转染DPP-4 siRNA或(和)加入SP600125的小鼠肺泡巨噬细胞极化及JNK/AP-1信号通路激活情况观察

目的观察转染二肽基肽酶-4(DPP-4)siRNA或(和)加入c-Jun N-末端激酶(JNK)抑制剂(SP600125)的小鼠肺泡巨噬细胞极化情况、JNK/AP-1信号通路激活情况。方法体外培养小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S),并随机分组:Control组转染空载siRNA、siDPP-4组转染DPP-4 siRNA、LPS组转染空载siRNA+LPS、siDPP-4+LPS组转染DPP-4 siRNA+LPS、LPS+SP600125组转染空载siRNA+LPS联合SP600125、siDPP-4+LPS+SP600125组转染DPP-4 siRNA+LPS联合SP600125。采用Western boltting法检测巨噬细胞中M1型和M2型极化标志物CD86、CD206蛋白及JNK、激活蛋白-1(AP-1)转录蛋白(c-Jun、c-Fos)磷酸化,RT-qPCR法检测巨噬细胞中M1型标志物(CD86、TNF-α、iNOS、IL-1β)和M2型标志物[CD206、精氨酸激酶-1(ARG-1)、IL-4、IL-10]mRNA,一氧化氮(NO)测定试剂盒、免疫荧光检测巨噬细胞上清液中M1型促炎因子NO和细胞内活性氧(ROS)生成情况。结果与Control组比较,LPS组M1型促炎型因子NO、ROS生成含量及M1型极化标志物(CD86蛋白及CD86、TNF-α、iNOS、IL-1βmRNA)表达升高,M2型极化标志物(CD206蛋白及CD206、ARG-1、IL-4、IL-10 mRNA)表达降低,P均<0.05。与LPS组比较,siDPP-4+LPS组M1型促炎型因子NO、ROS生成含量及M1型极化标志物(CD86蛋白及CD86、TNF-α、iNOS、IL-1βmRNA)表达升高,M2型极化标志物(CD206蛋白及CD206、ARG-1、IL-4、IL-10 mRNA)表达降低,P均<0.05。与LPS组比较,siDPP-4+LPS组p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、p-c-Fos/c-Fos蛋白磷酸化相对表达量升高,P均<0.05。与siDPP-4+LPS组比较,siDPP-4+LPS+SP600125组p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、p-c-Fos/c-Fos蛋白磷酸化相对表达量降低,P均<0.05。结论转染DPP-4 siRNA可促进LPS诱导的小鼠肺泡巨噬细胞M1型极化,抑制肺泡巨噬细胞M2型极化,并增加JNK、c-Jun、c-Fos蛋白磷酸化表达;加入JNK抑制剂后,可降低由转染DPP-4 siRNA引起的JNK、c-Jun、c-Fos蛋白磷酸化表达升高。转染DPP-4 siRNA促进LPS诱导的小鼠肺泡巨噬细胞M1型极化的作用机制可能与激活JNK/AP-1信号通路有关。

AP_4高聚物堵水剂的研制及应用

本文概述了AP4 高聚物堵水剂的组成、原理、性能、施工工艺及应用效果。室内实验和现场应用表明 :AP4 高聚物堵水剂具有堵得浅、堵得牢、材料费用低、工艺简便、应用范围较大等特点。对于薄油层、厚油层。

miR-145通过靶向AP4对非小细胞肺癌A549细胞迁移侵袭的影响

目的探讨miR-145对非小细胞肺癌迁移与侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法 qRTPCR法检测非小细胞肺癌组织中miR-145和激活增强子结合蛋白4(activatingenhancerbindingprotein4, AP4)mRNA的表达。A549细胞转染miR-145mimic或者AP4siRNA后,划痕实验与Transwell小室法分别检测A549细胞的迁移与侵袭能力,qRT-PCR法与免疫印迹法(Western blot)检测A549细胞中AP4mRNA与蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因法检测AP4mRNA与miR-145的关系。结果与癌旁正常组织相比,非小细胞肺癌组织中miR-145表达明显降低(P<0.05),而AP4 mRNA和蛋白表达均明显升高(均P<0.05);与对照组相比,转染miR-145 mimic后,A549细胞中miR-145表达明显升高(P<0.05),AP4 mRNA和蛋白水平明显降低(P<0.05);A549细胞的迁移数与侵袭能力均显著下降(均P<0.05);双荧光素酶报告基因法验证AP4 mRNA是miR-145的靶基因。A549细胞转染AP4siRNA后,A549细胞的迁移数与侵袭数显著下降(均P<0.05)。结论上调miR-145能抑制A549细胞的迁移与侵袭能力,可能与其抑制靶基因AP4表达有关。

鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中上调L-plastin表达的转录因子

目的鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的转录因子,进一步阐明非激素依赖型前列腺癌的发病机制。方法在鉴定L-plastin启动子近3′端-216到1序列片段存在明显的转录活性的基础上,利用TFSEARCH软件分析该片段的序列,寻找可能调控L-plastin表达的非甾体激素类转录因子,并用凝胶滞后实验和超滞后实验证实结合于该片段的转录因子,利用PCR定点突变法构建删除该转录因子结合位点的重组子,并检测切除该片段序列后荧光素酶活性,研究该转录因子在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的作用。结果TFSEARCH软件分析表明在距转录起始点-199～-194bp处含有AP-4转录因子结合位点CAGCTG,凝胶滞后实验和超滞后实验表明AP-4是结合于L-plastin启动子3′端序列CAGCTG的转录因子,删除AP-4结合位点后荧光素酶活性下降。结论AP-4是促进L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的重要调控因子。

家蚕转录因子AP-4基因cDNA的分子克隆与生物信息学分析

AP-4(activator protein 4)是一种转录因子,在生物的生长发育中有重要作用。根据家蚕表达序列标签(EST)并利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法克隆了家蚕AP-4(Bombyx mori activator protein4)基因,结合生物信息学方法对所获的序列进行开放阅读框、序列同源性分析,预测了AP-4蛋白的理化性质。获得的家蚕AP-4基因cDNA的全长为1621bp,其开放阅读框为996bp,编码331个氨基酸,基因由3个外显子和2个内含子组成。同源性比对表明该基因推导的氨基酸序列与棉铃虫AP-4和谷蛀虫AP-4推测的蛋白同源性分别为76%和54%,第45-99位氨基酸序列是一个典型的保守结构域。实时定量RT-PCR显示该基因在所检测家蚕的各发育时期中,除幼虫1龄和蛹期第4天无表达外,其它时期均有表达,其中幼虫3龄和4龄期的表达量较高。

转录因子OCT-4对靶基因AP-2γ表达调控的研究

OCT-4和AP-2γ是近年来睾丸生殖细胞瘤诊断过程中研究的热点基因.作为一个在胚胎发育中起着重要作用的转录因子,OCT-4基因在发育的不同时期、不同分化过程中发挥着多种生物学功能,其作用是通过对靶基因的调控来实现的.本研究运用多种软件分析,发现AP-2γ启动子区域的序列部分有OCT-4的结合位点.利用CHIP-PCR方法鉴定AP-2γ是OCT-4调控的靶基因.应用Luciferase assay、免疫荧光实验、小鼠隐睾模型等实验进行验证,OCT-4基因抑制AP-2γ转录活性和影响其蛋白质水平的表达.这一新发现,有利于从分子水平上研究睾丸生殖细胞瘤的发生机制.

TLR4、AP-1及NF-κB在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探讨Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)、转录因子激活蛋白-1(activating protein-1,AP-1)(通常是c-Jun和c-Fos的异源二聚体)及核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测54例NSCLC组织及54例癌旁正常肺组织中TLR4、c-Jun、c-Fos及NF-κB蛋白的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系。结果:TLR4、c-Jun、c-Fos及NF-κB蛋白的表达在NSCLC组织中高于癌旁正常肺组织,且差异具有统计学意义(P<0.05)。TLR4、AP-1及NF-κB蛋白的表达分别与NSCLC组织的分化程度、有无淋巴结转移及组织类型有关。在NSCLC组织中,TLR4与c-Jun、c-Fos及NF-κB的蛋白表达水平之间呈正相关。结论:TLR4、AP-1及NF-κB的高表达可能与NSCLC的发生发展有着密切关系,对其检测有助于判断肺癌的恶性程度及生物学行为。

AP-4基因表达下调抑制子宫内膜癌细胞侵袭和迁移能力

目的:观察靶向抑制激活增强子结合蛋白-4(AP-4)基因的表达对子宫内膜癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人子宫内膜癌细胞株HEC-1A、RL-952、HEC-1B、ishikawa中AP-4基因的表达水平。采用脂质体介导的细胞转染法将AP-4 siRNA转染至HEC-1A细胞,同时设置转染对照。转染48 h后,采用qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后各组HEC-1A细胞中AP-4的表达水平,通过细胞划痕实验观察转染后各组细胞迁移情况,采用Transwell实验检测转染后各组细胞侵袭能力。采用Western blot检测转染后各组细胞中上皮细胞标志分子E-钙粘蛋白(E-cadherin)和间充细胞标志分子N-钙粘素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果:AP-1基因在四株子宫内膜癌细胞中均有表达,在HEC-1A细胞中相对表达水平最高(P<0.05),用于后续转染实验。qRT-PCR和Western blot结果均显示转染AP-4 siRNA能够成功抑制HEC-1A细胞中AP-1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。Transwell实验显示转染AP-4 siRNA后HEC-1A细胞侵袭能力明显受到抑制(P<0.05)。划痕实验显示转染AP-4 siRNA后HEC-1A细胞迁移能力明显受到抑制(P<0.05)。Western blot结果显示转染AP-4 siRNA后HEC-1A细胞中N-cadherin和Vimentin蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平升高,抑制了上皮间质转化(EMT)过程(P<0.05)。结论:AP-4基因表达下调能够有效抑制子宫内膜癌细胞的侵袭和迁移能力,该过程可能与逆转细胞EMT过程有关。

油菜AP2/ERF-B4类转录因子克隆及表达载体的构建

利用油菜UniGene数据库,以拟南芥转录因子保守序列为探针,通过电子克隆方法分离得到一个UniGene库Bna.17538,进一步序列拼接得到一个油菜AP2/ERF-B4亚族的转录因子BnaERFB4-1,长度为672 bp,并进行了相关的生物信息学分析.结果显示BnaERFB4-1是亲水性蛋白,蛋白质三级结构与拟南芥RAP2.6L非常相似,蛋白质无序化程度大于拟南芥RAP2.6L.设计引物通过PCR和RT-PCR方法分别从甘蓝型油菜沪油15幼苗的DNA和cDNA中分离了BnaERFB4-1基因,命名为BnaERFB4-1-Hy15.序列测定和分析显示,来源于沪油15的BnaERFB4-1-Hy15基因与电子克隆的基因序列差异很小,有3个氨基酸位点不同,存在一个内含子.将BnaERFB4-1-Hy15基因通过BamHⅠ和SacⅠ酶切后分别插入酵母表达载体YK3302和植物双元表达载体pYF1404的相应位置,构建了BnaERFB4-1-Hy15基因的酵母体内结合和植物转化载体,为深入研究该基因在油菜抗逆调控中的作用奠定了基础.

阳和平喘颗粒对哮喘模型大鼠IgE、IL-4及AP-1表达的影响

目的:通过观察阳和平喘颗粒对哮喘大鼠模型肺组织活化蛋白-1(activatorprotein-1,AP-1)及免疫球蛋白E(Immunoglobulin E,Ig E)、白介素-4(Interleukin4,IL-4)的影响,探讨阳和平喘颗粒防治哮喘的可能作用机制。方法:选择50只健康雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、阳和平喘高、中、低剂量组。采用卵清白蛋白(Oalbumin,OVA)致敏的方法复制哮喘大鼠模型。各给药组分别给予相应剂量的药物,连续灌胃14天。正常组和模型组给予等体积生理盐水。给药结束后取主动脉血和肺组织,检测血清IL-4和Ig-E含量,肺组织匀浆采用RT-PCR测定AP-1m RNA。结果:与正常组相比,模型组大鼠的血清IL-4和Ig-E含量明显升高(P<0.01),AP-1m RNA的c-Fos和c-Jun表达量明显增高(P<0.01);与模型组相比,各给药组IL-4和Ig-E含量显著低于模型组(P<0.01),且呈量效关系,阳和平喘高、中剂量组AP-1m RNA蛋白表达量明显降低(P<0.01),阳和平喘低剂量组的蛋白表达也有一定降低,但无统计学意义。结论:阳和平喘颗粒可通过下调AP-1m RNA的表达量,阻碍细胞下游因子IL-4、Ig-E的合成,推断其为防治支气管哮喘的作用机制。

秸秆栽培AP_4毛木耳试验

木屑、棉子壳是栽培食用菌的主要原料,随着食用菌生产的发展,这些原料十分走俏,价格亦越来越高.为了扩大栽培木耳的原材料,我们于1988年开始利用多种秸秆为主料进行栽培AP4毛木耳试验。

Jem brana病毒LTR及细胞因子AP-4调控机制的研究

Jembrana病毒 ( Jembrana disease virus,JDV)是一种新近分离到的病毒 ,在分类学上属于反转录病毒科牛慢病毒属 ,与牛免疫缺陷病毒 ( Bovine immunodeficiency virus,BIV)亲缘关系很近 .序列分析显示在 JDV LTR中存在许多潜在的转录因子如 NF-κB、SP-1、核心增强子和 AP-4 ( activatorprotein 4 )的应答元件 ,R区含有反式激活因子 Tat( transactivator of transcription)的应答元件 ( transactivation responese element,TAR) ,暗示有多个转录因子协同参与 JDV LTR的转录调控 .本研究将带有 luc报告基因的 JDV LTR系列缺失质粒分别与 JDVTat表达质粒 p RSV-JTAT共转染 BL-1 2细胞系 ,体外瞬时表达分析显示 ,当 LTR从 nt-2 36缺失到 -1 2 1时 ,基本转录活性提高了 2 .5倍 ,表明 nt-2 36到 -1 2 1间存在负调控元件 .在 He La细胞中的转染结果显示 ,细胞因子参与由 Tat诱导的反式激活作用 .而细胞转录因子 AP-4对 JDV LTR起始转录具有正、负调控作用 ,正、负调控的开关受自身蛋白产量的影响 .

日产AP4冲洗机故障排除一例

日产AP4冲洗机是制作缩微品的重要设备之一,如果机器出现无电源指示、无温度指示无热风故障该怎样处理?

AP4高聚物单液法化学堵水技术

本文概述了ＡＰ４高聚物单液法化学堵水技术堵剂的组成、原理、性能、施工工艺及应用效果。室内实验和现场应用表明：该技术具有堵得浅、堵得牢、成本低、工艺简便等特点。适用于薄油层、厚油层、裂缝性油层。

AP-4在恶性肿瘤中的表达和意义

恶性肿瘤是以细胞增殖和转移为特点的一大类疾病,其发生、发展与多基因、多因素的调节有关。激活蛋白4(AP-4)作为转录因子AP家族的一员,在多种恶性肿瘤中呈过表达,通过识别和结合CAGCTG序列调控靶基因表达,参与恶性肿瘤细胞凋亡、增殖、血管生成、转移、DNA修复等的调节。本文就AP-4的作用途径及其在胃癌、结直肠癌等恶性肿瘤中的表达和意义作一综述。

Apocynin及其衍生物AP4的抗氧化活性研究

在中药胡黄连活性成分胡黄连素的基础上,进行结构修饰和活性筛选,得到Apocynin衍生物AP4.通过化学抗氧化模型,以及细胞实验初步验证AP4抗氧化活性明显优于Apocynin.最终获得活性更强的NADPH氧化酶抑制剂.

沙棘hrh-miR319e靶向转录因子AP4调控种子发育的研究

为探讨沙棘hrh-miR319e与转录因子AP4间的靶向关系,并分析其在种子发育过程中的表达,以不同发育期的种子为材料,运用RNAhybrid软件预测hrh-miR319e成熟体序列与其候选靶基因AP4的3′-UTR区的结合位点,构建pcDNA3.1+pmirGLO-AP4和pcDNA3.1-hrh-mir319e+pmirGLO-AP4载体,用双荧光素酶报告基因检测方法验证hrh-miR319e与候选靶基因AP4间的靶向关系,并采用qRT-PCR方法分析hrh-miR319e与AP4基因在沙棘不同发育期种子中的表达变化。结果显示:(1)生物信息学预测AP4-3′-UTR区与hrh-miR319e成熟体序列完全互补。(2)荧光检测显示pcDNA3.1-hrh-mir319e+pmirGLO-AP4质粒显著抑制荧光素酶活性(P<0.001)。(3)不同发育期种子中hrh-miR319e的表达量总体呈现出先明显上升后明显降低的变化趋势,而AP4基因的表达量则呈现出先降低后上升的趋势;当hrh-miR319e的表达量在花后80 d达到最高水平时,‘新俄3号’种子中为3.146、‘绥棘1号’种子中为4.298、‘杂56’种子中为3.892,AP4的表达量则为种子不同发育期的最低值,‘新俄3号’中为0.427、‘绥棘1号’中为0.526、‘杂56’中为0.451。研究表明,沙棘AP4是hrh-miR319e的靶基因,hrh-miR319e-AP4模块在沙棘种子发育过程中存在负调控关系。该研究结果为深入了解沙棘种子发育机制及大粒品种培育提供了理论依据。

COUNTING ROOTED NEAR-4-REGULAR EULERIAN MAPSON SOME SURFACES

In this article the rooted planar near-4-regular Eulerian trails are enum erated and an explicit form ula for such m aps is presented. Further, the rooted near-4-regular Eulerian m aps on the torus are counted in an exact w ay.

AP-4、EZH2基因表达量与子宫内膜癌病灶中细胞凋亡、上皮间质转化的相关性研究

目的:研究AP-4、EZH2基因表达量与子宫内膜癌病灶中细胞凋亡、上皮间质转化的相关性。方法:选择在孝感市第一人民医院接受手术切除治疗的子宫内膜癌患者,收集子宫内膜癌病灶及癌旁病灶适量,抽提RNA后测定AP-4、EZH2基因及凋亡基因、上皮间质转化基因的表达量。结果:子宫内膜癌病灶内AP-4、EZH2基因的mRNA表达量显著高于癌旁病灶;子宫内膜癌病灶内SRPX2、RLIP76、ZEB1、SALL4、TET1、RANKL、N-cadherin的mRNA表达量显著高于癌旁病灶,Fat-1、ITLN-1、Caspase-3、α-catenin的mRNA表达量显著低于癌旁病灶;AP-4高表达的子宫内膜癌病灶内SRPX2、RLIP76的mRNA表达量显著高于AP-4低表达的子宫内膜癌病灶,Fat-1、ITLN-1、Caspase-3的mRNA表达量显著低于AP-4低表达的子宫内膜癌病灶;EZH2高表达的子宫内膜癌病灶内ZEB1、SALL4、TET1、RANKL、N-cadherin的mRNA表达量显著高于EZH2低表达的子宫内膜癌病灶,α-catenin的mRNA表达量显著低于EZH2低表达的子宫内膜癌病灶。结论:子宫内膜癌病灶内高表达的AP-4、EZH2基因分别能够抑制癌细胞凋亡、促进癌细胞上皮间质转化。

超声波降解含聚原油中AP-P4的研究

采用超声波处理装置对含聚原油和AP-P4溶液分别进行了处理试验。结果表明,超声波频率的增加使得含聚原油体系的旋转黏度降低;对AP-P4体系而言,频率越高、作用温度越高,其体系的黏度越小,并且在功率为250W时,对体系黏度的影响较大,作用时间超过15 min后,对体系黏度的影响程度有所减弱。这表明超声波对AP-P4有一定的降解作用,可以有效降低含聚原油黏度,减少原油预处理过程中的结垢给装置正常生产带来的影响。