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Tth DNA聚合酶基因的分段PCR克隆及其表达载体构建 被引量:3
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作者 蒋永强 蒙健宗 +1 位作者 黄鲲 黄日波 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 1999年第1期33-38,共6页
利用计算机软件对取自GenBank的嗜热栖热菌ThermusthermophilusHB-8的DNA聚合酶基因(Tth)进行分析,并设计了两组引物进行PCR,分段克隆该基因。将两个PCR产物同时连接到另一个克隆载体上... 利用计算机软件对取自GenBank的嗜热栖热菌ThermusthermophilusHB-8的DNA聚合酶基因(Tth)进行分析,并设计了两组引物进行PCR,分段克隆该基因。将两个PCR产物同时连接到另一个克隆载体上,使之成为完整基因,最后将完整基因克隆到表达载体上,构建了Tth基因的表达质粒,使之适合在以大肠杆菌为寄主的细胞中进行表达。 展开更多
关键词 嗜热栖热菌 DNA聚合酶 基因克隆 表达载体
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Isolation and characterization of acidophilic bacterium from Dongxiangshan Mine in Xinjiang Province, China
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作者 夏金兰 张倩 +5 位作者 张瑞永 彭娟花 彭安安 赵小娟 聂珍媛 邱冠周 《Journal of Central South University》 SCIE EI CAS 2010年第1期50-55,共6页
One bioleaching bacterium, named as strain DXS, was isolated from acid mine drainages (AMDs) of Dongxiangshan Mine of Hami, Xinjiang Province, China. The strain DXS is gram-negative and rod-shaped with a size of (0... One bioleaching bacterium, named as strain DXS, was isolated from acid mine drainages (AMDs) of Dongxiangshan Mine of Hami, Xinjiang Province, China. The strain DXS is gram-negative and rod-shaped with a size of (0.40±0.05) μm x (1.3±0.5) μm. The optimal temperature and pH for growth are 30 ℃ and pH 2.0, respectively. It can grow autotrophically by using ferrous iron, elemental sulfur and NaS203 as sole energy sources. In the phylogenetic tree, strain DXS has similarity with Acidithiobacillus ferrooxidans type strain ATCC 23270 with 99.57% sequence similarity. The cloning and sequencing of Iro protein gene (iro) and tetrathionate hydrolase gene (tth) reveal that strain DXS is completely identical in iro gene sequence to A. ferrooxidans LY (DQ166841), and almost identical in tth gene sequene to .4. ferrooxidans (AB259312) (only two nucleotides change). The bioleaching experiments of marmatite and pyrite reveal that the leached zinc and iron concentrations reach 3.01 g/L and 2.75 g/L, respectively. The strain has a well potential application in industry bioleaching. 展开更多
关键词 .4cidithiobacillusferrooxidans BIOLEACHING iro and tth gene 16S rRNA
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重组Tth DNA聚合酶基因的克隆表达及活性鉴定 被引量:1
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作者 李华 杨玲玲 杜红旗 《河南大学学报(自然科学版)》 CAS 2019年第3期311-317,共7页
Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99... Tth DNA聚合酶具有聚合酶与反转录酶两种功能,而且耐高温,但是国内并未实现高效生产.本研究以粗提的嗜热栖热菌Thermus thermophilus基因组为模板,采用PCR分段扩增和酶切连接的方法获得Tth DNA聚合酶基因全长序列;然后构建重组质粒pXT99b/Tth并转化表达菌E.coli DH5α,利用IPTG诱导Tth基因表达,并采用热处理、Ni2+柱纯化融合His-tag的Tth DNA聚合酶,最后利用PCR、RT-PCR鉴定其活性.结果显示,本研究获得Tth DNA聚合酶基因全长2 505bp,成功表达并获得高纯度高活性的重组Tth DNA聚合酶,1L发酵液所得粗酶液中,酶活性约有800 000U,酶的比活约为6 315U/mg.本研究最终实现了Tth DNA聚合酶的高效国产化并降低了实验成本. 展开更多
关键词 tth 基因克隆 Ni2+柱 THERMUS THERMOPHILUS 酶活
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