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马立克病病毒meq基因缺失毒株HN302Δmeq的构建及致病性分析
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作者 张志会 滕蔓 +9 位作者 刘金玲 郑鹿平 王伟东 张文凯 张多 李林燕 张卓 柴书军 樊剑鸣 罗俊 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第10期71-79,共9页
马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病,严重危害世界养禽业。随着MDV持续进化及毒力增强,急需研发新型高效的MD疫苗以加强该病的有效防控。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以MDV变异株HN30... 马立克病(MD)是由马立克病病毒(MDV)感染引起的一种重要的家禽免疫抑制病与肿瘤病,严重危害世界养禽业。随着MDV持续进化及毒力增强,急需研发新型高效的MD疫苗以加强该病的有效防控。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以MDV变异株HN302为亲本毒株,成功构建了meq基因缺失的毒株HN302Δmeq,经过PCR扩增鉴定及测序分析,证实meq基因缺失且传代稳定。间接免疫荧光试验(IFA)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析均证实HN302Δmeq感染鸡胚成纤维细胞(CEF)中无meq基因表达,并且meq基因的缺失不影响其他病毒基因的表达。利用RT-qPCR分析HN302Δmeq在CEF中的体外增殖曲线,结果显示meq基因的缺失不影响MDV体外复制。1日龄SPF鸡攻毒试验结果显示,与亲本毒株HN302相比,HN302Δmeq对宿主无致病性,其诱导的MD发病率、死亡率和肿瘤发生率均为0,且未观察到明显的免疫器官萎缩。上述数据表明,HN302Δmeq的毒力明显丧失,具备继续作为疫苗候选株开展相关研究的可能性。本研究成功构建了MDV变异株HN302的meq基因缺失毒株,为后续MDV的致病机制及新型疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 马立克病病毒 meq基因 CRISPR/Cas9 基因编辑 致病性
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Cloning and Identification of L-meq Gene of Marek's Disease Virus
2
作者 GAO Ye ,WANG Xiao-ju,ZHENG Mei-zhu College of Chemistry,Changchun Normal University,Changchun 130032,China 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2012年第2期91-92,共2页
[Objective]To clone and identify Marek's disease virus ( MDV) serum gene. [Method]MDV genomic DNA was extracted from lymphoid tissues of the diseased chickens with latent MDV infection. The MDV L-meq gene was ampli... [Objective]To clone and identify Marek's disease virus ( MDV) serum gene. [Method]MDV genomic DNA was extracted from lymphoid tissues of the diseased chickens with latent MDV infection. The MDV L-meq gene was amplified by gradient PCR,inserted into pMD18-T vector and sequenced. The sequence was analyzed using DNAman software. [Result] The obtained sequence had 100% similarity with the published se- quence of L-meq gene,showing successful amplification of target gene. [Conclusion]The paper provides new ideas and new methods for preven- tion and treatment of Marek's disease in chickens. 展开更多
关键词 Marek's disease L-meq gene AMPLIFICATION CLONING
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4株鸡马立克氏病病毒国内分离株Meq基因的克隆与序列分析 被引量:18
3
作者 施维松 刘长军 +4 位作者 张艳萍 秦运安 张晓巍 李晶梅 陈洪岩 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期117-125,共9页
根据鸡马立克氏病病毒(MDV)GA株Meq基因序列,设计并合成一对用于扩增Meq基因的引物,利用这对引物通过PCR方法分别扩增4株东北地区分离的强毒株、国内标准强毒株J-1株、国内疫苗株814株的Meq基因片段,进行克隆测序,对4株MDV分离毒... 根据鸡马立克氏病病毒(MDV)GA株Meq基因序列,设计并合成一对用于扩增Meq基因的引物,利用这对引物通过PCR方法分别扩增4株东北地区分离的强毒株、国内标准强毒株J-1株、国内疫苗株814株的Meq基因片段,进行克隆测序,对4株MDV分离毒株Meq基因与国内传统毒株Meq基因及GenBank上收录的国内外9株毒株Meq基因序列进行比较分析。序列比较显示,不同的MDV株的Meq基因序列相对比较保守,它们相互间氨基酸序列的同源性在96.5%~99.7%之间。4株MDV分离毒株Meq基因在相关报道中提到的与毒力相关的脯氨酸重复区存在点突变;3株分离毒株Meq基因上相同位置均存在两个定点突变,这两处点突变是国内近几年分离株所特有的,国外已发表的MDV毒株Meq序列中不存在这种变化。分离株Meq基因的这些突变和毒株毒力的关系具有一定的规律性,但是这些规律性还有待进一步研究。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 meq基因 序列比较 定点突变
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马立克氏病病毒不同致病型meq基因的比较研究 被引量:37
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作者 韦平 崔治中 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期88-92,共5页
为了研究马立克氏病病毒 (MDV)的 meq基因与不同毒株致病性的关系 ,应用PCR技术扩增了不同致病型MDV毒株的meq基因 ,测定和比较了它们的核苷酸和氨基酸序列。这些毒株包括 :国际通用I型疫苗毒CV1988/Rispens株和中国特有的疫苗毒 814株... 为了研究马立克氏病病毒 (MDV)的 meq基因与不同毒株致病性的关系 ,应用PCR技术扩增了不同致病型MDV毒株的meq基因 ,测定和比较了它们的核苷酸和氨基酸序列。这些毒株包括 :国际通用I型疫苗毒CV1988/Rispens株和中国特有的疫苗毒 814株、强毒GA株 (vMDV)、特超强毒 6 48A株 (vv +MDV)以及 6个广西分离到的野毒株。结果发现 ,MDV不同致病型的meq基因序列相对比较保守 ,它们相互间核苷酸和氨基酸序列的同源性均在 95 .6 %~ 99.7%。但是 ,与所有测试的致病性MDV毒株相比 ,二个I型疫苗毒CV1988/Rispens株和 814株均在阅读框的核苷酸序列中缺失第 5 75~ 5 77位 3个碱基(CAC) ,导致一个氨基酸 (脯氨酸 )的缺失。该缺失性突变恰恰位于 meq基因的多脯氨酸功能区的一个重复序列 (EELCAQLC STPPPPI)之中。该缺失性突变与一个疫苗毒株失去致肿瘤性是否有关 。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 meq基因 序列比较 缺失性突变 毒株致病 PCR技术
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Ⅰ型马立克氏病强弱毒株Meq基因的克隆与序列分析 被引量:6
5
作者 丁维民 王旋 +4 位作者 张训海 魏建忠 赵磊 龚争 谢海晶 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第30期14604-14606,共3页
[目的]为获得MDV-1强弱毒株Meq基因序列的差异。[方法]根据GENE BANK登录的马立克氏病毒Meq基因序列,设计一对引物,采用PCR技术对MDV-I型国内商用CVI988/Rispens疫苗株和参考强毒京-1(BJ-1)株的Meq基因进行了扩增,并将扩增产物提纯后克... [目的]为获得MDV-1强弱毒株Meq基因序列的差异。[方法]根据GENE BANK登录的马立克氏病毒Meq基因序列,设计一对引物,采用PCR技术对MDV-I型国内商用CVI988/Rispens疫苗株和参考强毒京-1(BJ-1)株的Meq基因进行了扩增,并将扩增产物提纯后克隆到pcDNA3.1(+)上,进行酶切鉴定及测序验证。[结果]CVI988疫苗株和BJ-1强毒株的Meq基因开放阅读框(ORF)长度分别为1200和1197bp。通过与国际标准强毒GA株Meq基因进行比较,BJ-1株和CVI988株Meq基因中分别有一段180和177bp的插入序列,第211位核苷酸由G变为T,导致第71位氨基酸由丙氨酸A变为丝氨酸S;同时,CVI988株Meq基因第228位核苷酸由A变为G,导致第77位氨基酸由赖氨酸K变为谷氨酸E。此外,与BJ-1株相比,CVI988株Meq基因在576~578bp之间缺失3个碱基(ACC),并导致第193位脯氨酸P的缺失,该突变发生在一个多脯氨酸重复区域内。[结论]MDV-1强弱毒株Meq基因序列存在明显差异,为从其分子水平进行区分及生物学功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 MDV meq基因 克隆 序列分析
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马立克氏病病毒致瘤相关基因meq在不同病变组织中的变化 被引量:5
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作者 付本懂 王鲁 +5 位作者 申海清 褚秀玲 王春元 郭志廷 伊鹏霏 韦旭斌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期620-623,共4页
以MSB-1肿瘤细胞建立的马立克氏病为病理模型,利用PCR技术扩增不同病变组织中的meq基因,构建meq基因重组阳性质粒,测定和比较它们的核苷酸和氨基酸序列。结果显示,与L-meq(1 200 bp)和标准株GA的meq(1 020 bp)比较,MSB-1细胞和脾脏肿瘤... 以MSB-1肿瘤细胞建立的马立克氏病为病理模型,利用PCR技术扩增不同病变组织中的meq基因,构建meq基因重组阳性质粒,测定和比较它们的核苷酸和氨基酸序列。结果显示,与L-meq(1 200 bp)和标准株GA的meq(1 020 bp)比较,MSB-1细胞和脾脏肿瘤组织的meq基因(1 197 bp)、羽髓meq基因(1 017 bp)分别相应缺失3个碱基(CCA);MSB-1细胞和脾脏肿瘤组织的meq基因具有与L-meq相同的180 bp插入序列;氨基酸序列也发生相应变化。结果表明,meq基因在不同病变组织中的核苷酸序列发生了变化,这种变化可能与马立克氏病病毒的致瘤机制有关。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 meq基因 病变组织
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鸡马立克氏病病毒广西株Meq基因的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 屈素洁 邹联斌 +6 位作者 胡杰 粟艳琼 莫胜兰 施开创 尹彦文 李军 张步娴 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第1期45-49,共5页
为研究鸡马立克氏病病毒(MDV)广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了3株MDV。参照GenBank中MDV的核苷酸序列设计1对引物,利用PCR技术对分离毒株的Meq基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外参考毒株... 为研究鸡马立克氏病病毒(MDV)广西流行株的遗传变异情况,本研究从广西发病鸡中分离鉴定了3株MDV。参照GenBank中MDV的核苷酸序列设计1对引物,利用PCR技术对分离毒株的Meq基因进行了克隆、序列测定,并与GenBank中发表的国内外参考毒株进行比对分析。结果显示,Meq基因序列全长为1 020bp,编码一条由339个氨基酸组成的多肽,分离株与国内外MDV参考毒株相比,不同MDV株的Meq基因序列相对较保守,它们之间核苷酸同源性为83.8%~99.9%,氨基酸同源性为88.4%~99.6%。3株MDV分离株Meq基因在相关报道中提到的与毒力相关的脯氨酸重复区存在点突变。3株分离株与国内参考株YL、GXY2关系较近,与参考株RB1B、GA、Md5、648A及疫苗株亲缘关系较远。该研究为中国MDV的流行、遗传变异及防控研究提供了材料。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 meq基因 基因克隆 序列分析
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马立克氏病病毒meq基因缺失株细菌人工染色体序列自我敲除的分子鉴定 被引量:3
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作者 孙鹏 苏帅 +2 位作者 李延鹏 丁家波 崔治中 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期285-291,共7页
本试验旨在对缺失meq基因的马立克氏病病毒(MDV)感染性克隆基因组中细菌人工染色体(BAC)序列的自我敲除进行分子鉴定。将含有表达cre重组酶真核表达盒的SC9—1重组质粒通过转染鸡胚成纤维细胞(CEF)拯救SC9—1重组病毒。将SC9—1... 本试验旨在对缺失meq基因的马立克氏病病毒(MDV)感染性克隆基因组中细菌人工染色体(BAC)序列的自我敲除进行分子鉴定。将含有表达cre重组酶真核表达盒的SC9—1重组质粒通过转染鸡胚成纤维细胞(CEF)拯救SC9—1重组病毒。将SC9—1重组病毒在CEF细胞上进行连续传代培养,利用病毒表达的cre重组酶在传代过程中逐步敲除病毒的BAC序列。分别提取1~10代不同代次SC9—1重组病毒的DNA作为模板,利用BAC序列特异性引物对病毒基因组中的BAC进行PCR检测。利用针对BAC序列gpt基因的特异性检测引物,以MDV保守基因pp38作为内参,对不同代次病毒基因组中BAc序列进行荧光定量PCR的检测。利用PCR扩增SC9—1病毒敲除BAC序列后基因组中残留loxp位点两端序列,通过测序分析进一步验证BAC序列的敲除。利用BAC序列特异性引物对不同代次病毒基因组中BAC序列的检测结果显示,1~5代病毒DNA均能扩增出600bp的特异性目的条带,证实病毒的基因组中含有BAC序列。6~10代病毒DNA均不能扩增出特异性目的条带,证实病毒基因组中没有BAC序列。荧光定量PCR结果显示,病毒基因组中的BAC序列随着病毒的传代逐渐减少,直至第6代已经完全检测不到BAC序列。在病毒BAC序列敲除的过程中,对每代病毒BAC序列敲除后残留loxp位点序列进行PCR测序鉴定,结果显示BAC序列敲除后基因组中仅留下一个loxp位点,序列同源性均在99.7%以上。结果表明,利用cre/loxp系统将病毒在CEF细胞上连续6代传代培养可将MDVmeq基因缺失株SC9—1的BAC序列完全敲除掉,且同源重组酶敲除BAC序列具有高度一致性。 展开更多
关键词 马立克氏病 meq基因 细菌人工染色体 敲除 鉴定
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马立克氏病病毒河南分离株Meq基因的克隆与序列分析 被引量:2
9
作者 余祖华 滕蔓 +5 位作者 丁轲 闵亚杰 禹乐乐 宿靖伟 程相朝 罗俊 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第8期15-20,共6页
【目的】了解马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)河南分离株Meq基因的分子特性,为中原地区MDV流行情况提供较详细的信息,为更好地防控MD奠定基础。【方法】应用PCR方法分别扩增了17株MDV河南省野毒分离株的Meq基因片段,克隆... 【目的】了解马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)河南分离株Meq基因的分子特性,为中原地区MDV流行情况提供较详细的信息,为更好地防控MD奠定基础。【方法】应用PCR方法分别扩增了17株MDV河南省野毒分离株的Meq基因片段,克隆测序后,将各毒株Meq基因序列与vv+MDV 648A株、vvMDV RBIB株、vMDV GA株、mMDV疫苗株CVI988株和814株的Meq基因序列进行比对分析。【结果】17株分离株中除HNGS201和HNLC503的Meq基因扩增产物较预期稍大外,其余15个的片段长度为1 020bp,与预期长度相符;MDV河南分离株之间及其与参考毒株Meq基因的核苷酸同源性为99.0%~100%,部分毒株Meq基因的氨基酸序列有10个位点的氨基酸存在规律性突变;MDV河南分离株和参考株共组成3个进化分支,其中强毒株GA、RB1B和648A位于一个分支,分离株HNGS201、HNLH304、HNLC503与mMDV毒株CVI988和814位于同一分支,其余14株分离株位于另一个较大的分支。【结论】河南省可能流行着不同毒力的MDV,一些mMDV毒株的Meq蛋白存在59个或60个氨基酸的插入。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 meq基因 克隆 序列分析
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鸡MDV meq基因对鸡胚成纤维细胞p53基因表达的影响 被引量:2
10
作者 潘风光 郑梅竹 +4 位作者 李赫 邹亚学 孙莹 崔文璟 张玉静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期243-246,共4页
利用TaqMan探针技术,采用实时荧光相对定量RT-PCR的方法检测了鸡马立克氏病病毒(MDV)meq基因对鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)p53基因表达的影响,并用本室改进的TRAP法测定了端粒酶活性。结果显示,meq基因激活了CEF中... 利用TaqMan探针技术,采用实时荧光相对定量RT-PCR的方法检测了鸡马立克氏病病毒(MDV)meq基因对鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)p53基因表达的影响,并用本室改进的TRAP法测定了端粒酶活性。结果显示,meq基因激活了CEF中原癌基因p53的表达,并且48 h的表达量是72 h的18.8倍;在对CEF和转染前后48、72 h的细胞端粒酶活性测定时也发现,端粒酶活性在转染后48 h是转染后72 h的16倍。流式细胞仪检测发现meq基因使S期细胞比例较转染前有所上升,进一步印证了meq基因是MDV中致瘤的主要因素。 展开更多
关键词 MDV meq基因 P53基因
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MDV中meq基因对CEF细胞chTERT,chTR表达影响的研究 被引量:1
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作者 潘风光 艾永兴 +3 位作者 卢士英 孟宪梅 张俊辉 周玉 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2008年第1期104-108,共5页
利用TaqMan探针技术,采用实时荧光相对定量RT-PCR方法检测了MDV中meq基因对鸡胚成纤维细胞(CEF)的端粒酶催化亚单位基因(chTERT)、端粒酶RNA亚基(chTR)表达水平的影响,并用TRAP法测定了端粒酶活性,用流式细胞仪检测了细胞周期的变化.实... 利用TaqMan探针技术,采用实时荧光相对定量RT-PCR方法检测了MDV中meq基因对鸡胚成纤维细胞(CEF)的端粒酶催化亚单位基因(chTERT)、端粒酶RNA亚基(chTR)表达水平的影响,并用TRAP法测定了端粒酶活性,用流式细胞仪检测了细胞周期的变化.实验结果表明,转染48 h后chTERT表达水平为转染后72 h的16倍,chTR表达水平在转染前后基本不变;转染48 h后CEF细胞的相对端粒酶活性是转染72 h后的12倍;在转染后72 h S期细胞的百分比较未转染细胞显著增加. 展开更多
关键词 MDV meq基因 chTERT基因 chTR基因 端粒酶活性 细胞周期
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马立克氏病病毒L-meq基因的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 郑梅竹 潘风光 +3 位作者 邹亚学 孙莹 崔文璟 张玉静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期777-780,共4页
从潜伏期感染马立克氏病病毒的鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得了马立克氏病病毒的L-meq基因,与NCBI数据库已发表的序列(AB091109)相比,同源性达99%。将L-meq基因片段定向克隆到原核高效表达载体pET-28a中,构建pET-28a... 从潜伏期感染马立克氏病病毒的鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得了马立克氏病病毒的L-meq基因,与NCBI数据库已发表的序列(AB091109)相比,同源性达99%。将L-meq基因片段定向克隆到原核高效表达载体pET-28a中,构建pET-28a-L-meq重组质粒。将重组质粒转化受体菌Rosetta中,以IPTG对其进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,结果表明L-meq基因在E.coli Rosetta中得到了正确表达,薄层扫描分析表明,表达蛋白占细菌总蛋白的18.8%,将表达蛋白进行初步的纯化,制备了L-MEQ蛋白的多克隆抗体。用ELISA方法对多克隆抗血清进行鉴定,结果表明其纯化的重组的L-MEQ蛋白具有良好反应原性和特异性。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 L—meq基因 原核表达 抗体制备
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马立克病病毒中meq基因对CEF细胞chTERT mRNA转录水平的影响
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作者 潘风光 郑梅竹 +3 位作者 周玉 卢士英 罗翔丹 艾永兴 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第10期721-724,共4页
目的研究鸡马立克病病毒(MDV)meq基因对鸡胚成纤维细胞(CEF)的端粒酶催化亚单位基因(chTERT) mRNA转录水平的影响,并探讨meq基因与端粒酶活性的关系。方法构建重组载体pcDNA-meq,转染CEF细胞,利用Taq- Man探针,经实时荧光定量RT-PCR检测... 目的研究鸡马立克病病毒(MDV)meq基因对鸡胚成纤维细胞(CEF)的端粒酶催化亚单位基因(chTERT) mRNA转录水平的影响,并探讨meq基因与端粒酶活性的关系。方法构建重组载体pcDNA-meq,转染CEF细胞,利用Taq- Man探针,经实时荧光定量RT-PCR检测meq基因对CEF细胞chTERT mRNA转录水平的影响,并用TRAP法测定端粒酶活性。结果meq基因能激活CEF细胞中chTERT mRNA的转录,在48h的转录水平是72h的16倍,端粒酶活性在转染后48h是转染后72h的12倍。结论meq基因可能是MDV基因组中的主要致瘤基因,可以在体外导入正常的CEF细胞中,激活端粒酶的活性。 展开更多
关键词 马立克病病毒 meq基因 chTERT基因 端粒酶活性 鸡胚成纤维细胞
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MDV中L-meq基因对MDCC-MSB1细胞端粒酶活性影响的研究
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作者 郑梅竹 赵骥民 +2 位作者 潘风光 时东方 刘春明 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2009年第1期89-93,共5页
构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-L-meq,利用脂质体2000转染MDCC-MSB1细胞,采用改进的端粒重复序列扩增程序(telomere repeat amplification protocol,TRAP)法、实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后端粒酶活性以及端粒酶反转录酶(telomer... 构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-L-meq,利用脂质体2000转染MDCC-MSB1细胞,采用改进的端粒重复序列扩增程序(telomere repeat amplification protocol,TRAP)法、实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后端粒酶活性以及端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,chTERT)chTERT mRNA的表达量的变化,探讨L-meq基因对细胞端粒酶活性的影响.结果表明L-meq基因在MDCC-MSB1细胞中能够稳定表达,L-MEQ的稳定表达能够下调chTERTmRNA的表达水平,并抑制了MDCC-MSB1细胞的端粒酶活性,使其相对端粒酶活力下降. 展开更多
关键词 L-meq基因 端粒酶活性 MDV
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应用杆状病毒载体在昆虫细胞表达马立克氏病病毒Meq基因 被引量:5
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作者 韦平 LucyFLee 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期210-215,共6页
将源于马立克氏病病毒 ( MDV) GA株的 Meq基因克隆到杆状病毒转移载体质粒 p Blu Bac4中强有力的多角化蛋白启动子 ( PPH)之后 ,经与线性化的 Bac-N-Blue TMDNA共转染于昆虫细胞系 SF9,获得了重组杆状病毒。使用重组痘病毒表达的 Meq制... 将源于马立克氏病病毒 ( MDV) GA株的 Meq基因克隆到杆状病毒转移载体质粒 p Blu Bac4中强有力的多角化蛋白启动子 ( PPH)之后 ,经与线性化的 Bac-N-Blue TMDNA共转染于昆虫细胞系 SF9,获得了重组杆状病毒。使用重组痘病毒表达的 Meq制备的单抗 ,对重组杆状病毒感染的 SF9细胞及其裂解物分别进行间接免疫荧光试验、Western blotting和免疫沉淀试验 ,结果发现 :( 1 )本表达系统产生的 Meq可被原制备的单抗所识别 ;( 2 )在感染细胞中 ,Meq蛋白仅局限于细胞核内 ,而且随着感染后时间的增加 ,具有从核质向核仁和核膜转移的趋向 ;( 3 ) Western blotting和免疫沉淀试验均证实重组杆状病毒感染细胞裂解物中出现有 2条特异带 ( 60 0 0 0处 )。结果表明 ,杆状病毒 展开更多
关键词 meq基因 杆状病毒载体 昆虫细胞系统 马立克式病
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利用CRISPR/Cas9技术缺失MDV分离株meq基因的研究 被引量:6
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作者 张峰 于正浩 +10 位作者 兰兴鸽 张艳萍 王永强 高立 高玉龙 李凯 祁小乐 崔红玉 潘青 王笑梅 刘长军 《中国家禽》 北大核心 2019年第9期26-32,共7页
鸡马立克氏病病毒(MDV)是一种能够引起鸡肿瘤的疱疹病毒,具有严格的细胞结合特性,对其基因组编辑较为困难。研究利用CRISPR/Cas9技术对中国MDV分离株基因组中的meq基因进行缺失。依据中国MDV分离株BS/15株的meq基因序列,设计了8条靶向me... 鸡马立克氏病病毒(MDV)是一种能够引起鸡肿瘤的疱疹病毒,具有严格的细胞结合特性,对其基因组编辑较为困难。研究利用CRISPR/Cas9技术对中国MDV分离株基因组中的meq基因进行缺失。依据中国MDV分离株BS/15株的meq基因序列,设计了8条靶向meq基因的小向导RNA(sgRNA),分别克隆到pX330质粒中,构建表达靶向meq基因sgRNA的质粒pMeqsgRNA。通过pMeq-sgRNA转染、测序分析方法初步评价sgRNA切割效果,选择了两条适合的sgRNA。在鸡胚成纤维细胞(CEF)上同时转染上述筛选的2个pMeq-sgRNA质粒,接种MDV分离株BS/15株,通过PCR检测筛选meq基因缺失克隆株,成功克隆到一株meq基因缺失株。序列分析证明获得的MDV重组毒株确定meq基因序列已被敲除。体外试验证明该MDV重组毒株与亲本毒株在CEF上具有相似的复制能力。研究提供了一种简单、快捷的编辑MDV基因的方法,为MDV功能基因、分子进化和新型基因工程疫苗的研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 MDV CRISPR/Cas9 基因编辑 meq基因
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马立克病潜伏期L-meq基因对CEF细胞p53 mRNA转录水平的影响 被引量:1
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作者 王志平 李兆辉 +3 位作者 陈健 文力正 罗翔丹 潘风光 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第1期26-29,共4页
目的研究鸡马立克病(MD)潜伏期L-meq基因对鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)p53mRNA转录水平的影响,并探讨L-meq基因与端粒酶活性的关系。方法构建真核转染质粒pcDNA-L-meq,转染CEF细胞,采用实时荧光相对定量RT-PCR法检... 目的研究鸡马立克病(MD)潜伏期L-meq基因对鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)p53mRNA转录水平的影响,并探讨L-meq基因与端粒酶活性的关系。方法构建真核转染质粒pcDNA-L-meq,转染CEF细胞,采用实时荧光相对定量RT-PCR法检测MD潜伏期L-meq基因对CEF细胞p53mRNA转录水平的影响,并用改进的TRAP法检测端粒酶活性。结果质粒pcDNA-L-meq经PCR及双酶切鉴定,均可见大小为1200bp的特异性片段。L-meq基因能激活CEF细胞中p53mRNA的转录,在转染后48和72h,p53mRNA的转录水平较相应的内参照升高,但在转染后72h,p53mRNA转录水平降低,其RQ值由48h的0.15下降为72h的0.05。转染L-meq基因48和72h后,CEF细胞中端粒酶活性均比对照组稍微升高,但在48h的端粒酶活性比72h的稍高。结论鸡马立克病潜伏期L-meq基因能微弱地刺激端粒酶活性和p53mRNA转录。 展开更多
关键词 马立克病 L-meq基因 P53基因 转录 端粒酶活性
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河南省3株马立克病病毒Meq基因的序列分析 被引量:3
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作者 张天伟 章剑君 何宏轩 《动物医学进展》 北大核心 2017年第12期73-77,共5页
根据GenBank收录的马立克病病毒(MDV)基因组序列的Meq基因设计1对特异性引物,用PCR方法从河南发病鸡群中检测出了3株MDV,将目的片段克隆,并进行测序,获得Meq基因全长序列,将3株MDV的Meq基因与GenBank上收录的不同类型毒株进行比较分析。... 根据GenBank收录的马立克病病毒(MDV)基因组序列的Meq基因设计1对特异性引物,用PCR方法从河南发病鸡群中检测出了3株MDV,将目的片段克隆,并进行测序,获得Meq基因全长序列,将3株MDV的Meq基因与GenBank上收录的不同类型毒株进行比较分析。3株MDV的Meq基因段长度均为1 020bp,核苷酸序列分析表明,河南株Meq基因与其他MDV核苷酸同源性为98.6%,氨基酸同源性为96.5%;Meq基因的氨基酸序列共有9个位点的氨基酸存在突变;遗传进化分析表明这些毒株有3个分支,其中Henan 1~3株、ZC2014株(KP144356.1)、YLO40920株(DQ174459.1)、HNXZ106株(HF546099.1)和vv+MDV毒株648A(AY362725.1)位于同一个分支,vMDV GA(AF147806.1)、vvMDV RBIB(AY243332.1)位于同一个分支,mMDV CVI988(AF493555.1)和中国疫苗株814(AF493551)位于同一个分支。 展开更多
关键词 马立克病病毒 聚合酶链反应 meq基因 序列分析
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黄羽肉鸡马立克氏病病毒强毒株GX18NNM4的分离鉴定及其致瘤基因meq的序列分析 被引量:7
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作者 李敏 高延利 +6 位作者 石梦雅 王威威 李海娟 李秋红 邓乔木 黄腾 韦平 《中国家禽》 北大核心 2021年第3期28-34,共7页
为探究黄羽肉鸡鸡群临床异常的发病原因,通过病理剖检、组织病理学观察、PCR检测、细胞培养、间接免疫荧光试验(Immunofluorescent assay,IFA)、序列测定进行病原分离鉴定。结果显示:病鸡心脏、肝脏等器官均有肿瘤样病变;常见肿瘤病病毒... 为探究黄羽肉鸡鸡群临床异常的发病原因,通过病理剖检、组织病理学观察、PCR检测、细胞培养、间接免疫荧光试验(Immunofluorescent assay,IFA)、序列测定进行病原分离鉴定。结果显示:病鸡心脏、肝脏等器官均有肿瘤样病变;常见肿瘤病病毒PCR检测呈现马立克氏病病毒(Marek′s disease virus,MDV)阳性,细胞培养病毒分离及IFA鉴定结果表明成功分离一株MDV野毒株(命名为GX18NNM4);分离株meq基因的序列分析表明,GX18NNM4与vvMDV参考株GX0101的同源性最高,其核苷酸及氨基酸相似性分别高达99.8%和99.4%,且其突变位点符合国内强毒株的特征。通过氨基酸序列分析发现GX18NNM4的两个脯氨酸重复序列PPPP发生了突变,即PPPP→PNPP,且GX18NNM4与vvMDV/vv+MDV参考株RB1B、Md5、GX0101及648A的脯氨酸发生中断的数量同在0~3的范围内。结果表明该鸡群为MDV感染。 展开更多
关键词 MDV meq基因 序列分析 强毒株
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Gga-miR-29b-3p抑制MDV转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达
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作者 赵春芳 连玲 +5 位作者 杨宁 任曼 靳二辉 胡倩倩 郑美丽 李升和 《安徽科技学院学报》 2021年第2期7-13,共7页
目的:研究gga-miR-29b-3p对马立克氏病(MD)肿瘤转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达的影响。方法:选取SPF白来航鸡在感染马立克氏病病毒(MDV)后引发的内脏淋巴瘤为样本,通过实时荧光定量PCR检测gga-miR-29b-3p的表达情况;利用在线生物软件对g... 目的:研究gga-miR-29b-3p对马立克氏病(MD)肿瘤转化细胞侵袭和原癌基因Meq表达的影响。方法:选取SPF白来航鸡在感染马立克氏病病毒(MDV)后引发的内脏淋巴瘤为样本,通过实时荧光定量PCR检测gga-miR-29b-3p的表达情况;利用在线生物软件对gga-miR-29b-3p潜在的靶基因进行功能分析。以该miRNA为研究对象,MDV转化细胞系MDCC-MSB1为试验材料,分别转染miRNA激动剂或阴性对照,检测细胞侵袭相关基因MMP2和MMP9以及MDV原癌基因Meq的表达情况。结果:Gga-miR-29b-3p在感染MDV白来航鸡的肿瘤化脾脏和肝脏淋巴瘤中均显著低表达。信号通路方面miRNA的预测靶基因分别参与FoxO信号通路、mTOR信号通路、Jak-STAT信号通路、Toll样受体信号通路、ErbB信号通路、VEGF信号通路和细胞凋亡等,这些信号通路可参与肿瘤发生进程。转染miRNA激动剂后,MMP2和MMP9基因的表达量在48 h显著下调(P<0.05);Meq基因在48 h表达显著下调(P<0.05)。结论:Gga-miR-29b-3p抑制细胞侵袭和病毒原癌基因的表达,其潜在靶基因能够介导肿瘤发生,提示该miRNA可能参与MD肿瘤转化过程。 展开更多
关键词 马立克氏病 信号通路 原癌基因meq MMP2基因 MMP9基因
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