一种水产迟钝爱德华氏菌快速药敏检测方法的研究

为了建立一种可以应用于水产养殖现场的药敏快速检测方法,以迟钝爱德华氏菌JF-1为试验菌株,在MHB培养基基础上通过添加鱼肉蛋白胨及调节无机盐离子浓度,优选了迟钝爱德华氏菌的增菌液,在此基础上利用阿尔玛蓝作为细菌生长指示剂,选择11种水产常见药物并设置了8个倍比稀释的质量浓度梯度,制备了迟钝爱德华氏菌快速药敏检测微孔板,板内设有药敏检测区、生长对照区及空白对照区。经显色法及分光光度法药敏检测试验结果比对,选定1×105个/mL菌液密度作为快速药敏检测的接菌密度,将该密度菌液接种于制备的快速药敏检测微孔板进行药敏检测,同时以分光光度法及试管稀释法检测结果作为比对,结果显示在接种12h后,显色法测定的所有药物对菌株JF-1的最小抑菌质量浓度与分光光度法完全吻合,但与接种24h后观察的稀释法在氨苄青霉素和复方新诺明两种药物的最小抑菌质量浓度上存在微小偏差。试验结果显示,本研究建立的迟钝爱德华氏菌快速药敏检测方法能够快速、简便、准确地对该菌进行药敏检测。

实时细胞分析技术与Alamar Blue法用于测定纳米氧化铜细胞毒性的比较研究

目的通过比较研究实时细胞分析技术(real time cell analyze,RTCA)及Alamar Blue法测定纳米氧化铜体外作用于人胚肺成纤维细胞MRC-5及人正常肺上皮细胞BEAS-2B的毒性作用,探讨RTCA实时细胞分析技术用于测定纳米材料体外细胞毒性的可行性。方法分别将MRC-5及BEAS-2B细胞接种于RTCA配套16孔板中及普通96孔板中,96孔板中细胞用于Alamar Blue法测定细胞毒性。分别用剂量为0.75g/L、0.38g/L、0.19g/L、0.094g/L、0.047g/L的纳米氧化铜混悬液进行染毒。选择12h、24h、36h、48h、60h时间点计算两种方法测得的IC50值。采用SPSS 16.0分析软件,利用配对t检验,对两种方法所得相同时间点的IC50值进行统计分析,判断其相关性及是否存在差异。结果 MRC-5细胞用RTCA法测定染毒后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h的IC50值分别为391 mg/L、249 mg/L、185 mg/L、165mg/L、147mg/L;Alamar Blue法所得相同时间点的IC50值分别为507 mg/L、206 mg/L、172 mg/L、154mg/L、95.2mg/L。两种方法所测得IC50值进行统计分析,差异无统计学意义。BEAS-2B细胞用RTCA法测定染毒后12h、24h、36h、48h、60h的IC50值分别为131 mg/L、83.78 mg/L、65.37 mg/L、53.98mg/L、51.23 mg/L;Alamar Blue法所得相同时间点的IC50值分别为148 mg/L、104 mg/L、77.3mg/L、42.5mg/L、39.2mg/L。两种方法所测得IC50值进行统计分析,差异无统计学意义。结论RTCA实时监测法与Alamar Blue法在相同时间点测定纳米氧化铜体外细胞毒性得IC50值差异无统计学意义,说明RTCA实时监测法测定体外细胞毒性结果可靠,适用于纳米材料的体外毒性研究。