川芎嗪对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞CD_(34)抗原表达的影响

探讨川芎嗪对免疫再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓细胞ＣＤ_（３４）抗原分子表达的影响。方法：建立免疫介导的再障小鼠模型， ６．０Ｇｙ～^（６０）Ｃｏγ－射线照射和尾静脉输注淋巴细胞造成小鼠再障。分为正常组、再障组（对照组）、川芎嗪组，除正常组外均胃饲川芎嗪注射液 ４ｍｇ／次，１天 ２次，第 １０天用流式细胞仪检测各组小鼠骨髓细胞膜上 ＣＤ_（３４）抗原表达量。结果：川芎嗪 ＣＤ_（３４）抗原表达量的荧光强度（７７．６±６．５）明显高于再障组（６８．６±４．５，Ｐ＜０．０５），与正常组（８０．０±２．６）比较无明显差异。结论：川芎嗪通过影响骨髓微环境促进免疫再障小鼠的造血干、祖细胞增生，增加ＣＤ_（３４）抗原分子的表达。

Norplant使用者子宫内膜中层粘连蛋白、血管内皮生长因子及CD_(34)含量的研究

对未使用 Norplant和使用 Norplant0 .5年、1年及 2年以上的无不规则子宫出血与有不规则子宫出血的人子宫内膜进行研究 ,比较观察形态学变化以及内膜中层粘连蛋白、血管内皮生长因子及内皮细胞的 CD34 的含量 ,结果显示 1 .Norplant使用者子宫内膜增殖期特点消失 ;2 .血管内皮变薄 ;3.不规则出血的内膜中血管基膜层粘连蛋白、血管内皮生长因子明显减少。提示 Norplant使用者子宫不规则出血与内膜血管内皮变薄。

造血细胞生长因子对脐血CD_(34)^+细胞短期体外扩增的作用

目的 探讨造血细胞生长因子 (HGF)的不同组合对脐血 CD34 + 细胞短期体外扩增的作用。 方法 用免疫磁珠法分离纯化脐血 CD34 +细胞 ,培养于无血清培养液中。加入不同的细胞因子 ,于第 4 ,7,10 ,14天检测 CD34 +细胞百分率和有核细胞 (NC)总数。 结果 和对照组相比 ,各组的 NC扩增倍数随着培养时间的延长呈不同程度的增加 ,干细胞在 FL、TPO、GM- CSF、SCF、IL - 6、G- CSF、EPO和 IL - 3等因子作用下 ,NC扩增倍数在培养第 14天达高峰 ,为32 8.96倍 ;而 CD34 +细胞扩增倍数在培养第 7天达最高峰 ,但在 FL、TPO、GM- CSF、SCF、IL- 6、G- CSF等因子作用下 ,CD34 + 细胞扩增倍数最大 ,7d后达 2 5 .2 3倍 ,而后随着培养时间的延长而逐渐下降。 结论 脐血 CD34 + 细胞在HGF作用下 ,扩增时间以 7～ 10

肾小球肾炎时肾组织CD_(34)的表达

目的 探讨多种类型肾小球肾炎时肾组织中 CD34 的表达及病理学意义。 方法 对 6 6例原发性和继发性肾小球肾炎患者肾活检组织进行 CD34 、α-平滑肌肌动蛋白的免疫组织化学染色 ,探讨二者的关系。 结果 在病理条件下 ,肾小球系膜细胞出现 CD34 的表达 ;肾小球系膜细胞可同时表达 CD34 和α-平滑肌肌动蛋白 ,二者显著相关。 结论 CD34

慢性髓系白血病病期演变时CD_(34)抗原表达及其临床意义

目的 检测 CD34抗原在慢性髓系白血病 (CML)不同病期中的表达 ,并探讨其与临床化疗疗效及预后的关系。方法 采用流式细胞术检测 CML患者外周血和 (或 )骨髓单个核细胞(MNC) CD34抗原及 P1 70 糖蛋白的表达。结果 CML慢性期、加速期、急变期外周血 MNC CD34抗原阳性率比较差异有非常显著性 (P <0 .0 0 1) ,随着治疗的有效 CD34阳性率下降 ;P1 70 阴性组与 P1 70 阳性组 CD34阳性率比较差异有非常显著性 (P <0 .0 1) ,治疗有效率比较差异有差异性 (P <0 .0 5 )。结论 CML慢性期患者 CD34抗原表达与临床疗效呈负相关 ,对预测患者进入急变期有一定临床意义 ;CML病期演变时 CD34阳性白血病细胞 P1 70

恶性肿瘤患儿自体外周血CD_(34)^+造血干细胞的动员和检测

目的探讨恶性肿瘤患儿经化疗和细胞因子动员后，外周血CD造血干细胞的含量变化及意义。方法恶性肿瘤患儿6例，经化疗和细胞因子动员后，用CD抗体标记，流式细胞仪检测外周血CD细胞18次，对测定结果进行统计学分析。结果6例患儿的CD细胞的百分率为1．78％～9．72％，较正常儿童外周血的含量增加17～97倍，CFU-GM增加19～74倍。三组不同疾病：NHL、ANLL和ALL之间CD细胞含量有显著性差异，P＜0．01。结论恶性肿瘤患儿经动员后，CD造血干细胞及CFU-GM有明显扩增，CD的检测在自体造血干细胞移植中具有重要的意义。

生长抑素对白血病患者骨髓细胞CD_(34)抗原表达的影响

目的 研究生长抑素八肽类似物奥曲肽 (Octreotide ,SMS ;商品名 :善得定 )对白血病患者骨髓单个核细胞CD3 4 抗原表达的影响 ,探讨生长抑素对白血病细胞的调控作用。方法 采用细胞培养、免疫细胞化学技术及图像分析系统 ,随机计数CD3 4 阳性细胞数 ,观察分析SMS在白血病患者骨髓单个核细胞中CD3 4 抗原表达的分布和含量。结果 在相差倒置显微镜下 ,加入SMS组与对照组比较 ,细胞碎片增多 ,基质细胞减少 ;CD3 4 抗原主要表达于细胞膜和核膜 ;SMS组阳性细胞数显著少于对照组 (P <0 .0 1) ;图像分析光密度值 (OD值 )SMS组明显低于对照组 (P <0 .0 1)。结论 在体外SMS可减少造血干 祖细胞特异抗原 (CD3 4 )的表达。

以逆转病毒介导对人脐血CD_(34)^+造血细胞进行人MDR1基因转染的实验研究

探讨逆转录病毒介导的MDR1基因转导入脐血CD34+细胞的最佳方法,为MDR1基因转导的临床应用打基础。方法:用磷酸钙沉淀法将含有人全长MDR1cDNA的逆转录病毒载体pHaMDR1/A转到包装细胞PA317中,建立产病毒细胞系,以人脐血中分离的CD34+造血干/祖细胞为靶细胞,在体外进行基因转染,转导的条件为:与含病毒的上清液共培养12天,每天更换病毒上清液,上清液中加入IL-3,IL-6和SCF三种造血生长因子(HGF),转染后用集落培养法测定对COL的耐药性,用PCR检测14～17天所形成集落的MDR1cDNA,计算转染率,用免疫组化法检测P170的阳性程度,并观察不同时间间隔加HGF对脐血CD34+细胞的扩增和转染的影响。结果:脐血CD34+细胞转染阳性为86.4%,P170的阳性率为77.0%,77.1%的集落对6ng/ml的COL耐受,57.4%的集落对7ng/ml的COL耐受。结论:此转染系统既能有较好的转导效果,也有较好的扩增效果,有一定的临床实用价值。

脐血CD_(34)^+细胞免疫表型的分析

应用免疫磁珠法分离脐血CD细胞，以比较CD细胞亚群及各系相关抗原的变化。经过分离，CD细胞由1．47±0．77％升至57．39±16．17％，分离后CDCD细胞占CD细胞的比率为7．82±4．79％CD。细胞纯化同时可减少CD细胞达14．12±9．18倍，CD细胞减少16．42±21．47倍；B系（CD(19)）、巨核系（CD(41)）、NK系（CD(56)）各抗原表达率在CD细胞分离后均明显降低。结论：CD细胞纯化可明显减少CD细胞，应用纯化的CD细胞进行移植应加强支持治疗。

C-kit受体和CD_(34)在急性髓系白血病中的表达与化疗疗效关系

目的：探讨c－kit受体、CD34的表达与化疗疗效的关系。方法：应用流式细胞仪，测定10例正常人和87例急性髓细胞白血病骨髓c-kit受体和CD34的表达。结果：正常人骨髓c-kit受体和CD34表达率分别为0．5％和1．7％。以＞20％细胞表达为阳性，患者c-kit受体和CD34阳性率分别为52％和37％、结论：c-kit受体和CD34阳性病例缓解率较低，差异有显著性（P＜0．01），c-kit受体及CD34共同表达者疗效尤差（P＜0．005）。

rhTPO对CD_(34)^+细胞增殖及形成CFU-MK作用的研究

目的研究重组人TPO（rhTPO）单独及与rhIL-3、rhIL－6、rhSCF协同体外对巨核系的增殖效应。方法采用纯化的CD+34细胞，进行求固体巨核细胞集落培养和液体悬浮培养，研究TPO及与IL－3、IL－6、SCF协同体外对CD+34细胞增殖及向巨核系空向分化的特性，和形成CFU－MK的作用。结果rhTPO可以诱导CD+34细胞形成CFU－MK，增加巨核细胞集落数，这种作用可以被rhIL－3、rhIL－6、rhSCF增强。液体培养中，rhTPO促进CD+34变细胞分化／成熟为表达GPⅡb／Ⅱa的细胞，增加体系中CD+34。细胞，rhIL-3、rhIL－6、rhSCF可以协同TPO的作用。结论TPO作为一种促增殖因子，促进巨核系祖细胞的增殖及分化。

肝细胞癌血窦CD_(34)表达的意义

目的比较肝细胞癌、肝硬化和结节状增生中血管内皮细胞标记物CD34 、UEA -Ⅰ和Ⅷ因子的表达及意义。 方法对 36例手术切除肝细胞癌 ,其中 19例癌旁肝硬化、4例结节状增生及 2例正常肝组织进行免疫组织化学标记。 结果 1.CD34 在所有肝细胞癌 (HCC)血窦中均有较强阳性的表达 ,肝硬化 ,结节状增生及正常肝组织血窦中仅 3例有弱阳性的CD34 表达 ;2 .UEA -Ⅰ在HCC、肝硬化及结节状增生中均有较强阳性的血窦表达。CD34 在HCC血窦中表达与肝硬化、结节状增生相比显著增强 (P <0 .0 1) ;UEA -Ⅰ在HCC和肝硬化、结节状增生血窦表达无显著差异 (P >0 .0 5 )。 结论HCC与肝硬化、结节状增生血窦CD34 表达的差异可能与肿瘤的血管形成有关 ,而非简单的毛细血管化 ;CD34

低温冷冻对脐血CD_(34)^+细胞和造血祖细胞增殖的影响

采用－８０℃低温冷冻法，观察冷冻前及冷冻后１、２、３周时单个核细胞（ＭＮＣ）的回收率，脐血造血前体细胞在体外的增殖力，并用流式细胞仪检测ＣＤ３４＋细胞的百分率。旨在探讨低温冷冻对脐血造血前体细胞的影响。结果表明：脐血冷冻后１、２、３周时ＭＮＣ的回收率分别为９３．６％，９１．５％和９０．７％（Ｐ＞０．０５）；细胞活力分别为９８％，９７％，９５％和９１％（Ｐ＞０．０５）；ＣＤ３４＋细胞依次为１．２０％、１．１８％、１．１６％和１．１７％；ＣＦＵ－ＧＭ，ＣＦＵ－Ｅ冷冻后１、２周时回收率达９７％和９５％（Ｐ＞０．０５），第３周时达８９％（Ｐ＞０．０５）。结果提示：长期冷冻可能导致冷冻之脐血祖细胞产率下降，但对代表造血干细胞的ＣＤ３４＋细胞影响则不大。

羟基淀粉沉淀对免疫磁珠法分离脐血CD_(34)^+细胞及造血祖细胞增殖功能的影响

目的 :应用羟基淀粉沉淀去除脐血红细胞和免疫磁珠 (MACS)阳性选择 ,建立富集、分离脐血CD34+ 细胞的简易实用方法 ,通过造血祖细胞集落培养分析其在细胞因子作用下的增殖潜能 ,观察羟基淀粉沉淀对造血细胞增殖功能的影响。方法 :采用羟基淀粉沉淀和改进的 MACS富集、分离脐血 CD34+细胞 ,以甲纤半固体造血细胞培养法观察其粒 -单系细胞 (CFU- GM)和红系爆式集落 (BFU- E)的数量和特性。结果 :脐血分离前 ,CD34+细胞纯度为 1.5 %～ 3% ,MACS分离后其纯度可达 85 % ,羟基淀粉沉淀和 MACS分离可达 91% ;CD34+造血祖细胞培养有明显的增殖 ,采用 IL - 3、IL - 6、SCF、GM- CSF、EPO等细胞因子组合扩增培养 9～ 14d,CD34+ 细胞在液体培养中有明显扩增 ,MACS分离后 CD34+ 细胞总数增加 39倍 ,羟基淀粉沉淀和 MACS分离可增加 45倍。结论 :应用羟基淀粉沉淀和改进的 MACS系统可有效富集、分离脐血 CD34+细胞 ,羟基淀粉沉淀对 CD34+细胞的富集、分离无影响 ;脐血细胞分离后作造血祖细胞培养 ,可产生丰富的 CFU- GM和 BFU- E,说明羟基淀粉沉淀分离的 CD34+ 细胞的增殖功能优于 MACS分离 CD34+ 细胞的增殖功能。

高血压脑出血后外周血CD_(34)^+、CD_(166)^+与白细胞水平的动态变化及意义

为了解高血压脑出血患者血中干细胞变化情况,动态监测脑出血后外周血CD_(34)^+、CD_(166)^+细胞的绝对值和白细胞的动态变化,采用流式细胞仪和全自动细胞分析仪对高血压脑出血患者40例,分轻症组(血量11～30 ml)和重症组(血量31～50 ml)各20例,取同年龄段20例健康患者作为对照组。分别于第3、7、14、30天各采外周血2ml,肝素抗凝,进行动态监测CD_(34)^+、CD_(166)^+细胞的绝对值和白细胞的变化。结果表明,高血压脑出血后外周血CD_(34)^+、CD_(166)^+细胞和白细胞的绝对值均不同程度地上升,轻症组和重症组CD_(34)^+、CD_(166)^+细胞数分别于第7、14天达高峰,之后逐渐下降,重症组上升幅度较大,与对照组比较第7天具有明显统计学意义(P<0.05);与轻症组比较第14天具有明显差别(P<0.05)。两组白细胞数上升迅速,恢复也较快。轻症组和重症组分别于第7天和14天恢复至正常范围;待CD_(34)^+、CD_(166)^+细胞数达高峰时,白细胞已恢复至正常,与CD_(34)^+、CD_(166)^+细胞变化呈负相关(r=-0.284,P=0.041;r=-0.458,P=0.043)。结论显示高血压脑出血后CD_(34)^+、CD_(166)^+细胞及白细胞不同程度地上升,且重症患者上升幅度较大,表明这可以作为高血压脑出血后自身修复潜能及病情轻重的重要观察指标,同时脑出血后机体存在CD_(34)^+、CD_(166)^+细胞动员,亦表明脑出血后机体存在内源性干细胞的动员,参与脑出血后神经功能的修复。

CD_(34)^+细胞与骨髓增生异常综合征患者生存率的关系

目的 探讨CD34+细胞与骨髓增生异常综合征 (MDS)患者生存率的相关性。方法 应用免疫组化SAP法对 56例MDS患者骨髓细胞CD34抗原进行检测 ,并随访 3～ 5年 ,同时定期门诊复诊及住院治疗。结果 56例中 ,CD34- 3 3例 ,CD34+2 3例 ,随访 3～ 5年后 ,阴性组 10例 ( 3 0 .3 % )转为急性白血病 (AL) ,阳性组 14例 ( 60 .9% )转为AL ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。 17例RAEB患者中 ,CD34- 中数生存期 4 7月 ,CD34+者 16月 ,3年生存率前者 69% ,后者 2 1.1% .12例CD34+高表达RAEB T患者中 ,转化成AL时间明显缩短。结论 CD34+患者具有高危转为AL ,CD34+高表达RAEB T短期内转化为AL 。

CD_(34)^+造血干细胞混合CD_3^+ T细胞移植分离移植物抗宿主病和移植物抗白血病效应

目的 探讨在异基因造血干细胞移植中能否采用纯化 CD34 + 造血干细胞混合一定量纯化 CD3+ T细胞移植达到既控制移植物抗宿主病 (GVHD)又保留移植物的抗白血病效应 (GVL )。 方法 (C5 7BL /6× 6 15 ) F1代接种 L 6 15白血病细胞株建立小鼠白血病模型作为移植受鼠 ,利用免疫磁珠纯化骨髓 CD34 + 造血干细胞及脾脏CD3+细胞 ,流式细胞仪分析纯化前后 CD34 +、CD3+细胞百分比 ,观察单纯移植 CD34 +细胞及混合不同数量级 CD3+细胞后受鼠生存时间、GVHD、GVL效应 ,移植后骨髓造血重建细胞来源。 结果 纯化 CD34 + 细胞 1× 10 6 移植组10 0 %死于白血病复发 ;CD34 +细胞 +纯化 CD3+细胞 (1× 10 7)移植组生存期明显延长 ,5 0 %死于白血病复发 ,无GVHD表现 ;CD34 + 细胞 +CD3+ 细胞 (5× 10 7)移植组长期存活 ,无白血病复发 ,无 GVHD表现 ;CD34 + 细胞 +CD3+细胞 (1× 10 8)移植组 6 2 .5 %死于 GVHD,37.5 %长期存活 ;CD34 + 细胞 +CD3+ 细胞 (1.5× 10 8)移植组 10 0 %死于GVHD。移植后生存时间 >6 0 d的受鼠骨髓造血重建细胞 y染色体检出率为 10 0 %。 结论 移植物中 CD3+细胞数量与 GVHD和 GVL效应密切相关 ,通过限定移植物中的 CD3+ 淋巴细胞的含量能够保留

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层CD_34表达的影响

目的观察莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层CD_(34)表达的影响。方法 45只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠分为假手术组,模型组,莫诺苷小、中、大剂量组,每组9只。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞30 min后再灌注模型。术后莫诺苷小、中、大剂量组予莫诺苷30 mg/kg、90 mg/kg、270 mg/kg每天灌胃1次。7 d后采用免疫组化(n=6)及Western blotting法(n=3)观察缺血侧皮层CD_(34)表达。结果模型组大鼠患侧皮层CD_(34)表达显著升高,莫诺苷大剂量组较模型组显著升高(F>14.865,P<0.001)。结论莫诺苷可能通过上调局灶性脑缺血再灌注大鼠皮层CD_(34)的表达,促进血管新生。

心理干预对老年难治性急性早幼粒细胞白血病骨髓CD_(34)^+细胞bcl-2表达的影响

目的探讨心理干预治疗难治性急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)的临床疗效及作用机理。方法将71例难治性APL老年患者随机分为治疗组(36例)和对照组(35例),对照组采用复方青黛片常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用心理干预治疗。观察临床疗效及不良反应,并分别于治疗前后采用单克隆抗体-免疫磁珠分离系统(MACS)分离、纯化骨髓CD_(34)^+细胞;用SABC亲和细胞法和CMIAS系列多功能真彩图像分析仪检测骨髓CD_(34)^+细胞bcl-2表达。结果治疗组和对照组的完全缓解率、部分缓解率、总有效率分别为86.11%,8.33%,94.44%和74.29%,2.85%,77.14%.治疗组疗效明显优于对照组(P<0.01)。两组骨髓CD_(34)^+细胞bcl-2蛋白阳性产物的阳性率和OD值治疗前均较健康组明显增高(P<0.01),治疗后显著减低(P<0.01),治疗组减低幅度尤为明显,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论耐心细致的心理护理可明显提高中药砷剂的临床疗效和安全性;其作用机制可能是通过心理干预配合中药砷剂治疗能更有效下调凋亡抑制基因bcl-2表达,诱导或促进了APL骨髓CD_(34)^+细胞的分化和凋亡,使骨髓正常造血功能得以恢复重建。

脐血CD_(34)^+细胞体外扩增的实验研究

目的 探讨脐血造血细胞体外扩增及其移植的最佳时期。方法 用免疫磁珠法分离纯化人脐血CD+34细胞 ,从CD+34细胞不同体外培养系中取样检测细胞总数、CD+34细胞百分率和CFC(包括CFU -GM和BFU-E)。结果 A组 (加rhSCF、rhIL - 3、rhG -CSF、rhEpo及rhTPO)与B组 (加rhFL、rhIL - 3、rhG -CSF、rhEpo及rhTPO)对各阶段造血细胞扩增效果无显著差异 ,C组 (加rhSCF、rhFL、rhIL - 3、rhG -CSF、rhEpo及rhTPO)各项结果均显著优于A组 (P <0 0 1)和B组 (P <0 0 1) ,rhCSF与rhFL有明显的协调效应 ;培养 7d时开始增多 ,培养 14d进入高峰 ,培养 2 1d开始下降 ,培养 2 8d明显下降。结论 C组能明显扩增人脐血造血细胞 ,培养 7～ 14d造血细胞达高峰 ,为移植最佳时间。