CCL4在肿瘤微环境中影响免疫逃逸的研究进展

免疫治疗已成为当下恶性肿瘤治疗的基石。然而,不同患者对免疫治疗的反应具有较大异质性,并非都能从中获益。当下亟需寻找能高效预测免疫治疗疗效的生物标志物。C-C趋化因子配体4(C-C chemokine ligand4,CCL4)是一种细胞因子,隶属于炎症性CCL亚家族,主要由免疫细胞、肿瘤细胞分泌,在正常组织中不表达或者弱表达,在多种恶性肿瘤组织中异常高表达。CCL4与其受体C-C趋化因子受体5(C-C chemokine receptor type 5,CCR5)结合后可招募并介导免疫细胞迁移,破坏肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)的稳定性,参与致癌并促进肿瘤发展。在肿瘤免疫微环境中,CCL4可介导并募集单核细胞、巨噬细胞、自然杀伤(natural killer,NK)细胞、T细胞等关键免疫细胞定向迁移,成为影响免疫治疗疗效的潜在重要元素,而具有特定的价值。本文就CCL4在TME中影响免疫逃逸的研究进展进行综述,以期为基础研究及临床诊疗提供线索和参考。

Levisticum officinale extract protects against CCl4-induced hepatotoxicity through anti-inflammatory,anti-fibrotic,and antioxidant properties in rats

Objective:To investigate the hepatoprotective effects of Levisticum officinale extract on CCl4-induced hepatotoxicity.Methods:Different doses of Levisticum officinale extract were given orally to rats for 10 days,then rats received a single dose of CCl4(2.5 mL/kg,50%v/v in liquid paraffin).Biochemical and histopathological assays were performed to assess the effects of the extract on liver function and architecture.Moreover,antioxidant and oxidative markers as well as inflammatory and fibrotic indicators were measured.Results:Pretreatment with Levisticum officinale extract significantly mitigated CCl4-induced damage to liver structure,improved serum levels of alanine aminotransferase,aspartate aminotransferase,alkaline phosphatase,urea,total bilirubin,and total protein,enhanced glutathione content and superoxide dismutase and catalase activities in the liver,as well as decreased plasma and hepatic malondialdehyde levels.Immunohistochemical results demonstrated that the extract reduced Ki-67 andα-SMA expression and Masson’s trichrome staining revealed decreased liver collagen in rats treated with Levisticum officinale extract.Moreover,Levisticum officinale extract markedly decreased the gene expressions of TNF-α,IL-6,TGF-β1,MCP-1,and COX-2.Conclusions:Levisticum officinale extract exerts hepatoprotective effects on CCl4-induced hepatotoxicity through antioxidant,anti-inflammatory,and anti-fibrotic activities.

丙泊酚减弱CCL4诱导脑微血管内皮细胞促炎和细胞毒作用机制研究

目的 探讨趋化因子配体4(CCL4)诱导脑微血管内皮细胞炎症和细胞毒作用,以及丙泊酚对CCL4诱导效应的拮抗作用。方法 将体外永生化人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3分为为对照组、CCL4组、丙泊酚+CCL4组细胞。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖活力,细胞克隆形成实验分析细胞克隆形成能力,流式细胞术Annexin V/PI双染检测细胞凋亡情况。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞细胞炎症基因、血栓形成相关基因的表达情况,酶活性检测试剂盒检测环氧化酶-2(COX-2)及凝血酶活性。结果 与对照组细胞比较,CCL4组细胞增殖活力显著减弱,细胞克隆形成能力减低,凋亡细胞增加,差异有统计学意义(P<0.001);与CCL4组,丙泊酚+CCL4组细胞增殖活力显著上调,细胞克隆形成能力增加,凋亡细胞减少,差异有统计学意义(P<0.001)。qPCR检测结果显示,与对照组比较,CCL4组炎症相关基因白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、核转录因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及COX-2基因表达上调,血栓形成基因Thrombin、Factor 8、VWF及TXA表达增加,COX-2酶及凝血酶活性增加,差异有统计学意义(P<0.001)。丙泊酚可明显抑制CCL4对hCMEC/D3的炎症相关基因及血栓形成基因的促进表达作用,以及CCL4对hCMEC/D3的COX2酶及凝血酶活性。结论 丙泊酚可减轻CCL4对脑微血管内皮细胞的细胞毒作用,并拮抗其促炎和促血栓形成基因表达。

CCL 4与BDL致大鼠肝损伤中α-SMA、Hab18G/CD147表达的差异

探究CCL 4腹腔注射和胆总管结扎(Bile Duct Ligation,BDL)致大鼠肝损伤中α-SMA、Hab18G/CD147表达的差异,为法医学鉴定药物性肝损伤提供科学参考。选取雄性SD大鼠60只,随机分为CCL 4对照组(N)、BDL对照组(S)、CCL 4肝损伤组(C)、BDL肝损伤组(B),每组各15只。各组分别在实验1 w、3 w、5 w时断颈处死5只大鼠,采血检测谷丙转氨酶(Glutamic pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(Aspertate aminotransferase,AST),总胆红素(Total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(Direct bilirubin,DBIL),检测α-SMA、Hab18G/CD147mRNA的表达情况。qRT-PCR检测结果显示,C组α-SMAmRNA、Hab18G/CD147mRNA的表达量在1 w、3 w、5 w同时间段相比均高于B组(P<0.05)。与对照组相比较,C组、B组血清中ALT、AST、DBIL、TBIL含量均增加,说明大鼠肝脏均有不同程度的损伤;CCL 4与BDL肝损伤有不同特点,在肝损伤过程中α-SMA、Hab18G/CD147mRNA的表达随着损伤时间的延长表达量逐渐增加。

小分子多肽LK-5对CCl4致急性肝损伤小鼠的保护作用研究

【目的】研究小分子多肽LK-5(氨基酸序列为LHMFK)对CCl4致急性肝损伤模型小鼠的保护作用,探讨其作用机制。【方法】72只小鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯组(150 mg/kg)及LK-5低、中、高剂量组(30、60、120 mg/kg),每组12只。连续给药10 d, 1次/d,每次10 mL/kg。末次给药2 h后,各组(除正常组外)腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液,建立CCl4致小鼠急性肝损伤模型,16 h后,按照试剂盒方法,检测小鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)和碱性磷酸酶(AKP)水平,检测肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、血管紧张素1-7(Ang 1-7)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平。制作肝脏病理组织切片,苏木精-伊红染色(HE)后观察肝脏组织病理学变化。【结果】与正常组比较,模型组小鼠肝细胞有明显的脂肪变性,炎细胞分散分布于肝小叶血管周围和肝实质内,血清ALT、AST、AKP活性和TBA水平均显著上升,肝组织SOD、GSH-Px活性显著下降,MDA水平显著上升(P<0.05),说明成功建立急性肝损伤模型,TNF-α、IL-6、AngⅡ水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,LK-5中、高剂量组能够显著降低血清ALT、AST活性(P<0.05),各剂量组均可降低血清TBA水平和AKP活性(P<0.05),LK-5高剂量组能够显著提高小鼠肝组织SOD、GSH-Px活性(P<0.05),LK-5中、高剂量组能够显著降低肝组织MDA水平(P<0.05),LK-5高剂量组TNF-α水平显著降低(P<0.05),各剂量组能够显著降低肝组织IL-6、AngⅡ水平(P<0.05)。病理切片结果显示,LK-5各剂量组炎细胞均有不同程度减少,LK-5高剂量组肝小叶血管周围和肝实质内无炎细胞浸润。【结论】LK-5各剂量组对CCl4致急性肝损伤小鼠具有保护作用,其中60、120 mg/kg LK-5效果更为明显,其作用机制可能与抗氧化、抗炎及对肾素-血管紧张素系统(RAS)的调控有关。

壮方壮肝逐瘀煎联合骨髓间充质干细胞移植对CCl4大鼠肝纤维化的影响

目的 探讨壮肝逐瘀煎联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mensenchymal stem cell,BMMSC)移植对CCl4诱导的肝纤维化大鼠的影响。方法 取20只大鼠为正常对照组(A组),另取80只造模成功后的大鼠,随机分为模型组(B组)、单纯壮肝逐瘀煎组(C组)、单纯BMMSC组(D组)、壮肝逐瘀煎联合BMMSC组(E组),每组20只。A组、B组、D组灌服生理盐水(0.1 m L/kg,1次/d),C组、E组灌服壮肝逐瘀煎(0.1 mL/kg,1次/d),各组均连续干预12周。其中,第4周末,B组、C组尾静脉注射生理盐水,D组、E组尾静脉注射BMMSC。干预后,采用HE染色观察各组大鼠肝脏病理变化;采用全自动生化仪检测肝功能指标[谷草转氨酶(aspartate aminotransaminase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、白蛋白(albumin,ALB)]变化;采用RT-PCR检测肝组织甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、ALB、细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)mRNA;采用Western blot检测表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的表达;冷冻切片技术检测携带绿色荧光蛋白的BMMSC向肝脏归巢的情况。结果 B组肝小叶结构被广泛增生的纤维化组织分割并包绕成大小不等的圆形或类圆形的肝细胞团(即假小叶),肝细胞排列絮乱、坏死、变性及再生。C组、D组、E组肝小叶结构得到不同程度的恢复,肝细胞变性、水肿得到不同程度的改善。与A组比较,B组AST、ALT、TBIL明显升高(P<0.05),ALB和AFP、ALB、CK18 m RNA及HGF、EGF蛋白表达明显降低(P<0.05)。与B组比较,C组、D组、E组AST、ALT、TBIL明显降低(P<0.05),ALB和AFP、ALB、CK18 mRNA及HGF、EGF蛋白表达明显升高(P<0.05)。与E组比较,C组、D组AST、ALT、TBIL明显升高(P<0.05),ALB和AFP、ALB、CK18 mRNA及HGF、EGF蛋白表达明显降低(P<0.05)。免疫荧光结果显示,E组肝脏内携带绿色荧光蛋白数量明显高于A组、D组。结论 壮肝逐瘀煎联合BMMSC治疗可抗肝纤维化,可有效促进BMMSC向肝脏归巢,修复受损的肝组织。

虎杖苷对CCl_4损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的研究虎杖苷（ＰＤ）对ＣＣｌ４损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用。方法原位灌流法分离大鼠肝细胞，培养２４ｈ后加入ＰＤ，同时造成ＣＣｌ４损伤，分别于损伤后６，１２，２４和４８ｈ测培养液中谷丙转氨酶（ＡＬＴ）、丙二醛（ＭＤＡ）和还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）活性，４８ｈ后用ＭＴＴ比色法测肝细胞存活率。结果ＰＤ１×１０－７～１×１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１能不同程度地抑制ＡＬＴ和ＭＤＡ的上升，提高ＧＳＨ水平，显著提高细胞存活率，以１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１效果最好。

五味子对CCl_4中毒大鼠肝细胞核基质蛋白和结构的保护作用

目的探讨五味子对中毒大鼠肝细胞核基质蛋白和结构的保护作用。方法将Wistar大鼠随机分为对照组、中毒组和治疗组。中毒组和治疗组大鼠经腹腔一次性注射200mLLCCl4(0.2mL100g体质量)致毒。治疗组以五味子提取液[0.5mL(100g·d)]灌胃,中毒组以同量生理盐水灌胃,不同时间处死大鼠,光镜、电镜下观察肝脏细胞结构,并用免疫组化方法检测LaminB蛋白的表达和电泳分析核基质蛋白成分。结果光镜和电镜下,五味子提取物治疗后大鼠肝细胞病理改变明显减轻。五味子提取物促进了中毒大鼠肝细胞LaminB蛋白的表达、并有调节大鼠肝细胞核基质蛋白代谢的作用。结论五味子可能通过促进CCl4中毒大鼠肝细胞LaminB蛋白的表达和影响核基质蛋白的代谢而促进损伤肝细胞修复,对于CCl4中毒大鼠肝细胞核基质蛋白和结构具有保护作用。

沙苑子黄酮对CCl_4及D-氨基半乳糖致急性肝损伤的保护作用

目的探讨沙苑子黄酮(FAC)对肝损伤的保护作用。方法采用0.1%CCl4(10mL/kg)、D-氨基半乳糖(D-Gal,700mg/kg)分别ip造成小鼠急性肝损伤模型,并ig不同剂量的FAC,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,观察肝组织病理改变;用CCl4损伤原代培养大鼠肝细胞,测定细胞培养液ALT、AST活性,MTT法测定肝细胞增殖活性。结果FAC能显著降低小鼠CCl4和D-Gal损伤原代培养大鼠肝细胞模型ALT和AST活性(P<0.01),病理学观察显示,FAC明显减轻肝组织损伤程度(P<0.01)。FAC显著提高肝细胞活性,促进肝细胞增殖。结论FAC具有显著的保肝作用。

壳寡糖及其衍生物对CCl_4诱导的小鼠肝损伤的保护作用

研究壳寡糖(COS)、氨基葡萄糖(GlcNH2)和N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)对CCl4诱导的雄性昆明种小鼠肝毒性的保护作用,并探讨其可能机制.小鼠腹腔注射CCl4(20 mg/kg体重)24 h后,血清天门冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性明显提高,引起肝脏脂质过氧化反应,巯基含量降低,总抗氧化能力(T-AOC)减弱,诱发基因毒性.提前连续12天分别灌胃给予COS,GlcNH2和GlcNAc(1.5 g/kg体重)能够显著诱导金属硫蛋白(MT)的表达,体内的抗氧化防御系统随之增强以抵抗CCl4诱导的氧化损伤.血清AST和ALT活性明显降低,肝脏丙二醛(MDA)生成被抑制,巯基含量,T-AOC明显恢复.但是,从DNA电泳结果反应出的基因毒性并未减轻.实验结果证明,提前给予COS,GlcNH2和GlcNAc对CCl4诱导的小鼠肝损伤能够起到有效的保护作用,其中,GlcNH2的作用效果最显著.

复方鳖甲软肝片对大鼠CCl_4肝纤维化模型疗效研究

目的 研究复方鳖甲软肝片对四氯化碳 (CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型的治疗效果。方法 80只SD大鼠 ,雌雄各半 ,CCl4和橄榄油 1 :4混合后 ,给大鼠腹部皮下注射 ,每周 2次 ,每次注射剂量为 0 .1 5mL/ 1 0 0 g ,制备肝纤维化模型。制模 6周起开始用复方鳖甲软肝片灌胃治疗 ,每天 1次 ,连续治疗 3个月。于治疗前、治疗结束、停药后 1个月和 2个月每组各处死 8只大鼠 ,切取肝脏作病理切片检测。结果 复方鳖甲软肝片起效较慢 ,与模型组相比 ,在治疗刚结束时肝纤维化程度略有升高 (5 .2± 4 .3vs 4 .7± 0 .5 ,P >0 .0 5 ) ,停药 1个月后肝纤维化程度逐渐减轻 (2 .4± 3.1vs 6 .3± 3.1 ,P <0 .0 5 ) ,作用持续至停药后 2个月。复方鳖甲软肝片对肝纤维化大鼠肝脏的抗炎作用不十分明显 ,但具有较为明显的抗脂肪变作用 ,这种作用起效较慢 ,停药后 1个月才显现出来。

小柴胡汤和柴胡—黄芩含药血清对CCl_4损伤肝细胞的影响

目的 建立CCl4肝细胞损伤模型 ,考察小柴胡汤及柴胡—黄芩配方含药血清对CCl4损伤肝细胞的保护作用。方法 制备小柴胡汤及柴胡—黄芩配方的大鼠含药血清 ,体外10mol·L-1CCl4诱导肝细胞损伤模型 ,观察体积分数为 0 1的含药血清对损伤肝细胞增殖率、GPT、细胞形态学以及凋亡率的影响。结果 与正常组比较 ,模型组肝细胞增殖率降低 (P <0 0 1) ,细胞培养上清液中GPT含量升高 (P <0 0 1) ;与模型组比较 ,小柴胡汤及柴胡—黄芩配方组的肝细胞增殖率提高 (P <0 0 1) ,细胞培养上清液中GPT含量降低 (P <0 0 1)。倒置显微镜和Giemsa染色观察到模型组肝细胞存在着明显的坏死和凋亡 ,小柴胡汤及柴胡—黄芩配方的凋亡细胞明显减少。与正常组比较 ,CCL4模型组细胞凋亡增高 (P <0 0 1) ;与模型组比较 ,柴芩组和小柴胡汤全方组的细胞凋亡率降低 (P <0 0 1)。结论 小柴胡汤及柴胡—黄芩配方含药血清对体外CCl4诱导的肝细胞损伤有保护作用。CCl4引起的肝损伤同时存在着明显的凋亡和坏死 ,小柴胡汤及柴胡 -黄芩配方可能具有抗CCl4诱导的肝细胞凋亡的作用。

栀子中京尼平甙对CCl_4急性小鼠肝损伤保护作用的生化机理研究(英文)

预先给小鼠灌胃不同剂量的京尼平甙后,以四氯化碳造模,通过测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天氡氨酸氨基转移酶(AST)以及肝脏内GSH的含量并制作组织病理切片,研究了京尼平甙对四氯化碳肝损伤小鼠的保护作用,结果表明,京尼平甙能抑制四氯化碳肝中毒小鼠血清中ALT和AST的活性以及增加肝脏内GSH的含量.然后研究了京尼平甙对正常小鼠肝微粒体内细胞色素P4502E1和细胞色素P4503A活性的影响以及肝脏内谷胱甘肽(GSH)系统的影响,表明京尼平甙对正常小鼠肝微粒体内CYP4502E1具有明显的抑制作用,并能增强肝脏内谷胱甘肽还原酶(GR)以及谷胱甘肽-S-转移酶活性.以上3个酶与自由基形成以及清除有关.

木犀草素降低CCl_4诱导的大鼠肝纤维化

目的:研究黄酮类化合物木犀草素(luteolin,Lu)治疗肝纤维化的作用。方法:30只Wistar大鼠随机分成正常对照组,实验对照组和Lu实验组,实验对照组和Lu实验组给予8wk CCl_4和酒精饮料制备肝纤维化动物模型,Lu实验组从实验开始就用20mg.Kg^(-1).day^(-1)LU灌胃。实验结束后,进行病理学检测和测定肝组织羟脯氨酸含量,用Northern Blot检测Ⅰ型前胶原mRNA表达,并测定了肝组织MDA含量和基质金属蛋白酶(MMPs)的活性。结果:经Lu治疗后,肝脏纤维化程度降低,羟脯氨酸含量减少;同时观察到Lu使肝脏Ⅰ型前胶原mRNA表达降低(5.2±1.4 vs 3.8±1.1,P<0.05)和MDA含量显著减少(12.7±2.6 vs 8.2±2.0μmmol/g,P<0.05),但MMPs的活性没有改变。结论:Lu通过清除自由基,抑制胶原基因表达,在动物体内具有防治肝纤维化作用。

福建金线莲提取物对CCl_4所致小鼠急慢性肝损伤的保护作用

目的观察金线莲提取物对小鼠急性和慢性化学性肝损伤的保护作用。方法分别应用水煎法、醇提法、全草榨汁法提取金线莲中的有效成分;小鼠分别腹腔注射0.1%CCl4的蓖麻油溶液、灌胃50%CCl4的蓖麻油溶液5周,制作急慢性化学性肝损伤模型;分别将金线莲3种提取物以1.0、5.0g.kg-1给小鼠灌胃,以生理氯化钠溶液和益肝灵片(主要成分为水飞蓟素)分别作空白和阳性药对照;通过小鼠血清生化指标(谷丙转氨酶和谷草转氨酶)测定、脏器称重和肝脏病理切片观察,评价金线莲各提取物对小鼠急、慢性化学性肝损伤的保护作用。结果金线莲提取物可使CCl4所致急、慢性化学性肝损伤小鼠血清中的谷丙转氨酶和谷草转氨酶降低50%以上(P<0.01),转氨酶值接近正常组;金线莲提取物可抑制肝损伤引起的肝脏和脾脏肿大以及胸腺萎缩;肝组织切片镜检,金线莲提取物能明显减轻中毒小鼠的肝损伤以及早期肝纤维化的形成。结论金线莲对小鼠急、慢性化学性肝损伤具有保护作用及显著的降酶作用,并能减少早期肝纤维化的发生。

冬虫夏草及人工虫草菌丝体对CCl_4 所致急性化学性肝损伤的保护作用

[目的]研究冬虫夏草及人工虫草菌丝体对CCl4 所致急性化学性肝损伤的保护作用。[方法]将动物随机分成14组 ,分别是阴性对照组 ,模型对照组及冬虫夏草、蝙蝠蛾拟青霉、虫草头孢菌、蝙蝠蛾被孢霉高、中、低剂量组(3个剂量组分别为200、100和50mg/ml)。采用CCl4 建立急性化学性肝损伤动物模型 ,观察冬虫夏草及人工虫草菌丝体对模型动物的影响。[结果]冬虫夏草、蝙蝠蛾拟青霉、虫草头孢菌、蝙蝠蛾被孢霉200、100和50mg/ml3个剂量组均可以降低受试动物血清ALT、AST和MDA水平及升高血清SOD水平 ;200mg/ml组降低受试动物肝组织中TG和MDA水平及升高SOD和GSH水平。4种样品对CCl4 所致的小鼠急性化学性肝损伤均具有保护作用 ,它们的保护效果为 :冬虫夏草>蝙蝠蛾被孢霉>蝙蝠蛾拟青霉和虫草头孢菌 ,而蝙蝠蛾拟青霉和虫草头孢菌的保护效果差异无显著性。[结论]蝙蝠蛾拟青霉、虫草头孢菌及蝙蝠蛾被孢霉均可作为冬虫夏草的替代品而加以应用 。

柴胡黄芩配伍对CCl_4所致小鼠急性肝损伤的研究

目的研究柴胡黄芩不同剂量比例配伍对CCl4小鼠急性肝损伤模型的影响。方法采用0.2%CCl4液体石蜡灌胃造成CCl4小鼠急性肝损伤模型,以单味柴胡、黄芩作为对照药,通过对肝组织病理形态学、血清谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALb)变化的比较,探讨柴胡、黄芩不同剂量比例配伍对CCl4小鼠急性肝损伤的影响。结果柴胡、黄芩配伍均能降低CCl4引起的小鼠血清ALT酶升高,对抗CCl4所致急性肝损伤,尤其以柴胡黄芩2∶1配伍效果最显著。结论柴胡黄芩配伍对小鼠肝损伤有一定的保护作用,柴胡黄芩2∶1配伍效果最显著。

CCl_4致SD大鼠急性肝损伤模型制作的改进(英文)

目的本文筛选CCl4致SD大鼠急性肝损伤模型的最佳给药浓度和剂量,追踪观察模型大鼠肝损伤后修复过程。方法本文采用随机对照分组的研究方法,对不同的SD大鼠模型组给予不同剂量的CCl4一次性腹腔注射。给药后48 h检测大鼠血清ALT, AST。各组随机处死一只SD大鼠,取肝组织制成病理切片镜下观察。追踪观察筛选后的CCl4模型大鼠肝组织病理变化恢复情况。结果本实验发现3A-7A组的ALT,AST较对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),随着CCl4的剂量的增加,大鼠肝组织的病理损伤加重,6A和7A组可见自然死亡大鼠。结论本试验筛选了CCl4致SD大鼠急性肝损伤模型的较好CCl4的剂量。该模型肝损伤明显,死亡率低,对其他重要脏器影响小,可作为急性肝损伤研究的较好模型。

丹参提取物对CCl_4和DMN诱导的大鼠肝纤维化的影响

分别采用四氯化碳 (CCl4 )和二甲基亚硝胺 (DMN)诱导的大鼠肝纤维化模型 ,以秋水仙碱和丹参作对照 ,通过肝组织病理学及Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组化观察 ,肝组织羟脯氨酸 (Hyp)、丙二醛(MDA)及血清肝功能部分指标检测 ,探讨丹参提取物预防和治疗肝纤维化的效果及部分作用机理。结果显示 ,丹参提取物可显著改善肝组织损伤和纤维化程度 ,同时能显著降低肝组织Hyp和MDA含量 ,提示丹参提取物有显著的抗肝纤维化作用 ,为丹参的重要有效成分 ,其作用机理与抗脂质过氧化损伤有关 ,对胶原代谢也有直接的影响。

基于TLR4-NF-κB的柴胡黄芩水煎液抑制CCl4诱导大鼠肝星状细胞激活作用机制研究

目的探讨柴胡黄芩水煎液(CQ)对CCl_4诱导肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活的作用及机制。方法取对数生长的HSC,在无血清培养基中培养24 h后,以1.5×10~9·L^(-1)浓度接种到培养板中过夜。实验分组如下:空白对照组(无药物处理),CCl_4诱导组(6 mmol·L^(-1)CCl_4作用6 h),给药组(6 mmol·L^(-1)CCl_4作用6 h后,再用400、500、600 mg·L^(-1)的CQ作用24 h),TLR4阻断剂TAK-242、NF-κB阻断剂BAY 11-7082组(6 mmol·L^(-1)CCl_4作用6 h后,再用TAK-242 10 mol·L^(-1)、BAY 11-7082 2 mol·L^(-1)作用24h)。处理之后,应用ELISA法检测培养基中透明质酸酶(hyaluronidase,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,Ⅳ-C)浓度,RT-PCR方法检测细胞中Toll样受体4(Toll-like receptors4,TLR4)、核转录因子κB(NF-κB)基因的表达,应用Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB蛋白的表达。结果研究发现,与CCl_4干预组比较,CQ量效相关性降低CCl_4诱导的HSC增殖。600 mg·L^(-1)的CQ可以明显降低HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C细胞释放水平及TLR4、NF-κB基因、蛋白的表达。NF-κB抑制剂TAK-242、BAY 11-7082也可降低CCl_4造成的HSC增殖,HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C细胞释放水平及NF-κB基因、蛋白表达,不能下调TLR4基因、蛋白表达。结论 CQ可以抑制CCl_4诱导的炎症因子基因、蛋白表达,减轻肝纤维化相关指标的含量,其作用机制可能与TLR4-NF-κB转录活性及蛋白活性相关,提示其在抗肝纤维中的作用及机制。