CIDEA在脂代谢中的功能研究进展

哺乳动物后代的生存离不开乳腺在哺乳期间提供的充足脂类,细胞死亡诱导DFFA样效应蛋白A(CIDEA)是一种脂滴外壳蛋白,在泌乳乳腺中高水平表达,在脂代谢过程中发挥重要作用。本文综述了CIDE蛋白家族及CIDEA在奶牛脂代谢中的作用。

小鼠Cidea蛋白N端缺失异构体的鉴定和研究

Cidea蛋白调节脂肪代谢,在机体能量平衡过程中起重要作用,在转录和翻译后水平受到严格调控,但在翻译水平的调节还不清楚.通过对CIDEA基因敲除小鼠模型研究,鉴定了小鼠棕色脂肪组织内源性表达Cidea蛋白N端缺失异构体mCidea-22.定点突变等研究表明其产生机制为选择性起始翻译.并且,在异位表达时,N端缺失异构体和全长异构体的比例呈现细胞系特异性.此外,蛋白质稳定性实验表明mCidea-22半衰期很短.亚细胞定位研究显示mCidea-22是内质网和脂滴定位蛋白.为深入理解Cidea蛋白的功能和精细调节提供了新的思路和方向.

CIDE B/C基因多态性与高三酰甘油血症相关性研究

目的通过分析CIDE B/C基因多态性的人群分布特征,探明CIDE B/C基因多态性与中国河南汉族人群血三酰甘油（TG）水平的关系。方法选取528例无亲缘关系研究对象,男198例,女330例,平均年龄（52.23±13.41）岁,以1.70mmol/L为TG界值,将研究对象分为高三酰甘油血症（HTG）组（181例）和正常三酰甘油组（NTG组,347例）。检测CIDE B/C基因的7个SNP,采用SHEsis进行基因单倍型研究,分析两种基因的单倍型与TG的关系。结果分析显示rs2144492、rs2281472、rs2144493位点与TG有关,其中rs2144492的A等位基因、rs2281472和rs2144493的C等位基因具有保护作用,携带上述等位基因的个体TG水平相对较低。CIDE B基因的ATCC单倍型在NTG组比例较高,具有保护作用,OR及其95%CI为0.698（0.490-0.992）。结论 CIDE B/C基因多态性及CIDE B基因的ATCC单倍型对HTG的发生风险存在一定作用。

EGFP-CIDE-3及D sRed1-CIDE-3融合基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达和定位

目的:分别构建EGFP、DsRed1与CIDE-3的融合基因真核表达载体,观察其在人胚肾上皮细胞293T中的表达,确定CIDE-3的亚细胞定位。方法:分别以质粒pEGFP-C3、pDsRed1-N1及本实验室克隆得到的质粒pET28a(+)-CIDE-3为模板,PCR扩增EGFP、DsRed1 DNA片段及人CIDE-3基因的CDS序列,再分别将EGFP、CIDE-3及DsRed1、CIDE-3克隆入真核表达载体pShuttle-CMV中。酶切、测序鉴定后,经磷酸钙转染入293T细胞,通过荧光显微镜观察其在293T细胞中的表达,并利用荧光染料Bodipy 493/503定位脂滴,探讨CIDE-3与脂滴之间的关系。结果:酶切及DNA测序证实,重组质粒pShuttle-CMV-EGFP-CIDE-3和pShuttle-CMV-DsRed1-CIDE-3构建成功。荧光显微镜观察显示,pShuttle-CMV-EGFP-CIDE-3融合蛋白定位于细胞质,pShuttle-CMV-DsRed1-CIDE-3融合蛋白也定位于细胞质,并与脂滴存在共定位关系。结论:成功构建了重组质粒pShuttle-CMV-EGFP-CIDE-3和pShuttle-CMV-DsRed1-CIDE-3;两者均可在239T细胞中表达,融合蛋白分布于细胞质,并与脂滴存在共定位关系。

CIDEs家族在脂肪细胞肿瘤中的表达

目的:探讨CIDE基因家族与脂肪肉瘤的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测30例正常脂肪组织、20例脂肪瘤和21例脂肪肉瘤组织中CIDEA、CIDEB和CIDE3的表达情况。结果:CIDEA和CIDE3在30例正常脂肪组织、20例脂肪瘤和8例高分化脂肪肉瘤中均高表达,在2例去分化、6例黏液型及5例多形型脂肪肉瘤中,仅在成熟的脂肪细胞或有脂母细胞分化的细胞中表达,而去分化的肿瘤细胞和基质细胞则不表达;且CIDEA和CIDE3的表达一致;CIDEB在所有正常脂肪组织、脂肪瘤及脂肪肉瘤中均呈阴性。结论:CIDEA和CIDE3均与脂肪细胞的分化密切相关,二者的表达缺失可能与脂肪肉瘤的发生和进展有关,但CIDEB与脂肪肉瘤的发生无明显关系。

cide b蛋白在小鼠正常组织中的分布及其在胰腺组织内的定位

目的:检测c ide b蛋白在小鼠正常组织表达情况以及c ide b在小鼠胰腺中的确切定位,以期初步了解c ide b在胰腺组织中的生物学功能。方法:利用免疫组织化学———链霉素抗生物素-过氧化物酶(SP)法检测c ide b蛋白在小鼠正常组织中的表达分布;应用镜影切片染色和免疫荧光双标记染色及激光共聚焦扫描显微镜技术,观察c ide b和胰岛素在小鼠胰腺中的共定位情况。结果:c ide b蛋白除了在小鼠肝、小肠、肾等组织内表达外,在胰腺胰岛细胞中也有特异性表达;胰岛内c ibe b阳性表达细胞与胰岛素阳性细胞的分布有部分重叠的关系。结论:c ide b在小鼠胰岛β细胞特异表达,提示其可能与胰岛素的分泌、调节有关。

酵母双杂交诱饵表达载体pGBKT7-cide-3的构建、鉴定以及毒性、自激活效应的检测

目的:构建并转化酵母双杂交体系中"诱饵"载体pGBKT7-cide-3以便用于人肝cDNA文库的筛选。方法:用RT-PCR方法从人肝细胞株QZG中扩增cide-3基因全外显子片段,并定向克隆入细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7中;用PEG/LiAC法将pGBKT7-cide-3转化感受态酵母菌AH109。提取转化酵母菌的质粒DNA和总蛋白进行鉴定。同时检测表达产物对报告基因的激活作用及对酵母株AH109的毒性。结果:成功扩增出人cide-3 cDNA片段,限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确的重组质粒pGBKT7-cide-3;获得可在色氨酸缺陷培养基(SD/-Trp)上生长含pGBKT7-cide-3的酵母菌克隆。鉴定表明pG-BKT7-cide-3已转化入酵母菌AH109,无自主激活报告基因的能力及对酵母的生长无毒性。结论:酵母双杂交"诱饵"载体pGBKT7-cide-3构建获得成功,可应用于酵母双杂交体系。

Cide蛋白质与糖脂代谢相关性的研究进展

细胞内糖脂代谢的稳态调控是维持细胞或机体基本生命活动的基础,糖脂代谢紊乱与糖尿病、肥胖、肝脂肪变性、心血管疾病以及癌症的发生和发展密切相关。1998年,细胞死亡诱导的DNA片段化因子-α样效应子（Cide）被首次发现,

脑缺血再灌注后CIDE-B表达与神经元凋亡的关系

目的探讨大鼠脑缺血/再灌注损伤后细胞死亡DNA片段裂解因子45样因子B(CIDE-B)表达与海马神经元凋亡的关系。方法成年健康雄性Wistar大鼠,应用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,TUNEL法染色观察海马神经元凋亡,免疫组化法和Western blot法检测海马神经元CIDE-B蛋白表达,RT-PCR检测CIDE-B mRNA表达。结果与假手术组比较,脑缺血2h再灌注6h,1d,3d,7d,14d,凋亡神经元显著增加(P<0.01),CIDE-B mRNA和CIDE-B蛋白表达明显增强加(P<0.01);至缺血2h再灌注28d神经元凋亡数量显著较少,CIDE-B mRNA和蛋白表达明显减弱(P<0.01),细胞凋亡与CIDE-B基因表达的时相一致。结论脑缺血再灌注损伤后CIDE-B表达与神经元凋亡呈时相依赖性。

人CIDE-3蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的:制备人诱导细胞死亡的DFF45样效应因子-3(CIDE-3)蛋白兔抗人多克隆抗体并进行鉴定。方法:将原核表达载体pET28a(+)/CIDE-3转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达CIDE-3蛋白,经Ni-NTA Agarose纯化后免疫新西兰白兔,获得人CIDE-3蛋白兔抗血清,并通过免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫组织化学法对抗体进行鉴定。结果:成功地表达、纯化了人CIDE-3蛋白,与弗氏佐剂乳化后,免疫新西兰白兔,获得高效价的人CIDE-3蛋白兔抗血清,ELISA结果证实该抗体具有较高的亲和性,Western blot及免疫组织化学染色显示证实该抗体能够与人CIDE-3蛋白特异性结合,是一种细胞质蛋白。结论:获得了效价高、特异性较强的人CIDE-3蛋白兔抗血清,为进一步研究人CIDE-3奠定了实验基础。

脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡与CIDE-B表达的关系

目的研究脑缺血/再灌注损伤后诱导细胞死亡DNA片段因子-45样因子-B(CIDE-B)表达在神经元凋亡的作用。方法成年健康雄性Wistar大鼠24只,随机分为假手术组(n=6)和脑缺血30min(n=6)、90min(n=6)和120min(n=6)再灌注组。参照Pusinelli四动脉阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。采用TUNEL法染色观察海马区神经元凋亡,免疫组织化学检测CIDE-B表达。结果大鼠脑缺血30min、90min和120min,海马区凋亡神经元数量较假手术组均显著增加(t=3.12,P<0.05;t=3.94,P<0.01;t=2.47,P<0.05);同时,CIDE-B阳性神经元数量较假手术组均有明显增加(t=2.46,P<0.05;t=3.93,P<0.01;t=2.28,P<0.05)。结论脑缺血/再灌注损伤后CIDE-B表达与神经元凋亡呈时相依赖性。

山羊CIDE家族基因克隆分析及互作蛋白预测鉴定

旨在获得CIDEB、CIDEC基因的CDS,检测该家族基因在山羊不同组织中的表达量,预测其互作蛋白,为进一步揭示CIDE家族基因在脂代谢中的调控网络提供参考。主要利用RT-PCR克隆获得山羊CIDEB、CIDEC基因序列并利用在线工具分析CIDE家族蛋白的生物学特性,并预测其互作蛋白。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测了CIDE家族基因在山羊不同组织中的表达水平,并检测各互作蛋白在其表达水平最高的组织中的表达量,利用SPSS分析其表达量之间的相关性。克隆获得了CIDEB基因CDS区660 bp,共编码219个氨基酸,CIDEC基因CDS区714 bp,编码237个氨基酸。进化树分析显示,山羊CIDEA、CIDEB、CIDEC均与绵羊亲缘关系最近。RT-qPCR检测发现CIDEA、CIDEB、CIDEC基因分别在山羊瘤胃、肝脏、小肠中表达量最高。CIDEA与DFFB和ELOVL3在瘤胃中的表达量具有极显著相关性(P<0.01),与DIO2、TMEM26、PRDM16、PLIN1具有显著相关性(P<0.05)。CIDEB与DFFA和SDR39U1在肝脏中的表达量具有显著相关性(P<0.05)。CIDEC与PLIN2、GPLD1、ADIPOQ在小肠中的表达量具有显著相关性(P<0.05)。通过分析发现了与CIDE家族表达量具有相关性的基因,可为进一步揭示CIDE基因在脂质代谢中的作用及其调控网络提供理论基础,且CIDE家族蛋白均为脂滴相关蛋白,也可为进一步研究精确的脂滴形成机制提供参考。

CIDEs在细胞程序化死亡中作用的研究进展

与DNA裂解因子DFF45同源性高的一类蛋白称之为C IDE(Cell death-induc ing DFF45-like ef-fector,C IDE),即诱导细胞死亡DFF45样的效应因子,是重要的凋亡相关因子,参与或调节DNA的降解。当DNA降解不完全时,凋亡表现为不典型,或称为类凋亡。本文就C IDEs参与程序化死亡的进展作一综述。

全国第6届智能CAD与数字娱乐(CIDE2009)学术会议征文通知

由中国图像图形学会计算机动画与数字娱乐专业委员会和中国人工智能学会智能CAD与数字艺术专业委员会联合主办,泰山学院承办的第6届智能CAD与数字娱乐学术会议将于2009年8月15～17日在泰安市举行。

全国第6届智能CAD与数字娱乐(CIDE2009)学术会议征文通知

2009年8月15日-17日中国泰安为了进一步促进我国在智能CAD、计算机动画、数字娱乐及数字艺术等领域的研究与应用,由中国图像图形学会计算机动画与数字娱乐专业委员会和中国人工智能学会智能CAD与数字艺术专业委员会联合主办。

全国第6届智能CAD与数字娱乐(CIDE2009)学术会议征文通知

<正>由中国图像图形学会计算机动画与数字娱乐专业委员会和中国人工智能学会智能CAD与数字艺术专业委员会联合主办,泰山学院承办的第6届智能CAD与数字娱乐学术会议将于2009年8月15~17日在泰安市举行。