Cathepsin-D、MMP-2和MMP-9在乳癌组织中的表达

①目的通过检测人乳癌组织中组织蛋白酶D(CathepsinD)、MMP2和MMP9三种蛋白酶的表达,探讨其在乳癌演进和异质化过程中的改变及意义。②方法采用免疫组织化学方法,检测58例人乳癌标本、5例正常乳腺标本及5例良性增生乳腺组织标本中三种酶的表达。③结果CathepsinD、MMP2和MMP9在乳癌的肿瘤细胞和间质细胞中均有表达,在肿瘤细胞中呈异质性过表达,而良性增生乳腺组织呈阴性或弱表达;CathepsinD阳性表达与瘤细胞分化程度(分级)有关(χ2=8.35,P<0.05);而MMP2和MMP9阳性表达与淋巴结转移有关(χ2=7.66、17.67,P<0.05)。④结论乳癌CathepsinD、MMP2和MMP9的表达与正常或良性增生乳腺组织有质的差别,是乳癌不断演进和异质化的形态和功能特征之一,与乳癌癌细胞的侵袭和转移能力密切相关。

THE PROGNOSIS SIGNIFICANCE OF CATHEPSIN-D EXPRESSIONIN THE DIFFERENT LOCATIONS IN AXILLARY NODES NEGATIVE CARCINOMA

Objective: The aim of this study was to investigate Cathepsin-D (Cath-D) expression in different location and its relationship with prognosis in the axillary lymph nodes negative (ANN) breast cancer patients. Methods: Cath-D expression in 192 cases of breast carcinoma were examined by immunohistochemistry. Depending on different parts of expression, three evaluating methods were used, compared and analysed. Results: The positive rate of Cath-D expression in ANN breast cancer with poor prognosis group and axillary nodes positive (ANP) group were significantly higher than that in ANN breast cancer with good prognosis group (x 2=23.20,P<0.01), while there was no significant difference between ANP group and ANN with poor prognosis group (x 2=0.19,P>0.05). Cath-D expression in stromal cells had no statistical difference among the three groups (x}2=1.56,P>0.05). When the Cath-D expression in cancer and stromal cells were counted into the positive rate, it was near the same (u 1=0.47,u 2=1.41,P>0.05). Conclusion: These results suggest that Cath-D expression is one of the powerful prognostic markers in ANN breast cancer. It’s a reliable, practical, and convenient method to observe and evaluate Cath-D expression in cancer cells.

COX-2和Cathepsin-D在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)和组织蛋白酶D(Cathepsin-D)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法选取2013年9月至2017年9月间广西中医药大学第一附属医院收治的50例经病理证实的结直肠癌组织,另选取50例同期疑似结直肠癌并做活检的正常结直肠组织,分别行免疫组化测定COX-2的表达和Cathepsin D定量测定,追踪收集病例临床资料和术后随访资料。结果Cathepsin D和COX-2在结肠癌组织中的表达与淋巴结转移、分化程度及临床分期密切相关,差异均有统计学意义(均P<0.05),与年龄和性别无关(P>0.05)。Cathepsin D和COX-2在结直肠癌组织是表达的阳性率均高于正常结直肠组织,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Cathepsin D和COX-2阳性组的术后复发转移率均高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论COX-2和Cathepsin-D在结直肠癌组织中的表达与分化程度、淋巴结转移及临床分期密切相关,检测COX-2和Cathepsin-D的表达,能研究其参与结直肠癌复发、浸润、转移及在抑制细胞凋亡和促进肿瘤血管生成中的调节机理。

扶正消癌方对CRC根治术后患者COX-2及Cathepsin-D的影响

目的:观察扶正消癌方对结直肠癌(CRC)根治术后患者的环氧化酶-2(COX-2)和组织蛋白酶D(CathepsinD)的影响。方法:将结直肠癌根治术后患者100例按随机数字表法分为2组各50例,2组均采用FOLFOX4方案治疗后,治疗组予扶正消癌方治疗,对照组予香菇多糖片治疗。结果:治疗组Cathepsin-D活性治疗前后组内比较及治疗后组间比较,2组COX-2水平治疗前后组内比较及治疗后组间比较,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论:扶正消癌方能够降低结直肠癌根治术后患者Cathepsin-D和COX-2的表达水平,表明抗肿瘤血管生成可能是扶正消癌方抑制肿瘤进展的主要作用机制之一。

C-erbB-2基因扩增/表达和Cathepsin-D表达对乳腺癌预后的影响

用差异ＰＣＲ方法检测了１３１例乳腺癌Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增，免疫组化法检测了１３１例乳腺癌Ｃ－ｅｒｂＢ－２和Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ－Ｄ表达，并对其对乳腺癌的预后影响进行评价。Ｃ－ｅｒｂＢ２基因扩增阳性率为２９．０１％，与临床分期、病理类型、组织学分级和淋巴结转移状况无明显相关，与Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达虽不完全吻合但呈高度相关。Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达阳性率为３２．０６％，与临床分期、病理类型、组织学分级、淋巴结转移状况及瘤体大小未见明显相关，转移灶和原发灶表达一致。Ｃａｔｈｅｐ－ｓｉｎ－Ｄ表达阳性率为３２．０６％，与淋巴瘤结转移状况、Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达及病理类型明显相关。单因素分析表明Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增、Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达及Ｃａｔｈ－Ｄ表达对乳腺癌术后生存及无瘤生存影响显著，Ｃｏｘ模型多因素回归分析表明Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达是乳腺癌一独立预后指标。联合应用Ｃ－ｅｒｂＢ－２和Ｃａｔｈ－Ｄ表达检测更有助于早期病例和淋巴结转移阴性病例中高危患者的筛选。

HIF-1α、cathepsin-D表达与宫颈鳞状细胞癌放疗耐受的关系

目的:探讨缺氧诱导因子-1(H IF-1α)、组织蛋白酶-D(cathepsin-D)表达对宫颈鳞状细胞癌放疗耐受的作用。方法:应用免疫组织化学方法检测宫颈鳞状细胞癌54例中H IF-1α、cathepsin-D在肿瘤浸润前沿和中央部位的表达,结合临床放疗疗效和病理资料进行分析。结果:H IF-1α在宫颈鳞状细胞癌中的阳性表达率为50%,浸润前沿阳性细胞集中,而中央部位表达较弱,且阳性细胞弥散;表达水平与分化程度、浸润深度明显相关(r=-0.674,P<0.05和r=0.897,P<0.001),与临床分期、肿瘤体积、淋巴结转移无明显相关(P>0.05);放疗耐受组浸润前沿的H IF-1α表达水平明显高于放疗敏感组(P<0.05),两组肿瘤中央的阳性表达水平无明显差别;cathepsin-D在子宫颈鳞状细胞癌中的表达率为87.1%,肿瘤浸润前沿阳性细胞较少,而中央的阳性细胞比较集中;表达水平与肿瘤体积、临床分期明显相关(r=0.989,P<0.05和r=0.807,P<0.001),与分化程度、淋巴结转移、浸润深度之间无明显相关(P>0.05);放疗敏感组中浸润前沿cathepsin-D表达明显低于耐受组中的表达(P<0.05),两组中央部位的阳性表达水平无明显差别。结论:宫颈鳞状细胞癌浸润前沿缺氧状态和自噬活性升高与放疗耐受相关。

MMP-2、MMP-9、Cathepsin-D在淋巴结阴性乳腺癌中的表达及其与预后的关系

目的研究MMP-2、MMP-9(matrixmetalloproteinase,基质金属蛋白酶)、Cathepsin-D(组织蛋白酶D)在淋巴结阴性乳腺癌中的表达与预后的关系。方法用免疫组织化学ABC法检测270例淋巴结阴性乳腺癌患者肿瘤组织中MMP-2、MMP-9、Cathepsin-D的表达。结果肿瘤组织中MMP-2、MMP-9、Cathepsin-D的阳性率分别为56·7%(153/270)、59·6%(161/270)、55·6%(150/270);单因素分析MMP-2阳性、MMP-9阳性及两者共表达患者有较低的无复发生存率,多因素分析发现MMP-2和MMP-9共表达能独立预测患者的无复发生存率(RR=2·487;P<0·05)。结论在淋巴结阴性乳腺癌患者中MMP-2和MMP-9的阳性表达患者的预后较差。

Cathepsin-D、LC3的表达影响宫颈鳞状细胞癌化疗效果分析

目的:分析组织蛋白酶-D(Cathepsin-D)及微管相关蛋白(LC3)表达对宫颈鳞状细胞癌化疗效果的影响。方法:将73例接受化疗的宫颈鳞状细胞癌患者分为Cathepsin-D阳性组31例,Cathepsin-D阴性组42例,LC3阳性组34例,LC3阴性组39例,分别分析Cathepsin-D及LC3表达对化疗治疗效果的影响。结果:随着肿瘤分化程度的升高,Cathepsin-D及LC3表达程度均随之降低,Cathepsin-D阳性组患者化疗有效率明显低于Cathepsin-D阴性组,LC3阳性组患者化疗有效率明显低于LC3阴性组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:Cathepsin-D及LC3的表达可降低宫颈鳞状细胞癌化疗的疗效。

先天性巨结肠患儿术后肠道组织中CAD、SOX2的表达水平及其临床意义

目的探讨先天性巨结肠(HD)患儿术后肠道组织蛋白酶D(CAD)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)的表达水平及其临床意义。方法选取2015年5月至2019年3月郑州大学第一附属医院收治的56例HD患儿结肠组织(HD组)和23例因肠道梗阻或穿孔实施造瘘手术获取的结肠组织标本(对照组)。采用免疫组化、Western-blot技术检测结肠组织中CAD、SOX2的表达水平,并采用Pearson线性相关分析法分析CAD、SOX2表达与病变肠段肌间神经丛直径、神经节细胞数的关系。结果HD患儿的狭窄段组织中CAD蛋白、SOX2蛋白阳性表达率分别为7.14%、12.50%,移行段肠组织中CAD蛋白、SOX2蛋白阳性表达率分别为32.14%、35.71%,明显低于对照组的78.26%、82.61%,而狭窄段组织中CAD蛋白、SOX2蛋白阳性表达率明显低于移行段,差异均有统计学意义(P<0.05);HD患儿的狭窄段肠组织中肌间神经丛直径、神经节细胞数目分别为(30.66±5.14)μm、(0.83±0.24)个/视野,移行段肠组织中肌间神经丛直径、神经节细胞数目分别为(31.20±5.83)μm、(1.94±0.56)个/视野,明显短(少)于对照组的(54.29±8.50)μm、(5.40±1.84)个/视野,狭窄段肠组织中肌间神经丛直径、神经节细胞数目明显短(少)于移行段,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析结果显示,HD患儿狭窄段、移行段肠组织中肌间神经丛直径、神经节细胞数目与CAD蛋白、SOX2蛋白表达强度均呈显著正相关(P<0.05)。结论HD患儿病变结肠组织中CAD蛋白、SOX2蛋白的表达强度下调,可能与肌间神经丛直径、神经节细胞数目的减少有关。

手术标本YAP1、POU2F2、Cath-D表达与局限性肾癌术后复发的相关性及预测意义

目的研究手术标本Yes相关蛋白1(YAP1)、POU2家族同源框2(POU2F2)和组织蛋白酶D(Cath-D)表达与局限性肾癌术后复发的相关性及预测意义。方法回顾性分析2019年1月至2022年3月新乡医学院第一附属医院收治的282例局限性肾癌手术患者的临床资料,根据术后2年随访期内(2例失访)复发情况分为复发组42例和未复发组238例。比较两组患者的基线资料以及手术标本YAP1、POU2F2、Cath-D表达水平,采用多因素Logistic回归分析局限性肾癌术后复发的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析手术标本YAP1、POU2F2和Cath-D表达单一及联合预测局限性肾癌术后复发价值,采用Pearson相关分析法分析手术标本YAP1、POU2F2和Cath-D表达与复发时间的相关性。结果复发组患者的2017AJCCTNM分期T2期、Fuhrman分级Ⅳ级患者占比分别为80.95%、40.48%,明显高于未复发组患者的62.31%、21.85%,差异均有统计学意义(P<0.05);复发组患者的YAP1阳性率、POU2F2 mRNA和Cath-D阳性率分别为78.57%、1.70±0.36和83.33%,明显高于未复发组患者的47.90%、1.48±0.41、50.00%,差异均有统计学意义(P<0.05);校正前多因素Logistic回归分析结果显示,2017AJCCTNM分期T2期、Fuhrman分级>Ⅱ级、YAP1阳性、POU2F2mRNA、Cath-D阳性均与局限性肾癌术后复发相关(P<0.05),校正后YAP1阳性、POU2F2 mRNA和Cath-D阳性仍是局限性肾癌术后复发的独立相关危险因素(P<0.05);ROC分析结果显示,三者联合预测局限性肾癌术后复发的AUC为0.915,敏感度为80.95%,特异度为89.00%,明显高于各指标单独预测(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,手术标本YAP1、POU2F2、Cath-D表达与复发时间呈负相关(r=-0.802、-0.769、-0.834,P<0.05)。结论局限性肾癌患者手术标本YAP1、POU2F2和Cath-D表达水平与术后复发密切相关,其联合预测局限性肾癌术后复发具有良好参考价值。

组织蛋白酶D在急性ST段抬高型心肌梗死后心血管事件中的作用

目的探讨全血组织蛋白酶D(CTSD)表达量在急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者心肌损伤及经皮冠状动脉介入术(PCI)后6个月心血管事件中的作用。方法选取2022年11月至2023年7月沈阳医学院附属第二医院心血管内科收治的96例STEMI患者作为STEMI组,另选20例同期住院的冠状动脉造影正常患者作为对照组。2组均抽取冠状动脉血,采用实时定量PCR检测动脉血CTSD的相对表达水平,并进行比较。再根据CTSD表达量三分位数将STEMI组分为低、中、高CTSD组,随访PCI治疗后6个月内主要不良心血管事件(MACE)。结果STEMI组动脉全血CTSD表达量[1.31(1.03~1.75)]高于对照组[1.02(0.67~1.48)],差异有统计学意义(P<0.05)。低、中、高CTSD组患者血小板计数、肌钙蛋白T、N末端B型利尿钠肽、高密度脂蛋白胆固醇比较,差异有统计学意义(P<0.05)。低、中、高CTSD组间MACE发生率呈递减趋势,低CTSD组MACE发生率(65%)高于高CTSD组(10%,P<0.05)。受试者操作特征(ROC)曲线分析CTSD预测STEMI患者PCI治疗后6个月内MACE的截断值为1.214,灵敏度为75.0%,特异度为70.8%,ROC曲线下面积为0.765(95%CI:0.658~0.872,P<0.001)。结论STEMI患者全血CTSD表达异常。CTSD可能成为判断STEMI预后的指标及防治STEMI的药物靶点。

组织TIPE2、Cath-D、GPX3与PTC发病关系及预测术后复发的相关性

目的探讨组织免疫负调控分子肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)、组织蛋白酶D(Cath-D)、谷胱甘肽过氧化物酶3(GPX3)与甲状腺乳头状癌(PTC)发病及预测术后复发的相关性。方法选取2020年6月至2021年12月于新乡市中心医院接受手术治疗的176例(均完成1年随访)PTC患者为PTC组,同期176例甲状腺良性结节患者为对照组,根据PTC患者术后1年复发情况将其分为复发(64例)和未复发(112例)两个亚组。比较两组TIPE2、Cath-D、GPX3表达情况,比较复发和未复发患者癌组织中TIPE2、Cath-D、GPX3表达情况,比较不同病理学参数PTC患者癌组织中TIPE2、Cath-D、GPX3表达情况,分析组织中TIPE2、Cath-D、GPX3表达情况与PTC发病、PTC病理学参数及术后复发的相关性,偏回归分析PTC患者术后复发的影响因素。结果PTC组癌组织中TIPE2、GPX3阳性表达率低于对照组,Cath-D阳性表达率高于对照组(P<0.05);复发患者癌组织中TIPE2、GPX3阳性表达率低于未复发患者,Cath-D阳性表达率高于未复发患者(P<0.05);不同病理学参数PTC患者癌组织中TIPE2、GPX3阳性表达率比较:Ⅰ~Ⅱ期高于Ⅲ~Ⅳ期,高中分化高于低分化,无淋巴结转移高于有淋巴结转移(P<0.05);不同病理学参数PTC患者癌组织中Cath-D阳性表达率比较:Ⅰ~Ⅱ期低于Ⅲ~Ⅳ期,高中分化低于低分化,无淋巴结转移低于有淋巴结转移(P<0.05);PTC发病、复发、临床分期、分化程度、淋巴结转移与组织中TIPE2、GPX3阳性表达率呈负相关,与Cath-D阳性表达率呈正相关(P<0.05);Logistic回归分析发现,PTC患者癌组织TIPE2、GPX3阳性表达是PTC患者术后复发的保护因素,Cath-D阳性表达为危险因素(P<0.05)。结论组织中TIPE2、Cath-D、GPX3阳性表达率与PTC发生发展相关,且是PTC患者术后复发的影响因素。

红景天对乳腺癌抑制作用的研究

目的:通过体外和体内实验研究红景天对乳腺癌的增殖抑制作用和浸润转移相关因子表达的影响。方法:采用不同浓度红景天提取物处理乳腺癌MDA-MB-435细胞,制作细胞增殖曲线,观察药物对肿瘤细胞增殖活性的影响;应用流式细胞仪检测红景天提取物对乳腺癌细胞的细胞周期阻滞作用;选择裸鼠乳腺癌MDA-MB-435细胞移植瘤模型,以免疫组织化学染色方法研究红景天提取物对裸鼠移植瘤内MMP-2和组织蛋白酶D(CathD)表达的影响。结果:红景天提取物可显著抑制MDA-MB-435细胞的增殖活性,该抑制作用随着作用时间的延长、药物浓度的增高更为明显。红景天提取物具有阻滞MDA-MB-435细胞增殖周期的作用,主要阻滞于S期,该阻滞作用呈浓度依赖性。在红景天提取物治疗组裸鼠乳腺癌移植瘤中,CathD蛋白表达明显低于生理盐水对照组(免疫组化H-评分均数治疗组为72±50.70,而对照组为168±64.19,P=0.03);治疗组移植瘤MMP-2蛋白表达明显低于生理盐水对照组(免疫组化H-评分均数治疗组为90±29.15,而对照组为176±65.80,P=0.04)。结论:红景天可能通过抑制细胞增殖、浸润能力等多途径对乳腺癌细胞产生一定的抑制作用,其在乳腺癌的防治中具有一定的临床意义。

骨肉瘤组织蛋白酶D表达及其与预后的关系

目的：探讨骨肉瘤组织蛋白酶Ｄ表达与肿瘤细胞增殖活性及骨肉瘤预后的关系。方法：运用免疫组织化学染色，检测８５例骨肉瘤细胞增核抗原（ＰＣＮＡ）及组织蛋白酶Ｄ（Ｃａｔｈ－Ｄ）的表达，计算其标记指数（Ｌａｂｅｌｉｎｇｉｎｄｅｘ即ＬＩ）。结果：Ｃａｔｈ－ＤＬＩ在６％～９８．５％之间，ＰＣＮＡＬＩ在９％～９８％之间，Ｃａｔｈ－ＤＬＩ与骨肉瘤患者的年龄、性别、肿瘤的大小及Ｄａｈｉｌｉｎ分型无关，而与ＷＨＯ１９９３年新分型，Ｐｒｉｃｅ分级及ＰＣＮＡＬＩ密切相关。生存率分析显示Ｃａｔｈ－ＤＬＩ＜６２．５％的骨肉瘤预后较好，＞６２．５％的骨肉瘤预后较差。结论：骨肉瘤Ｃａｔｈ－Ｄ表达与肿瘤细胞增殖活性及生存率密切相关。

血清鳞状细胞癌抗原、组织蛋白酶D和糖类抗原125检测对宫颈鳞癌诊断及预测转移的应用价值

目的探讨血清鳞状细胞癌抗原（SCCAg）、组织蛋白酶D（Cath-D）、糖类抗原125（CA125）联合检测对宫颈鳞癌诊断及预测转移的临床应用价值。方法酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中SCCAg和CathD水平,全自动化学发光免疫分析法检测CA125。收集2009年1月30日-2012年4月1日宫颈鳞癌患者（ⅠA2～ⅡA期）60例为研究组;宫颈上皮内瘤变组（CIN组）60例为对照组1;慢性宫颈炎组60例为对照组2。研究组在术前检测血清SCCAg、Cath-D、CA125水平,分析血清SCCAg、Cath-D、CA125水平与宫颈鳞癌、临床病理特征、转移及复发之间的相关性。结果宫颈鳞癌组手术前的SCCAg、Cath-D和CA125水平分别为（1.41±0.26）ng/ml、（19.14±1.52）ng/L和（17.42±0.90）u/ml,明显高于CIN组和慢性宫颈炎组,差异有统计学意义（P=0.003、0.005、0.000、0.000、0.000和0.000）;SCCAg、Cath-D水平与宫颈鳞癌临床分期、肿瘤体积、分化程度、间质浸润深度、脉管癌栓、宫旁转移、盆腔淋巴结转移有不同程度相关,差异有统计学意义（P〈0.05）,CA125水平变化与宫颈癌间质浸润深度密切相关,差异有统计学意义（P=0.007）。应用工作特征曲线（ROC）分析SCCAg、Cath-D和CA125诊断宫颈鳞癌的临界值分别为1.03 ng/ml、13.58 ng/L和8.16 u/ml,预测转移临界值分别为3.21 ng/ml、21.20 ng/L和12.45 u/ml,曲线下面积（AUC）分别为0.954、0.905和0.718。结论血清SCCAg和Cath-D水平对宫颈鳞癌的诊断、临床分期、预判复发具有很高的临床诊断价值;SCCAg、Cath-D和CA125 3项指标联合使用,可明显提高预测宫颈鳞癌转移的临床价值。

微管相关蛋白LC3和组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的:探讨微管相关蛋白LC3、组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌组织中的表达及与临床病理参数之间的关系。方法:用免疫组织化学法检测12例正常增生期子宫内膜、12例子宫内膜增殖症以及51例子宫内膜样腺癌组织中LC3和组织蛋白酶D的表达并分析。结果:LC3在子宫内膜样腺癌组织的表达强度显著低于正常增生期内膜和子宫内膜增殖症(P＜0．001,P＜0．001) LC3在子宫内膜样腺癌中的表达强度与组织学分级以及手术病理分期呈明显的负相关(r=-0．390,P＜0．001;r=-0．312,P＜0．05)。组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌组织中的表达显著低于正常增生期内膜(P＜0．05)。结论:自噬活性相关的LC3、组织蛋白酶D在子宫内膜样腺癌中的表达下降,自噬活性的改变可能参与了子宫内膜样腺癌的发生和演进过程。

猪CTSD全长cDNA的克隆和表达分析

以人CTSD mRNA全长序列为基序,在db EST库中搜索同源性大于80%、重叠大于40个碱基的猪EST下载经Seqman软件装配后,利用RT-PCR扩增到猪CTSD基因部分cDNA序列,进一步通过RACE技术获得cDNA全长（GenBank登录号为DQ018727）,猪CTSD基因cDNA全长2032 bp包括93 bp 5′UTR区、706 bp 3′UTR区和1 233bp ORF,编码410个氨基酸残基。其编码区与人、鼠、牛、羊CTSD编码区同源性分别为87.9%、78.2%、86.6%和85.0%,其氨基酸序列与人、鼠、牛、羊氨基酸序列同源性分别为86.6%、80.1%、86.0%和84.7%。疏水性分析和信号肽预测发现猪CTSD氨基酸序列存在至少7个疏水性区域,信号肽位点为第1-20个氨基酸残基。在NCBI进行Blast P搜索结果显示猪CTSD氨基酸结构中含有Asn（Asparagine,天门冬酰胺）结构域,与天冬氨酸蛋白酶3D结构同源性高达99.7%,具有真核生物天冬氨酸蛋白酶的典型结构。以猪多组织RNA池为模板,以1026 bp部分cDNA序列作为杂交探针进行Northern杂交,得到一条2000 bp左右特异条带,从而验证了RACE产物为全长cDNA并揭示该基因只有一个转录本。为了研究猪CTSD基因在体内不同组织内表达的特点,采用半定量RT-PCR对CTSD基因在猪10个组织中的表达进行研究,结果表明在10个组织中均有表达,且表达量与-βactin内参接近。

大鼠脑外伤后溶酶体酶Cathepsin-B和D的表达

目的研究大鼠脑外伤后溶酶体酶cathepsin-B和-D是否被激活及其不同时段表达变化,阐述其与凋亡执行因子caspase-3表达的关系,并探讨对脑外伤诊断及形成时间的意义。方法采用自由落体打击法建立脑外伤动物模型,并对模型及对照样本进行免疫荧光、双标和激光共聚焦检测,结果用SPSS10.0软件处理。结果脑外伤后1hcathepsin-B表达即增加,4～8d达高峰,脑外伤后32d仍处于高表达水平;cathepsin-D的表达于脑外伤后12h增加,4～8d达高峰,32d的表达仍然高于12h的表达水平。脑外伤初期,cathepsin-B和-D阳性细胞与caspase-3阳性细胞重叠较少,脑外伤后6h开始增加,32d仍然有很多阳性细胞重叠。结论脑外伤后cathepsin-B和-D被激活,其激活在脑外伤早期可能抑制细胞凋亡执行因子caspase-3的激活,之后(6h后)则与caspase-3起协同作用,共同促进细胞死亡;cathepsin-B和-D表达的时程变化对于脑外伤的法医学诊断和中晚期的时间推断有参考意义。

癌基因c-erbB-2、组织蛋白酶D在胃癌中的表达及其意义

目的 探讨癌基因c erbB 2、组织蛋白酶D(Cath D)在胃癌中的表达及其与胃癌发展的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测 10 2例胃癌组织的c erbB 2、Cath D蛋白表达 ,分析其与胃癌生物学行为之间的关系。结果 c erbB 2阳性率 38 2 % ,Cath D阳性率 81 4 %。c erbB 2阳性者Cath D的阳性率明显高于c erbB 2阴性者 ,c erbB 2和Cath D表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移密切相关 ,而与组织学分型无关。Cath D表达还与肿瘤的生长方式及脉管内癌栓有关 ;c erbB 2和Cath D表达阳性的胃癌患者 5年生存率较表达阴性者低。结论 c erbB 2和Cath D对胃癌的生长、浸润和转移有促进作用 ,c erbB 2和Cath D可作为反映胃癌生物学行为的指标之一。

家蚕组织蛋白酶D基因的克隆、序列分析及其表达谱研究

组织蛋白酶D(cathepsinD,CtD)是溶酶体内天冬氨酸内切蛋白酶,参与机体多种生理病理过程,尤其在昆虫的发育变态过程中起着重要作用。利用NCBI上登录的组织蛋白酶D基因核酸序列和家蚕Bombyxmori表达序列标签(expressedsequencetags,EST)数据库,进行电子克隆获得家蚕组织蛋白酶D(BmCtD)基因的全长cDNA(DQ010007)。该cDNA大小为1543bp,其中ORF长1152bp,同源性分析表明BmCtD与其他物种的CtD具有较高的相似性。BmCtD的mRNA存在选择性拼接,另外一种mRNA形式命名为BmCtDⅠ。RT-PCR实验表明该基因在本实验所调查的家蚕不同发育时期和组织中都有表达。