电针对Cardiotoxin肌肉损伤小鼠MyoD表达的影响

目的探讨电针对肌肉损伤小鼠MyoD表达的影响,为针灸在临床上治疗各类肌肉损伤引起的肌肉再生不足提供实验依据。方法将蛇毒细胞毒素(CTX,Cardiotoxin)胫骨前肌注射造成的肌肉损伤小鼠随机分为模型组和CTX电针组。电针治疗7d后取胫骨前肌制作冰冻切片,HE染色观察损伤肌肉的形态学变化、免疫组化染色检测MyoD的表达。结果 HE染色显示2组均可见部分肌纤维形态破坏,肌细胞间质中炎症细胞浸润,而电针组炎症细胞浸润较模型组明显增多。免疫组化显示模型组可见MyoD表达,电针组MyoD阳性细胞面积百分比较模型组明显增高(P<0.01)。结论电针能够促进肌肉损伤后其他细胞向成肌细胞的转化,对肌肉再生有增强作用。

Cardiotoxin肌损伤模型的形态学观察

目的 建立由Cardiotoxin所致的肌损伤模型并了解损伤部位自然修复的情况 ,为研究肌损伤的再生及修复作用奠定基础。方法 将Cardiotoxin按 8μg g体质量局部注入SCID小鼠股四头肌中 ,分别观察不同时相点 ( 2 4h、7d、2周、4周和 6周 )损伤部位的病理改变。结果 注射 2 4h后可见肌细胞变性坏死 ,胞浆内有空泡形成 ;7d后肌纤维发生明显断裂 ,变性坏死加重 ,并出现钙化 ;2周后变性坏死钙化加重达到顶峰 ;4周后变性坏死钙化依然存在 ,但已可见部分肌纤维再生 ;6周后变性坏死已不明显 ,钙化仍存在 ,肌细胞大部分再生。结论 成功地建立了Cardiotoxin所致的肌损伤模型 ,该模型稳定、简便、易控制 ,且重复性好。

中华眼镜蛇心脏毒素(CardiotoxinⅢ)的克隆及其在大肠杆菌和酵母中的表达(英文)

心脏毒素cardiotoxinⅢ(CTXⅢ)是中华眼镜蛇毒主要组分之一,根据Genbank中已有的CTXs序列设计特异性引物,从中华眼镜蛇毒中克隆出208bp的CTXⅢ片段,并将该基因片段分别克隆至大肠杆菌His-patch ThioredoxinB载体中,重组CTXⅢ经渗透休克分泌至胞外。将CTXⅢ基因插入酵母pPIC9K分泌型表达载体重组表达,N端带有3个氨基酸(GYT)残基的重组CTXⅢ(rCTXⅢ)分泌量达9.5mg/L,经一步凝胶过滤纯化,其纯度达90%以上,纯化率达65%。经细胞毒性实验检测,纯化的rCTXⅢ12h的IC50为4.66μg/ml,证实重组蛋白具有良好的生物学活性。

抗肿瘤药物的心脏毒性及预防

心脏毒性,是抗肿瘤药物严重的并发症。近年来,随诊抗肿瘤药物的发展,多药联合治疗可显著延长患者的生存期,但此方式加重心脏毒性。了解心脏毒性的发生机制,及时发现并进行预防,可减少心血管意外的发生。本文就抗肿瘤药物的心脏毒性预防及管理进行综述。

氯喹类药物对心肌细胞离子通道的影响

作为传统抗疟药,氯喹类药物在疟疾控制方面发挥了极其重要的作用。近年来,随着临床应用深度和广度的扩展,氯喹类药物在其他方面的应用价值不断被挖掘和开发出来,例如抗炎、免疫抑制、抗肠虫等,而在新型冠状病毒感染疫情暴发时,氯喹同类物羟氯喹也被迅速纳入多国的治疗方案中。然而众多文献证明,氯喹类药物可引起心律失常等心脏不良反应(延长QT间期,增加扭转性室性心动过速发生风险),故临床使用时应严格掌握适应证和禁忌证。为了进一步规范氯喹类药物的临床应用,更好地为临床服务,本文从离子通道的角度对该类药物心脏不良反应发生的电生理基础和临床特征进行综述。

c-Met在骨骼肌损伤组织肌卫星细胞中的表达

目的探讨肝细胞生长因子受体（c-Met）在正常和注射心脏毒素后，致肌损伤的肌肉组织中具有再生能力的肌卫星细胞的表达情况；为进一步研究某些肌肉变性疾病，如进行性肌营养不良（DMD）在发病中的分子机制和治疗肌肉退行性变提供参考依据。方法C57雄性小鼠12只，饲养于独立送排风笼具（IVC Cage）实验室。随机分为6组，1-6组左侧股四头肌局部注射心脏毒素（5μg／只），右侧股四头肌为对照，1-6组分别在注射后1d、4d、1周、2周、4周、6周颈椎脱臼处死小鼠，完整分离出股四头肌。浸入4％甲醛溶液中固定，常规包埋切片染色，与对照C57小鼠股四头肌进行组织学和免疫组织化反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）比较分析（样本量为10），了解c-Met的原位表达情况。结果免疫组织化学和反转录聚合酶链式反应结果显示，正常小鼠股四头肌中c-Met在肌卫星细胞上仅有少量的表达；与对照比较，注射心脏毒素24h后，表达即明显增加并持续到观察终点的第6周，且其表达量在第1周达到高峰且直到观察期间末（第6周），仍高于正常肌肉组织，其差异有统计学意义（P〈0.05）。结论c-Met可能是肌肉损伤修复过程的关键蛋白。

舟山眼镜蛇毒心脏毒素-13的纯化、活性及尼群地平对其作用的影响

目的 从舟山眼镜蛇 (Najaatra)毒分离纯化心脏毒素并观察其心脏毒性作用和探讨作用机制。方法 用离子交换和凝胶过滤法从蛇毒中分离纯化心脏毒素 ,观察其对整体动物 ,离体器官和组织的作用及作用影响因素。结果 从舟山眼镜蛇毒中分离出 4个有心脏毒性组分 ,纯化其中 1个定名为心脏毒素 13(Cardiotoxin 13,CTX 13) ,它含有 6 0个氨基酸 ,分子质量 7 76 9ku。小鼠ivLD50 为 0 75 6mg·kg-1。对大鼠离体心脏CTX 13可使冠脉阻力增高 ,心脏收缩幅度减小 ,停于收缩期。尼群地平 (Nit)能取消CTX 13升高冠脉阻力作用 ,同时使CTX 13的负性肌力作用逆转为正性肌力作用。CTX 13可诱发猪离体冠脉环呈剂量依赖性收缩 ,其EC50 为 2 6 0mg·L-1,Nit 0 0 5 μmol·L-1使其量效曲线平行右移 ,EC50 提高到 36 0mg·L-1。但对于大鼠离体乳头肌Nit 0 83μmol·L-1对CTX 13所致心脏毒性无明显对抗作用。在整体实验中Ni0 3mg·kg-1可使大鼠ivCTX 13的最小致死量 (MLD)从 (44 4 7± 2 8 5 ) μg·kg-1提高到(5 41 2± 2 3 2 ) μg·kg-1。结论 CTX 13的心脏毒性作用除其直接心脏毒作用外 。

Fura—2荧光测定眼镜蛇心脏毒引起细胞胞浆Ca^(2+)浓度的变化

用Fura—2荧光技术直接测定眼镜蛇心脏毒(CTX)对大鼠泪腺细胞胞浆Ca^(2+)浓度的影响。在无Ca^(2+)的介液下,CTX可使胞浆Ca^(2+)浓度升高;随之加入1mmol/L CaCl_2可使胞浆Ca^(2+)浓度进一步升高。表明CTX能引起胞内Ca^(2+)释放和胞外Ca^(2+)内流。8mmol/L CaCl_2能阻断CTX升高胞浆Ca^(2+)浓度的作用。

以表阿霉素为基础的化疗对乳腺癌合并糖尿病患者心脏毒性的影响

目的分析目前临床常用的以表阿霉素为基础的化疗对合并糖尿病的女性乳腺癌患者的心脏毒性。方法选择2013年10月—2015年10月于河北医科大学第四医院乳腺中心行根治性肿瘤切除术后经病理检查明确为诊断乳腺癌的女性患者108例,均预行以表阿霉素为基础的化疗(表阿霉素+环磷酰胺),3周为1个疗程,共6个疗程。其中合并2型糖尿病患者55例作为糖尿病化疗组,不合并糖尿病患者53例作为非糖尿病化疗组。同时期于内分泌科门诊入选年龄匹配的无乳腺癌的女性2型糖尿病患者50例作为糖尿病对照组。乳腺癌患者均于应用化疗方案前(基线时)及化疗结束后、糖尿病对照组于入组时及4.5个月后测定常规指标、多普勒超声检查指标及氧化应激指标。结果糖尿病化疗组最终入选50例患者,非糖尿病化疗组最终入选50例患者。基线时,糖尿病化疗组与糖尿病对照组总胆固醇、三酰甘油、糖化血红蛋白均高于非糖尿病化疗组(P<0.05);化疗结束后,3组患者Δ体质指数、Δ血压、Δ血红蛋白、Δ总胆固醇、Δ三酰甘油、Δ糖化血红蛋白比较(P>0.05)。基线时,糖尿病化疗组及糖尿病对照组左房室瓣舒张早期血流速度/左房室瓣舒张早期运动速度(E/Ea)高于非糖尿病化疗组(P<0.05);化疗结束后,糖尿病化疗组ΔEa低于糖尿病对照组及非糖尿病化疗组,ΔE/Ea高于糖尿病对照组及非糖尿病化疗组(P<0.05)。基线时,糖尿病化疗组及糖尿病对照组血清超氧化物歧化酶(SOD)低于非糖尿病化疗组,丙二醛(MDA)高于非糖尿病化疗组(P<0.05);化疗结束后,3组ΔSOD、ΔMDA组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论以表阿霉素为基础的化疗导致女性乳腺癌合并糖尿病患者出现了明显加重的心脏舒张功能受损,提示同时合并糖尿病加重了以表阿霉素为基础的化疗对心脏的损害。

银环蛇心脏毒素类似物cDNA的克隆

采用SMART技术和RT PCR方法,从同一个银环蛇毒腺中克隆到了5种尚未报道过的心脏毒素类似物全长cDNA序列(MNCTL1 a、MNCTL1 b、MNCTL1 c、MNCTL1 d和MNCTL2)。5种序列中,MNCTL1 b、MNCTL1 c、MNCTL1 d和MNCTL2的长度均为505bp,包括5′非翻译区32bp,3′非翻译区212bp和其余261bp组成的一个完整开放阅读框;MNCTL1 a由于3′非翻译区24bp的缺失,全长cDNA仅为481bp。所得序列编码区部分与已报道的银环蛇心脏毒素类似物(cardiotoxin likeprotein)编码区cDNA序列的同源性达95.8%以上。我们克隆到的序列编码85个氨基酸组成的心脏毒素类似物前体,包括20个氨基酸的信号肽和65个氨基酸的成熟肽,与已知的心脏毒素类似物氨基酸组成有很高的同源性。运用AntheportV4.5软件分析,发现编码的蛋白质与眼镜蛇毒中心脏毒素有相似的结构和性质,推测它们可能有类似心脏毒素的功能。本研究首次报道了从同一个体的银环蛇毒腺中克隆到多个心脏毒素类似物全长cDNA序列,提示银环蛇心脏毒素类似物基因在该种蛇基因组中有多个拷贝,并在毒腺细胞中同时转录。

金环蛇毒心脏毒对S180,EAC腹水癌细胞的细胞毒性作用

目的 :探讨金环蛇毒心脏毒对 S180 ,EAC腹水癌细胞的细胞毒作用。方法 :采用小白鼠腹腔和皮下接种 S180 ,EAC腹水癌细胞造成小白鼠腹水模型后腹腔注射金环蛇毒心脏毒。结果 :腹腔注射金环蛇毒心脏毒 ,能抑制肿瘤细胞的生长 ,降低接种率。但不能完全控制腹水和癌细胞的生长。体外试验表明有明显的细胞毒作用。台酚蓝染色镜检可见死细胞显著增加 ,腹水图片检查 ,给药后细胞膜破裂 ,纤维化坏死明显。结论

吡格列酮对阿霉素所致小鼠心脏毒性保护作用

目的研究吡格列酮对阿霉素所致的小鼠心脏毒性的保护作用。方法 8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠28只,随机分为对照组、模型组、药物组(灌胃吡格列酮)和联合组(灌胃吡格列酮和腹腔注射GW9662),每组7只,后3组腹腔注射阿霉素5mg/kg,每周1次,持续4周,累积剂量达20mg/kg。4周后,存活小鼠进行相关检测,苏木精-伊红染色、Tunel染色、Western blot法及RT-PCR法检测小鼠心脏受损及凋亡情况。结果与对照组比较,模型组LVEF、短轴缩短率、心脏质量/胫骨长度、心肌细胞横截面积下降(P<0.05);心房钠尿肽(ANP)及B型钠尿肽(BNP)表达上调和细胞凋亡增加(P<0.05)。与模型组比较,药物组LVEF、短轴缩短率、心脏质量/胫骨长度、心肌细胞横截面积上升[(78.41±4.80)%vs(62.24±4.50)%,(46.63±5.09)%vs(33.35±3.35)%,(7.07±0.52)mg/mmvs(5.87±0.09)mg/mm,(191.93±9.52)μm2 vs(115.79±10.61)μm2,P<0.05)];ANP、BNP相对水平和细胞凋亡比下调[0.21±0.06 vs 1.22±0.18,0.28±0.04 vs 0.82±0.06,(6.40±2.09)%vs(61.34±3.28)%,P<0.05)];联合组抑制药物对小鼠心功能和凋亡的改善(P<0.05)。结论吡格列酮可能通过作用于过氧化物酶体增殖物激活受体γ介导其对阿霉素所致的小鼠心功能降低和心肌凋亡的保护作用。

眼镜蛇心脏毒素性肺损伤大鼠肺病理与MDA改变的研究

目的 探讨肺损伤时肺组织丙二醛(MDA)变化与肺病理改变的关系。方法 采用大鼠眼镜蛇心脏毒素(CTX)性肺损伤模型观察肺的病理变化,并与支气管肺泡灌洗液(BALF)中MDA组分进行比较。结果 CTX高低剂量致伤后,BALF中MDA含量显著高于对照组(P<0.01),而与油酸组无差异;MDA含量高峰期在CTX 致伤后2 h至3 d;CTX高剂量组加PS治疗组则MDA含量较CTX组明显减轻(P<0.01)。结论CTX可导致急性肺损伤且可使MDA增加,而PS加入可减轻CTX所致肺的病理改变。

中华眼镜蛇毒心脏毒素-13对猪离体冠脉的作用

目的探讨中华眼镜蛇毒中分离纯化获得的心脏毒素－１３（ＣＴＸ－１３）对离体冠脉血管平滑肌的作用和机制。方法用离子交换和凝胶过滤法从中华眼镜蛇毒中分离纯化出心脏毒素。以不同浓度ＣＴＸ－１３分别作用于猪冠脉环，观察记录其所诱发的血管环收缩。普萘洛尔（１６．３μｍｏｌ／Ｌ）、哌唑嗪（１μｍｏｌ／Ｌ）和尼群地平（０．０５μｍｏｌ／Ｌ）分别与冠脉环预作用５ｍｉｎ，再分别给予不同浓度的ＣＴＸ－１３，观察记录其收缩强度的变化。改变浴液中钙离子浓度，观察ＣＴＸ－１３在高钙（３．６ｍｍｏｌ／Ｌ），低钙（０．１８ｍｍｏｌ／Ｌ）及无钙（加钙螯合剂）环境中对血管平滑肌的作用。结果（１）ＣＴＸ－１３小鼠静脉注射ＬＤ５０为０．７５６ｍｇ／ｋｇ。（２）ＣＴＸ－１３可诱发猪离体冠脉环呈剂量依赖性收缩，其ＥＣ５０为２６．０μｇ／ｍｌ。（３）尼群地平对ＣＴＸ－１３诱发血管收缩有明显抑制作用，普萘洛尔和哌唑嗪则无明显影响。（４）高钙使ＣＴＸ－１３作用减弱；低钙增强其作用；ＣＴＸ－１３在无钙环境中，仍可诱发血管平滑肌收缩，该作用不为尼群地平所抑制，恢复钙离子后，血管平滑肌进一步强烈收缩，该作用为尼群地平所抑制。结论ＣＴＸ－１３诱发的冠脉血管平滑肌的?

中华眼镜蛇毒心脏毒素对人肝癌细胞株细胞膜的影响

目的和方法：运用５７０ 型粘附式细胞仪光漂白后荧光再分布法测定单个细胞膜脂流动性的动态变化和流式细胞仪测定细胞群细胞膜电位，以观察中华眼镜蛇毒心脏毒素对人肝癌细胞株细胞膜的影响。结果：心脏毒素使肝癌细胞膜脂流动性下降，并且使肝癌细胞膜电位下降。

胰岛素样生长因子1受体在肌损伤组织肌卫星细胞的表达

目的:探讨胰岛素样生长因子1受体(Insulin like growth factor 1 receptor,IGF1R)在正常和注射心脏毒素后,致肌损伤的肌肉组织中具有再生能力的肌卫星细胞表达情况;为进一步研究某些肌肉变性疾病的分子学发病机制和治疗方法提供参考依据。方法:取C57雄性小鼠12只,随机分为6组,1～6组左侧股四头肌局部注射心脏毒素(Cardiotoxin,CTX),5μg/只,右侧股四头肌作为自身对照,于注射后1、4 d及1、2、4、6周处死小鼠,分离两侧股四头肌,取材行HE染色、免疫组织化学染色及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测分析,了解IGF1R的原位表达情况。结果:HE染色示肌肉组织从损伤修复到再生的全过程,免疫组织化学及RT-PCR显示:正常小鼠股四头肌中IGF1R在肌卫星细胞上仅有少量的表达;与对照比较,注射心脏毒素1 d后,表达即明显增加并持续到观察终点的第6周,其表达量在第2周达到高峰且直到观察期间末(第6周),仍高于正常肌肉组织,且其差异有统计学意义(P<0.01)。结论:IGF1R可能在肌肉损伤修复过程中起重要作用。

CTX对家兔肺损伤早期血气与酸碱平衡调节改变的研究

应用油酸、肾上腺素型肺损伤模型观察家兔早期血气变化,并与CTX组进行对照比较.结果表明:家兔注射CTX、油酸和肾上腺素后3h,呼吸呈进行性加快,PaO2和O2SAT下降,PaCO2、ctCO2、HCO3—降低.CTX引起血气中各项指标改变是肺急性损伤所致,与油酸、肾上腺素型肺损伤相似.

高敏感性心肌肌钙蛋白Ⅰ用于监测蒽环类药物治疗患者心脏毒性的临床价值

目的:探讨高敏心肌肌钙蛋白Ⅰ(hs-cTnI)对接受蒽环类药物化疗的白血病患者心脏毒性的监测价值。方法:选择2013年1月～2016年12月我科收治的急性髓细胞性白血病患者160例作为研究对象。患者被随机均分为常规化疗组和右丙亚胺组(在常规化疗前30min接受右丙亚胺),均接受化疗6个月。观察比较两组化疗前后不同时间点血清hs-cTnI水平、心脏毒性事件发生率。比较不同血清hs-cTnI水平组间心脏毒性事件发生率,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清hs-cTnI对心脏毒性的预测价值。结果:与化疗前比较,化疗后两组各个周期的血清hs-cTnI水平均显著升高(P均=0.001),且随着时间推移,其水平逐渐升高。与常规化疗组比较,右丙亚胺组自第2个月起血清hs-cTnI水平[第2个月:(7.59±0.85)×10-2ng/ml比(7.27±0.86)×10-2ng/ml]显著降低,P<0.05或<0.01。右丙亚胺组总心脏毒性事件发生率显著低于常规化疗组(5.00%比25.00%),P=0.001。血清hs-cTnI>0.100ng/ml组的心脏毒性事件发生率显著高于血清hs-cTnI≤0.100ng/ml组(31.25%比4.17%),P=0.001。ROC曲线显示,血清hs-cTnI预测此类患者发生心脏毒性的AUC为0.825,截断值为0.121ng/ml,灵敏度为90.27%,特异度为92.35%。结论:接受蒽环类药物化疗的白血病患者在化疗早期即出现血清hs-cTnI水平升高,其对心脏毒性事件的发生具有较高预测价值。

蛇毒抗肿瘤蛋白心脏毒素的分离纯化与鉴定

目的:对蛇毒抗瘤蛋白的活性组分进行分离与鉴定。方法:采用 RP-HPLC 分离蛇毒抗瘤蛋白各组分,收集纯化组分Ⅱ。RP-HPLC 及 SDS-PAGE 测定组分Ⅱ的纯度;MALDI—TOF 质谱仪测定组分Ⅱ的相对分子质量;对组分Ⅱ进行 N-末端氨基酸序列测定。结果:蛇毒抗瘤蛋白组分Ⅱ经 RP-HPLC 和 SDS-PAGE 分析为单一成分,MALDI-TOF 质谱仪测得其相对分子质量为6719.49,其 N-末端氨基酸序列为 L-K-C-N-K-L-V-P-L-F-Y-K-T-C-P。结论:经分离鉴定,蛇毒抗瘤蛋白组分Ⅱ为心脏毒素。

蛇毒心脏毒素对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用初步研究

目的探讨蛇毒心脏毒素（ＣＴＸ）对荷瘤小鼠Ｓ１８０腹水瘤细胞生长抑制的影响。方法小鼠腹腔接种Ｓ１８０活瘤细胞，连续１０ｄ分别腹腔注射ＣＴＸ０．８ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ，分析统计荷瘤小鼠的体重变化和癌细胞死亡率，并用有丝分裂完全阻断法分析体内癌细胞的有丝分裂过程。结果ＣＴＸ各剂量组荷瘤小鼠的体重抑制和癌细胞死亡率均有明显的剂量反应关系，与对照组相比有显著的差异（Ｐ＜０．０１）；镜检发现ＣＴＸ能抑制体内癌细胞的有丝分裂，表现在０．４ｍｇ／ｋｇ和０．８ｍｇ／ｋｇ实验组腹水Ｓ１８０细胞处于有丝分裂前期和中期的细胞数量明显减少，其ＭＩ值分别为０．７１％和０．８０％，比对照组显著减少（Ｐ＜０．００１）。结论ＣＴＸ对Ｓ１８０小鼠体内癌细胞的生长有抑制和杀伤作用，并通过干扰和阻断癌细胞的有丝分裂过程，抑制腹水的生长。