Severe infection with multidrug-resistant Salmonella choleraesuis in a young patient with primary sclerosing cholangitis

Massive global spread of multidrug-resistant(MDR) Salmonella spp. expressing extended-spectrum beta-lactamase(ESBL) and additional resistance to fluoroquinolones has often been attributed to high international mobility as well as excessive use of oral antibiotics in livestock farming. However, MDR Salmonella spp. have not been mentioned as a widespread pathogen in clinical settings so far. We demonstrate the case of a 25-year-old male with primary sclerosing cholangitis who tested positive for MDR Salmonella enterica serotype Choleraesuis expressing ESBL and fluoroquinolone resistance. The pathogen was supposedly acquired during a trip to Thailand, causing severe fever, cholangitis andpancreatitis. To our knowledge, this is the first report of Salmonella enterica serotype Choleraesuis in Europe expressing such a multidrug resistance pattern. ESBL resistance of Salmonella enterica spp. should be considered in patients with obstructive biliary tract pathology and travel history in endemic countries.

中草药有效成分酶解法提取工艺优化及其不同配方对引起仔猪腹泻细菌的抑制作用

【目的】探明中草药有效活性成分的提取条件,并筛选抑制仔猪腹泻细菌的高效中药方剂,为生猪养殖过程中绿色防治断奶仔猪腹泻提供理论依据。【方法】采用酶解法提取中草药的有效成分,通过单因素试验研究有效成分提取的温度、时间、pH、酶用量、料液比和处理方式对提取效果的影响,从而确定酶解的最佳条件;利用抑菌圈法测定不同中草药对肠产毒性大肠埃希氏菌、猪霍乱沙门氏菌和绿脓杆菌的抑菌情况,筛选具有较好抑菌效果的中药方剂。【结果】酶解法提取中草药有效成分的最佳工艺为提取温度55℃+提取时间2 h+酶添加量为3%+料液比为1∶25,pH 10,提取前对中草药进行研磨处理。肠产毒性大肠埃希氏菌对单味中草药连翘表现极敏〔抑菌圈直径(Φ)22.2 mm〕,对石榴皮(Φ15.7 mm)和山楂(Φ19.4 mm)表现高敏,优化配方为山楂+虎杖+石榴皮+苦参(Φ18.4 mm);猪霍乱沙门氏菌对单味中草药黄芪(Φ19.2 mm)和川黄柏(Φ15.5 mm)表现高敏,优化配方为黄芪+川黄柏+石榴皮(Φ24.4 mm);绿脓杆菌对单味中草药板蓝根(Φ11.5 mm)和党参(Φ12.1 mm)表现高敏,优化配方为党参+鱼腥草+甘草+龙胆草(Φ15.0 mm)。【结论】中药方剂山楂+虎杖+石榴皮+苦参、黄芪+川黄柏+石榴皮和党参+鱼腥草+甘草+龙胆草分别对引起仔猪腹泻的肠产毒性大肠埃希氏菌、猪霍乱沙门氏菌和绿脓杆菌具有高效抑制作用。

单抗竞争ELISA检测猪沙门氏菌感染方法的建立与应用

以猪霍乱沙门氏菌作为包被抗原 ,利用沙门氏菌O7单克隆抗体酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪霍乱沙门氏菌抗体。经过研究确定抗原包被浓度为 2×1 0 8CFU/ml,血清检测稀释度为 1∶1 6,酶标抗体浓度为 1∶70 0 ,包被液为碳酸盐缓冲液 ( 0 .0 5MpH9.6)。应用单抗竞争ELISA和平板凝集试验 (PAT)同时对 5 0 6份血清进行猪霍乱抗体检测 ,PAT的检出率为 3 .60 % ,ELISA检出率为 5 .75 % ,两者符合率达 96.4%。试验结果表明 ,ELISA方法敏感性高 ,特异性强 ,稳定性和重复性好 ,操作简便。本方法的建立在猪群沙门氏菌感染的检疫、实验室诊断的标准化及流行病学调查方面具有应用价值。

樱桃谷鸭感染猪霍乱沙门氏菌的分离鉴定

某地樱桃谷鸭群发生一种高发病率、高死亡率的传染病 ,其临床表现为沉郁、不食、下痢、脚软、发热等 ,病变特征以内脏器官充血、出血为主。本文从鸭体内分离到 2株细菌 ,经鉴定为猪霍乱沙门氏菌 ;并进行了毒力试验和药敏试验 ,结果 2菌致病性均很强 ,对氯霉素、卡那霉素。

猪霍乱沙门菌载体介导猪瘟病毒DNA免疫研究

构建了猪瘟病毒(CSFV)主要保护性抗原E2基因的真核表达质粒pVAXE2。将其电转化猪霍乱沙门氏菌C500疫苗株,得到了携带pVAXE2质粒的猪霍乱沙门氏菌工程菌株S.C500pVAXE2,对该菌株的特征、培养特性和生化特性进行了鉴定。分别用1×108CFU、2×109CFUS.C500pVAXE2经口服或肌肉注射免疫小鼠和家兔,间接ELISA检测免疫动物的特异性抗体,在第三次免疫后2周用20ID50猪瘟兔化弱毒和致死量猪霍乱沙门氏菌强毒株对免疫兔进行攻击。结果表明,S.C500pVAXE2保持了猪霍乱沙门氏菌原有形态特征、培养特性和生化特性,免疫鼠和兔都产生了抗CSFV和猪霍乱沙门菌的ELISA抗体,免疫家兔能抵抗猪瘟兔化弱毒株和猪霍乱沙门氏菌强毒株的攻击。显示了以S.C500为DNA运输载体构建二联或多联猪用疫苗的可行性。

猪霍乱沙门氏菌的分离与鉴定以及PCR检测方法的建立

[目的]为了确定四川省某猪场初生仔猪大规模发病的原因。[方法]对发病仔猪进行细菌分离、培养特性及形态结构观察、生化鉴定、药敏试验、动物致病性试验和血清型鉴定,并建立PCR快速检测方法。[结果]从发病仔猪体内分离到1株优势菌,初步鉴定为沙门氏菌。根据沙门氏菌invB基因设计的1对引物进行PCR扩增,得到408bp的特异性条带,PCR产物经T-A克隆测序证实为invB基因,与参比序列具有非常高的同源性,说明该PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性。经血清学试验确定该分离株为猪霍乱沙门氏菌,毒力试验和药敏试验结果表明分离菌致病性很强,对头孢三嗪、氯霉素、氧氟沙星等敏感。[结论]该研究为沙门氏菌病原鉴定与疾病诊断提供了依据。

规模化猪场猪霍乱沙门氏菌的分离鉴定与药敏试验

采集新乡市某规模化猪场疑似猪沙门氏菌病的病料,通过细菌分离培养、生化鉴定、动物试验和药敏试验,分离到1株革兰氏阴性小杆菌,该菌在麦康凯琼脂平板上呈细小、无色半透明、光滑、圆整的菌落,对葡萄糖、木糖醇、赖氨酸、甘露醇、蔗糖、果糖和山梨醇反应阳性,对甘露糖、硫化氢、苯丙氨酸、尿素酶反应呈阴性,可致死小白鼠,确定所分离的细菌为猪霍乱沙门氏菌。该菌对头孢噻呋、左旋氧氟沙星等敏感,对诺氟沙星和新霉素中介,对氟苯尼考、氨苄西林、庆大霉素等耐药。该研究为猪沙门氏菌病的防治提供理论依据。

鸡肠炎沙门氏菌病的病原分离与鉴定

某“南海黄”鸡养殖场鸡群发生一种高发病率、高死亡率的传染病。从病死鸡肝脏分离到1株细菌,经分离鉴定为肠炎沙门氏菌。经毒力试验和药敏试验,结果表明,细菌毒力很强,但对丁胺卡那霉素、氟甲砜霉素等敏感。

猪霍乱沙门氏菌的快速分离鉴定

猪霍乱沙门氏菌是引起仔猪副伤寒的主要病原菌,给养猪业造成重大危害。本文旨在建立一套细菌快速分离鉴定方法,为该病流行病学调查提供有效手段。从临床初诊为仔猪副伤寒的病猪采集粪便,接种亚硒酸盐亮绿增菌液增菌后,划线于SS琼脂培养基,挑无色透明菌落纯化。纯化菌落用美国B IOLOG自动细菌鉴定仪GN2肠杆菌鉴定板鉴定,同时用常规生化鉴定管鉴定,结果符合猪霍乱沙门氏菌的生化特征。PCR扩增invA基因,测序鉴定PCR产物,结果与猪霍乱沙门氏菌参考序列同源性达99%以上。分离菌株接种小白鼠,证明其对小白鼠有致病性。用沙门氏菌属标准血清检测证实其抗原式为6,7∶c∶1,5,符合猪霍乱沙门氏菌的抗原特征。应用以上方法从全国各地病料中分离鉴定了40多株猪霍乱沙门氏菌,为猪霍乱沙门氏菌病的流行病学调查提供了依据,同时证明该方法切实可行。

绿荧光蛋白基因在猪霍乱沙门氏菌C500株asd^-缺失株平衡致死载体系统中的表达

猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱用于预防仔猪副伤寒病的弱毒疫苗株,毒力弱且免疫原性良好。为将猪霍乱沙门氏菌开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体并保持原有免疫原性,构建了以C500为亲本菌,用负向选择的重组自杀性质粒介导接合转移的方法构建了无抗性标记的asd-缺失株。首先构建asd(天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶)基因缺失1408bp的带有蔗糖敏感基因sacB的重组自杀性质粒,与C500接合转移,两步法筛选无抗性的asd-缺失株,通过PCR鉴定。该缺失株在无外源DAP(二氨基庚二酸)条件下溶菌死亡,它的生长必需外源DAP。PCR扩增绿荧光蛋白突变体4基因,克隆到带有asd基因的原核表达载体pYA3493中,电转化C500asd-缺失株,转化子在LB中生长,并激发强的绿荧光。上述结果表明,该asd-缺失株的构建是成功的,并且可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因,为开发C500为载体的口服多价疫苗奠定了基础。

猪霍乱沙门氏菌C78-1株Δcrp缺失株的构建及其生物学特性初步研究

通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pRE112上,构建含缺失320 bpcrp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp。运用重组自杀性质粒介导的等位交换技术,两步法筛选C78-1的Δcrp缺失株。进一步的生物学特性研究表明,缺失株的血清型与亲本菌株C78-1一致,且能够稳定遗传缺失的crp基因,但其生化特性和生长速度与C78-1相比发生明显改变,小鼠致死性试验结果表明其毒力较C78-1降低约750倍。以上结果均证实,作者成功构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失突变株,缺失株遗传稳定,毒力显著降低,为进一步开发猪霍乱沙门氏菌的弱毒疫苗菌株奠定了基础。

TaqMan-rRT-PCR检测猪霍乱沙门菌方法的建立和实验室评价

目的基于猪霍乱沙门菌血清型特异性基因,建立TaqMan逆转录实时聚合酶链反应(TaqMan-rRT-PCR)检测猪霍乱沙门菌的方法。方法利用基因组序列比对筛选到猪霍乱沙门菌特有的基因SC0358,通过普通PCR及利用多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株共计145株,评价该方法的菌株特异性,针对该基因设计TaqMan-rRT-PCR检测方法的引物,优化反应条件,建立针对该靶基因的TaqMan-rRT-PCR检测方法,以纯菌及血液模拟标本RNA为模板进行敏感性检测。结果利用该方法检测26株猪霍乱沙门菌均为阳性,其余菌株扩增均阴性,对纯菌RNA检测中,TaqMan-rRT-PCR的最低检测限度为5 fg/反应,约为10个拷贝/反应。对全血液模拟样品分析中,敏感性达25 cfu/mL。结论以猪霍乱沙门菌保守、特异基因SC0358建立的TaqMan-rRT-PCR方法,能够简便快捷区分猪霍乱沙门菌与其他血清型沙门菌,尤其能够区分与其有抗原式相同的丙型副伤寒沙门菌,此方法为猪霍乱沙门菌感染的快速诊断提供了简便的手段,可用于对猪霍乱沙门菌的早期诊断。

两株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪霍乱沙门氏菌的分离及人工共感染猪的致病性试验

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与细菌混合感染的情况,本研究采用RT-PCR方法对不同猪场采集的样品进行PRRSV检测,并进一步对PRRSV阳性样品进行细菌培养分离,经BIOLOG细菌鉴定仪鉴定,分离培养的细菌为猪霍乱沙门氏菌(S.cholersuis)。利用分离获得的2株PRRSV和一株S.cholersuis进行动物回归试验,结果表明所有人工感染猪在感染后的第5 d出现病毒血症;2份PRRSV分离株单独人工感染的发病率均为100%,死亡率分别为55.6%和100%;PRRSV与S.cholersuis共感染的动物死亡率均为100%。与单独的PRRSV感染组相比,PRRSV与S.cholersuis共感染后实验动物的发病和死亡时间大大缩短,进一步表明其混合感染具有协同致病性,导致发病率和死亡率的上升。

嗜酸乳杆菌和两歧双歧杆菌体外粘附Caco-2细胞及其对病原菌粘附性能的影响

以Caco-2细胞作为体外模式,观察嗜酸乳杆菌、两歧双歧杆菌、大肠杆菌K88和猪霍乱沙门氏菌对Caco-2细胞的粘附特性,并探讨嗜酸乳杆菌和两歧双歧杆菌的抗粘附作用。结果表明,所试4种细菌菌株均表现出很强的粘附Caco-2细胞的特性;粘附抑制试验表明,无论在排斥试验、竞争试验还是置换试验,嗜酸乳杆菌或两歧双歧杆菌均能明显抑制大肠杆菌K88和猪霍乱沙门氏菌的粘附;杀菌试验表明,嗜酸乳杆菌或两歧双歧杆菌上清液均能显著抑制病原菌的生长,但上清液用胰蛋白酶、蛋白酶K、乳酸脱氢酶处理后,杀菌作用明显降低,表明杀菌作用是乳酸和蛋白质样物质共同作用的结果。

猪霍乱沙门氏菌LAMP检测方法的建立与应用

利用猪霍乱沙门氏菌lac Z基因设计特异性引物,通过优化各种反应条件,建立了检测猪霍乱沙门氏菌的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。此方法特异性好,灵敏度高,将细菌DNA稀释到10-8仍可检出,是PCR方法的1000倍。本研究建立的LAMP方法操作简便、灵敏度高、特异性强,为临床检测猪霍乱沙门氏菌和预防人猪霍乱沙门氏菌病提供了技术保障。

从直接食用的生葱中检出沙门氏菌的报告

为提高食品卫生水平 ,1999年～ 2 0 0 1年对佐料卫生状况进行调查 ,共检样 12 0件 ,自调味品小葱中分离出肠道致病菌鼠伤寒沙门氏菌、纽波特沙门氏菌各 1株。由此提示引起食源性传染病的食品是多样化的。

乐果降解菌的分离、筛选和鉴定

筛选高效的有机磷农药乐果的降解菌。采集福建省福农生化有限公司排污口,沟口及草坪土壤进行乐果降解菌的分离鉴定。经含乐果的培养基分离培养、脂肪酸鉴定,总共得到17个属23株细菌,对这些菌通过消解试验进行复筛,得到4株对乐果有较好降解能力的菌株,沙门氏菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌,在乐果浓度为1000mg/L时,48h的降解率分别为27.3%、26.6%、22.9%和18.1%。对乐果有降解作用的菌株存在种类多样性的特点。

猪霍乱沙门菌SC500运载TGEVS与猪IL-15融合基因疫苗的稳定性及免疫安全性

为研究猪霍乱沙门菌SC500作为TGEV S与IL-15融合基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15运载体的稳定性与免疫安全性,将外源表达质粒pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15及空载体质粒pCC-neo、pCI-neo转化SC500,采用体外增殖试验研究不同质粒在SC500中的稳定性,携带质粒的SC500对ST细胞的黏附率、侵袭力和增殖能力的影响;采用BALB/c小鼠口服免疫试验研究表达质粒在体内的稳定性及SC500对小鼠的安全性。结果显示:外源目的基因影响表达载体在运载体内的稳定性,就载体类型而言,对pCI-neo的影响大于对pCC-neo的影响;携带目的基因的外源质粒影响SC500对ST细胞的黏附率和侵袭率,pCC-neo影响大于pCI-neo;外源质粒影响SC500在小鼠体内的增殖能力,pCC-neo影响大于pCI-neo;SC500在体内的增殖中,其所运载的质粒具有一定的稳定性。结果表明,利用SC500运载基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15免疫小鼠具有相对的稳定性和免疫安全性。

乳酸菌对IPEC-J2细胞黏着斑激酶磷酸化及紧密连接蛋白Occludin表达的影响

本试验旨在探讨嗜酸乳杆菌(LAB1)如何影响黏着斑激酶(FAK)磷酸化及紧密连接蛋白Occludin的表达。用高(1.0×109 CFU·mL-1)、中(1.0×108 CFU·mL-1)、低(1.0×107 CFU·mL-1)3种浓度的致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)和霍乱沙门菌(Salmonella choleraesuis,S.cho)对猪空肠上皮细胞系(IPEC-J2)进行感染后,用高、中、低3种浓度的LAB1作用于感染后的IPEC-J2(模拟治疗试验),用Western blotting检测FAK第397位酪氨酸磷酸化水平;用ELISA方法检测Occludin表达水平。结果显示:在LAB1模拟治疗S.cho感染的试验中,FAK磷酸化水平和Occludin的表达量与LAB1浓度呈正浓度效应,而与S.cho浓度呈负浓度效应;3种浓度的LAB1处理中、低浓度S.cho感染时,组间相互比较差异显著(P<0.05)。在LAB1模拟治疗E.coli感染的试验中,FAK磷酸化水平和Occludin表达量与LAB1浓度呈正浓度效应,3种浓度的LAB1处理低浓度E.coli感染时,组间相互比较差异显著(P<0.05)。结论:LAB1激活受E.coli和S.cho抑制的FAK磷酸化,并能上调细胞紧密连接蛋白Occludin的表达。

人工孵化后期死亡鸡胚的细菌分离试验

对后期死亡鸡胚的卵黄囊和肝脏进行细菌分离纯化 ,通过生化试验进行初步鉴定。在 15枚死胚中 ,大肠埃希氏菌 (EscherichiaColi)的检出率为 33.3% ,鸡白痢沙门氏菌 (SalmonellaPullorum)检出率为 40 %。