As_2O_3对胃癌细胞周期及端粒酶活性的影响

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对SGC 790 1胃癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响及其机制。方法 细胞凋亡、细胞周期分布及相关蛋白的表达采用流式细胞术 ;端粒酶活性的检测采用端粒末端重复序列扩增 ELISA法 (TRAP ELISA) ,端粒酶亚单位mRNA及c mycmRNA的表达采用RT PCR技术。结果 As2 O3 可明显抑制SGC 790 1细胞的生长 ,细胞凋亡率明显增加 ,G0 /G1期细胞减少 ,S和G2 /M期细胞增加 ,Bcl 2、c myc、PCNA蛋白表达减少 ,Bax蛋白表达增加 ,端粒酶活性明显下降 ;端粒酶亚单位hTR和TP1mRNA无明显变化 ,hTRTmRNA表达减少 ,同时 ,c mycmRNA的表达亦减少。结论 As2 O3 对SGC 790 1细胞的抑制作用可能是通过二条途径实现 :一个是诱导细胞凋亡 ,另一个是通过下调hTRTmRNA的表达来下调端粒酶活性 ,其机制有可能与c myc和Bcl 2基因的减少以及Bax基因的增加有关。

金属氧化物吸附剂干法脱除气相As_2O_3实验研究

利用自制 As2 O3连续发生装置，在固定床反应器上研究了金属氧化物 CaO、F e2 O3、Al2 O3对煤燃烧高温烟气中气相砷的吸附特性。600～900℃温度的吸附实验结果表明，金属氧化物 CaO、Fe2 O3吸附剂对气相 As2 O3的吸附以化学吸附为主，随着吸附温度的升高，吸附量与吸附效率逐渐减小；3种金属氧化物的气相固砷能力依次为 Fe2 O3＞CaO＞Al2 O3；研究了气相砷浓度对吸附剂固砷量的影响特性，当气相砷体积浓度在4．5×10^－6～13．5×10^－6变化时，不会有吸附饱和的现象发生，当吸附剂种类一定时，吸附效率仅与吸附温度有关，对于不同气相砷浓度保持相同的吸附温度可以获得相同的吸附效率。

As_2O_3磁性纳米微球的研制及表征

采用改良的乳化冷冻凝聚法制备As2 O3磁性纳米微球 ,用能谱仪、透射电镜、原子荧光分光光度计、原子吸收分光光度计、图像分析仪和动力渗析系统等进行特性研究 .结果显示所制备的As2 O3磁性纳米微球近似球形 ,粒径为 ( 1 90± 5 0 )nm ,其中含As2 O3( 0 65 989± 0 42 ) μg/mg ,锰锌铁氧体磁性纳米粒子 ( 69 5 70 2 7± 0 36) μg/mg ,缓释性好 .用作微球载体的Mn0 4Zn0 6Fe2 O4的居里温度为 1 0 5 40 7℃ ,其不同浓度的磁流体在高频交变磁场下可升温至 43～ 47℃并保持不变 .实验结果表明 ,采用改良的乳化冷冻凝聚法可以成功制备As2 O3磁性纳米微球 ,并为载药磁性微球及磁流体热疗的研究提供了理论及实验依据 .

具有磁感应定向加热肿瘤治疗作用的纳米As_2O_3磁性脂质体的制备和表征

在薄膜法制备工艺基础上 ,采用反复冻融和超声处理、并加明胶分散磁性粒子的改良方法制备纳米As2 O3磁性脂质体 ,然后应用透射电子显微镜、能谱仪、原子荧光光谱仪和图像分析系统等对其特性进行检测 .结果所得纳米As2 O3磁性脂质体粒径为 ( 1 90± 80 )nm ,球形或卵球形 ,有一个明显磁性核心 ,As2 O3的包封率为 5 3.0 % .所以此改良法制备出的纳米As2 O3磁性脂质体粒径较小、稳定性好和药物包封率高 。

AS_2O_3对CD34^+白血病细胞NKG2D配体表达及NK杀伤活性的影响

目的:观察AS2O3对CD34+早期急性髓系白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响。方法:流式细胞仪检测KG1a细胞表面CD34抗原表达率,MTT法确定AS2O3的基本工作浓度,以不同浓度的AS2O3处理KG1a细胞,流式细胞仪测定处理前后KG1a细胞NKG2D配体的表达情况;MACS法分离5例健康个体的NK细胞,LDH释放法检测NK细胞对AS2O3处理前后KG1a细胞的杀伤活性。结果:10nmol/ml的AS2O3作用KG1a细胞后,能使KG1a细胞表面ULBP1的表达水平显著上调(P<0.05),同时也激发了NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:AS2O3能上调CD34+白血病细胞表面NKG2D配体的表达水平,诱导NK细胞对其的杀伤活性,启示AS2O3可与NK细胞组成过继性免疫化疗方案,提高急性白血病的疗效。

AS_2O_3对消化道肿瘤细胞凋亡作用的研究

目的研究AS3O3对10种消化道肿瘤细胞株的致凋亡作用。方法采用形态学观察、流式细胞仪检测及DNA电泳分析。结果发现两株细胞经AS2O3作用后有明显凋亡，三株细胞无凋亡，其余有少量凋亡。结论AS2O3对不同的消化道肿瘤细胞有不同的作用，提示AS2O3对不同细胞的致凋亡作用可能存在不同的机理。

As_2O_3对多发性骨髓瘤细胞的细胞毒作用的机制研究

背景与目的:多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)是恶性浆细胞疾病,目前仍难以治愈;已有研究证明三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)在体外能够抑制骨髓瘤细胞增殖并诱导其凋亡。本研究拟探讨As2O3对多发性骨髓瘤细胞的可能作用机制。方法:采用MTT法检测As2O3对5株骨髓瘤细胞U266、SKO-007、LP-1、HS-Sultan和KM3的抑制作用,求出其IC50,同时研究维生素K3(vitamineK3,VK3)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)对As2O3的协同或拮抗作用;利用光学比色法测定不同浓度As2O3作用后的5株骨髓瘤细胞以及As2O3与VK3、NAC或外源性GSH共同作用后的U266细胞的GSH含量,对细胞GSH含量与IC50进行相关性分析。结果:As2O3对5株骨髓瘤细胞均有增殖抑制作用,但其敏感性不同,细胞内GSH含量与其IC50正相关(r=0.87,P<0.05);氧化剂VK3与As2O3有明显协同作用,抗氧化剂NAC和GSH对As2O3具有拮抗作用。结论:As2O3可能是通过与细胞内的含巯基化合物结合,降低细胞内GSH含量,从而诱导骨髓瘤细胞凋亡。

抑制端粒酶活性对As_2O_3诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的观察端粒酶反义寡核苷酸、As2O3对肝癌细胞生长的影响,寻找低剂量、低毒、高效、安全的抗肝癌新疗法。方法自行设计合成靶向端粒酶模板区的20nt硫代反义寡核苷酸,观察端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞端粒酶活性的影响及两者协同对肝癌细胞生长的影响,采用H-E染色、流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳观察端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞的凋亡诱导作用,以流式细胞术检测肝癌细胞的Fas、Fas-L、bcl-2蛋白的表达。结果5μmol/L的端粒酶反义寡核苷酸作用24h可显著抑制肝癌细胞端粒酶活性(P<0.01);肝癌细胞端粒酶活性被抑制后对As2O3诱导凋亡的敏感性显著增加,表现为低浓度、短时间即可诱导肝癌细胞凋亡(P<0.01),端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞的凋亡诱导作用是通过Fas、Fas-L途径实现的。结论抑制肝癌细胞端粒酶活性可显著增强其对As2O3诱导凋亡的敏感性,减少砷剂用量,两者协同有潜在的临床应用前景。

肾癌组织中NF-kB信号分子的表达及As_2O_3对人肾癌786-O细胞中NF-kB信号通路影响的研究

目的:探讨NF-K B信号通路与肾癌发生和发展的关系以及三氧化二砷(As_2O_3)对人肾癌细胞系786-0的NF-K B信号转导的影响。方法:采用ICC、ISH、Western blot和EMSA技术检测15例肾癌组织和10例正常肾组织中NF-K B信号分子IKKα/β、IK Bα、p65和ICAM-1的表达和NF-K B DNA结合活性;As_2O_3处理肾癌786-0细胞后NF-K B信号分子蛋白表达、p65mRNA表达和NF-K B DNA结合活性的改变。结果:肾癌组织中NF-KB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白表达量升高(P<0.01),但IK Bα蛋白明显降低(P<0.01);经2μmol/L浓度As_2O_3处理786-0细胞72h后,p65mRNA含量、NF-KB DNA结合活性及p65、IKKα/β、I K Bα和ICAM-1蛋白的表达量均降低(P<0.01)。结论:NF-KB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白增加可能与肾癌的发生和进展有关;2μmol/L以上浓度As_2O_3可以全面抑制786-0细胞中p65、IKKα/β、IK Bα和ICAM-1蛋白和p65 mRNA的表达,抑制NF-KB DNA结合活性,可能是As_2O_3、抑制786-0细胞增殖的另一种机制,NF-KB有可能成为抗肾癌治疗的靶点之一。

As_2O_3诱导人肾癌786-0细胞凋亡及其分子机制的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导786-0细胞凋亡的作用及其分子机制。方法用FCM和TUNEL等方法观察As2O3诱导786-0细胞凋亡,以ICC、RT-PCR、ISH、Western blot和EMSA技术等检测凋亡相关基因p53、bcl-2、c-myc、c-fos、NF-κBp65的mRNA和蛋白表达及NF-κBDNA结合活性的改变。结果2μmol/L以上浓度As2O3作用786-0细胞24h后开始发生细胞凋亡,出现凋亡的形态学改变和特征性亚二倍体峰(凋亡峰),使786-0细胞内p53活性升高(P<0.05),而bcl-2、c-myc、c-fos和NF-κBp65基因表达降低(P<0.05),NF-κBDNA结合活性也被显著抑制(P<0.01)。结论As2O3可能通过降低NF-κBp65基因表达和NF-κBDNA结合活性,下调bcl-2、c-myc和c-fos基因表达,而增加p53基因的表达,诱导人肾癌786-0细胞凋亡。

AS_2O_3逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因甲基化状态及激活转录的实验研究

本研究旨在探讨三氧化二砷(As2O3)逆转恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因甲基化状态和调节转录作用及其可能的机制。以高甲基化的恶性淋巴瘤细胞株CA46作为研究基因甲基化与表达关系的实验对象。采用SRB法检测As2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力的影响;nMSP法检测药物作用后p16甲基化状态变化;RT-PCR法检测p16、甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达;利用流式细胞术DNA倍体分析法探讨As2O3对恶性淋巴瘤细胞周期的影响。结果表明:①As2O3作用CA46细胞株72小时后p16基因甲基化程度明显减弱,p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因呈微弱表达,As2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5μmol/L组、1.0μmol/L组和2.0μmol/L组p16基因表达阳性条带与β-actin灰度的比值分别为(0.33±0.10)、(0.57±0.11)、(0.67±0.09),阳性对照灰度比值为(0.73±0.13),差异有统计学意义(p<0.01);③与未处理组相比,As2O3作用72小时后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性,而DNMT1表达不受影响;④与对照组相比,3组不同浓度As2O3均能明显抑制肿瘤细胞生长,G0/G1期细胞增加。结论:As2O3可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B或(和)直接逆转p16基因甲基化状态,使p16基因表达上调,并恢复其活性,从而实现其细胞周期调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞的增长。

褐藻寡糖抗三氧化二砷(As_2O_3)诱导蚕豆根尖的细胞遗传毒性

采用蚕豆根尖细胞的微核试验和染色体畸变试验方法,测定不同浓度的褐藻寡糖对As2O3诱导的蚕豆根尖细胞的微核率、有丝分裂指数和染色体畸变率的影响.结果表明:褐藻寡糖能有效抑制As2O3诱导的蚕豆根尖细胞微核的产生,即在一定浓度范围内,微核率随褐藻寡糖处理浓度的降低而减少,但低于一定浓度后反而呈上升趋势;不同浓度的褐藻寡糖均可使蚕豆根尖细胞有丝分裂指数增大;褐藻寡糖还能有效降低蚕豆根尖细胞染色体畸变率.因此,褐藻寡糖对蚕豆根尖细胞具有明显的诱抗活性和调节细胞分裂生长的效应.

As_2O_3对缺氧性增殖视网膜病变血管和内皮细胞增殖的影响

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对缺氧性视网膜病变模型血管和其内皮细胞(EC)增殖的影响。方法 出生17 d的(C57BL/6J小鼠56只,随机分为正常组、模型组1和模型组2,模型组2又分为未注药、注As2O3 0.5 mg/kg和5 mg/kg组,分别于注射后3、6、9、12 d取完整眼球,行HE和CD34免疫组化染色观察。结果 模型注药组在As2O3注射0.5 mg/kg后6 d,注射5mg/kg后3 d,视网膜神经纤维层(NFL)和突出于玻璃体腔的内皮细胞(EC)、新生血管(NV)数及其总数均降到正常组水平,并持续到注射后12 d。模型2不注药组在出生17 d后,EC和NV数量较模型组1增加,出生29 d时有统计学差异。注射后视网膜各层未见明显的组织损害。结论 注射低剂量的As2O3可有效抑制小鼠缺氧性视网膜病变的EC和NV的过度增殖。

As_2O_3联合FP99诱导骨肉瘤细胞MG-63凋亡的初步研究

采用噻唑蓝(MTT)法发现FP99能够协同三氧化二砷(As2O3)抑制人骨肉瘤细胞MG-63的生长,并采用流式细胞计数进一步证实FP99加强As2O3对MG-63细胞凋亡的诱导作用;进而检测了Caspase-3的活性,发现As2O3联合FP99作用MG-63细胞后,Caspase-3的活性显著提高,提示我们As2O3联合FP99增加MG-63细胞的凋亡率的机制可能是通过提高Caspase-3激酶活性,从而促进了整个凋亡通路的激活,最终导致细胞凋亡的增加。

As_2O_3磁性纳米微球的制备及其联合磁流体热疗对宫颈癌治疗的体外实验研究

目的:研究As2O3磁性纳米微球的制备及其联合磁流体热疗(MFH)对宫颈癌Siha细胞株的治疗作用。方法:采用改良的乳化冷冻凝聚法制备As2O3磁性纳米微球,能谱仪、原子荧光光谱仪对其进行表征;高频交变磁场中进行体外升温实验。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测As2O3磁性纳米微球联合MFH对宫颈癌Siha细胞株生长的影响,流式细胞仪(FCM)检测凋亡。结果:所制备As2O3磁性纳米微球近似球形,粒径约为120nm,含砷量为0.61%,在输出电流I=300A的高频交变磁场中具有升温能力,且能达到肿瘤治疗的有效温度(41℃～46℃);As2O3磁性纳米微球联合MFH能抑制宫颈癌Siha细胞株的生长,促进其凋亡,且均较单纯As2O3液及单纯MFH明显。结论:As2O3磁性纳米微球可同时发挥As2O3的细胞毒性作用和磁感应加热的联合定向治疗作用,效果优于单一治疗,为临床治疗宫颈癌提供新的方法。

As_2O_3纳米粒的制备和体外治疗肺癌及其抗转移机制实验

采用改良的溶胶-凝胶法制备系列的As2O3纳米粒,用透射电镜、扫描电镜、能谱仪、图像分析系统等进行表征及特性检测.应用MTT法研究As2O3纳米粒体外对细胞的增殖抑制作用;用流式细胞仪测定As2O3纳米粒及亚砷酸诱导细胞的凋亡率;用免疫组织化学半定量法检测As2O3纳米粒及亚砷酸处理细胞后Bcl-2、Bax、CD44v6和P53基因的表达改变.研究结果表明,制备的As2O3纳米粒在电镜下呈圆形或椭圆形,分散性较好,平均直径约为80 nm、110 nm、130 nm、150 nm和450 nm;体外细胞实验证实As2O3纳米粒抗肺癌A-549细胞的效应强于亚砷酸溶液;免疫组织化学半定量法显示As2O3纳米粒有较强的诱导肺癌细胞凋亡的作用,可能与其改变Bcl-2和Bax基因表达(Bcl-2/Bax比值降低)及促进P53基因的表达、抑制CD44v6基因表达有关.

负载As_2O_3壳聚糖纳米粒的药代动力学及其毒性观察

背景:As2O3作为抗肿瘤药物具有不同程度的不良反应,目前尚没有可以较好降低As2O3不良反应的方法。目的:观察负载As2O3壳聚糖纳米粒在体内是否有缓释作用,是否可以延长药物作用时间,减低As2O3毒副作用。方法:将20只SD大鼠以抽签法随机分为As2O3组和壳聚糖纳米粒-As2O3组进行药代动力学测定,于给药前和给药后不同时间点测定血液中砷浓度;将40只SD大鼠随机分为壳聚糖纳米粒组、壳聚糖纳米粒-As2O3组、As2O3组、生理盐水组进行毒理学检测,检测血浆中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酸激酶、肌酐、尿素氮水平,并结合苏木精-伊红染色形态学观察心、肝、肾组织形态学变化。结果与结论:壳聚糖纳米粒-As2O3组较As2O3组半衰期明显延长(P<0.05)。除肌酸激酶外,As2O3组其他各指标均高于其他各组(P<0.05);而含相同浓度As2O3的壳聚糖纳米粒As2O3组与壳聚糖纳米粒组、生理盐水组各项指标差异无显著性意义(P>0.05)。As2O3组大鼠肝脏和肾脏均有较明显的病理学改变,壳聚糖纳米粒-As2O3组未见明显形态学改变。4组大鼠心脏均未见明显形态学改变。说明负载As2O3壳聚糖纳米粒在体内有缓释作用,可以延长药物作用时间,减轻As2O3的毒副作用。

靶向抗癌药(As_2O_3)白蛋白纳米球的研究

目的:研究白蛋白纳米球的制备工艺,并检测偶联单克隆抗体白蛋白纳米球对靶细胞的特异性杀伤作用。方法:采用高温固化法制备白蛋白纳米球,通过正交设计筛选最佳工艺。制备免疫白蛋白纳米球,观察白蛋白纳米球对急性早幼粒细胞白血病M3亚型白血病细胞的特异性杀伤作用。结果:在最佳工艺条件下制备白蛋白纳米球,平均直径为250nm左右,形态圆整。免疫纳米球(0.3μmol/mL剂量组作用48h)对靶细胞(急性早幼粒细胞白血病M3亚型白血病淋巴细胞)杀伤率为(34.12±4.76)%,对正常对照(正常人外周血淋巴细胞)杀伤率仅为(5.37±2.21)%。结论:免疫纳米球对靶细胞具有特异性杀伤作用,而对非靶细胞的杀伤作用较小。

As_2O_3抑制人肝癌细胞侵袭及转移的实验研究

目的通过研究三氧化二砷(As2O3)对肝癌侵袭及转移基因的影响,探讨As2O3治疗肝癌的机制。方法利用人肝癌细胞系(Bel-7402)接种裸鼠,建立肝癌模型;实验分3组,测量各组裸鼠实体肿瘤的重量及体积,计算瘤重抑制率;检测AFP;肿瘤组织及双肺病理检查,计算肺转移结节;免疫组化法检测肿瘤组织的MIF、IL-8、bFGF及HIF-1α的表达情况。结果 As2O3治疗组平均瘤重和瘤体积较对照组明显减低,差异显著P<0.01;As2O3治疗组能够明显降低肺转移结节数目,并能降低MIF、IL-8、bFGF及HIF-1α的阳性表达,均有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3能抑制肝癌细胞的侵袭和转移,降低MIF、IL-8、bFGF及HIF-1α的表达。

烟气中As_2O_3的氧化脱除试验

以芬顿(Fenton)溶液作为吸收剂,在自制的小型鼓泡反应器内,进行了Fenton氧化法脱除气态As_2O_3的试验,考察了反应温度和模拟烟气成分等因素对烟气中As_2O_3脱除效率的影响。研究结果表明:在H_2O_2浓度为0.2 mol/L、Fe^(2+)浓度为5 mmol/L、Fenton吸收液初始pH值为5.5、反应温度为50℃时,烟气中As_2O_3的脱除效率可达100%。模拟烟气中SO_2和NO质量浓度、O_2和CO_2质量分数等因素对As_2O_3脱除效率影响显著。同时,采用高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法,对液相离子产物进行了定性与定量检测,得到As_2O_3脱除产物主要为As(V)。