基于ApoA-Ⅰ/Akt1/β-catenin/TGF-β通路探讨化瘀祛痰方改善ApoE~(-/-)AS小鼠主动脉内皮细胞间质转化的作用机制

目的基于ApoA-Ⅰ/Akt1/β-catenin/TGF-β通路探讨化瘀祛痰方对ApoE~(-/-)AS小鼠主动脉EndMT的作用机制。方法24只ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组8只;C57BL/6J小鼠8只作为空白常对照组。ApoE~(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养制备AS模型,C57BL/6J小鼠给予普通饲料喂养。12周后,开始灌胃,空白对照组和模型组灌胃等容积生理盐水,化瘀祛痰方组灌胃化瘀祛痰方20 g/(kg·d),辛伐他汀组灌胃辛伐他汀混悬液2.275 mg/(kg·d),每日1次,给药4周。采用全自动生化分析仪检测血清血脂水平;苏木精-伊红染色法(HE)观察主动脉病理组织形态表现;免疫荧光法检测主动脉EndMT程度;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测主动脉转录因子E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)、TWIST mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测肝脏ApoA-Ⅰ、主动脉α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血管内皮钙粘蛋白(VE-Cadherin)、ZEB1、TWIST、Akt1、p-Akt1、β-catenin、p-β-catenin、TGF-β1、Smad2及p-Smad2蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,模型组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著下降(P<0.05);主动脉内壁不平整光滑,可见多量的泡沫细胞聚集,形成粥样斑块,斑块附着处血管内膜明显增厚且结构紊乱,管腔中可见脱落的斑块碎;主动脉α-SMA、VE-Cadherin双染色阳性细胞明显增多,α-SMA蛋白表达水平明显升高,VE-Cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05);主动脉转录因子ZEB1、TWIST mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);主动脉TGF-β1、p-Smad2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),肝脏ApoA-Ⅰ、主动脉p-Akt1及p-β-catenin蛋白表达水平明显降低(P<0.05);化瘀祛痰方干预后,小鼠血清TC、TG、LDL-C水平显著下降,HDL-C水平显著升高(P<0.05);主动脉内壁欠光滑,可见少量内皮细胞脱落,管壁厚度明显减轻;主动脉α-SMA、VE-Cadherin双染色阳性细胞明显减少,α-SMA蛋白表达水平明显降低,VE-Cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05);主动脉转录因子ZEB1、TWIST mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);主动脉TGF-β1、p-Smad2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),肝脏ApoA-Ⅰ、主动脉p-Akt1及p-β-catenin蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论化瘀祛痰方能够显著改善ApoE~(-/-)AS小鼠EndMT,其作用机制可能与调控ApoA-Ⅰ/Akt1/β-catenin/TGF-β通路,调节EndMT相关转录因子,进而调节EndMT基因表达有关。

姜黄素靶向β-Catenin/BCL9信号通路对肝癌细胞自噬和凋亡的影响研究

目的:探讨姜黄素靶向β-联环素/B淋巴细胞淋巴瘤因子9(β-Catenin/BCL9)信号通路对肝癌细胞自噬和凋亡的影响。方法:将人肝癌细胞系随机分为oe-β-Catenin组、oe-BCL9组、oe-β-Catenin-BCL9组、NC组和对照组,其中mimic-β-Catenin转染oe-β-Catenin组细胞;mimic-BCL9转染oe-BCL9组细胞;mimic-β-Catenin和mimic-BCL9转染oe-β-Catenin-BCL9组;空载质粒转染NC组细胞;对照组细胞中仅加入等量的转染试剂。采用MTT法检测细胞增殖抑制率。采用流式细胞仪检测细胞凋亡。采用丹酰尸胺(MDC)法检测细胞自噬情况。采用蛋白免疫印迹法(WB)检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62和通路相关蛋白β-Catenin、BCL9蛋白表达水平。结果:oe-β-Catenin-BCL9组中β-Catenin、BCL9 mRNA表达水平高于NC组和对照组(P<0.05);oe-β-Catenin组中β-Catenin mRNA表达水平高于NC组和对照组(P<0.05);oe-BCL9组中BCL9 mRNA表达水平高于NC组和对照组(P<0.05)。各个时间点中,oe-β-Catenin-BCL9组的细胞增殖抑制率和细胞凋亡率低于oe-β-Catenin组、oe-BCL9组、NC组和对照组(P<0.05);oe-β-Catenin组和oe-BCL9组的细胞增殖抑制率和细胞凋亡率低于NC组和对照组(P<0.05)。对照组和NC组中可见大量自噬泡,oe-β-Catenin组、oe-BCL9组和oe-β-Catenin-BCL9组中自噬泡较少。oe-β-Catenin-BCL9组的LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62的表达水平均低于oe-β-Catenin组、oe-BCL9组、NC组和对照组(P<0.05);oe-β-Catenin组和oe-BCL9组的LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62的表达水平低于NC组和对照组(P<0.05)。oe-β-Catenin-BCL9组的β-Catenin、BCL9蛋白表达水平均高于oe-β-Catenin组、oe-BCL9组、NC组和对照组(P<0.05);oe-β-Catenin组和oe-BCL9组的β-Catenin、BCL9蛋白表达水平高于NC组和对照组(P<0.05)。结论:姜黄素可以靶向抑制肝癌细胞中β-Catenin/BCL9信号通路,从而起到促进肝癌细胞凋亡的作用,并且可以调控自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62,促使肝癌细胞发生自噬。

松脂醇二葡萄糖苷激活Wnt/β-catenin信号通路保护成骨细胞

背景:松脂醇二葡萄糖苷可以促进骨形成与骨基质的合成,加速骨组织修复,但其对成骨细胞的影响和作用机制仍需进一步探索。目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨松脂醇二葡萄糖苷对地塞米松干预成骨细胞的影响和作用机制。方法:设置不同浓度的地塞米松组和松脂醇二葡萄糖苷组对成骨细胞干预24 h,筛选最佳干预浓度;使用地塞米松、松脂醇二葡萄糖苷和Wnt/β-catenin抑制剂XAV-939对成骨细胞进行干预,设置对照组、地塞米松组、抑制剂组、松脂醇二葡萄糖苷组、松脂醇二葡萄糖苷+抑制剂组。CCK-8法检测细胞活性,检测各组细胞碱性磷酸酶和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7酶活性,Annexin V/PI染色与EdU法检测细胞凋亡与增殖情况,Real-Time qPCR检测Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达水平,Western Blot检测Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达水平。结果与结论:①地塞米松和松脂醇二葡萄糖苷干预成骨细胞24 h后,发现浓度为10μmol/L的地塞米松细胞抑制率为实验最佳干预浓度;松脂醇二葡萄糖苷浓度在100μmol/L时,细胞增殖最为明显;②与地塞米松组比较,松脂醇二葡萄糖苷组的碱性磷酸酶活性显著增强(P<0.05),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3/7酶活性显著降低(P<0.05);Annexin V/PI染色和EdU法细胞增殖检测结果表明,松脂醇二葡萄糖苷可抑制地塞米松干预后成骨细胞的凋亡,促进成骨细胞增殖;③与地塞米松组和抑制剂组比较,松脂醇二葡萄糖苷组和松脂醇二葡萄糖苷+抑制剂组中Wnt3a、β-catenin、c-myc、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);④结果表明,松脂醇二葡萄糖苷可以抑制地塞米松干预后的成骨细胞凋亡,通过激活Wnt/β-catenin信号通路来保护成骨细胞活性,促进成骨细胞增殖,可能发挥延缓激素性股骨头坏死的作用。

压应力激活SOST/Wnt/β-catenin 通路诱导软骨终板细胞退变

背景:在许多可以导致椎间盘退变的因素中(衰老、营养匮乏、机械因素等),力学负荷被认为是极其重要的因素,但其机制尚不清楚。目的:探讨硬骨素和Wnt/β-catenin信号通路在压应力诱导终板软骨退变中的作用。方法:提取4周龄雄性SD大鼠软骨终板细胞,体外利用力学加载仪器对终板软骨细胞施加压应力,于压缩细胞1,3,5,7 d,采用CCK-8法测定细胞活力;Western blot、RT-qPCR及细胞免疫荧光等检查终板软骨细胞内软骨标记物(聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原)、钙化相关因子(Runx2、骨钙素)、细胞外基质降解酶及信号通路基因(硬骨素、β-catenin)等表达。结果与结论:①压应力作用下,终板软骨细胞活力会随着压应力时间、强度增加而降低;②终板软骨细胞的软骨标记物(聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原)表达下降,而钙化相关因子(Runx2、骨钙素)表达上升;③压应力能促进终板软骨细胞的细胞外基质降解,基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶13表达量增加;④细胞内Wnt/β-catenin信号通路表达出现异常,其特异性抑制因子硬骨素伴随着β-catenin的异常积累而表达下降。结果说明:在压应力作用下,终板软骨细胞内硬骨素的表达下降,导致Wnt/β-catenin信号通路激活,促进软骨终板的钙化、退变与细胞外基质的降解,进而促进椎间盘退变。

芍药苷通过β-catenin/c-Myc通路抑制有氧糖酵解缓解小鼠脓毒症相关急性肾损伤

目的 探究芍药苷(paeoniflorin,PF)在小鼠脓毒症相关急性肾损伤(sepsis-associated acute kidney injury, SA-AKI)中的作用及机制。方法 采用腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)的方法构建小鼠SA-AKI模型。将24只6~8周龄的雄性C57BL/6J小鼠(体质量为20~25 g),用随机数字表法分为4组(n=6):对照组(Control组);模型组(LPS组),腹腔注射LPS(15 mg/kg);芍药苷组(LPS+PF组),LPS造模前30 min腹腔注射PF(50 mg/kg);β-catenin特异性激动剂BML284组(LPS+PF+BML284组),LPS造模前30 min,先腹腔注射PF(50 mg/kg),再腹腔注射BML284(10 mg/kg)。采用HE染色观察肾脏组织病理变化并进行Paller评分;采用ELISA检测血清肌酐(serum creatinine, Scr)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)和乳酸,以及肾组织己糖激酶2(hexokinase2,HK2)、乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)的含量;Western blot检测总β-连环蛋白(beta-catenin, β-catenin)、磷酸化β-cateninY654(p-β-cateninY654)、细胞核β-catenin以及c-骨髓细胞瘤癌基因蛋白(c-myelocytomatosis oncogene gene, c-Myc)的表达。结果 与Control组比较,LPS组HE染色显示肾脏组织受损,Paller评分升高(P<0.05),血清Scr、NGAL增加(P<0.05),肾组织HK2、LDHA及血清乳酸等有氧糖酵解指标和IL-1β、IL-18含量增多(P<0.05),肾组织总β-catenin、p-β-cateninY654、细胞核β-catenin以及c-Myc表达上升(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+PF组HE染色显示肾脏组织损伤减轻,Paller评分下降(P<0.05),血清Scr、NGAL降低(P<0.05),肾组织HK2、LDHA及血清乳酸等有氧糖酵解指标和IL-1β、IL-18含量减少(P<0.05),肾组织总β-catenin、p-β-cateninY654、细胞核β-catenin以及c-Myc表达下调(P<0.05)。与LPS+PF组比较,LPS+PF+BML284组HE染色显示肾脏组织受损加重,Paller评分升高(P<0.05),血清Scr、NGAL增加(P<0.05),肾组织HK2、LDHA及血清乳酸等有氧糖酵解指标和IL-1β、IL-18含量增多(P<0.05),肾组织总β-catenin、p-β-cateninY654、细胞核β-catenin以及c-Myc表达上升(P<0.05)。结论 PF可以缓解SA-AKI,其机制可能是通过抑制β-catenin/c-Myc通路,降低肾组织有氧糖酵解水平和炎症反应。

Wnt/β-catenin信号通路在结直肠癌肝转移中的研究进展

本文叙述了Wnt/β-catenin信号通路与结直肠癌发生发展与肝转移的作用相关最新研究进展,回顾了近几年的研究成果及研究热点,揭示了Wnt/β-catenin在结直肠癌肝转移中的关键机制。

ALKBH5靶向调控Titin基因介导Wnt/β-catenin信号通路参与宫颈癌生物学行为的机制研究

目的探讨ALKB同源物5(ALKBH5)靶向调控肌联蛋白(Titin)基因表达,并介导无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点家族蛋白(Wnt)/β-连锁蛋白(β-catenin)信号通路参与宫颈癌生物学行为的相关机制。方法回顾性选取2022年10月至2023年10月经金华市中心医院病理诊断为宫颈良性肿瘤、上皮不典型增生以及浸润性癌患者各30例并收集其手术切除获取的新鲜宫颈组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ALKBH5和Titin mRNA表达水平。体外选择宫颈癌细胞株Hela并分为5组,即正常对照(NC)组、ALKBH5-小干扰RNA(siRNA)组、ALKBH5-NC组、ALKBH5-siRNA+Titin-模拟物(mimic)组和ALKBH5-siRNA+Titin-NC组;连续培养72 h,分别采用四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞术、划痕实验、Transwell法检测细胞增殖率、凋亡率、迁移率以及侵袭细胞数,蛋白质印迹法检测上皮间质转化相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)以及Wnt、β-catenin蛋白表达水平,qRT-PCR检测细胞ALKBH5和Titin m RNA表达水平。采用荧光素酶法检测ALKBH5与Titin基因的靶向作用。结果与宫颈良性肿瘤组织、上皮不典型增生组织相比,浸润性癌组织中ALKBH5和Titin mRNA表达水平均明显升高(均P<0.01)。与NC组、ALKBH5-NC组相比,ALKBH5-siRNA组细胞增殖率、迁移率均下降(均P<0.05),侵袭细胞数均减少(均P<0.05),凋亡率均升高(均P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平均上调(均P<0.05),Vimentin、N-cadherin、Wnt、β-catenin蛋白表达水平以及ALKBH5、Titin mRNA表达水平均下调(均P<0.05);与ALKBH5-siRNA组、ALKBH5-siRNA+Titin-NC组相比,ALKBH5-siRNA+Titin-mimic组细胞增殖率、迁移率均升高(均P<0.05),侵袭细胞数均增加(均P<0.05),凋亡率均下降(均P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平均下调(均P<0.05),Vimentin、N-cadherin、Wnt、β-catenin蛋白表达水平以及Titin mRNA表达水平均上调(均P<0.05)。荧光素酶报告显示了ALKBH5与Titin基因的靶向作用位点(225-231位点),并且ALKBH5与Titin-野生型的相对荧光强度高于Titin-突变型(P<0.001)。结论ALKBH5能靶向上调Titin基因表达,并激活Wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌的发生以及恶性肿瘤生物学行为。

血清维生素D、Cyclin D1、β-catenin水平及其与甲状腺癌预后的相关性

目的分析甲状腺癌患者血清维生素D、细胞周期素D1(Cyclin D1)、β-连环素蛋白(β-catenin)的水平及其与预后的相关性。方法收集90例甲状腺癌患者作为观察组,甲状腺良性结节者46例作为对照组。比较2组血清维生素D、Cyclin D1、β-catenin水平及不同预后甲状腺癌患者的维生素D、Cyclin D1、β-catenin水平,分析维生素D、Cyclin D1、β-catenin水平与甲状腺癌预后的相关性。分析维生素D、Cyclin D1、β-catenin水平对甲状腺癌预后的预测价值。结果观察组维生素D水平低于对照组,Cyclin D1、β-catenin水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。甲状腺癌死亡组维生素D水平低于存活组,Cyclin D1、β-catenin水平高于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结转移、肿瘤直径≥4 cm患者维生素D水平低于高中分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移、肿瘤直径小于4 cm患者,Cyclin D1、β-catenin水平高于高中分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移、肿瘤直径<4 cm患者,差异有统计学意义(P<0.05)。以15.180 ng/ml为维生素D的预测阈值、4.320 ng/ml为Cyclin D1的预测阈值、521.185 pg/ml为β-catenin的预测阈值,预测甲状腺癌预后的曲线下面积(AUC)分别为0.771、0.731、0.808,维生素D、Cyclin D1、β-catenin联合对甲状腺癌预后的预测AUC面积为0.874,高于单一指标,灵敏度、特异度也相对较高。结论甲状腺癌患者及甲状腺癌死亡患者中维生素D水平较低,Cyclin D1、β-catenin表达均较高,三者联合对甲状腺癌预后有良好的预测价值,可作为临床上甲状腺癌预后的辅助评价指标。

槲皮素联合木犀草素对大肠癌细胞凋亡和β-catenin及其靶基因的作用

目的:研究槲皮素和木犀草素及其联合使用对CT26大肠癌细胞增殖和细胞凋亡的作用及机制。方法:实验分为对照组、槲皮素组(QCT)、木犀草素组(LTL)和联合组(QCT+LTL),分别给予等体积DMSO、槲皮素、木犀草素及槲皮素联合木犀草素处理CT26细胞。CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞增殖;Annexin-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡;酶底物试剂盒检测Caspases活性;Western blot法检测β-catenin及其下游c-Myc、Cyclin D1和Survivin的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,槲皮素和木犀草素治疗可抑制CT26细胞增殖,诱导细胞凋亡,伴随Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性增强,同时还可抑制β-catenin、c-Myc、Cyclin D1及Survivin蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。槲皮素和木犀草素联合可增强对CT26细胞的作用。结论:槲皮素和木犀草素可抑制CT26大肠癌生长,诱导细胞凋亡,两药联合作用显著优于单药,其机制与下调β-catenin、c-Myc、Cyclin D1及Survivin表达,活化Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9相关。

黄芪多糖通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞铁死亡并抑制细胞增殖

目的:研究黄芪多糖(APS)在肝癌铁死亡机制的调控作用。方法:用不同浓度APS(0、50、100、200 mg/L)处理肝癌HepG2细胞48 h,分别记作对照组和APS低、中、高剂量组。采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,同时采用试剂盒检测各组细胞的谷胱甘肽(GSH)、活性氧自由基(ROS)和脂质过氧化物水平,采用流式细胞术检测各组细胞的铁离子水平。通过免疫印迹法检测各组细胞的铁死亡标志蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链脂酰CoA合成酶4(ACSL)以及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt和β-catenin蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,APS高、中、低剂量组均能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,且随着APS的浓度升高,抑制效果更显著(P<0.05)。与对照组相比,高、中、低剂量组均能降低肝癌HepG2细胞中GSH水平,并提高ROS和脂质过氧化物水平,同时提高铁离子水平,且随着APS浓度升高效果更显著(P <0.05)。同时,与对照组相比,APS高、中、低剂量组均能降低GPX4蛋白表达水平,提高ACSL4蛋白表达水平,且呈剂量依赖性(P <0.05)。与对照组相比,APS高、中、低剂量组均能降低Wnt和β-catenin蛋白表达水平,随着APS剂量升高,蛋白表达抑制效果更显著(P <0.05)。结论:APS通过增强ROS和脂质过氧化物的积累增强铁死亡,抑制肝癌细胞的增殖,这一过程可能与Wnt/β-catenin信号通路的抑制相关。

芦丁调节Wnt/β-catenin信号通路对正畸大鼠牙周组织重建的影响

目的:探究芦丁(RUT)调节Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对正畸大鼠牙周组织重建的影响。方法:将SPF级SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、低、高剂量RUT组(RUT-L、RUT-H组,40、80 mg/kg)、RUT-H+Wnt抑制剂KYA1797K组(RUT-H+KYA1797K组,80 mg/kg RUT+25 mg/kg KYA1797K),每组12只。测定各组大鼠正畸牙移动距离。HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶染色评估牙周组织形态学变化及破骨细胞分布情况与数量。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测大鼠牙周组织Wnt3a、β-catenin mRNA的表达。Western Blot检测各组大鼠牙周组织Wnt3a、β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、Runt相关转录因子2(Runx2)蛋白的表达。结果:与Control组相比,Model组正畸牙移动距离、张力侧与压力侧牙槽骨表面破骨细胞数目、牙周组织GSK-3β蛋白表达显著升高(P<0.05),牙周组织Wnt3a、β-catenin mRNA和蛋白表达、Runx2蛋白表达显著降低(P<0.05),压力侧牙周间隙变窄,张力侧牙周韧带变宽,可见成骨反应。与Model组相比,RUT-H组张力侧牙槽骨表面破骨细胞数目、牙周组织GSK-3β蛋白表达显著降低(P<0.05),正畸牙移动距离、牙周组织Wnt3a、β-catenin mRNA和蛋白表达、Runx2蛋白表达显著升高(P<0.05);张力侧新骨形成明显。KYA1797K减弱了RUT对正畸大鼠牙周组织重建的促进作用。结论:RUT通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进正畸大鼠牙周组织重建。

lncRNA ENST00000452996.1通过ERK/GSK-3β/β-catenin信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的研究一种新的长链非编码RNA ENST00000452996.1对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭等的影响及其调控机制。方法TCGA数据集分析肝癌组织ENST00000452996.1表达;构建ENST00000452996.1的shRNA载体,包装病毒感染Huh-7细胞(shENST00000452996.1组),CCK-8法、克隆形成法、流式细胞术、划痕法和Transwell小室法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;Western blot法检测shENST00000452996.1组、ERK激动剂EGF处理组和GSK-3β抑制剂TDZD-8处理组的ERK/GSK-3β/β-catenin信号分子的表达。结果TCGA分析发现,肝癌组织ENST00000452996.1表达水平明显高于癌旁组织,且与Edmondson-Steiner分级呈正相关,与总生存时间呈负相关;与对照组相比,shENST00000452996.1组细胞增殖、迁移及侵袭能力明显下降,凋亡能力明显增强,p-ERK1/2、p-GSK-3β^(Ser9)和β-catenin表达均下调,GSK-3β和p-β-catenin表达上调,核β-catenin表达下降;与shENST00000452996.1组相比,EGF处理组p-ERK1/2表达升高,EGF处理组和TDZD-8处理组p-GSK-3β^(Ser9)和β-catenin及核β-catenin表达均升高,GSK-3β和p-β-catenin表达均降低。结论干扰ENST00000452996.1表达抑制ERK1/2磷酸化,阻止GSK3β^(Ser9)磷酸化,导致β-catenin磷酸化,抑制β-catenin核转位,推断ENST00000452996.1通过ERK/GSK-3β/β-catenin信号通路增强肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,抑制细胞凋亡,从而发挥促进肝细胞癌的作用。

低氧微环境通过TGFBI调控Wnt/β-catenin通路介导胰腺癌化疗耐药及机制研究

目的:研究低氧微环境通过TGFBI调控胰腺癌耐药的作用及分子机制。方法:以CCK-8方法检测细胞增殖;以Western blotting技术检测蛋白表达水平;以ImageJ软件分析蛋白灰度值;RNAi技术用于敲减TGFBI基因。结果:TGFBI在Panc-1细胞中表达比正常细胞增强;低氧促进胰腺癌细胞Panc-1增殖并减弱顺铂对Panc-1的抑制作用,而高氧抑制Panc-1细胞增殖并加强顺铂的杀伤作用;低氧促进TGFBI表达及EMT行为;低氧通过TGFBI调控Panc-1细胞增殖及顺铂的杀伤作用;低氧通过TGFBI调控Wnt/β-catenin信号,进而促进EMT行为。结论:低氧微环境通过增强TGFBI表达促进胰腺癌细胞增殖及耐药;低氧微环境通过TGFBI激活Wnt/β-catenin信号通路,促进EMT标志分子表达。

CTNND1通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究CTNND1调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制,为胰腺癌精准治疗提供新理论依据。方法:通过生信分析验证CTNND1在胰腺癌和正常组织中的表达,免疫组织化学(IHC)和qPCR进一步验证。Transwell、划痕实验和细胞增殖试验用于研究CTNND1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下成瘤实验检测CTNND1对人胰腺癌细胞成瘤能力的影响。结果:在胰腺癌细胞中敲低CTNND1可以抑制胰腺癌细胞的Wnt/β-catenin信号通路以及增殖、迁移和侵袭能力。加入LiCl(Wnt/β-catenin特异性激活剂)能部分恢复CTNND1敲低胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。裸鼠皮下成瘤显示,敲低CTNND1抑制了肿瘤裸鼠皮下成瘤。结论:敲低CTNND1能从体内外通过Wnt/β-catenin信号通路调控胰腺癌的增殖、迁移和侵袭及皮下成瘤能力。

补中益气汤协同Siβ-catenin调控Wnt/β-catenin信号通路干预肺腺癌顺铂耐药性的分子机制研究

目的:探讨补中益气汤含药血清协同Siβ-catenin调控Wnt/β-catenin信号通路干预A549/DDP细胞顺铂耐药性的分子机制研究。方法:采用siRNA干扰沉默β-catenin的表达,Western blot检测正常血清组、顺铂组、siCTNNB1-235组、siCTNNB1-510组、siCTNNB1-547组A549/DDP细胞的β-catenin蛋白的相对表达量;干扰β-catenin后,Western blot检测各组A549/DDP细胞β-catenin和Survivin的蛋白表达量,MTT法检测各组A549/DDP细胞对顺铂的IC50,Annexin V/PI染色法检测各组A549/DDP细胞顺铂诱导的凋亡率。结果:相较于正常血清组(1.00),siCTNNB1-235组(0.323±0.021)对β-catenin表达抑制率达67%(P=0.000)。RNAi技术沉默β-catenin后,与正常血清组(1.00)相比,补中益气汤联合顺铂组的Survivin(0.247±0.015)和β-catenin(0.257±0.015)蛋白的表达下调更为明显(P=0.000,P=0.000)。IC50和正常血清组(28.330±1.029)µmol/L相比,单独补中益气汤含药血清(20.350±1.155)µmol/L或单独瞬时转染siCTNNB1-235组(15.577±1.535)µmol/L均可降低A549/DDP细胞顺铂的IC50(P=0.000,P=0.000),2者联合(10.453±0.999)µmol/L使用可进一步降低顺铂的IC50(P=0.000)。与正常血清组(9.130±0.384)%相比,瞬时转染siCTNNB1-235联合顺铂组(64.393±0.244)%和补中益气汤联合顺铂组(70.120±0.400)%的总凋亡率均升高(P=0.000,P=0.000)。结论:补中益气汤含药血清和瞬时转染siβ-catenin在抑制Wnt/β-catenin信号通路改善肺腺癌顺铂耐药性方面具有协同效应,且补中益气汤具有siβ-catenin瞬时转染样效应。

下调METTL5通过Wnt/β-catenin信号通路抑制三阴乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的探讨甲基转移酶5(methyltransferase-like 5,METTL5)在三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)中的作用和潜在机制。方法采用免疫组织化学方法和Western blot检测TNBC肿瘤组织和细胞系中METTL5的表达情况。用靶向METTL5的shRNA(shRNA-METTL5)转染TNBC细胞后,用CCK-8、集落形成、伤口愈合以及Transwell实验分别检测细胞增殖活性、迁移与侵袭,Western blot检测Wnt/β-catenin信号关键蛋白的表达。构建异种移植瘤模型,验证敲降METTL5对TNBC细胞在体内生长以及Wnt/β-catenin信号活性的影响。结果METTL5在TNBC肿瘤组织和细胞系中表达上调(P<0.01)。敲降METTL5可抑制TNBC细胞的增殖、迁移和侵袭并降低了Wnt/β-catenin信号分子β-catenin、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-7的表达(均P<0.01)。体内实验显示,敲降METTL5减缓了移植瘤生长和Wnt/β-catenin信号活性。结论敲降METTL5能抑制TNBC细胞的增殖、迁移与侵袭,其作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

Wnt/β-catenin信号通路的中药调控与创面愈合

创面愈合是由于外伤、糖尿病溃疡、压疮、感染和术后创面不愈合等多种因素导致的如表皮、真皮、肌肉、筋膜等局部组织的损伤,其愈合过程是一个复杂且动态的程序,涉及到多种细胞反应和周围微环境的相互配合。目前,创面发病率呈逐年增长的趋势,造成了全球范围内巨大的社会和经济负担,老龄人口中发生的慢性损伤随着年龄的增长而逐年攀升。当前,修复创面的药物种类及方法多样,一定程度上减轻了患者的生理、心理和经济社会压力。中药单体及复方制剂修复创面具有独特的优势和力量,引起社会各界广泛的关注及应用,Wnt/β-catenin是调节细胞增殖、分化及凋亡,高度参与创面修复,是皮肤损伤修复过程中最重要的经典信号通路之一。Wnt/β-catenin信号通路通过中药单体及复方制剂降低机体创面中蛋白激酶、炎症反应,促进血管新生和表皮干细胞等表达,对创面愈合的治疗具有重要的参考价值。本文复习国内外相关文献,对Wnt/β-catenin信号通路与创面的关系及中药单体和中药复方通过调控该信号通路影响创面愈合的机制进行归纳总结,为中药治疗创面损伤提供新的思路和方向。

松果菊苷调节Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的探讨松果菊苷调节Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将肺癌HCC827细胞分为对照组、松果菊苷低、高剂量组、松果菊苷高剂量+LiC1(Wnt/β-catenin信号通路激活剂)组、FH535组(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)。克隆形成实验检测细胞克隆能力;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Ki-67、MMP-9、Caspase-3、β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白表达。结果与对照组比较,松果菊苷低、高剂量组和FH535组HCC827细胞克隆形成率、划痕愈合率与侵袭个数、N-cadherin、vimentin、Ki-67、MMP-9、β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白表达显著降低,凋亡率、E-cadherin、Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05);LiC1可部分逆转松果菊苷对HCC827细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05);FH535组HCC827细胞各项检测指标与松果菊苷高剂量组处于同一水平(P>0.05)。结论松果菊苷可抑制HCC827细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并促进细胞凋亡,进而抑制肺癌细胞的恶性生物学行为,可能是通过阻断Wnt/β-catenin信号通路实现的。

血清β-catenin、E-cadherin水平与糖尿病肾病患者钙磷代谢、颈动脉钙化的关系

目的探讨血清E-钙黏蛋白(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)水平与糖尿病肾病患者钙磷代谢、颈动脉钙化的关系。方法选择2019年5月至2022年11月该院收治的112例糖尿病肾病患者作为研究组,并根据双侧颈动脉彩超检查结果分为颈动脉钙化组(n=44)和非颈动脉钙化组(n=68),另选同期于该院接受体检的90例体检健康者为对照组。检测并比较各组血清E-cadherin、β-catenin及钙磷代谢水平,采用Pearson相关分析血清E-cadherin、β-catenin水平与糖尿病肾病患者钙磷代谢的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清E-cadherin、β-catenin对糖尿病肾病患者颈动脉钙化的预测价值,采用多因素Logistic回归分析糖尿病肾病患者颈动脉钙化的影响因素。结果研究组糖化血红蛋白、血磷、钙磷乘积、甲状旁腺激素(iPTH)、肌酐、碱性磷酸酶、β-catenin水平均高于对照组,E-cadherin水平低于对照组(P<0.05)。颈动脉钙化组血磷、血钙、钙磷乘积、iPTH、肌酐、碱性磷酸酶、β-catenin水平均高于非颈动脉钙化组,E-cadherin水平低于非颈动脉钙化组(P<0.001)。Pearson相关分析显示,糖尿病肾病患者血清E-cadherin与血磷、血钙、钙磷乘积、iPTH、肌酐、碱性磷酸酶均呈负相关(r=-0.453、-0.654、-0.365、-0.490、-0.411、-0.377,均P<0.05),血清β-catenin水平与血磷、血钙、钙磷乘积、iPTH、肌酐、碱性磷酸酶均呈正相关(r=0.444、0.345、0.421、0.398、0.651、0.622,均P<0.001)。ROC曲线分析显示,血清E-cadherin、β-catenin及二者联合预测糖尿病肾病颈动脉钙化的曲线下面积分别为0.844(95%CI 0.795~0.894)、0.853(95%CI 0.801~0.901)、0.901(95%CI 0.851~0.952)。多因素Logistic回归分析显示,血清E-cadherin(OR=3.789,95%CI 2.055~6.983)、β-catenin(OR=4.104,95%CI 1.795~9.385)、钙磷乘积(OR=2.998,95%CI 1.895~4.743)、iPTH(OR=2.713,95%CI 1.787~4.118)均是糖尿病肾病患者颈动脉钙化的影响因素(P<0.05)。结论糖尿病肾病患者β-catenin水平升高,E-cadherin水平降低,二者与患者钙磷代谢、颈动脉钙化密切相关,可作为评估糖尿病肾病患者颈动脉钙化的有效指标,同时二者联合对颈动脉钙化的预测价值更高。

敲低趋化因子受体3通过减弱Wnt/β-catenin信号通路抑制肝母细胞瘤细胞增殖与迁移

目的 探讨CXC趋化因子受体3 (CXC chemokine receptor 3,CXCR3)在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)中的作用及机制。方法 收集16例HB组织及其癌旁组织,用免疫组化与Western blot法检测CXCR3蛋白的表达。HB细胞(Huh-6及HepT1)分别转染Con-shRNA、CXCR3-shRNA1和CXCR3-shRNA2后,将其分为Con-shRNA组、CXCR3-shRNA1组和CXCR3-shRNA2组。CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖,划痕法和Transwell法检测细胞迁移与侵袭,Western blot法检测β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)、基质金属蛋白酶(metallomatrix proteinase,MMP)7及MMP-9的表达。裸鼠异位移植;肿瘤实验检测各组细胞体内成瘤情况及瘤体体积,并用免疫组化检测瘤体组织中MMP-9和Ki67表达。结果 CXCR3在HB组织中表达上调(P<0.01)。与Con-shRNA比较,CXCR3-shRNA1组和CXCR3-shRNA2组Huh-6及HepT1细胞活力、增殖、迁移及侵袭能力均降低(P<0.01),Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达减弱(P<0.01),细胞移植瘤的瘤体生长缓慢且体积明显缩小(P<0.01),瘤体组织中MMP-9和Ki67表达降低(P<0.01)。结论 下调CXCR3可抑制HB细胞的增殖与迁移,其机制可能与减弱Wnt/β-catenin信号有关。