细胞分裂周期蛋白基因6半定量检测方法的条件建立

目的 以beta actin为内参基因 ,细胞分裂周期蛋白基因 6 (CDC6 )为检测基因 ,探索半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)体系在检测CDC6基因时的条件建立。方法 以膀胱癌细胞株为标本 ,提取总RNA ,合成cDNA ,优化PCR反应条件 ,建立针对CDC6的半定量PCR反应体系。结果 通过对实验参数的优化 ,确定适宜的反应体系 :退火温度 5 8℃、Mg2 + 浓度 2 0mmol/L、循环次数 37次 ;批内、批间变异系数分别为 8 0 1%和 14 5 3% ,最小检测限为总RNA 0 0 5ng。通过重复性试验、敏感性试验和准确性实验分析 ,该方法具有良好的重复性、准确性和敏感性。结论 将内参基因与CDC6目的基因共同扩增 ,选择适当条件 ,可直接获得目的基因CDC6的mRNA的相对表达量。