基于多链结构的CD30 CAR-T细胞的抗肿瘤作用研究

目的基于衔接蛋白DAP12的多链嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)开发靶向CD30的CAR-T细胞药物,研究CD30 CAR-T对霍奇金淋巴瘤肿瘤细胞的体外和体内临床前药效。方法通过基因合成和分子克隆技术,设计构建靶向CD30的CAR质粒,进行慢病毒包装,将得到的慢病毒转染T细胞,其中靶向CD30的多链CAR-T为CD30-KIRS2/Dap12-BB组,单链二代CAR-T为CD30-41BBζ组,未做病毒侵染的T细胞为NTD组,利用流式细胞术检测CAR阳性率情况,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放检测细胞的杀伤活性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子干扰素γ(IFN-γ)的分泌水平,进一步通过小鼠异种移植瘤模型检测CD30 CAR-T在小鼠体内抗肿瘤活性。结果靶向CD30的多链CAR-T和单链二代CAR-T进行对比,研究发现多链CAR-T与单链CAR-T的杀瘤作用相似。但值得注意的是,多链CAR-T的IFN-γ分泌水平更高(P<0.001)。更重要的是,在小鼠的肿瘤模型实验中,多链CAR-T实现了肿瘤的完全消退。结论靶向CD30的多链CAR-T在抗肿瘤活性方面优于传统单链CAR-T。

易误诊为ALCL的CD30阳性DLBCL 1例并文献复习

目的:提高对CD30阳性的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的认识。方法:回顾性分析2022年4月陕西省人民医院收治1例免疫组织化学染色CD30弥漫表达的DLBCL患者的临床资料,并进行文献复习。结果:患者为76岁男性,于外院行超声检查提示颈部3、4区淋巴结肿大,并行颈部淋巴结穿刺活检,结合其组织形态学特点及免疫组织化学染色等诊断为CD30阳性的弥漫大B细胞淋巴瘤。予BV联合CHP方案化疗2疗程,CHOP联合来那度胺方案化疗6疗程,患者肿大淋巴结较前明显缩小,疗效评估接近完全缓解。结论:CD30弥漫阳性的DLBCL较为罕见,其免疫表型及组织学形态与经典型ALCL相似,应尽早行组织病理学检查,明确诊断,尽早治疗。

CD30在弥漫性大B细胞淋巴瘤患者中的表达及其临床意义

目的:探讨CD30在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者中的表达及其临床意义。方法:回顾性分析2018年1月至2020年7月在南京医科大学附属常州第二人民医院诊断的124例原发性DLBCL患者,采用免疫组织化学染色法检测CD30在DLBCL中的表达情况,分析比较CD30表达阳性组与阴性组间各临床病理特征,应用Kaplan-Meier法进行生存分析。分析CD30表达与各临床特征及预后的关系。结果:124例DLBCL中,CD30+19例(15.32%)。CD30+DLBCL患者的临床病理特征具有年龄低、男性多见、结外受累数目少、国际预后指数(IPI)小、Hans分型以GCB型多见、获得的最佳疗效较好的特点(P<0.05)。但在有无B组症状(P=0.323)、Ann Arbor分期(P=0.197)、美国东部肿瘤协作组(ECOG)评分(P=0.479)、乳酸脱氢酶(LDH)值(P=0.477)及是否累及骨髓(P=0.222)方面无明显统计学差异。CD30+与CD30-组的OS、PFS均具有显著性差异(χ^(2)=5.653,P=0.017;χ^(2)=4.109,P=0.043),阳性组预后较阴性组好。亚组分析结果显示,在IPI评分1-2分、LDH升高组中CD30+组有较好的预后(P<0.05);在Ann Arbor分期为Ⅲ-Ⅳ期(P=0.055)、Hans分型为non-GCB型(P=0.053)亚组中CD30+组有较好的预后趋势,但差异未显示出统计学意义。单因素分析结果显示,DLBCL患者的良好预后与CD30+表达、无B组症状、Ann Arbor分期早、ECOG评分低、LDH值正常、IPI评分低、结外受累数目少、获得最佳疗效为CR密切相关(P均<0.05)。COX多因素分析显示,存在B组症状、获得最佳疗效为非CR是影响DLBCL患者预后效果的独立危险因素(P<0.05)。结论:DLBCL患者中CD30+表达提示良好的预后,在评估DLBCL患者预后中具有一定的判断价值。

血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30联检对非霍奇金淋巴瘤患者化疗相关间质性肺炎的预测价值

目的 探究血清白细胞介素-10 (IL-10)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、可溶性CD30 (sCD30)联检对非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者化疗相关间质性肺炎(IP)的预测价值。方法 回顾性分析2019年1月至2022年12月南阳市第二人民医院收治的168例NHL患者的临床诊治资料,根据化疗期间是否出现IP分为IP组(n=37)和非IP组(n=131),比较两组患者的一般资料、入院时血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30水平,采用Logistic回归方程筛选IP发生影响因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)分析血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30预测IP效能,采用相对危险度(RR)分析不同血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30表达对IP发生的影响。结果 IP组患者的血清LDH水平为(288.84±86.41) U/L,利妥昔单抗应用所占比例为48.65%,明显高于非IP组的(199.95±59.66) U/L、22.90%,差异均有统计学意义(P<0.05),但两组患者的性别、年龄、BMI、IPI评分、临床分期、全身症状、肺实质侵犯、骨髓侵犯、以往基础肺疾病史、吸烟史比较差异均无统计学意义(P>0.05);IP组患者的血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30水平分别为(25.41±7.60) ng/L、(29.55±8.83) pg/mL、(142.21±42.67) k U/L、,明显高于非IP组的(18.00±5.41) ng/L、(20.65±6.20) pg/mL、(98.87±28.96) kU/L、,差异均有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归方程显示,IL-10 (OR:18.046)、TGF-β_(1)(OR:16.755)、sCD30 (OR:17.126)、LDH (OR:15.561)、应用利妥昔单抗(OR:10.331)均是NHL患者化疗相关IP发生的影响因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30联合预测IP效能[AUC:0.947,95%CI:0.901~0.976]明显优于三者单一预测[AUC:0.740,95%CI:0.667~0.804]、[AUC:0.762,95%CI:0.691~0.824]、[AUC:0.745,95%CI:0.672~0.809];血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30高表达者IP发生率是低表达的2.914、5.287、3.142倍。结论 血清IL-10、TGF-β_(1)、sCD30是NHL患者化疗相关IP的高危因素,联合检测有助于提高预测效能,指导临床医生做出治疗决策,减少IP发生风险。

共刺激分子CD30/CD30L介导小鼠实验性过敏性结膜炎免疫机制的研究

目的:①探讨共刺激分子CD30和CD30L介导小鼠实验性过敏性结膜炎(EC)的发生机制;②研究分析共刺激分子CD30和CD30L的表达对实验性过敏性结膜炎(EC)的影响。方法:以RW进行免疫处理,A1、A2、A3组在第0,2,4,6,8天分别向小鼠腹腔内注射正常鼠抗体IgG,抗CD30抗体,抗CD30L抗体,每只小鼠注射剂量均为200μg,在第10天对这些小鼠以RW与磷酸盐缓冲液(PBS)混合液点眼处理,24h后取结膜,脾,和血液进行相关分析。免疫组小鼠免疫后不经任何抗体腹腔注射,在第10天取其脾细胞,并在体外与RW一起培养,然后将此脾细胞过继性转移到同源基因的幼稚型小鼠体内,在第2,4天向小鼠腹腔内分别注射正常鼠抗体IgG,抗CD30抗体,抗CD30L抗体,每只小鼠注射剂量均为200μg,在第4天注射后2h进行RW混合液点眼,24h后取结膜组织进行组织分析及嗜酸性粒细胞测定,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测法对诱导组小鼠血液内的IgE进行定量分析,另外,经免疫组化法检测结膜组织中CD+4T细胞的变化情况。结果:A2组小鼠结膜内浸润的嗜酸性粒细胞数比A1组明显增多,有显著性差异(P<0.01);A3组小鼠结膜内浸润的嗜酸性粒细胞数比A1组明显减少,差异有显著性(P<0.05)。A2组IgE的水平比A1组升高,但差异不具有显著性,而A3组IgE水平比A1组明显降低,有显著性差异(P<0.01)。B2组结膜内浸润的嗜酸性粒细数高于B1、B3组,但不具有显著性差异。D2组小鼠结膜内浸润的嗜酸性粒细胞数明显高于D1组,且有显著性差异(P<0.01)。D3与D1组比较,无明显差异。免疫组化(IHC)法结果显示:实验组F1与对照组F2相比,前者小鼠结膜内有大量的CD+4T细胞浸润。结论:①共刺激分子CD30通过CD+4T细胞的激活发生免疫应答来促进小鼠实验性过敏性结膜炎的发生,发展;②共刺激分子CD30L的表达能够抑制小鼠实验性过敏性结膜炎的发生,发展。

CD30^+间变性大细胞淋巴瘤细胞系的建立及其生物学特性

由 1例非霍奇金淋巴瘤患者的胸水标本通过液体培养法建立了 1株CD3 0 + 间变性大细胞淋巴瘤细胞系 ,并对其生物学特性进行研究。所建立的细胞系可以在含 10 %小牛血清的RPMI 1640培养液中持久增殖 ,倍增时间约为 3 6小时 ,目前已传代 12 0余次 ,生长良好 ,暂命名为SH 1。光镜下细胞形态与典型的CD3 0 + 间变性大细胞淋巴瘤 (anaplasticlargecelllymphoma ,ALCL)细胞的形态十分类似 ,电镜下可观察到胞浆内存在较多病毒颗粒。细胞组织化学染色 :光镜下过氧化物酶POX阴性 ,糖原染色PAS阳性 ,酸性磷酸酶 (ACP)呈强阳性 ;电镜下髓过氧化物酶 (MPO )阴性 ,血小板过氧化物酶 (PPO)阴性。EB病毒核心抗原 1(EBNA 1)呈阳性。细胞免疫表型为CD3 0 + 、CD45+ 、HLA DR+ ,而EMA、CD3 4、CD3 8、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD15、CD19、CD2 0均呈阴性。染色体分析示SH 1细胞系核型为二倍体或四倍体核型 ,并具有明显的结构和数量异常 ,但未见典型t(2 ;5)。结论 :所建立的细胞系为CD3 0 + ALCL细胞系。

CD30/CD30L的功能研究进展

CD30最初发现于何杰金淋巴瘤中的何杰金细胞和Reed sternberg(RS)细胞 ,现已知在一些正常淋巴细胞、病毒感染的淋巴细胞、淋巴系统来源的肿瘤细胞及产生Th2型细胞因子的活化T细胞亚群表面也有表达。CD30属于肿瘤坏死因子受体 (TNFR)超家族 ,CD30的生理功能除具有协同刺激信号的传递外 ,还有其他多种功能。CD30配体 (CD30L)属于肿瘤坏死因子 (TNF)超家族 ,CD30L存在于活化的T细胞、静止B细胞、粒细胞、胸腺髓质细胞以及各种白血病细胞。CD30和CD30L交联后 ,通过TNFR相关因子 (TRAF) ,包括TRAF1,2 ,3,5,导致多样的生理功能信号传导。本文就CD30 /CD30L的分子生物学特征、细胞上的表达。

ALK-1蛋白阳性的原发性皮肤CD30^+间变性大细胞淋巴瘤1例

报告1例ALK-1蛋白阳性的原发性皮肤CD30+间变性大细胞淋巴瘤。患儿女,6岁。因左下眼睑包块5个月就诊。入院检查见左下眼睑一2.5cm×3.0cm×0.5cm红色包块,组织病理学检查示真皮内大片大细胞浸润,细胞核呈间变性;免疫组化染色示UCHL-1(+)、CD30(+)、ALK-1(+),EBER原位杂交为阴性。ALK蛋白表达模式为细胞质与细胞核。回顾相关文献,该例原发性皮肤CD30+间变性大细胞淋巴瘤检测到ALK蛋白阳性表达系国内首例报告。

种痘样水疱病样T细胞淋巴瘤伴发原发性皮肤CD30阳性大细胞淋巴瘤1例

患者女,17岁。全身反复起丘疹、水疱、坏死、凹陷状瘢痕伴瘙痒、发热15年,四肢起肿块2年。血清抗EBV-IgM(-),抗EBV-IgG(+)。肿块处皮损组织病理示真皮中下层和皮下组织见弥漫性致密的瘤细胞浸润,细胞核呈间变性;免疫组化示CD3(+),浸润的大细胞CD30(+),CD43(+),80%浸润细胞Ki-67(+)。水疱处皮损组织病理示表皮网状变性及多个水疱,真皮和皮下组织可见血管和附属器周围以淋巴细胞为主的、伴少量嗜酸粒细胞浸润,部分浸润细胞呈明显异形性;免疫组化示CD3(+),CD30(-),CD43(+),Ki-67(+)。诊断:种痘样水疱病样T细胞淋巴瘤伴发原发性皮肤CD30阳性大细胞淋巴瘤。确诊后建议患者转肿瘤科化疗,随访中。

B细胞对T细胞及其亚群CD25、CD30表达的影响

目的探讨B淋巴细胞对T淋巴细胞的抗原提呈作用。方法分离外周血T、B细胞及CD4+、CD8+T淋巴细胞,分别用LPS、PPD、PWM刺激B细胞,洗去刺激原后与T细胞及亚群共同培养。最后用流式细胞仪检测T细胞及其亚群CD25、CD30表达水平。结果PPD刺激组T细胞CD25、CD30表达水平明显升高,而PWM、LPS刺激组与对照组间无差异(P>0.05)。PPD刺激组CD4+T细胞CD25、CD30表达与对照组间有显著差异(P<0.05),但CD8+T细胞与对照组间无差异;LPS、PWM刺激组与对照组间无差异。结论 1未受抗原刺激的B细胞对T细胞活化无明显影响;2受PPD刺激的B细胞对T细胞的活化有明显促进作用;

结肠原发性CD30阳性间变性大细胞淋巴瘤1例报道及文献复习

目的 探讨结肠原发间变性大细胞淋巴瘤 (ALCL)的组织学特点及免疫组化特征。方法 运用组织形态学、免疫组化方法研究 1例发生在结肠的间变性大细胞淋巴瘤并结合文献进行讨论。结果 间变性大细胞淋巴瘤其形态学表现为多样性 ,免疫组化显示CD30 +,另外CD4 5、CD4 5RO、CD3和EMA也可 +。结论 间变性大细胞淋巴瘤发生在结肠非常罕见 ,其形态学和免疫组化表型有一定的特殊性 ,并且预后良好 ,有必要与其它类型淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、恶性组织细胞增生症、恶性黑色素瘤。

ELISA定量测定sCD30的方法学评价与临床应用

目的:用ELISA方法评价Bender MedSystems公司的"研究用"human sCD30 ELISA定量测定试剂盒的方法学及其在临床应用。方法:收集到458例尿毒症等待肾移植、淋巴瘤病和一些恶性肿瘤患者及健康成人的血清、尿液、腔积液,采用ELISA定量检测sCD30浓度,并进行比较;另对该方法的精密度、准确性及曲线的线性与测定范围作了观察。结果:249例肾移植术前患者的sCD30浓度为(178.1±80.3)U/ml、11例非霍奇金淋巴瘤患者为(233.3±61.2)U/ml,比58名健康成人(45.5±16.8)U/ml显著增高(P<0.01);而肾移植术前及术后均增高患者在术后1周内发生急排率为38.5%;8例霍奇金病患者和9例恶性肿瘤患者的sCD30分别为(86.1±46.0)和(92.1±40.6)U/ml,也明显高于健康成人(P<0.01)。ELISA定量测定sCD30的批内CV3.9%,批间CV6.3%,回收率为(101.2±2.9)%,线性相关性系数r=0.999 2。结论:ELISA定量测定sCD30方法简便,重复性好,结果可靠,适用于各种体液标本的检测。在以免疫应答为主流的疾病中,血清中sCD30浓度增高常与疾病的活动性加重有关。而从目前接受肾移植的患者血清中的初步结果可以看出其浓度与急性排斥反应相关,有望成为预测排斥风险的有用标志物。

可溶性CD30联合血清肝细胞生长因子检测诊断移植肾急性排斥

目的探讨肾移植术前可溶性CD30(sCD30)联合术后第5天血清肝细胞生长因子(HGF)检测诊断肾移植术后急性排斥反应(AR)。方法采用酶联免疫吸附法对65例肾移植患者术前sCD30水平及术后第5天的HGF水平进行检测。依据术前sCD30水平将患者分为sCD30阳性受者及sCD30阴性受者。通过分析特征工作曲线(ROC)评价第5天的HGF水平诊断移植肾AR的意义,进一步分析sCD30联合HGF诊断AR的价值。结果65例患者术后26例发生AR为排斥反应组,39例顺利恢复,为无排斥反应组。以sCD30值120U/ml为界限值,排斥反应组sCD30阳性率为61.5%,无排斥反应组阳性率为17.9%,有显著差异(P<0.05)。排斥反应组和无排斥反应组肾移植术后第5天的HGF水平差别有统计学意义(P<0.05),ROC证明HGF界限值90μg/L可较好的诊断移植肾急性排斥反应,敏感度84.6%,特异度76.9%。联合术前sCD30的结果,可提高AR的诊断效果。结论sCD30联合HGF检测分析可有效诊断肾移植AR。

CCR5和CD30在自身免疫性甲状腺疾病外周淋巴细胞上的表达

目的:探讨自身免疫性甲状腺疾病(AITD)中辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2)的平衡偏移及其在发病中的作用。方法:选择21例初发Graves病(GD组),21例桥本甲状腺炎(HT组)和45名健康人(对照组)为研究对象,应用流式细胞仪技术检测外周血淋巴细胞中CD4+CCR5+和CD4+CD30+细胞,以其各自百分比和平均荧光强度(MFI)作为反映Th1/Th2免疫应答强度的指标。结果:与对照组相比,GD组CD4+CD30+细胞升高(P<0.05),而CCR5+细胞MFI明显减低(P<0.01);HT组CD4+CCR5+和CD4+CD30+细胞均升高(P<0.05)。GD组中CD30+细胞MFI与TRAb浓度正相关,与FT3、FT4、TSH均无相关性。结论:GD的发生可能与Th2优势应答密切相关;Th1和Th2细胞可能共同参与了HT的发病。

原发性皮肤CD30^+间变性大细胞淋巴瘤临床及组织病理分析

目的:探讨原发性皮肤CD30+间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)的临床及组织病理学特征。方法:对3例患者的皮损行组织病理学及免疫组化检查,观察原发性皮肤CD30+ALCL组织病理学特征及CD45、CD3、CD20、CD30、EMA、HMB45等抗体染色结果。结果:3例患者临床上均表现为皮下结节。组织病理学特征为肿瘤细胞异形性明显,呈多形性,胞质丰富,核大,核仁明显。CD30标记阳性,不表达T细胞标记CD45RO及CD3。结论:原发性皮肤CD30+ALCL是具有独特形态特点及临床特征的肿瘤,根据组织学特征及免疫组化CD30阳性,可与其他恶性肿瘤进行鉴别。

儿童激素敏感性肾病综合征CD30^+细胞及TH2类细胞因子研究

目的 了解糖皮质激素敏感性肾病综合征 (SSNS)患儿CD30阳性细胞及分泌白细胞介素 4(IL 4) ,5 ,6的TH2细胞活化状态 ,进一步证实SSNS免疫异常模式。方法 流式细胞仪 (FACS)检测SSNS与健康儿童CD30阳性细胞百分率、ELISA检测外周血单个核细胞 (PBMC)培养上清中IL 4,5 ,6及血清IgE浓度 ;用SSNS患儿CD30细胞百分率与PBMC培养上清中IL 4,5 ,6及血清IgE作直线相关分析。 结果 SSNS患儿CD30阳性细胞率、IL 4及血IgE( 11.96 %lg 2 .11pg/ml,2 99IU/ml)显著高于健康儿童 ( 2 .81%lg 1.37pg/ml,110IU/ml) (P均 <0 .0 1) ,但IL 5 ,6水平与健康儿童比较则未见显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;SSNS患儿CD30阳性细胞百分率与IL 4及血IgE水平相关有显著性 (r =0 .94,P <0 .0 1,r=0 .74,P <0 .0 1) ;与IL 5、IL 6水平无显著性相关 (P <0 .0 5 )。结论 SSNS患儿CD30阳性细胞增加并不意味着存在TH2类细胞全面活化 ,SSNS患儿既有某些TH2类细胞因子 (IL 4)升高 ,又有一些TH2细胞因子的降低 (IL 5 )或无变化 (IL 6 ) 。

IMP3和CD30蛋白在霍奇金淋巴瘤H/RS细胞中的表达及意义

目的 探讨IMP3蛋白在霍奇金淋巴瘤（HL） H/RS细胞中的表达及意义.方法 采用免疫组化半定量及计数方法观测34例HL组织标本中IMP3和CD30蛋白的表达,比较两种蛋白在H/RS细胞中的阳性率和表达强度之间的差异.结果 34例HL中结节性淋巴细胞为主型（NLPHL） 13例,经典型（CHL）21例.13例NLPHL中,IMP3阳性率100％,CD30均呈（-）;IMP3阳性的H/RS细胞所占比例86.07％±14.21％,明显高于CD30（P＜0.01）.在21例CHL中,IMP3和CD30阳性率100％,病变中～重度中IMP3阳性率90.4％（19/21）明显高于CD30的阳性率42.8％ （9/21）（P＜0.01）.H/RS阳性细胞数占总H/RS细胞数的比例,IMP3 （92.07％±5.34％）明显高于CD30 （84.86％±10.65％）（P＜ 0.05）.结论 IMP3在NLPHL和CHL的瘤细胞胞质内普遍高强度表达,极易识别,结合CD30蛋白免疫标记,可以提高HL的诊断率.IMP3很有可能成为HL辅助诊断的新型免疫标记物.

血清sCD30、CA125联合检测对非霍奇金淋巴瘤的诊断价值

目的评价血清可溶性CD30(sCD30)、CA125联合检测对非霍奇金淋巴瘤(NHL)的诊断价值。方法选择50例NHL患者作为NHL组,同时期健康者50例作为对照组。采用ELISA法检测NHL组和对照组血清sCD30、CA125水平,分析NHL组血清sCD30、CA125水平与患者临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清sCD30、CA125单独及联合检测诊断NHL的价值。结果 NHL组血清sCD30、CA125水平均高于对照组(P均<0. 05)。血清sCD30水平与NHL患者病理分型、临床分期和和恶性程度有关(P均<0. 05),血清CA125水平与临床分期、有无全身症状、淋巴结外浸润和恶性程度有关(P均<0. 05)。血清sCD30、CA125联合检测诊断NHL的ROC曲线下面积为0. 904,诊断敏感性为94. 52%,特异性为90. 00%。结论血清sCD30与CA125联合检测可用于临床辅助诊断NHL。