泌蛋白4(HE4)、SMAD4水平与宫颈癌放化疗敏感性的相关性。方法选取接受放化疗治疗的宫颈癌患者74例为研究对象,根据放化疗敏感性分为抵抗组和敏感组,分别有48例和26例。检测患者治疗前后血清SCC-Ag、HE4及SMAD4 mRNA水平,分析治疗前血清SCC-Ag、HE4、SMAD4水平与超声参数的相关性。绘制受试者工作特征曲线(ROC)描述治疗前SCC-Ag、HE4及SMAD4 mRNA水平对放化疗敏感性的预测价值。结果治疗后2组患者血清SCC-Ag、HE4水平较治疗前降低,SMAD4 mRNA水平较治疗前升高(P<0.05);且敏感组患者治疗前、后SCC-Ag、HE4水平均低于抵抗组,SMAD4 mRNA水平均高于抵抗组(P<0.05)。治疗前血清SCC-Ag、HE4与VI呈正相关(γ=0.518、0.544,P<0.05),SMAD4 mRNA与VI呈负相关(γ=-0.581,P<0.05)。ROC曲线显示,治疗前SCC-Ag、HE4及SMAD4 mRNA联合对放化疗敏感性的预测价值较高,AUC为0.863(95%CI:0.764~0.962)。结论血清SCC-Ag、HE4及SMAD4 mRNA水平与宫颈癌放化疗敏感性密切相关,且三者联合对放化疗敏感性具有较高的预测价值。

SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在小尾寒羊卵巢活动中的功能分析

为探究SMAD基因家族重要成员SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在小尾寒羊繁殖活动中的生物学功能,利用生物信息学技术对SMAD2、SMAD3和SMAD4基因的蛋白理化性质、亲疏水性和亚细胞定位进行分析,并对其二级结构、蛋白互作进行预测及GO(gene ontology)和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)的富集分析;然后以小尾寒羊为研究对象,通过免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)确定SMAD2、SMAD3和SMAD4蛋白在卵巢组织中的表达,利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(western blot,WB)方法测定SMAD2、SMAD3和SMAD4基因mRNA及其编码蛋白在不同生理阶段卵巢组织和不同直径卵泡中表达水平。结果显示,SMAD2、SMAD3和SMAD4蛋白为亲水性蛋白,理论等电点分别为6.67、6.73和6.50,在不同生理阶段卵巢组织中的阳性表达主要位于卵母细胞、卵泡膜细胞和颗粒细胞,且二级结构中α螺旋和无规则卷曲的占比较高,其蛋白与FOXH1、ACVR1B、SMAD1、TGFβR1、TGFβR2、ZFYVE9、SKI、SKIL、TGIF1和ENSOARP0000001869蛋白存在互作关系。SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在TGF-β受体信号通路、TGF-β受体结合、TGF-β激活受体活性中发挥生物学功能,且在TGF-β信号通路富集。SMAD2和SMAD4蛋白在撤栓后42 h卵巢组织中的表达量显著高于撤栓后18 h,其mRNA表达趋势及其编码蛋白表达趋势总体一致;而SMAD3基因mRNA及其编码蛋白的表达量在不同生理阶段卵巢组织中差异不显著。SMAD3基因mRNA及其编码蛋白在中卵泡中的表达量显著高于大卵泡;SMAD2和SMAD4基因表达量在不同直径卵泡中差异不显著。综上所述,SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在小尾寒羊卵巢周期性活动中的生物学功能存在差异,SMAD2和SMAD4基因参与小尾寒羊发情初期至排卵前的卵巢生理变化,但不参与卵泡发育;而SMAD3参与卵泡发育。以上研究结果为进一步探索SMAD基因家族在小尾寒羊卵巢活动中的分子机理提供理论参考。

SMAD4过表达干预骨质疏松大鼠铁代谢相关蛋白的表达

背景:SMAD家族成员4(SMAD4)能够促进骨质疏松大鼠骨重建,然而SMAD4是否干预骨质疏松大鼠铁代谢相关蛋白表达尚不清楚。目的:探究SMAD4过表达对骨质疏松大鼠铁代谢相关蛋白表达的影响。方法:大鼠随机分为假手术组、卵巢摘除组、转染对照组和SMAD4过表达组,后3组切除卵巢建立骨质疏松大鼠模型,假手术组仅切除脂肪组织。1周后行股骨髓腔腺病毒注射,SMAD4过表达组和转染对照组分别注射过表达SMAD4基因的腺病毒及对照空载病毒,注射1个月后进行指标检测。显微CT、苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测骨质疏松大鼠骨形成和骨吸收情况;ELISA检测血清铁蛋白、铁调素水平;免疫组化染色检测股骨组织碱性磷酸酶、骨钙素、核因子κB受体激活因子配体、抗酒石酸酸性磷酸酶水平;RT-qPCR检测股骨组织SMAD4、铁调素、二价金属离子转运体1、转铁蛋白受体1、膜铁转运蛋白1 mRNA水平;Western blot检测股骨组织SMAD4、碱性磷酸酶、骨钙素、骨保护素、核因子κB受体激活因子配体、抗酒石酸酸性磷酸酶、β-胶原降解产物、铁调素、二价金属离子转运体1、转铁蛋白受体1、膜铁转运蛋白1蛋白水平。结果与结论:①假手术组大鼠股骨组织骨小梁完整,几乎未见破骨细胞;卵巢摘除组、转染对照组骨小梁稀疏,存在大量破骨细胞;SMAD4过表达组大鼠骨小梁增多,破骨细胞减少;②与假手术组相比,卵巢摘除组大鼠股骨组织SMAD4、碱性磷酸酶、骨钙素、骨保护素蛋白水平、血清和股骨组织铁调素水平明显降低,股骨组织核因子κB受体激活因子配体、抗酒石酸酸性磷酸酶、β-胶原降解产物蛋白水平、二价金属离子转运体1、转铁蛋白受体1、膜铁转运蛋白1 mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05);③与转染对照组相比,SMAD4过表达组大鼠股骨组织SMAD4、碱性磷酸酶、骨钙素、骨保护素蛋白水平、血清和股骨组织铁调素水平明显升高,股骨组织核因子κB受体激活因子配体、抗酒石酸酸性磷酸酶、β-胶原降解产物蛋白水平、二价金属离子转运体1、转铁蛋白受体1、膜铁转运蛋白1 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05);④提示过表达SMAD4通过干预铁代谢相关蛋白表达促进骨质疏松大鼠骨重建。

The Epstein-Barr virus-miRNA-BART6-5p regulates TGF-β/SMAD4 pathway to induce glycolysis and enhance proliferation and metastasis of gastric cancer cells

Background:EBV-miR-BARTs exhibit significant relevance in epithelial tumors,particularly in EBVassociated gastric and nasopharyngeal cancers.However,their specific mechanisms in the initiation and progression of gastric cancer remain insufficiently explored.Material and Methods:Initially,EBV-miRNA-BART6-5p and its target gene SMAD4 expression were assessed in EBV-associated gastric cancer tissues and cell lines.Subsequent transfection induced overexpression of EBV-miRNA-BART6-5p in AGS and MKN-45,and downregulation in EBVpositive cells(SUN-719).The subsequent evaluation aimed to observe their impact on gastric cancer cell proliferation,migration,and glycolytic processes,with the TGF-β/SMAD4 signaling pathway value clarified using a TGF-βinhibitor.Results:EBV-miRNA-BART6-5p exhibits pronounced upregulation in EBV-associated gastric cancer tissues and EBV-positive cells,while its target gene SMAD4 demonstrates downregulated expression.Upregulation of it can promote the proliferation and migration of gastric cancer cells.Additionally,We found EBV-miRNA-BART6-5p promotes glycolysis of gastric cancer cells.Inhibition of the TGF-β/SMAD4 signaling pathway resulted in suppressed proliferation and migration of gastric cancer cells,concomitant with a diminished glycolytic capacity.Conclusion:In this study,we found that EBV-miRNA-BART6-5p can target SMAD4,effectively increasing glycolysis in gastric cancer cells by regulating the TGF-β/SMAD4 signaling pathway,thereby enhancing the proliferation and metastasis of gastric cancer cells.Our findings may offer new insights into the metabolic aspects of gastric cancer.

FOXO1、SMAD4在食管癌组织中的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系

目的 探讨食管癌(EC)组织中FOXO1和SMAD4的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系。方法 收集131例EC患者癌组织和癌旁组织标本。采用苏木精-伊红(HE)染色观察EC组织和癌旁组织病理形态。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定FOXO1 mRNA、SMAD4 mRNA表达;采用免疫组化法测定FOXO1和SMAD4蛋白表达;采用Spearman相关性分析法分析EC组织中FOXO1和SMAD4蛋白表达的相关性;采用Cox回归分析法分析EC患者预后的影响因素;采用Kaplan-Meier分析法进行EC患者生存分析。结果 EC组织中FOXO1 mRNA表达及其蛋白阳性表达率高于癌旁组织,SMAD4 mRNA表达及其蛋白阳性表达率低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。FOXO1、SMAD4与患者肿瘤直径、肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。EC组织中FOXO1与SMAD4表达呈负相关(r=-0.419,P<0.05)。FOXO1、SMAD4、肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移、TNM分期是EC患者死亡的影响因素(P<0.05)。EC患者3年总生存率为84.73%(111/131)。EC组织中FOXO1阳性表达患者3年累积生存率低于FOXO1阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05);SMAD4阳性表达患者3年累积生存率高于SMAD4阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EC组织中FOXO1阳性表达率较高,SMAD4阳性表达率较低,二者蛋白表达与患者临床病理特征和预后有关。FOXO1、SMAD4或可作为预测EC预后的重要标志物。

原发性青光眼患者血清STAT3和SMAD4水平表达在临床早期诊断及分期中的应用价值研究

目的探究血清信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3),SMAD4水平表达在原发性青光眼(primary glaucoma)患者早期诊断及临床分期中的应用价值。方法选取沧州市眼科医院2021年8月~2023年5月收治的原发性青光眼患者86例作为研究组,依据研究组临床症状和视力检查结果分为轻度损伤期(n=30)、中度损伤期(n=34)和重度损伤期(n=22);另选取同期在该院进行体检的健康正常者86例作为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清STAT3和SMAD4表达水平;多因素Logistic回归分析影响原发性青光眼临床分期的相关因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清STAT3和SMAD4对原发性青光眼中/重度损伤期患者的诊断价值。结果研究组血清STAT3(13.96±3.45 ng/ml)和SMAD4(11.23±2.85 ng/ml)表达水平均显著高于对照组(9.83±1.72 ng/ml,7.78±1.95 ng/ml),差异有统计学意义(t=9.935,9.265,均P<0.05)。轻度损伤期、中度损伤期和重度损伤期组原发性青光眼患者血清STAT3(11.88±2.52 ng/ml,13.85±3.51 ng/ml,16.96±4.63ng/ml)和SMAD4(9.15±1.95 ng/ml,11.23±2.83 ng/ml,14.08±4.12 ng/ml)表达水平均逐渐升高,差异具有统计学意义(F=13.085,17.513,均P<0.05)。轻度损伤期、中度损伤期和重度损伤期患者眼压(24.21±5.03 mmHg,28.16±6.31 mmHg,32.26±7.57 mmHg)比较,差异有统计学意义(F=10.577,P<0.05)。血清STAT3[OR(95%CI)=2.728(1.409~5.281)],SMAD4[OR(95%CI)=2.849(1.507~5.387)],眼压[OR(95%CI)=2.435(1.094~5.417)]为影响原发性青光眼临床分期的危险因素(均P<0.05)。血清STAT3,SMAD4二者联合诊断原发性青光眼中/重度损伤期患者的曲线下面积(AUC)为0.963(95%CI:0.899~0.992),优于各自单独诊断(Z=2.558,1.961,P=0.010,0.049),其灵敏度和特异度分别为96.43%,83.33%。结论血清STAT3和SMAD4表达水平越高患者临床症状越严重,二者联合检测对中/重度损伤期患者有较好的诊断价值。

妊娠期高血压患者血清转化生长因子-β1和Smad3、Smad4浓度与临床意义

目的探讨妊娠期高血压(hypertension during pregnancy,HDP)患者血清转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Smad3、Smad4的浓度与临床意义。方法选取河北中石油中心医院妇产科2021年1月至2022年8月诊治的96例HDP患者作为研究组,同时选取96名在本院产检且一般资料与HDP患者相匹配的正常孕妇作为对照组。采用Logistic回归分析影响孕妇发生HDP的相关因素;采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析TGF-β1和Smad3、Smad4对HDP的诊断效能。结果两组患者年龄、孕周、孕次、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组患者血清TGF-β1、Smad3、Smad4浓度及有原发性高血压(高血压)家族史的患者所占比例均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。有高血压家族史、TGF-β1、Smad3、Smad4浓度升高均为孕妇发生HDP的危险因素(P<0.05)。血清TGF-β1、Smad3、Smad4诊断HDP的曲线下面积(AUC)分别为0.652、0.720、0.730,而三者联合诊断的曲线下面积为0.916,三者联合优于血清TGF-β1、Smad3、Smad4各自单独诊断(Z三者联合-TGF-β1=6.864、Z三者联合-Smad3=5.955、Z三者联合-Smad4=5.907,P均<0.001),其敏感度和特异度分别为82.29%、78.50%。结论血清TGF-β1、Smad3、Smad4浓度与HDP的发生密切相关,三者联合检测对HDP具有较高的诊断价值。

微小RNA-190b-5p靶向调控Smad4及对TGF-β1诱导的直肠癌细胞迁移侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨微小RNA-190b-5p(miR-190b-5p)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的直肠癌细胞迁移侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法给予直肠癌SW1463细胞miR-190b-5p模拟物(mimic)和/或TGF-β1处理,采用实时荧光定量PCR测定miR-190b-5p表达水平;Western blot检测钙黏蛋白E、波形蛋白和SMAD家族蛋白4(Smad4)的蛋白表达水平;Transwell实验检测SW1463细胞的迁移侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-190b-5p与Smad4的靶向关系。结果与正常人结肠上皮细胞CCD841 con相比,SW1463细胞的miR-190b-5p表达降低。TGF-β1处理诱导SW1463细胞的miR-190b-5p表达水平进一步降低,促进EMT且增强细胞迁移侵袭能力和Smad4蛋白表达水平。过表达miR-190b-5p可抑制TGF-β1诱导的EMT及细胞迁移侵袭过程和Smad4表达上调。结论miR-190b-5p可能通过抑制Smad4表达来阻断TGF-β/Smad信号通路诱导的直肠癌细胞EMT和侵袭迁移过程,miR-190b-5p/Smad4有成为直肠癌治疗靶点的潜能。

基于TGF-β1/Smads信号通路探讨2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮抗肝纤维化的作用机制

目的探讨2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2,5-diene-1,4-dione,DMDD)对CCl_(4)致大鼠肝纤维化的影响及潜在作用机制。方法采用50%CCl_(4)复制肝纤维化模型,检测血液中门冬氨酸转移酶(aspartate transferase,AST)、丙氨酸转移酶(alanine transferase,ALT)、白蛋白/球蛋白(albumin/globulin,A/G)、总蛋白(total protein,TP)、总胆红素(total bilirubin,T-BIL)、大鼠透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,ColⅢ)和Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,ColⅣ)。HE和Masson染色观察肝脏组织病变和纤维形成情况。免疫组织化学法检测肝脏组织中α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColI)、转化生长因子β1(transformed growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2、Smad7蛋白表达水平。RT-PCR法检测肝脏组织中α-SMA、ColI、TGF-β1、Smad7mRNA水平。Western blot法检测肝脏组织中TGF-β1、Smad4、Smad7蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组血清AST、ALT、TP、T-BIL、HA、LN、ColⅢ、ColⅣ水平明显升高,A/G水平明显降低,肝脏HE和Masson染色显示有大量纤维形成,说明造模成功。与模型组相比,DMDD给药组大鼠AST、ALT、TP、T-BIL、HA、LN、ColⅢ、ColⅣ含量和α-SMA、ColI、TGF-β1、Smad2、Smad4mRNA及蛋白水平显著下调,A/G、Smad7水平上调。肝脏HE和Masson染色结果显示纤维增生明显减少。结论DMDD对CCl_(4)诱导的肝纤维化具有保护作用,其机制可能与TGF-β1/Smads信号通路有关。

自体动静脉内瘘狭窄与转化生长因子-β1/Smad4信号通路的关系

目的探讨自体动静脉内瘘(AVF)狭窄与转化生长因子(TGF)-β1/Smad4信号通路的关系。方法选取2017年10月至2020年2月于贵州医科大学附属医院行AVF的60例患者为观察组,选取同期50例因外周血管疾病行血管切除的患者为对照组。比较两组患者的年龄、血钙、血磷、血红蛋白、血全段甲状旁腺激素(iPTH)、β2微球蛋白、C反应蛋白(CRP)水平、Smad4及TGF-β1蛋白水平。结果两组患者年龄、血钙、血磷、血红蛋白、血iPTH、β2微球蛋白、CRP水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组Smad4蛋白表达量低于对照组,TGF-β1蛋白表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β1、Smad4在透析患者AVF狭窄组织中异常表达,并在静脉内膜增生引起瘘管狭窄的过程中发挥重要作用。

鼻咽癌患者血清SMAD家族成员4、组织多肽特异性抗原表达水平及与临床特征和预后的关系

目的探讨鼻咽癌(NPC)患者血清SMAD家族成员4(SMAD4)、组织多肽特异性抗原(TPS)表达水平及与临床特征和预后的关系。方法选取43例NPC患者作为NPC组,40例健康体检者作为健康组,比较两组受试者血清SMAD4、TPS水平,分析SMAD4、TPS与NPC患者临床特征的关系。采用Cox回归模型分析NPC患者预后的影响因素。结果NPC组患者血清SMAD4水平明显低于健康组,TPS水平明显高于健康组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同临床分期、颈淋巴结转移情况、颅神经侵犯情况NPC患者血清SMAD4、TPS水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Cox回归分析结果显示,有颅神经侵犯、血清SMAD4水平﹤97.43 ng/L、血清TPS水平≥164.44 U/L均为NPC患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.01)。结论NPC患者血清SMAD4呈异常低表达,TPS呈异常高表达,其水平与NPC患者的临床特征有关,且与预后相关。

温针联合桃红四物汤对腰椎骨折大鼠骨愈合能力、骨矿化及Smad4通路的影响

目的探讨温针联合桃红四物汤对腰椎骨折大鼠骨愈合能力、骨矿化及Smad4信号通路的影响。方法随机将45只大鼠分为5组,假手术(CO)组、模型(MO)组、针灸(AC)组、桃红四物汤(PE)组、联合(JO)组,每组9只。建立大鼠腰椎骨折模型。AC组给予温针治疗,隔日一次,干预28 d;PE组给予桃红四物汤6 ml/kg灌胃;JO组在PE组的基础上给予温针治疗;CO组和MO组均给予等容量生理盐水灌胃。比色法测定血清钙(Ca)浓度;磷钼酸法测定血清磷(P)浓度;全自动生化分析仪检测碱性磷酸酶(ALP)水平;放射免疫法检测骨钙素(BGP)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓组织病理学变化;免疫组化检测血管内皮生长因子(VEGF)表达;免疫印迹检测转化生长因子(TGF)-β1、Smad4蛋白的表达。结果与CO组相比,MO组血清中Ca、P、ALP、BGP水平均明显降低(P<0.05),与MO组相比,AC组、PE组和JO组Ca、P、ALP、BGP水平均显著升高(P<0.05),AC组和PE组相比,组间比较无统计学差异(P>0.05),与AC组相比,JO组Ca、P、ALP、BGP水平均明显升高(P<0.05)。HE染色结果显示,CO组显示灰白质边界清楚,神经元丰富;MO组显示出以为灰白质边界不清及神经元数目显著降低为特征的严重损害;与MO组相比,AC组、PE组神经元数目明显增加,但灰白质边界欠清;与AC组、PE组相比,JO组中神经元数目增加更明显,脊髓的结构更好。与CO组相比,MO组腰椎组织中VEGF阳性表达显著降低(P<0.05),与MO组相比,AC组、PE组和JO组VEGF阳性表达显著升高(P<0.05),AC组和PE组相比,组间比较无统计学差异(P>0.05),与AC组相比,JO组VEGF表达明显升高(P<0.05)。与CO组相比,MO组腰椎组织中TGF-β1、Smad4表达显著降低(P<0.05),与MO组相比,AC组、PE组和JO组TGF-β1、Smad4表达显著升高(P<0.05),AC组和PE组相比,组间比较无统计学差异(P>0.05),与AC组相比,JO组TGF-β1、Smad4表达明显升高(P<0.05)。结论温针联合桃红四物汤可以抑制骨矿物质的流失,加快钙盐的沉积,上调Smad4水平,促进骨愈合。