青岛市胶州地区B(A)亚型患者的血型血清学及基因检测分析

目的调查并分析青岛市胶州地区某三级医院就诊患者B(A)亚型的血清学及分子生物学特征。方法2019年11月至2023年2月,12名患者血液标本经微柱玻璃珠法和盐水试管法ABO血型检测疑为AB亚型,进一步对其ABO基因第6、7外显子进行直接扩增、测序和分析,确定ABO等位基因型别。结果青岛市胶州地区26065名患者中共检测发现9例B(A)亚型,检出率为0.345‰(9/26065);9例B(A)亚型中,8例血清学反应表现A_(w)B,基因检测为BA.04基因与O基因杂合,1例血清学反应表现为ABw,基因检测为BA.04基因与A基因杂合。结论血型血清学结合基因检测可准确鉴定ABO血型,在AB_(w)血清学反应的个体中,有可能存在B(A)亚型等位基因。

山东省ABO亚型等位基因的分析研究

目的对山东省内医疗机构及血站送检的疑似ABO亚型的标本进行血清学、ABO基因测序及单倍型序列测定,分析山东省人群ABO亚型等位基因的分布和分子机制。方法血清学检测疑似为ABO亚型的无偿献血者标本239例及临床就诊患者标本701例,共940例采用PCR-SBT方法进行ABO基因序列分析;采用单克隆测序方法检测单体型;软件分析比对测序结果,确定该标本的等位基因型。结果分子测序发现山东省A基因亚型等位基因12种,以ABO*A2.05最为常见;B基因亚型等位基因15种,以ABO*BW.03最为常见;复合型ABO糖基转移酶基因6种,以ABO*BA.04最为常见;嵌合体血型6例。结论山东省B亚型的数量和种类均多于A亚型;A亚型以ABO*A2.05和ABO*A3.07最为常见;B亚型以ABO*BW.03和ABO*BW.27多见;ABO*BA.04和ABO*cisAB.01等位基因是最常见的复合型ABO糖基转移酶等位基因类型。

B(A)血型的鉴定及临床输血探讨

目的对B(A)血型进行血型血清学及分子生物学鉴定,分析探讨此类血型的合理输血方法。方法采用血清学和直接测序的方法对7例B(A)血型标本进行血清型和基因型检测,用盐水介质和抗人球蛋白卡交叉配血,分析7例标本输注红细胞的方案。结果7例标本的血型血清学结果相似,基因型中有3例为B(A)04/O01,2例为B(A)04/O02,2例为B(A)02/O01。7例B(A)血型标本与O型和B型献血者和标本主侧配血均为阴性。结论B(A)血型应结合基因分型技术正确定型,B(A)血型红细胞输血可选择O型和B型洗涤红细胞。

初治弥漫大B细胞淋巴瘤患者化疗后T淋巴细胞亚群变化

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤患者的细胞免疫状态改变及其预测预后的意义。方法回顾性分析复旦大学附属中山医院厦门医院血液科2018年2月至2020年12月收治的28例初治弥漫大B细胞淋巴瘤患者。用流式细胞仪检测患者化疗前后不同时期外周血T淋巴细胞亚群变化。结果与化疗前相比,患者化疗后外周血CD4^(+)T淋巴细胞计数及CD4^(+)/CD8^(+)比值均降低。CD4^(+)T淋巴细胞计数在化疗4个周期及6个周期后显著低于化疗前(P<0.05),在化疗4个周期后达最低值[(0.245±0.086)×10^(9)/L]。CD4^(+)/CD8^(+)比值在化疗4个周期后、化疗6个周期后、化疗结束后3个月及化疗结束后6个月显著低于化疗前(P<0.05)。终末疗效为完全缓解的患者化疗6个周期后CD4^(+)T淋巴细胞计数及CD4^(+)/CD8^(+)比值高于非完全缓解患者(P<0.05)。复发患者化疗6个周期后CD4^(+)T淋巴细胞计数低于未复发患者(P=0.030)。结论弥漫大B细胞淋巴瘤患者化疗后存在细胞免疫受损,主要表现为CD4^(+)T淋巴细胞计数在治疗后6个月内先降低后恢复,其化疗早期降低程度可能与患者预后有关。

T淋巴细胞亚群和肝功能指标与慢性乙型肝炎患者中医辨证分型的相关性

目的 分析T淋巴细胞亚群和肝功能指标与慢性乙型肝炎(CHB)患者中医辨证分型的相关性,为临床中医辨证分型、治疗方案选择和疗效观察提供科学依据。方法 选取2020年1—12月乐山市中医医院983例CHB患者,其中中医辩证分型实证270例(湿热中阻证75例、瘀血阻络证195例)、虚证713例(肝郁脾虚证662例、肝肾阴虚证28例、脾肾阳虚证23例)。检测各证型患者肝功能相关指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DBil)]和T细胞(CD3~+、CD4~+、CD8~+)计数,分析各项指标与CHB中医证型的相关性。结果 肝郁脾虚证、瘀血阻络证、湿热中阻证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚证临床CHB频率依次升高。CHB各证型中,脾肾阳虚证患者年龄最大,湿热中阻证患者年龄最小。各证型间肝功能相关指标和T淋巴细胞计数差异均有统计学意义(P<0.05);CD3~+、CD4~+T细胞计数与湿热中阻证呈正相关(P<0.05),与脾肾阳虚证呈负相关(P<0.05)。结论 T淋巴细胞亚群和肝功能相关指标与CHB患者中医辨证分型存在相关性,可为临床中医辨证分型、治疗方案选择和疗效观察提供客观依据。

中国汉族人群检出新的B(A)641T>C等位基因

目的明确稀有ABO表现型的遗传学基础。方法对ABO血清学常规定型正反不一致的样本,采用PCR-RFLP方法作初步基因分型,对8例血清学表现为AwB,而基因分型具有O基因的个体,进行ABO基因第6和7外显子PCR产物的TA克隆及核苷酸序列测定。结果8例样本除1对为母女关系外,其余无任何亲缘关系,血清学表现相似,红细胞上含有接近正常的B抗原和少量A抗原,H抗原含量较正常B细胞显著增高,血清中存在抗-A,初定为AwB,基因分型均为BO。克隆测序表明除具有正常O1或者O1V基因外,他们的B基因第7外显子在正常B等位基因的基础上,均发生单碱基突变,4例发生nt700C>G点突变,导致Pro234Ala,2例无关个体为nt640A>G点突变,导致Met214Val,1对母女均表现nt641T>C点突变,导致Met214Thr。证实所有8例样本真正血型应为B(A)表现型,其基因型均为B(A)/O型。结论在中国汉族人群中检出3种B(A)血型,除了已在我国台湾首先被发现的B(A)700C>G和笔者以前报道的B(A)640A>G之外,新发现1种B(A)641T>C等位基因。

猪脾转移因子增强禽白血病病毒A/B亚群抗体阳性鸡群免疫水平的研究

为了解猪脾转移因子(TF)对禽白血病病毒A/B亚群(ALV—A/B)抗体阳性鸡群免疫水平的影响,本研究以新城疫(ND)HI试验和淋巴细胞增殖试验分别检测ND HI抗体效价(log2x)和刺激指数(SI)作为指示参数,采集特佳、罗曼、海兰和伊莎共4个品种蛋鸡血样,并从中选出各60羽份(ALV-A/B抗体阳性、阴性鸡各半,ALV p27抗原均为阴性),将4个品种的ALV-A/B抗体阳性蛋鸡均分为实验组(联合接种TF 0.02 mL+NDV La Sota疫苗1羽份/羽,TF多肽含量为3.5 mg/mL,核糖含量为72.0μg/mL,脱E受体法效力检验活力为15%)和对照组(单独接种NDV La Sota疫苗1羽份/羽),于接种后21 d采血检测。结果显示,ALV-A/B抗体阳性鸡群(120羽份)的ND HI抗体效价均值(6.1±1.3)与阴性鸡群(120羽份)均值(6.2±1.3)差异不显著,但其SI均值(1.20±0.10)显著低于阴性鸡群(1.35±0.10)(p<0.05);实验组(60羽份)的ND HI抗体效价和SI均值(9.0±1.3,1.73±0.15)显著高于对照组(60羽份)均值(7.8±1.2,1.39±0.16)(p<0.05)。研究结果表明,ALV-A/B抗体阳性与鸡ND HI抗体效价相关性不大,而对SI具有抑制作用;TF具有增强ALV-A/B抗体阳性鸡群免疫水平的作用。

B亚型中Bx新等位基因的鉴定

目的对ABO血型中B亚型分子遗传背景的研究,发现并鉴定ABO新等位基因。方法对5份血型血清学鉴定为B亚型的样本,采用PCR-SSP、ABO基因第6及第7外显子直接测序方法进行基因定型;并对目的B亚型样本进行RT-PCR、巢式PCR扩增、测序,分析其cDNA结构的差异。结果5份血清学为B亚型的样本中,血清学鉴定为Bx的个体发现了一个新的B等位基因。该等位基因与B101等位基因相比,差异仅在于第7外显子的B基因序列中nt721位C>T突变。其余4份B亚型样本的ABO基因第6、7外显子都未发现新的点突变。结论首次在中国汉族人中发现一个721C>T新变异的B等位基因,该等位基因nt721位由C转变为T,241位氨基酸由精氨酸转变为色氨酸,可导致糖基转移酶活性的降低,表明ABO基因的第241位氨基酸对决定糖基转移酶活性是至关重要的。

罕见B(A)血型的鉴定

目的观察2例罕见B(A)血型的血清学特征并研究其分子机制。方法用血型血清学鉴定2例献血者标本ABO血型,用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)基因分型和直接测序确定其基因型。结果 2例献血者血型血清学检测结果均表现为B(A)亚型的特点。标本1基因分型为BO2,测序结果为第7外显子B基因发生640A>G突变,符合B(A)04/O02的基因型特点;标本2基因分型为BO1,测序结果为第7外显子B基因发生700C>G突变,符合B(A)02/O01的基因型特点。结论2例标本均为B(A)表现型,基因型分别为B(A)04/O02和B(A)02/O01。

B(A)血型等位基因分型研究

目的了解血清学定型为B(A)血型标本的分子基础。方法采用PCR-SSP方法检测以血清学方法定型为B(A)血型的4名献血者和8例送检患者标本的ABO基因型;对于有O等位基因的杂合子标本,使用特异性引物分别扩增O和B等位基因的7号外显子编码序列,并做测序分析。结果 12例采用血清学方法定为B(A)血型标本的ABO基因型分别为B/B型1例(8.33%),B/O1型4例(33.33%),B/O2型7例(58.33%);序列分析显示:B(A)02等位基因为5例(41.67%),B(A)04等位基因为7例(58.33%)。结论 B(A)04和B(A)02等位基因可能是我国北方汉族人群B(A)血型中主要的遗传类型。

在1名幼儿及其家系中发现538C>T变异新B等位基因

目的对1名ABO血型正反定型不符的患儿及其家属做ABO血型血清学鉴定和基因检测以弄清原因。方法采用常规血型血清学方法检测患儿ABO血型,以PCR-SSP方法对患儿做ABO基因及ABO血型B亚型基因分型鉴定,并对ABO等位基因直接测序;最后对患儿做家系调查。结果血清学检测:患儿ABO血型为ABx亚型;ABO基因测序并将结果与NCBI网站数据库中ABO血型基因序列比对:患儿除有1个正常的A102基因外,还存在1个未见报道新的点突变型(538C>T)B型变异基因,该位点变异使得基因产物B糖基转移酶第180位氨基酸由精氨酸转变为半胱氨酸,使抗原表达减弱,改变了血型表现型;家系调查:患儿父亲、奶奶、姑姑都拥有相同的新型B变异基因。结论首次在中国汉族儿童中发现1例新的538C>T变异B型等位基因,该B变异基因具有家族遗传性;而且当它与O基因等位共存时,血清学表现型为正常B型,当它与A基因等位共存时,血清学表现出ABx亚型。

B(A)血型的血清学和分子生物学定型及患者临床输血策略研究

目的对B(A)血型进行血清学和分子生物学定型,并对B(A)血型患者的血样进行分析,研究此类血型患者的输血策略。方法对58例正反定型不符的医院送检样本和本中心的献血员血样采用试管法鉴定ABO血型,同时采用PCR-SSP方法进行ABO基因分型;采用盐水介质和Liss-coombs卡交叉配血,分析论证38例该血型患者输注B型红细胞的可行性。结果 58例血样经血清学和分子生物学定型为B(A),其中39例为B(A)04,19例为B(A)02。38例临床医院送检的B(A)病例,与随机选择的100位B型献血员交叉配血,除1例有高效价抗-A的献血员与2例患者次侧盐水介质W+外,其余均相合。结论 B(A)血型有明确的血清学特异性,分子生物学定型B(A)02和B(A)04较常见,B(A)患者优先考虑输注O型洗涤红细胞和AB型血浆、AB型血小板,亦可输注配血相合的B型红细胞,抗-A效价低于128的B型血浆和B型血小板也可考虑输注。

B抗原减弱表型的表型频率与ABO基因分析

目的对血清学表现为B抗原减弱的血液样本进行筛查和ABO基因分析,了解其分布特征和分子遗传学基础。方法筛查并收集B抗原减弱(与抗-B血清试管法凝集强度中等)的样本,采用血型血清学方法进行鉴定分析,采用直接测序的方法对ABO基因的第6、7外显子及第6内含子进行序列分析,对可追踪家庭进行家系分析。结果从241 952份样本中检出13例B抗原减弱表型,其中B型9例、AB型4例;所有样本的红细胞与抗-H反应均增强;其中2例可检出不规则抗-B;ABO基因型分别为A102/B w12(1例)、B101/B101(2例)、B101/O02(3例)、A102/B101(3例)、B101/O01(4例)。在1例基因型为B101/O01个体的家系成员(父亲)中检出相同表型。结论该类表型在B型人群中的频率约为1∶7 000;除1例样本的B等位基因存在278C>T突变(B w12)外,其余样本在第6、7外显子和第6内含子中均未检出突变;ABO基因酶催化活性区域编码序列以外的基因变异,可能是导致B抗原减弱的原因之一。

呼吸道合胞病毒A与B亚型多重荧光PCR检测方法的建立及应用

目的建立一种新的呼吸道合胞病毒(RSV)分型检测方法,用于快速检测和监测。方法针对RSV G基因设计引物、探针,并引入人β-actin基因(ACTB)作为内参质控,建立RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法。使用多种常用呼吸道病原体及体外转录RNA产物考核其特异性和灵敏度。并对2015年1月至12月广州两家医院的儿童急性呼吸道感染患者进行检测。结果所建立的多重检测方法未见非特异性反应。RSV-A、RSV-B和ACTB分别可检测低至4、8和12 copies/μL的RNA模板,且分别在10~1×10^(10)copies/μL、100~1×10^(10)copies/μL和100~1×10^(10)copies/μL时具备良好的线性关系,线性相关系数r2均大于0.99。儿童急性呼吸道感染患者监测中,RSV-A为期间优势亚型。结论本研究所建立的RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法,具有较好的特异性、灵敏度、可操作性,可用于相关研究。

弱B表型的分子生物学基础

目的研究ABO血型中弱B表型的分子生物学背景。方法对3份正反定型不符,血型血清学鉴定为弱B表型的样本,采用序列特异性引物-聚合酶链反应方法进行基因定型。结果 3份血清学为Bw样本中1例基因型结果为O1vB1,2例为O1B1。结论血型基因学检查是对血型血清学检查的补充,有助于疑难血型的正确定型,减少临床血型鉴定错误及相关输血反应的发生。

弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-2、bcl-6、CD_(10)、MUM1蛋白表达与亚分类

目的探讨bcl-2、bcl-6、CD10、MUM1在弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达及与亚分类的关系。方法应用免疫组织化学S-P法,检测60例弥漫性大B细胞淋巴瘤标本中bcl-2、bcl-6、CD10、MUM1蛋白的表达水平。结果bcl-2、bcl-6、CD10、MUM1在60例弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达率分别为55.0%(33/60)、48.3%(29/60)、46.7%(28/60)、58.3%(35/60),其中GCB占55.0%(33/60),non-GCB占45.0%(27/60)。GCB、non-GCB中bcl-2的表达差异具有显著性。在non-GCB中,bcl-6+与bcl-6-的病例bcl-2表达的差异具有显著性。结论该组病例GCB所占的比率超过non-GCB,bcl-2在DLBCL亚分类中可能具有一定的作用。

2例B(A)血型的鉴定

目的对2例标本B(A)血型进行鉴定。方法运用血型血清学、PCR-序列特异性引物(sequence specificprimer,SSP)基因定型和ABO基因第6及第7外显子直接测序的方法,对2例标本的B(A)血型和B(A)型等位基因进行检测。结果 2例标本血清学定型分别为A2B和AxB,PCR-SSP法初筛均为B/O基因型,DNA序列分析测定标本1基因型为B(A)02/O02型,标本2基因型为B(A)02/O01型。结论采用DNA序列分析法才能准确测定华北地区汉族人群中B(A)血型,PCR-SSP法可能引起差错。

大蒜多糖B对免疫抑制小鼠免疫活性的调节

目的:研究大蒜多糖B(GP-B)对免疫抑制小鼠体内免疫活性的调节作用。方法:用氢化可的松(HC)皮下注射制造免疫功能抑制的动物模型,以左旋咪唑作为阳性药物对照。给模型小鼠分别灌胃生理盐水、多糖溶液,连续12 d,灌胃多糖溶液质量分数分别为1600、800和400 mg/kg。通过流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的百分比,计算胸腺指数和脾脏指数,检测脾细胞增殖情况及腹腔巨噬细胞吞噬功能等实验对大蒜多糖B的免疫学活性进行研究。结果:以大蒜多糖B质量分数为800 mg/kg灌胃的小鼠CD3+CD4+T细胞百分率以及CD4+/CD8+比值明显增高(P<0.05),同时免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性显著增强(P<0.05)。但该浓度的GP-B降低了CD3+CD8+细胞百分比(P<0.05),且对脾T淋巴细胞转化率无促进作用。结论:大蒜多糖B对免疫抑制小鼠的T淋巴细胞亚群及巨噬细胞的吞噬功能具有正向调节作用。

病毒性心肌炎患者外周血T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞的研究

目的:测定不同时期病毒性心肌炎(VMC)患者T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞的数量,并同时检测患者血清心肌损害标志物心肌肌钙蛋白I(cTnI)的水平,探讨其在VMC发病机制中的作用。方法:采用流式细胞术检测不同时期VMC患者(n=126)外周血CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+以及CD19+的表达,并设正常人群作为对照组(n=50)。结果:急性期(<3个月)患者CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+以及CD19+与对照组相比差异显著。<1个月以CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+为著(P<0.01;P<0.01)。病程<7 d的患者与对照组相比,CD4+CD45RA+值的降低具有显著性(P<0.01);CD4+CD45RO+值下降明显(P<0.01)。而病程7～14 d、14～21 d及21～30 d的患者CD4+CD45RA+值、CD4+CD45RO+值及CD19+值与对照组相比差异均有统计学意义,CD4+CD45RO+值恢复较快。CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+在发病14 d内的患者与对照组差异无统计学意义;而14～30 d的患者与对照组相比差异有显著性。发病1～3个月患者以CD19+为著(P<0.01)。急性期CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+细胞的比例失衡。恢复期(3～12个月)患者CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+以及CD19+、CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+细胞的比例与对照组相比差异无显著性。结论:VMC患者感染初期(<1个月)以T淋巴细胞亚群异常为主,感染后期(1～3个月)以B淋巴细胞异常较为显著,以上两时期均存在CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+细胞比例失衡。恢复期(3～12个月)T淋巴细胞及B淋巴细胞逐渐恢复至正常。