高压氧对脑缺血再灌注海马神经元Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 :进一步探讨高压氧治疗脑缺血再灌注损伤 ,减轻神经元凋亡从而发挥保护作用的机理。方法 :采用“双侧颈总动脉阻断法”前脑缺血模型 ,对沙土鼠前脑缺血 2 0min后再灌注 3d ,并用 0 .15MPa和 0 .2 5MPa压力的高压氧治疗 (6 0min/d ,连续 3d)后 ,应用免疫组化LSAB方法 ,观察高压氧对海马CA1,区神经元凋亡相关基因bcl 2和bax的蛋白表达的影响。结果 :沙土鼠脑缺血再灌注 3d组海马CA1区大量神经元表达Bax蛋白 ,并且神经元发生凋亡 ,未见神经元表达Bcl 2蛋白 ;高压氧治疗组则大量神经元表达Bcl- 2蛋白 ,并且 0 .2 5MPa高压氧治疗组比0 .15MPa高压氧治疗组变化更显著 ,而各组表达Bax蛋白的神经元数目无明显变化 ,但高压氧治疗组Bax蛋白阳性的神经元形态正常。结论 :HBO暴露可诱导大量神经元表达Bcl- 2蛋白 ,对Bax蛋白表达则无明显作用 ,使Bcl 2和Bax蛋白表达的比值增高 ,从而起到保护神经元的作用 。

局部亚低温对再灌注治疗时间窗的影响

目的:脑缺血再灌注期间进行局部亚低温干预,观察其对再灌注治疗时间窗的影响并研究其机制。方法:将72只Wistar大鼠随机分为假手术组6只;大脑中动脉闭塞(MCAO)24小时组6只;常温再灌注组30只;亚低温再灌注组30只。动物均在再灌注24小时后处死,但MCAO24小时组大脑中动脉闭塞24小时后直接处死。采用TTC染色观察梗死体积,用干-湿质量法测定脑含水量,用原位末端标记(TUNEL)观察神经细胞凋亡的变化,采用免疫组化法检测大鼠模型的Bcl-2、Bax及水通道蛋白4(aquapor-in4,AQP4)的表达。结果:与脑梗死的近期结局MCAO24小时组的梗死体积、脑含水量、TUNEL阳性细胞数、及Bcl-2、Bax、AQP4的表达相比较:常温组MCAO2～3小时再灌注24小时有统计学差异(P<0.01),MCAO4～6小时再灌注24小时没有统计学差异(P>0.05);亚低温组MCAO2～4小时再灌注24小时各组有统计学差异(P<0.01);MCAO5～6小时再灌注24小时没有统计学差异(P>0.05)。亚低温再灌注组各时相点的梗死体积、脑含水量、TUNEL阳性细胞数、Bax、AQP4的表达均显著低于相应常温组,Bcl-2的表达显著高于常温组(P<0.01,P<0.05)。结论:再灌注期间实施局部亚低温可延长再灌注治疗时间窗,其机制可能与抑制Bax的表达提高Bcl-2的表达从而抑制凋亡,抑制AQP4的表达从而保护脑微循环有关。

朝医三神散改善血管性痴呆模型大鼠认知功能障碍的机制研究

目的探讨朝医三神散对血管性痴呆模型大鼠认知功能障碍的作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、朝医三神散高、低剂量组和西药盐酸多奈哌齐组,除假手术组外均采用“两血管阻断+硝普钠降压法”建立血管性痴呆(VD)模型。分别给药4周后,通过Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力,HE染色法观察大鼠海马病理形态变化,用ELISA法检测大鼠血清中的AchE,Bax,Bcl-2的含量和炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌水平,Western blot法检测大鼠脑组织中TLR4的蛋白表达量、检测NF-κB信号通路关键蛋白NF-κBp65的表达水平。结果朝医三神散高剂量组在第3天开始明显比西药组上台潜伏期缩短;HE染色结果发现朝医三神散的高、低剂量组与模型组相比,细胞数量增多,细胞紧密结构完整;ELISA结果表明,朝医三神散高、低剂量组与模型组相比Bcl-2的含量则显著升高;West-ern blot法显示,朝医三神散可抑制VD大鼠脑组织TLR4及NF-κB p65的过度表达。结论朝医三神散可以提高痴呆模型大鼠的学习记忆能力,降低AchE、Bax表达含量,提高Bcl-2的表达含量,从而抑制神经细胞凋亡,通过调控TLR4/NF-κB信号转导通路抑制VD大鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌,发挥其抗炎作用,起到提高血管性痴呆大鼠认知能力的作用。