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Expression Pattern Analysis of Zinc Finger Protein Genes in Wheat(Triticum aestivum L.) Under Phosphorus Deprivation 被引量:2
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作者 LI Xiao-juan GUO Cheng-jin +5 位作者 LU Wen-jing DUAN Wei-wei ZHAO Miao MA Chun-ying GU Jun-tao XIAO Kai 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2014年第8期1621-1633,共13页
Zinc finger protein(ZFP) genes comprise a large and diverse gene family, and are involved in biotic and abiotic stress responses in plants. In this study, a total of 126 ZFP genes classified into various types in wh... Zinc finger protein(ZFP) genes comprise a large and diverse gene family, and are involved in biotic and abiotic stress responses in plants. In this study, a total of 126 ZFP genes classified into various types in wheat were characterized and subjected to expression pattern analysis under inorganic phosphate(Pi) deprivation. The wheat ZFP genes and their corresponding GenBank numbers were obtained from the information of a 4×44K wheat gene expression microarray chip. They were confirmed by sequence similarity analysis and named based on their homologs in Brachypodium distachyon or Oriza sativa. Expression analysis based on the microarray chip revealed that these ZFP genes are categorized into 11 classes according to their gene expression patterns in a 24-h of Pi deprivation regime. Among them, ten genes were differentially up-regulated, ten genes differentially downregulated, and two genes both differentially up- and down-regulated by Pi deprivation. The differentially up- or down-regulated genes exhibited significantly more or less transcripts at one, two, or all of the checking time points(1, 6, and 24 h) of Pi stress in comparison with those of normal growth, respectively. The both differentially up- and down-regulated genes exhibited contrasting expression patterns, of these, TaWRKY70;5 showed significantly up-regulated at 1 and 6 h and down-regulated at 24 h whereas TaAN1AN20-8;2 displayed significantly upregulated at 1 h and downregulated at 6 h under deprivation Pi condition. Real time PCR analysis confirmed the expression patterns of the differentially expressed genes obtained by the microarray chip. Our results indicate that numerous ZFP genes in wheat respond to Pi deprivation and have provided further insight into the molecular basis that plants respond to Pi deprivation mediated by the ZFP gene family. 展开更多
关键词 wheat(Triticum aestivum l.) zinc finger protein Pi deprivation gene expression
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Identification and Cloning of Resistance Gene Analogues (RGAs) Encoding NBS-LRR Proteins from Gossypium arboreum L.
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作者 AZHAR Muhammad Tehseen BASHIR Aftab BRIDDON Rob W MANSOOR Shahid 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2008年第S1期42-,共1页
Plants have developed a complicated defense mechanism during evolution to resist the harmful pathogens they encountered.The mechanism involves the interaction of the plant resistance(R)
关键词 NBS Encoding NBS-lRR proteins from Gossypium arboreum l Identification and Cloning of Resistance gene Analogues lRR RGAs
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黄瓜类钙调蛋白CML8与性型分化主效基因编码蛋白的互作分析
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作者 许俊强 张新梅 +4 位作者 吕霞 苏甜 张国平 张应华 许彬 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第5期904-912,共9页
【目的】为探索类钙调蛋白CMLs是否参与黄瓜性型分化过程,以便进一步完善性型分化调控网络提供参考。【方法】通过克隆黄瓜CML8、ACS1G、ACS2及ACS11基因,qPCR检测CML8基因在不同花型中的表达量,酵母双杂交检测CML8与黄瓜性型分化主效... 【目的】为探索类钙调蛋白CMLs是否参与黄瓜性型分化过程,以便进一步完善性型分化调控网络提供参考。【方法】通过克隆黄瓜CML8、ACS1G、ACS2及ACS11基因,qPCR检测CML8基因在不同花型中的表达量,酵母双杂交检测CML8与黄瓜性型分化主效基因编码蛋白间的互作情况。【结果】克隆得到黄瓜CML8基因,完整ORF 441 bp,编码146 aa,不含信号肽;不含跨膜域,为胞外蛋白,含4个具有Ca^(2+)结合能力的EF-hand结构域,不含内含子,亚细胞定位在细胞膜和细胞质;克隆得到黄瓜性型分化关键基因F(ACS1G)、M(ACS2)及A(ACS11),序列比对表明三者的基因序列及编码蛋白序列与黄瓜数据库中的一致,且在雌花、雄花和两性花3种不同花型中的表达量差异显著,在雄花中差异极显著;酵母双杂交试验表明,CML8均可与ACS1G和ACS2发生互作,而不能与ACS11发生互作。【结论】成功克隆得到黄瓜CML8基因,且CML8可与ACS1G和ACS2发生互作,可能参与黄瓜性型分化过程,本研究首次探索类钙调蛋白参与植物性型分化过程,期望为钙信号系统参与植物性型分化提供参考。 展开更多
关键词 黄瓜 类钙调蛋白(CMl8) 性型分化 主效基因 蛋白互作
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Molecular Cloning and Sequence Analysis of C4H Gene of Mangifera indica L.
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作者 Kuanliang LIU Zhichang ZHAO +4 位作者 Aiping GAO Yeyuan CHEN Jianfeng HUANG Zhiguo DANG Ruixiong LUO 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2017年第5期6-10,共5页
Cinnamate-4-hydroxylase( C4H) is a key enzyme in phenylpropanoid pathway in plants. Its activity and abundance directly affect the biosynthesis of flavonoids and aromatic compounds. In this study,degenerate primers we... Cinnamate-4-hydroxylase( C4H) is a key enzyme in phenylpropanoid pathway in plants. Its activity and abundance directly affect the biosynthesis of flavonoids and aromatic compounds. In this study,degenerate primers were designed according to previously reported C4 H gene sequences to clone C4H cDNA sequence with 3'and 5'RACE-PCR from mango( Mangifera indica L). The full-length cD NA of M. indica C4H is 1 680 bp long. Its open reading frame( ORF)is 1 518 bp,encoding a protein of 505 amino acids with a predicted molecular weight of 58. 08 kDa. The isoelectric point of the predicted protein is 9. 52. Functional prediction showed that this gene is mainly located in mitochondria. In addition,the tertiary structure of the protein was built using SWISS-MODEL,and the results showed that the protein has three possible conformations. Phylogenetic analysis based on C4H protein sequences revealed that M. indica has a close genetic relationship with olive( Canarium album) and cocoa( Theobroma cacao). By analyzing the expression level of C4H gene in three colored mango cultivars,we found that that the expression level of C4 H gene in Guifei( with red peel) was the highest,and that in Guiqi( with green peel) was the lowest. The results provide a theoretical basis for studying the molecular mechanism of anthocyanin biosynthesis and C4H's impact on the color of mango fruit. 展开更多
关键词 Mangifera indica l. C4H gene ClONING protein Bioinformatics analysis
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Changes of the expression of CCNL2 gene during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes
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作者 Zhiwen Jiang Lili Zhuo Jie Gong Rong Yang Yanhui Sheng Xiangqing Kong Kejiang Cao 《Journal of Nanjing Medical University》 2009年第4期275-278,共4页
Objective: To investigate the changes of cyclin L2(CCNL2) gene mRNA and protein during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes, and to explore the relationship between CCNL2 gene and the differentiatio... Objective: To investigate the changes of cyclin L2(CCNL2) gene mRNA and protein during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes, and to explore the relationship between CCNL2 gene and the differentiation of cardiac myocytes. Methods: P19 cells were cultured with 0.9% DMSO for 18 days. Western blots of cardiac troponin I (cTnI) were used to identify cell differentiation. Total RNA was extracted from P19 cells during the process of differentiation at various time points:pre-differentiation(Day 0), and Day 1 to Day 18. The expression levels of CCNL2 gene mRNA and protein were evaluated by RT-PCR and Western blot, respectively. Results: After being induced to differentiate by DMSO for 4 days in suspension, spontaneously and rhythmically beating ceils were seen at 8 day, which were cTnI-positive. In P19 cells, both the expression level of CCNL2 gene mRNA and protein were gradually down-regulated. Conclusion: Both the expression of CCNL2 gene and protein were down-regulated during the process of the differentiation of P19 cells into cardiac myocytes, suggesting a possible role for this cyclin in their differentiation. 展开更多
关键词 cyclin l2 protein gene P19 cells cell differentiation
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百脉根不定根发育相关基因LcC2DP1的克隆与功能初步分析
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作者 马思宇 肖芳斌 +2 位作者 罗雪 韦飘 宋莉 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期42-50,共9页
为研究百脉根(Lotus corniculatus L.)C2钙依赖蛋白激酶基因LcC2DP1在不定根形成过程中的功能,通过RACE法从百脉根中克隆LcC2DP1基因,利用qRT-PCR检测其时空表达模式,并通过农杆菌介导的瞬时表达系统在百脉根中过量表达LcC2DP1并鉴定其... 为研究百脉根(Lotus corniculatus L.)C2钙依赖蛋白激酶基因LcC2DP1在不定根形成过程中的功能,通过RACE法从百脉根中克隆LcC2DP1基因,利用qRT-PCR检测其时空表达模式,并通过农杆菌介导的瞬时表达系统在百脉根中过量表达LcC2DP1并鉴定其功能。结果显示:LcC2DP1基因全长705 bp,编码235个氨基酸,分子质量为25.95 ku,与蒺藜苜蓿同源性最高(82%);在百脉根不定根分化过程中持续表达,表达部位为根、茎和叶片;与野生型亲本(WT)相比,转LcC2DP1基因百脉根(TP)的不定根分化提前1~2 d;在不定根分化的9~15 d,其总根长分别是WT的168%、155%,根体积分别是WT的249%、161%,根尖数分别是WT的156%、137%。TP百脉根的总根长(P<0.01)、根体积(P<0.01)和根尖数(P<0.05)表现出一定的发育优势,表明LcC2DP1基因可能与百脉根不定根发育调控相关。 展开更多
关键词 百脉根 不定根分化 钙依赖蛋白激酶 C2结构域蛋白 基因克隆 生长发育调控
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蜡梅Chimonanthus praecox(L.)Link COR413蛋白基因(Cpcor413pm1)的分子特性与表达分析 被引量:13
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作者 秦华 眭顺照 +2 位作者 李名扬 雷兴华 余国武 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期547-552,共6页
为研究蜡梅冬季开花过程的抗寒分子机理,在构建蜡梅花cDNA文库及EST分析的基础上,通过随机克隆测序,克隆了1个蜡梅COR413蛋白的cDNA基因,命名为Cpcor413pm1.Cpcor413pm1cDNA长946bp,推测的编码蛋白CpCOR413PM1包含201个氨基酸.CpCOR413... 为研究蜡梅冬季开花过程的抗寒分子机理,在构建蜡梅花cDNA文库及EST分析的基础上,通过随机克隆测序,克隆了1个蜡梅COR413蛋白的cDNA基因,命名为Cpcor413pm1.Cpcor413pm1cDNA长946bp,推测的编码蛋白CpCOR413PM1包含201个氨基酸.CpCOR413PM1蛋白N端保守性差,没有信号肽,具有5个保守的跨膜区,1个潜在的GPI锚点,具有可能对蛋白结构或活性十分重要的位置保守的7个Pro、1个Cys,1个被富Gly区一分为二的α螺旋区域,以及Tyr、Thr、Ser磷酸化位点各1个.序列比较分析表明,Cpcor413pm1是首次从蜡梅中克隆到的COR413蛋白基因.RT-PCR分析表明,该基因在蜡梅的萌动期、蕾期、露瓣期、初开期、盛开期、衰老期均有表达,但在初开期和盛开期表达丰度更高,推测Cpcor413pm1与蜡梅花的抗冻性有密切关系. 展开更多
关键词 蜡梅 COR413蛋白 Cpcor413pm1基因 抗寒
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薄荷茉莉酸受体McCOI1a基因的克隆与表达模式分析
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作者 唐伟林 康琴 +6 位作者 汪霞 谌明洋 孙欣江 王棵 侯凯 吴卫 徐东北 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期270-280,共11页
【目的】茉莉酸(jasmonic acid,JA)受体COI1在调节植物生长发育、逆境响应方面具有重要作用。克隆薄荷McCOI1a基因,并分析其蛋白特征与表达模式,为薄荷分子育种提供基因资源。【方法】基于转录组数据从薄荷叶片中克隆McCOI1a,并通过生... 【目的】茉莉酸(jasmonic acid,JA)受体COI1在调节植物生长发育、逆境响应方面具有重要作用。克隆薄荷McCOI1a基因,并分析其蛋白特征与表达模式,为薄荷分子育种提供基因资源。【方法】基于转录组数据从薄荷叶片中克隆McCOI1a,并通过生物信息学分析、烟草叶片瞬时表达、实时荧光定量PCR技术对McCOI1a的蛋白特性、亚细胞定位、基因表达模式进行分析。【结果】McCOI1a基因全长1842 bp,编码613个氨基酸;McCOI1a蛋白具有保守的F-box和LRR结构域,与丹参SmCOI1蛋白同源性最高;亚细胞定位结果显示McCOI1a蛋白定位于细胞核;McCOI1a在不同组织中均有表达,在根中表达量最高,在叶序中表达呈逐渐上升的趋势;在叶片中,McCOI1a在MeJA、干旱、NaCl、AlCl3、CdCl2、CuCl2处理下的表达呈不同程度的上调,并且AlCl3处理下其上调最明显,表达量最高可达1206倍;在根中,McCOI1a的表达在CuCl2处理下呈先下调而后上调的模式,在其余处理下,McCOI1a的表达都呈现出不同程度的下调。【结论】McCOI1a响应MeJA和非生物逆境胁迫,可能在调控薄荷生长发育、逆境响应方面发挥重要作用。 展开更多
关键词 薄荷 McCOI1a基因 蛋白特征 胁迫响应 表达分析
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转晚期胚胎发生丰富蛋白(LEA)基因棉花及抗旱性分析 被引量:19
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作者 裴金玲 杨红兰 +4 位作者 李春平 张大伟 李小双 蔡明 张道远 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期331-337,共7页
本研究将紫杆柽柳(Tamarix and rossowii Litv)晚期胚胎发生丰富蛋白(LEADQ663481)基因导入新疆早熟棉新陆早18号,通过冬季海南加代、夏季新疆继代的方法获得T3代转基因棉花株系。从40株大田卡那霉素检测阳性植株中,经过PCR筛选证明3株... 本研究将紫杆柽柳(Tamarix and rossowii Litv)晚期胚胎发生丰富蛋白(LEADQ663481)基因导入新疆早熟棉新陆早18号,通过冬季海南加代、夏季新疆继代的方法获得T3代转基因棉花株系。从40株大田卡那霉素检测阳性植株中,经过PCR筛选证明3株为阳性的转化株。在室内条件下,对转化株幼苗进行水培实验,并用12%(w/v)PEG-6000处理12h模拟干旱胁迫。结果显示,干旱胁迫之后,转LEA基因棉花基因表达量显著增加;丙二醛生成量显著降低;游离脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白的生成量显著增加;棉花表型分析也证明了转LEA基因棉花抗旱性有提高。培养45d后,转LEA基因棉花的生物量高于非转基因棉花。本研究结果表明,在干旱胁迫条件下,转LEA基因棉花表现出了优良的生长和生理优势,显示出转LEA基因棉花能提高棉花的抗旱能力。 展开更多
关键词 棉花(Gossypium hirsutum l.) 晚期胚胎发生丰富蛋白基因 转基因 抗旱性
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鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆与P基因的表达鉴定 被引量:10
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作者 刘玉良 吴艳涛 +3 位作者 黄勇 邵卫星 韦栋平 刘秀梵 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期37-40,共4页
将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM Teasy载体 ,再分别亚克隆到真核表达载体pCI neo上 ,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框 (ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点 ,将... 将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM Teasy载体 ,再分别亚克隆到真核表达载体pCI neo上 ,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框 (ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点 ,将报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)基因克隆进P基因真核表达重组质粒 ,分别转染COS 1细胞和CEF细胞 ,在倒置荧光显微镜下可见到绿色荧光 ,表明GFP基因已得到表达 ,由此证明P基因也已得到表达。鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆成功 。 展开更多
关键词 新城疫病毒 NP、P和l基因 绿色荧光蛋白 表达
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芥菜SRO基因家族全基因组鉴定与表达分析
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作者 杨巍 赵丽芬 +7 位作者 唐兵 周麟笔 杨娟 莫传园 张宝会 李飞 阮松林 邓英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期129-141,共13页
【目的】SRO基因家族是植物特有的一类转录因子,在植物生长发育与胁迫响应中具有重要作用,研究芥菜SRO基因家族,为解析芥菜SRO基因功能与遗传改良提供理论依据。【方法】利用生物信息学鉴定油用芥菜与菜用芥菜基因组中的SRO基因家族成员... 【目的】SRO基因家族是植物特有的一类转录因子,在植物生长发育与胁迫响应中具有重要作用,研究芥菜SRO基因家族,为解析芥菜SRO基因功能与遗传改良提供理论依据。【方法】利用生物信息学鉴定油用芥菜与菜用芥菜基因组中的SRO基因家族成员,运用TBtools、MEGA、Cytoscape、NCBI、STRING、EggNOG等软件与数据库进行理化性质、序列特征、进化关系、调控网络等分析以及RT-qPCR分析盐胁迫下的表达模式。【结果】两种类型芥菜SRO基因家族成员数量存在差异,并分属A与B两大类,其中A类SRO蛋白含有WWE、PARP及RST结构域,而B类蛋白则缺少WWE结构域,SRO基因启动子区域含有多种非生物胁迫响应与激素响应的顺式作用元件,microRNA-BjuSRO-靶基因构建复杂调控网络,参与了细胞凋亡、根系形态建成、免疫应答、异源刺激的细胞反应、对活性氧的反应等生物学过程,油用芥菜BjuOSRO基因与甘蓝SRO基因具有较近的进化关系,RT-qPCR结果显示,在盐胁迫下BjuVA1a、BjuVA1e、BjuVA2a、BjuVA3a、BjuVB1b、BjuVA2a显著上调表达。【结论】芥菜SRO基因家族具有功能多样性,BjuVA1a、BjuVA1e、BjuVA2a、BjuVA3a、BjuVB1b、BjuVA2a与盐胁迫响应密切相关,可作为培育耐盐型芥菜新品种的候选基因。 展开更多
关键词 芥菜 SRO转录因子 生物信息学 MICRORNA调控 蛋白互作 GO富集分析 进化分析 基因表达分析
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RT-PCR克隆籼稻叶绿素a/b结合蛋白基因全长cDNA及序列的in silico分析 被引量:5
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作者 袁定阳 余东 +4 位作者 谭炎宁 孙志忠 韶也 孙学武 段美娟 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期173-177,共5页
根据日本晴cab4基因序列(GenBank:AK104499.1)设计引物,用RT-PCR的方法从籼稻9311中克隆了叶绿素a/b结合蛋白基因的全长cDNA,命名为cab-9311(cab gene from 9311)。insilico分析表明:cab-9311与cab4基因同源性为99%,编码的蛋白含有244... 根据日本晴cab4基因序列(GenBank:AK104499.1)设计引物,用RT-PCR的方法从籼稻9311中克隆了叶绿素a/b结合蛋白基因的全长cDNA,命名为cab-9311(cab gene from 9311)。insilico分析表明:cab-9311与cab4基因同源性为99%,编码的蛋白含有244个氨基酸,与cab4基因编码的蛋白同源性为98%。蛋白分子质量为26.9kD,理论等电点为6.52。第54位~第216位氨基酸是一个典型的叶绿素a/b结合蛋白功能域(chlorophyll a/bbinding domain)。跨膜分析和蛋白质三级预测显示,该蛋白在C端有一个典型的跨膜区。亚细胞定位分析表明该蛋白定位于叶绿体,是一个叶绿体内囊体膜上的锚定蛋白。 展开更多
关键词 水稻 叶绿素a/b结合蛋白基因 克隆 in silico分析
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家蚕组织蛋白酶L(BmCathepsin L)基因鉴定、表达及其功能分析 被引量:3
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作者 潘光照 张奎 +6 位作者 李重阳 赵羽卒 申利 徐曼 苏晶晶 林西 崔红娟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第16期3236-3246,共11页
【目的】鉴定克隆家蚕组织蛋白酶L基因BmCathepsin L(BmCat L),分析其序列和表达特征。分析家蚕组织蛋白酶L在大肠杆菌诱导下m RNA表达量的变化趋势,为进一步研究家蚕组织蛋白酶L的功能打下基础。【方法】基于家蚕基因组数据库(Silk DB... 【目的】鉴定克隆家蚕组织蛋白酶L基因BmCathepsin L(BmCat L),分析其序列和表达特征。分析家蚕组织蛋白酶L在大肠杆菌诱导下m RNA表达量的变化趋势,为进一步研究家蚕组织蛋白酶L的功能打下基础。【方法】基于家蚕基因组数据库(Silk DB)中序列BGIBMGA006893设计引物,利用RACE技术克隆家蚕组织蛋白酶L基因的cDNA全长序列,通过在线工具对基因结构和蛋白质分子量及等电点进行预测;在NCBI数据库下载其他物种组织蛋白酶L同源序列,利用Clustalx(1.83)和MEGA 6.0软件进行同源比对并构建进化树。运用RT-PCR和qRT-PCR对其时空表达特征进行分析。选取该基因的特异性片段,经PCR扩增,测序验证后将其连接至pET-28载体,转化至Rosseta感受态表达菌株,经IPTG在适宜温度条件下诱导,获得组织蛋白酶L重组蛋白。然后再利用镍离子亲和层析法对该蛋白进行纯化,获得纯度较高的重组蛋白。最后利用大肠杆菌对家蚕血液系统进行攻毒,检测家蚕组织蛋白酶L基因的表达水平。【结果】通过查询家蚕基因组数据库和生物信息学分析得出,家蚕组织蛋白酶L基因定位于家蚕第10号染色体上,基因编号为BGIBMGA006893,nscaf2860。基因开放阅读框全长687 bp,编码228个氨基酸,含有保守的Pept_C1结构域。通过在线网站预测,得出该蛋白酶的分子量为26.132 k D,等电点为4.57。进化分析表明该基因与同为鳞翅目昆虫的草地贪夜蛾和黑脉金斑蝶亲缘关系最为接近。RT-PCR显示该基因集中表达于血细胞,在血液不同龄期也较高表达。用His抗体检测经纯化后的蛋白,最终成功孵育出纯化后的蛋白条带;大肠杆菌个体攻毒免疫试验检测显示,其mRNA表达水平随攻毒时间呈现抛物线式的显著性变化规律,从而揭示出BmCat L与家蚕免疫系统的关联性。【结论】克隆获得家蚕组织蛋白酶L基因的cDNA序列,发现其特异性高表达于血细胞。通过原核表达和蛋白纯化成功获得了该基因的重组蛋白。大肠杆菌的刺激能够显著上调其表达,推测组织蛋白酶L可能参与家蚕免疫反应。 展开更多
关键词 组织蛋白酶l基因 家蚕 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 免疫应激
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黄瓜S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶全长cDNA的克隆及表达分析 被引量:3
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作者 金晓霞 秦智伟 +1 位作者 周秀艳 武涛 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1338-1346,共9页
【目的】克隆黄瓜S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶基因的cDNA,并进行生物信息学和表达分析,为研究该基因的功能奠定基础。【方法】通过对乙烯利诱导黄瓜茎尖SSH文库的筛选,采用RT-PCR和电子克隆技术,获得黄瓜CsSAHH基因的cDNA全长序列(NCBI编... 【目的】克隆黄瓜S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶基因的cDNA,并进行生物信息学和表达分析,为研究该基因的功能奠定基础。【方法】通过对乙烯利诱导黄瓜茎尖SSH文库的筛选,采用RT-PCR和电子克隆技术,获得黄瓜CsSAHH基因的cDNA全长序列(NCBI编号:HQ444960,CsSAHH)。运用半定量RT-PCR,分析CsSAHH基因在乙烯利诱导后的茎尖和雌雄花不同部位的表达。通过生物信息学方法预测CsSAHH基因的蛋白结构。【结果】黄瓜CsSAHH基因的cDNA全长1 545 bp,编码485个氨基酸,其理论上的等电点pI=5.66,分子量MW=53.1 kD。CsSAHH基因在黄瓜茎尖受乙烯利诱导增强表达,在黄瓜雄花中的雄蕊表达较弱。CsSAHH理化性质表明,该蛋白无明显的信号肽;蛋白二级结构主要由loop环和α螺旋构成,含少量的β折叠,预测发现该蛋白分别在85—99氨基酸残基和262—279氨基酸残基处各有1个S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶活性功能区。CsSAHH基因氨基酸序列与苜蓿的同源性为63%,与水稻、玉米、拟南芥等作物同源性较低。【结论】成功克隆黄瓜CsSAHH基因cDNA序列,在85—99氨基酸残基和262—279氨基酸残基处各有1个S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶活性功能区。该基因在茎尖受乙烯利诱导增强表达,在雄蕊中表达较弱。在未处理的雌雄花芽发育不同阶段,雌花芽中表达强于幼果和雄花芽。 展开更多
关键词 黄瓜 S-腺苷-l-高半胱氨酸水解酶 克隆 表达 蛋白结构预测
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桑树乳汁蛋白基因MLX56的克隆及生物学功能分析 被引量:2
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作者 莫瑶瑶 张华梁 +5 位作者 郭方月 王红 刘琪 袁传忠 盖英萍 冀宪领 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期974-981,共8页
MLX56是一种分子质量为56 k D,对多种鳞翅目昆虫具有毒性的桑树韧皮部汁液蛋白。利用PCR技术从桑品种湖桑32号的桑树叶片中克隆了MLX56基因,命名为Ma MLX56(Gen Bank登录号:JX432966)。该基因编码区全长为1 203 bp,编码蛋白质含有400个... MLX56是一种分子质量为56 k D,对多种鳞翅目昆虫具有毒性的桑树韧皮部汁液蛋白。利用PCR技术从桑品种湖桑32号的桑树叶片中克隆了MLX56基因,命名为Ma MLX56(Gen Bank登录号:JX432966)。该基因编码区全长为1 203 bp,编码蛋白质含有400个氨基酸,有3个典型的保守结构域,具有信号肽序列,是一种分泌型蛋白质。将克隆得到的Ma MLX56编码区片段插入植物表达载体p BI121,构建植物表达载体p BI121-Ma MLX56,并转化拟南芥获得了转基因植株。转基因拟南芥分别接种甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae)和丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv.Tomato DC3000,Pst DC3000)后,植株呈现出较强的抗虫性和抗Pst DC3000侵染能力,推测Ma MLX56在桑树响应生物胁迫过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 桑树 乳汁蛋白 MA MlX56基因 转基因拟南芥 抗性
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白鹭源禽Ⅰ型副粘病毒L基因的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 何奇松 孙翔翔 +4 位作者 易春华 蒋家霞 付薇 马琳 熊毅 《广西农业科学》 CSCD 2010年第5期481-484,共4页
根据GenBank中已发表的鹅副粘病毒GPV-SF02株全基因组序列设计5对引物,采用RT-PCR扩增出白鹭源禽I型副粘病毒(W13株)L基因的LA(1121 bp)、LB(1481 bp)、LC(1439 bp)、LD(1476 bp)、LE(1608 bp)5个片段,用DNA Star软件比较分析后进行拼接... 根据GenBank中已发表的鹅副粘病毒GPV-SF02株全基因组序列设计5对引物,采用RT-PCR扩增出白鹭源禽I型副粘病毒(W13株)L基因的LA(1121 bp)、LB(1481 bp)、LC(1439 bp)、LD(1476 bp)、LE(1608 bp)5个片段,用DNA Star软件比较分析后进行拼接,获得长约6760 bp包含有L基因全长的核苷酸序列,而W13株L基因的mRNA全长为6704 bp、开放阅读框(ORF)为6615个碱基、编码2204个氨基酸。氨基酸同源性分析表明:W13株L基因与鹅源SF02、ZJl、NA-1株及鸡源Guangxi7株的同源性均超过97.0%;而核苷酸同源性分析表明:W13株L基因与鹅源SF02、ZJl、NA-1株及鸡源Guangxi7株的同源性均超过93.0%。可见,W13株与鹅源SF02、ZJl、NA-1株及鸡源Guangxi7株的亲缘关系较近。 展开更多
关键词 禽I型副粘病毒 l基因 克隆 序列分析
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葡萄F-box基因VvSLY1的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 王西成 吴伟民 +3 位作者 王壮伟 赵密珍 周蓓蓓 钱亚明 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期959-966,共8页
SLEEPY1(SLY1)属于F-box蛋白,是SCF复合体的主要组成元件之一,在赤霉素信号转导过程中发挥着重要的调节作用。本研究以夏黑葡萄为试材,利用电子克隆和RT-PCR技术克隆获得一个F-box蛋白基因全长c DNA序列,命名为VvSLY1。该基因全长为1096... SLEEPY1(SLY1)属于F-box蛋白,是SCF复合体的主要组成元件之一,在赤霉素信号转导过程中发挥着重要的调节作用。本研究以夏黑葡萄为试材,利用电子克隆和RT-PCR技术克隆获得一个F-box蛋白基因全长c DNA序列,命名为VvSLY1。该基因全长为1096 bp,包含1个555 bp的完整开放阅读框(ORF),编码184个氨基酸。序列比对和结构域分析结果表明,该VvSLY1包含F-box蛋白家族的LGG和LSL保守结构域。进化树分析结果显示,VvSLY1与可可亲缘关系最近。qRTPCR分析结果表明,在果实快速膨大发育阶段,外源赤霉素GA3处理会促进该基因的上调表达。 展开更多
关键词 葡萄 F-BOX蛋白 VvSlY1基因 克隆 基因表达
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头穴电针对脑出血大鼠脑组织GLUT-1及其基因表达的影响 被引量:3
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作者 鲍春龄 李璟 东红升 《上海中医药大学学报》 CAS 2008年第2期50-54,共5页
目的:研究大鼠脑出血后血肿周围组织葡萄糖载体蛋白-1(GLUT-1)、GLUT-1mRNA表达的动态变化规律及头穴透刺治疗作用。方法:将雄性Wistar大鼠144只随机分为假手术组、模型组、针刺组,每组又分为24h、72h、168h三个小组,采用胶原酶/肝素联... 目的:研究大鼠脑出血后血肿周围组织葡萄糖载体蛋白-1(GLUT-1)、GLUT-1mRNA表达的动态变化规律及头穴透刺治疗作用。方法:将雄性Wistar大鼠144只随机分为假手术组、模型组、针刺组,每组又分为24h、72h、168h三个小组,采用胶原酶/肝素联合注入法制备脑出血大鼠模型。针刺组给予百会透太阳穴电针治疗,按指定时间断头取脑,取血肿周围3mm范围内组织,分别采用免疫组织化学法检测GLUT-1和RT-PCR法检测GLUT-1mRNA表达的变化。结果:脑出血后,模型组三个时间点均见大部分GLUT-1阳性微血管形态变窄、皱缩、闭塞,越靠近病灶越严重;与假手术组比较,模型组GLUT-1及GLUT-1mRNA表达24h时失代偿性升高(P<0.05),72h、168h时失代偿性降低(P<0.05)。针刺组:仅在24h时血肿周围出现了轻微的管腔狭窄,之后大部分血管表现为管腔呈圆形扩张;GLUT-1与GLUT-1mRNA表现相同的变化趋势,即与假手术组比较,24h时变化不明显,72h、168h时出现降低(P<0.05),且各时间点与模型组有明显差异(P<0.05)。结论:头穴电针能扩张血管,改善供血,减轻血管内皮细胞的损伤,故能推迟GLUT-1及GLUT-1mRNA病变的发生,延长治疗时间窗。 展开更多
关键词 头针 脑出血 葡萄糖载体蛋白-1 基因
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菊芋14-3-3基因家族的鉴定及其对非生物胁迫响应的分析
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作者 任文才 岳杨 +2 位作者 丁柏水 高秀美 周兆胜 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期477-488,共12页
[目的]本文旨在鉴定菊芋14-3-3基因家族成员并分析它们对高温、低温、盐和干旱胁迫响应的表达模式,为研究14-3-3蛋白功能及菊芋育种提供依据。[方法]采用克隆和生物信息学研究基因性质,采用RNA-seq数据分析和RT-qPCR研究基因对非生物胁... [目的]本文旨在鉴定菊芋14-3-3基因家族成员并分析它们对高温、低温、盐和干旱胁迫响应的表达模式,为研究14-3-3蛋白功能及菊芋育种提供依据。[方法]采用克隆和生物信息学研究基因性质,采用RNA-seq数据分析和RT-qPCR研究基因对非生物胁迫的响应模式。[结果]从菊芋中克隆到14-3-3基因家族的10个成员HtGRF1—HtGRF10,GenBank登录号为OP132618—OP132627。根据进化关系将其分为2个亚家族:HtGRF1—HtGRF7属于非ε组,HtGRF8—HtGRF10属于ε组,通常形成同源或异源二聚体。组织表达分析表明,HtGRF2/3/6/9在芽、根、茎、叶中的表达丰度较高,HtGRF3/5/9在块茎发育过程中前高后低。综合分析根和叶中HtGRF对非生物胁迫响应时发现,HtGRF6表达水平在高温、盐和干旱胁迫下下降;HtGRF2/3/7/8/9表达水平在盐胁迫下下降,而在干旱胁迫下上升;HtGRF1表达水平在低温胁迫下上升;HtGRF4/5表达水平在干旱胁迫下下降;而HtGRF10表达水平变化不显著。[结论]菊芋14-3-3蛋白是一个高度保守的多基因编码家族,在菊芋的生长发育和适应复杂环境中起着重要作用。 展开更多
关键词 菊芋 14-3-3蛋白 基因克隆 组织表达 非生物胁迫
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NaCl胁迫对胡麻种子萌发、幼苗生长及Na^+/H^+逆向转运蛋白基因表达的影响 被引量:2
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作者 赵东晓 董亚茹 +4 位作者 孙景诗 耿兵 王照红 郭洪恩 王向誉 《山东农业科学》 2020年第7期40-45,共6页
为研究胡麻种子萌发和幼苗生长期对不同浓度NaCl胁迫的响应情况,以胡麻品种定亚17号为材料,研究了0、50、100、150、200mmol/L NaCl胁迫下胡麻种子萌发及幼苗生长情况。结果表明:随着NaCl浓度的增加,胡麻种子的发芽势、发芽率、发芽指... 为研究胡麻种子萌发和幼苗生长期对不同浓度NaCl胁迫的响应情况,以胡麻品种定亚17号为材料,研究了0、50、100、150、200mmol/L NaCl胁迫下胡麻种子萌发及幼苗生长情况。结果表明:随着NaCl浓度的增加,胡麻种子的发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数均呈现逐渐下降的趋势,而幼苗的株高、根长、地上部和根部的鲜重和干重则呈现先升高后下降的趋势,在50mmol/L NaCl胁迫下高于对照,NaCl浓度高于100mmol/L时逐渐下降。NHX基因在叶片和根中均有表达,表达量均与NaCl浓度正相关,且根部受诱导程度高于叶片。 展开更多
关键词 NACl胁迫 胡麻 萌发特性 幼苗生长 NA^%PlUS%/H^%PlUS%逆向转运蛋白基因
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