Purification and characterization of vitellin in mature ovary of marine crab Charybdis japonica

Vitellin of mature female marine crab Charybdis japonica was purified by high-performance liquid chromatography (HPLC, DEAE-cellulose-16 anion exchange column). The apparent molecular mass of the vitellin is 546 ku based on the data of native-PAGE. Under denatured condition (SDS-PAGE), it was found that vitellin was composed of four polypeptides each at 120, 100, 65, and 55 ku. One disulfide bond was detected in the binding of polypeptide subunits. The purified vitellin, contained 4.47% phosphor and 10.6% polysaccharides, and was identified as glyco-lipo-carotenoprotein, according to the PAGE staining data. The purified vitellin can be used as antigen to raise polyclonal antisera in further application.

产蛋间隔期母鸽卵黄前体及其受体基因的表达分析

旨在探究产蛋间隔期鸽卵黄沉积相关基因的表达规律。选取12月龄白羽王鸽48对,分别在产蛋间隔(LI)第1天(LI1)、第3天(LI3)、第5天(LI5)和第7天(LI7)4个时期采集母鸽肝脏、卵巢、F1卵泡颗粒层和F1卵泡膜层样本,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测载脂蛋白B(APOB)、载脂蛋白极低密度脂蛋白Ⅱ(APO-VLDLⅡ)、卵黄蛋白原(VTG)2和极低密度脂蛋白受体(VLDLR)4种基因的表达规律。结果:肝脏中APOB的表达水平呈下降趋势,在LI7期达到最低,与LI1和LI3期差异显著(P<0.05);APO-VLDLⅡ在LI1期表达水平最高,呈先下降后上升再下降趋势,在LI3和LI7期达到最低,与LI1和LI5期差异极显著(P<0.01);VTG2的表达水平呈上升趋势,在LI7期达到最高,与LI1、LI3和LI5期差异极显著(P<0.01)。卵巢中VLDLR的表达水平呈先下降后上升再下降趋势,在LI3时达到最高,与LI1、LI5和LI7期差异极显著(P<0.01);颗粒细胞层中VLDLR表达水平呈先下降后上升趋势,在LI3期达到最低,与LI5和LI7期差异极显著(P<0.01);膜细胞层中VLDLR的表达水平呈先上升后下降趋势,在LI5期达到最高,与LI3期差异显著(P<0.05)。综上,产蛋间隔前期APOB和APO-VLDLⅡ表达水平较高,启动载脂蛋白合成和运输,后期卵黄沉积减缓,APOB和APO-VLDLⅡ表达水平下降,同时雌激素诱导VTG2表达水平上升;产蛋间隔前期卵巢VLDLR表达水平较高,介导吸收卵黄前体物质,后期颗粒细胞层和膜细胞层VLDLR表达水平较高,介导卵黄前体进入卵泡最终形成卵黄。

成熟中国对虾(Penaeus chinensis)卵巢中卵黄蛋白的纯化

用层析 (SephadexG - 15 0 ,DEAE -Cellulose- 5 2 )和电泳洗脱 2种方法分别从成熟中国对虾卵巢中纯化得到了一种卵黄蛋白 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)检测表明 ,卵黄蛋白出现在SephadexG - 15 0的第 1个洗脱峰和DEAE -Cellulose - 5 2的 0 .4mol/L和 0 .5mol/LNaCl洗脱峰处 .比较了这 2种方法的优缺点 :层析法可用于蛋白的大量制备 ,电泳洗脱能够得到高纯度的蛋白 .

光裸星虫体腔液中卵子发生的超微结构

为探究光裸星虫卵子发生的细胞学特点,利用电镜技术观察了光裸星虫体腔液中卵子发生过程的超微结构变化。结果表明:(1)光裸星虫体腔液中存在游离的卵原细胞和卵母细胞,卵母细胞的发育分为卵黄形成前期、卵黄形成初期、卵黄旺盛合成期和成熟期4个阶段。(2)卵原细胞的细胞器少,核质比大。卵黄形成前期,卵母细胞的细胞器有所增加,大量核仁外排物进入胞质中;出现卵黄膜和胶质膜,卵黄膜遍布微孔。卵黄形成初期卵母细胞核有较多突起,细胞器大量增加,出现分散分布的卵黄粒。卵黄旺盛合成期卵母细胞迅速增大,卵黄大量积累。成熟期卵母细胞核膜突起回缩,胶质膜易于脱落。(3)卵黄分为2种。Ⅰ型卵黄电子密度高,不发生融合,为内源性卵黄;II型卵黄中等电子密度,可融合为无定形卵黄块,为外源性卵黄。(4)成熟卵母细胞卵黄膜为三层,外层为颗粒层,表面具有粒状突;中层初始为均质结构,不断增厚并纤维化;内层致密,厚度不均。胶质膜电子密度极低。(5)卵子外有滤泡细胞,其核质比很大,细胞器少,在卵母细胞成熟期发生凋亡。文章还探讨了胶质膜、卵黄膜、滤泡细胞的功能,以及细胞器在卵黄形成中的作用。研究结果积累了光裸星虫卵子发生细胞学资料,为光裸星虫生殖调控与人工繁育研究提供理论参考。

天蚕卵黄原蛋白的合成、运转与沉积

系统测定了天蚕 Ａｎｔｈｅｒａｅａ ｙａ ｍ ａ ｍ ａｉ 吐丝结茧至成虫期脂肪体、血淋巴和卵巢中卵黄蛋白和可溶性蛋白总含量的动态变化。结果表明， 脂肪体是卵黄原蛋白 （ Ｖｇ） 合成场所， Ｖｇ 合成始于吐丝结茧后第４ 天； 脂肪体、血淋巴中 Ｖｇ 滴度在吐丝结茧后第４ 天开始上升， 化蛹后第６ 天或第８ 天达高峰， 成虫羽化第１ 天则明显下降。卵巢对 Ｖｇ 摄取始于化蛹第１ 天， 此后随蛹日龄逐渐上升， 并渐趋平稳。同一卵巢管中卵黄蛋白 （ Ｖｔ） 含量自顶端至基端随卵室增大而逐渐升高， 不同日龄蛹中相应序号卵室的 Ｖｔ 含量以日龄大者为高； 卵室中 Ｖｔ 含量与卵室体积大小呈正线性关系。电镜观察表明， Ｖｇ 被卵母细胞摄入后以卵黄体形式存在， 不同发育阶段卵巢中卵母细胞内卵黄体大小不同， 以早期者为小； 同一卵巢管中不同卵母细胞内卵黄体以顶端为小， 基端明显增大。

蝗虫微孢子虫对东亚飞蝗卵黄原蛋白含量的影响

采用免疫学方法 ,对东亚飞蝗Locustamigratoriamanilensis感染蝗虫微孢子虫Nosemalocustae后体内卵黄蛋白含量的变化进行了研究。结果表明 ,感病蝗虫与对照健虫相比 ,卵黄发生有严重障碍 ,脂肪体和卵巢中卵黄原蛋白或卵黄蛋白含量极低 ,导致感病雌虫丧失产卵能力。脂肪体中卵黄原蛋白含量最高峰健虫为 18 7mg mL ,而病虫只有 4 7mg mL ;血淋巴中卵黄原蛋白含量最高峰健虫为 7 6mg mL ,而病虫只有 2 6mg mL ;卵巢中卵黄蛋白含量最高峰健虫为 73 4mg mL ,而病虫只有 4 9mg mL。

三氯苯达唑对卫氏并殖吸虫体壁及卵黄细胞超微结构的影响

目的： 观察三氯苯达唑在体内外杀灭卫氏并殖吸虫后， 虫体体壁及卵黄细胞超微结构的变化。方法：将被药物在体内、外杀死的虫体及对照组正常虫体， 按常规方法制成电镜样品， 用扫描和透射电镜观察。结果： 在药物作用下， 体壁的外质膜及基质层裂解消失， 肌肉层有不同程度的坏死， 皮层细胞膜及卵黄细胞膜破坏消失，核膜部份破坏， 核内异染色质凝固、聚边、直至溶解。胞质内的高尔基体消失， 内质网扩张， 线粒体肿胀变性、直至溶解，但对糖原颗粒无明显影响。对体内虫体的破坏比体外严重。结论： 三氯苯达唑对卫氏并殖吸虫的体壁及卵黄细胞均有明显的破坏作用， 主要破坏细胞核、细胞的膜质结构以及微管系统， 并可使虫体皮层裂解消失。

保幼激素类似物对德国小蠊卵黄发生及繁殖的影响

应用ELISA、单向免疫扩散法,研究了保幼激素类似物(灭幼宝)对德国小蠊Blattellagermanica卵黄发生的影响;同时,观察了灭幼宝对德国小蠊繁殖的影响。灭幼宝促进了德国小蠊脂肪体Vg的合成,使血淋巴Vg的浓度明显增高,出现时间早于对照组;且变化规律不同于对照组,呈双峰模式。灭幼宝处理组昆虫卵巢中Vt的含量在第5天、第7天明显高于对照组,而在第9天明显下降,仅为对照组的50%左右,而此时对照组卵巢的Vt含量则上升到处理组第7天水平。灭幼宝处理新羽化的雌虫,导致不育。

成虫期营养对甜菜夜蛾生殖力及卵巢发育的影响

成虫营养是影响甜菜夜蛾生殖力的关键因素。本文采用不同的成虫营养处理,观察雌蛾产卵量,卵巢发育及卵黄蛋白含量的变化。饲喂清水对其生殖力产生较大影响,产卵量比饲喂槐花蜜的处理下降41%,但饲喂清水对其卵的孵化率影响不大。缺乏成虫期营养的处理,卵量、交配率和卵孵化率大大下降。成虫期营养缺乏时产卵前期明显延长,卵期和寿命缩短。成虫期取食清水对卵巢管长度和卵巢鲜重影响不大,而缺乏成虫期营养的处理,卵巢发育状况很差。营养状况与虫体内脂肪含量密切相关,饲喂清水与缺乏成虫营养的处理,腹部脂肪占干重的百分比分别比饲喂槐花蜜的处理下降了24%和18%。

日本血吸虫卵黄培养细胞超微结构动态的研究

从超微结构水平研究日本血吸虫卵黄细胞培养的动态。在体外培养过程中，卵黄细胞对外界环境的改变比日本血吸虫的其它体细胞更加敏感。随着培养时间的延长，卵黄细胞发生不同程度的变性，成熟卵黄细胞比未成熟卵黄细胞先发生变性。变性主要表现在核和胞质的电子密度降低；卵黄球相互融合，或卵黄球与膜之间的空隙逐步增大，最终卵黄球从中释放出来，变成裸露体；脂滴数目增多，体积增大；粗面内质网扩大和囊泡变，其上的核糖体脱颗粒等。由此认为，未成熟卵黄细胞在体外培养过程中超微结构的变化可以作为评价培养条件优劣的一个指标。

黄秋葵茎叶粉对文昌鸡蛋黄着色的影响

采用单因子试验设计,选取300日龄产蛋率相近的文昌鸡360只,随机分为6个试验处理,每个处理设置3个重复,每个重复20只鸡,试验组为占日粮2%、3%、4%、5%的黄秋葵,对照组为不添加黄秋葵组、添加加丽红和加丽黄的混合组,试验共进行30d。研究结果表明:日粮添加2%、3%、4%、5%黄秋葵试验组和加丽红、加丽黄的混合组均显著提高了试验鸡蛋黄的着色效果(p<0.05),5个处理彼此间差异不显著(p>0.05);而未添加黄秋葵的对照组的着色效果较差,与其它各组差异显著(p<0.05);试验组鸡摄取含黄秋葵的饲料1￣2周后,蛋黄颜色明显加深,3周后,蛋黄达到较为理想的黄色,比色值达到10级以上。日粮添加黄秋葵茎叶粉对试验鸡的产蛋率和料蛋比无显著影响(p>0.05)。

三疣梭子蟹卵黄磷蛋白纯化及其ELISA测定方法

采用凝胶过滤层析法纯化了三疣梭子蟹成熟卵巢的卵黄磷蛋白(vitellin,Vn),采用变性凝胶电泳(SDS-PAGE)确定了Vn亚基数量和分子量,以纯化的Vn为抗原,制备了三疣梭子蟹Vn多克隆抗血清,纯化后得到Vn抗体,在此基础上比较和优化了三疣梭子蟹Vn测定的酶联免疫吸附法(ELISA)参数,建立了稳定的三疣梭子蟹Vn含量测定的ELISA方法。结果表明:(1)SDS-PAGE显示三疣梭子蟹成熟卵巢中的Vn含有分子量为100、75和66 ku的3个亚基,Western-blotting检测表明,这3个亚基均具有较强的免疫特异性;(2)样品直接包被法比双抗体夹心法具有更高的线性相关性,Vn抗体最佳稀释倍数为1∶90 000,最佳包被时间为8 h,一抗和二抗反应时间分别为2 h和1 h,显色时间为20 min;(3)该方法定性检测的灵敏度为14.9 ng/mL左右,标准曲线方程为y=0.000 9x++0.399 1(R2=0.986 1),其中x和y分别代表Vn浓度和OD450值,工作范围为200～900 ng/mL;(4)应用该方法测定三疣梭子蟹卵巢中Vn含量,结果表明,批次内和批次间平均变异系数分别为3.59%和3.10%,重复性良好。

高温处理对甜菜夜蛾雌虫成虫期生殖力及卵巢发育的影响

对雌成虫羽化后24 h用不同高温处理,观察其产卵量,卵巢发育及卵黄蛋白含量的变化。结果表明,高温对甜菜夜蛾的生殖力和卵巢发育有显著影响。从3个温度处理(40、434、6℃)、3个处理时间(1、48、h)来看,短时间高温对甜菜夜蛾生殖力影响不明显,而8 h高温使产卵量和卵的孵化率大大降低,尤其是46℃处理8 h时,产卵量仅为对照的50%,而孵化率只有9%。高温处理主要抑制了生殖器官的正常发育,使卵巢管长度和卵巢鲜重有不同程度的下降;进而影响了卵黄蛋白的吸收、合成和运转。46℃处理8 h卵巢中卵黄蛋白含量比对照降低了43%,可溶性蛋白含量下降了23%。43℃8 h和46℃4 h处理生殖力开始明显下降。

克氏原螯虾(Procambius clarkii)卵黄蛋白的部分生化性质

通过电泳回收的方法对克氏原螯虾(Procambius clarkii)的卵黄蛋白进行了纯化,鉴定结果显示总分子质量为481 ku,具有6个亚基(198,176,132,111,92,82 ku);染色分析表明该蛋白是一种糖脂磷类胡萝卜素蛋白,亚基之间有1个二硫键交联.

长角血蜱卵黄蛋白的纯化及其性质

用凝胶过滤与离子交换层析、蛋白质电泳和糖脂蛋白染色等方法提取纯化长角血蜱Haemaphysalislongicornis卵黄蛋白 ,并对其性质进行了研究。PAGE和SDS PAGE分析表明 ,长角血蜱的卵黄蛋白只有一种 ,由 8个亚基组成 ,亚基的相对分子质量分别为 112kD ,10 3kD ,80kD ,78kD ,71kD ,6 8kD ,6 2kD和 5 2kD ,卵黄蛋白经苏丹黑B和希夫试剂染色呈阳性 ,表明是一种含血红素的糖脂蛋白。

龟纹瓢虫卵黄蛋白的分子特性及发生动态

研究了龟纹瓢虫Propylea japonica(Thunberg)卵黄蛋白的基本特性以及卵黄发生过程中卵黄蛋白的动态变化。PAGE和SDS-PAGE实验表明,龟纹瓢虫卵黄蛋白分子量为294.81±40.70kD,并由分子量分别为144.68±0.03kD和51.23±0.27kD的两种亚基组成。对卵黄蛋白的氨基酸组成和含量分析发现,其必需氨基酸总量占57.48%,略高于非必需氨基酸,其中谷氨酸(Glu)含量最高,为15.26%;色氨酸(Trp)和蛋氨酸(Met)含量较低,分别为0.50%和0.11%。采用间接竞争ELISA法,系统测定了龟纹瓢虫成虫期脂肪体、血淋巴和卵巢中卵黄蛋白的动态变化,结果表明:脂肪体是卵黄原蛋白合成的场所,卵黄原蛋白的合成始于羽化后第2天;脂肪体、血淋巴和卵巢中卵黄原蛋白的滴度在羽化后第4天开始迅速上升,至成虫期的第8天左右达到高峰期。

蝶蛹金小蜂卵黄蛋白单克隆抗体的制备及其应用方法的建立

为深入研究寄生蜂卵黄发生及其内分泌调控，特采用杂交瘤细胞技术，制备4株能稳定分泌抗蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum卵黄蛋白（vitellin，Vt）的单克隆抗体（mAb），即PpVtmAb1，PpVtmAb2，PpVtmAb3和PpVtmAb4。这4株单克隆抗体的重链和轻链的亚类均分别为IgG1和κ类型，不仅特异性识别Vt，而且识别雌蜂血淋巴中卵黄原蛋白（viteUogenin，Vg），但与雄蜂体液无反应。通过比较4种不同的ELISA方法，确定了微量检测蝶蛹金小蜂体内Vg／Vt的最适ELISA法，即双夹心ELISA法。该方法可用于单头雌蜂体内Vg／Vt的检测，其检测灵敏度为20ng／mL。用Western免疫印迹的方法证实了该蜂Vg的合成始于刚羽化的成虫，并在羽化后12～36h内含量达到高峰。

致蛋鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌分子分群、耐药表型及耐药基因型检测与分析

为分析邢台和秦皇岛地区致蛋鸡卵黄性腹膜炎大肠杆菌(E.coli)分离株的分子分群情况及耐药表型和耐药基因型之间的相关性,本研究采用PCR法和96孔板微量肉汤稀释法分别对临床分离的42株致鸡卵黄性腹膜炎E.coli的系统进化分群、耐药基因和12种抗菌药物耐药表型进行检测。结果显示,42株分离菌株中属于A、B1、B2、D群的分别有7株、9株、14株、12株,以B2+D群流行为主;42株分离菌株对12种抗菌药物耐药性严重且呈现多重耐药性,其中对阿莫西林-克拉维酸、磺胺间甲氧嘧啶、多西环素等9种药物耐药率在45.24%以上,对其它药物耐药率在19.04%~38.10%,耐12种、9种抗菌药物分离菌株最多,分别占分离菌株的19.05%、16.67%;42株分离菌株中耐药基因tetA、Sul1、TEM、Sul2、mcr-1、floR、SHV、tetR检出率在59.52%以上,其它耐药基因检出率为14.29%~38.10%;ESBLs类、四环素类、喹诺酮类、头孢菌素类、磺胺类、多肽类和酰胺醇类7类抗菌药物的耐药表型和耐药基因型符合率在52.6%以上,其中酰胺醇类、多肽类的耐药表型与耐药基因型符合率为100%。本实验为致蛋鸡卵黄性腹膜炎E.coli防控及临床用药提供参考。

真水狼蛛 Pirata piraticus 卵黄蛋白的研究

从真水狼蛛 Pirata piraticus卵中提取出了雌性特异性蛋白质——卵黄蛋白 .聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫扩散试验证明 ,该蛋白质为生殖期雌蛛所特有 .真水狼蛛的卵黄蛋白为糖脂结合蛋白 ,等电点为 p H6.7～ 7.5 .氨基酸组份分析表明其谷氨酸、天门冬氨酸的含量较高 ,而含硫氨基酸甲硫氨酸和半胱氨酸含量较低 .卵黄蛋白的分子量为 2 5 5 k D,其分子由 4个亚基组成 ,亚基分子量分别为 84k D,69k D,63k D和 49.8k D.在胚胎发育过程中 ,卵黄蛋白含量下降明显 .合适的温度和多种食物混合饲养有利于卵巢的生长发育和卵黄蛋白的合成 .真水狼蛛的卵黄蛋白可能是由卵巢自身合成的 .通过比较卵巢中卵黄蛋白含量和卵粒直径大小 。

红螯光壳螯虾卵黄磷蛋白的分离纯化和鉴定

采用凝胶层析、聚丙烯酰胺凝胶电泳及SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法对红螯光壳螯虾 (Cheraxquadricarinatus)卵巢中的卵黄磷蛋白进行了分离、纯化和鉴定。结果显示该虾的卵黄磷蛋白是一个分子量为 3 69ku的多聚体 ,由分子量为 85 4、80 6、76 6、73 7ku的四个亚基组成。染色分析表明卵黄磷蛋白为糖 磷 类胡萝卜素结合的复合蛋白。氨基酸组成分析显示天冬氨酸 (Asp)和谷氨酸 (Glu)为主要氨基酸。