口蹄疫病毒O型全自动磁微粒CLIA抗体定量检测方法的建立

【背景】口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、烈性传染病,疫苗接种是预防临床口蹄疫的有效措施。免疫抗体水平监测则是评估疫苗免疫效果、制定免疫程序的重要依据,是免疫工作和疫情防控必不可少的关键环节,因此建立高效、快速、全自动的抗体检测方法具有重要意义。【目的】基于磁微粒(micromagnetic particles,MPs)化学发光免疫分析技术(CLIA),建立一种新型、全自动、可定量的口蹄疫病毒O型抗体检测方法,为口蹄疫免疫监测和疫情防控提供技术支撑。【方法】使用纳米材料磁微粒为固相载体和分离载体包被捕获抗体,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记检测抗体,经过条件优化建立了一种新型磁微粒CLIA检测方法(magnetic particle chemiluminescence immunoassay,MP-CLIA)。本方法首先加入磁微粒-兔抗偶联物(magnetic particle-polyclonal antibodies,MPs-p Abs)、待测样本、口蹄疫病毒O型抗原,37℃孵育;再加入适量酶标抗体(ALP-p Abs),37℃孵育;最后加入化学发光底物AMPPD,检测相对发光强度(relative light unit,RLU)。研究通过检测标准品拟合标准曲线,并应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)确定检测方法的判定标准;利用质控样本进行方法学评价,同时检测田间样本,并和液相阻断ELISA(LPB-ELISA)比对,验证临床检测效果。【结果】优化后最佳反应条件为磁微粒浓度0.25 mg·m L^(-1)、口蹄疫病毒O型抗原1﹕1000稀释、酶标抗体1﹕2000稀释、加样量20μL。整个检测过程均在全自动化学发光免疫分析仪中完成,反应时间20 min,在抗体含量0—1280 U(效价0—1﹕2048)范围内标准曲线R2>0.99,可进行定量检测。该方法敏感性为94.66%;特异性为97.10%,检测口蹄疫A型、Asia I型血清型特异性为97.14%,与塞内卡病毒(SVV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、牛流行热病毒(BEFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、羊痘病毒(QRFV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体阳性血清无交叉反应;重复检测变异系数CV值<10%;田间样本检测结果与LPB-ELISA符合率为94.69%,定量结果相关系数R2为0.8473,P<0.0001,相关性显著。【结论】建立的MP-CLIA方法耗时短、操作简便,配套国产全自动化学发光仪,可进行全自动化检测,是一种新型、高效的口蹄疫病毒O型抗体定量检测方法,本方法对应的试剂盒已经完成中试生产和临床检测试验,在全国不同区域试用效果较好,具有较高的临床应用价值。

化学发光免疫分析（CLIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗环瓜氨酸肽抗体评价

目的对化学发光免疫分析（CLIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗环瓜氨酸肽（抗CCP）抗体进行评价。方法依据2010ACR／EULAR类风湿关节炎分类诊断标准收集2012年1月～4月南通大学附属医院RA患者58例。其他风湿性疾病患者67例，南通大学附属医院体检健康且排除自身抗体阳性的健康体检者67例。用CLIA法和ELISA法分别检测所有研究对象血清中的抗CCP抗体；评估CLIA法检测抗CCP抗体的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及与ELISA法的相关性。结果CLIA法对RA的诊断敏感度和特异度分别为72．41％和97．01％；阳性预测值和阴性预测值分别为91．30％和89．04％；CLIA与ELISA方法差异无统计学意义（χ^2=1．207，P〉0．05）。结论CLIA自动化仪器检测，其操作的智能化程度高，快速简便，且易于进行质量控制。

CLIA法检测血清CA125在卵巢癌诊断中的应用

目的 探讨化学发光免疫分析(CLIA)法检测血清CA125在卵巢癌诊断中的临床应用价值。方法 采用CLIA法检测247例卵巢肿瘤患者(其中卵巢癌63例,卵巢良性肿瘤184例)与98例正常健康体检女性的血清CA125水平。结果 卵巢癌组血清CA125水平为(296.53±325.06)U/ml,均显著高于正常对照组与卵巢良性肿瘤组(P<0.01),卵巢良性肿瘤组血清CA125水平显著高于正常对照组(P<0.01)。卵巢癌组、卵巢良性肿瘤组及正常对照组的血清CA125阳性率分别为81.0%、30.4%、12.2%。CLIA法检测血清CA125对卵巢癌诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及实验有效率分别为81.0%、75.9%、42.9%、94.7%与76.8%。结论 CLIA法检测血清CA125在卵巢癌诊断中具有重要临床价值,可作为速检项目尽快地为卵巢癌的临床诊断提供快速可靠的依据。

ELISA法和CLIA法检测HBs Ag和梅毒抗体的对比分析

目的:对比分析酶联免疫吸附实验(ELISA)和化学发光免疫测定(CLIA)法检测乙肝表面抗原(HBsAg)和梅毒螺旋体(TP)抗体的结果。方法:分别采用ELISA法和CLIA法平行检测3060份无偿献血标本的HBsAg和TP抗体,其中ELISA法检测HBsAg阴性的标本进行核酸检测(NAT),分析比较两种方法检测结果,检测结果不一致的标本送临检中心进行确证试验。结果:HBsAg检测结果,ELISA、CLIA的灵敏度分别为90.00%、90.00%,特异度分别为99.87%、100.00%;4例ELISA反应性CLIA阴性标本经确认为阴性,1例NAT反应性标本确认为反应性。TP抗体检测结果,ELISA、CLIA检测的灵敏度分别为40.00%、90.00%,特异度分别为99.84%、99.97%;12例ELISA反应性CLIA阴性标本确认阴性11例,反应性1例;8例ELISA阴性CLIA反应性标本有6例确认为反应性,2例为阴性。结论:CLIA检测血液标本的HBsAg和TP抗体具有较高的灵敏度和特异度。

血清CA19-9CLIA法检测的临床应用

目的探讨血清CA19-9化学发光免疫分析(CLIA)检测的临床应用价值。方法回顾分析1243例患者(其中恶性肿瘤511例、非肿瘤疾病732例)与253例健康对照组的血清CA19-9CLIA法检测水平。结果恶性肿瘤中,胰腺癌、胆囊及胆管癌、结直肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等患者血清CA19-9均值及阳性率均显著高于正常对照组(P<0.01);非肿瘤疾病中,胰腺炎、胆囊及胆管疾病、肝硬化等患者血清CA19-9均值及阳性率显著高于正常对照组(P<0.01);胃肠道疾病、肝炎、肺炎、乳腺非肿瘤疾病等患者血清CA19-9均值及阳性率与正常对照组差异均无显著性(P>0.05)。胰腺癌组、胆囊及胆管癌组、结直肠癌组、胃癌组、肺癌组、乳腺癌组CA19-9均值及阳性率分别显著高于其相对应非肿瘤疾病组(P<0.01)。肝癌组均值及阳性率均显著高于肝硬化组及肝炎组(P<0.01),肝硬化组均值及阳性率均显著高于肝炎组(P<0.01)。结论血清CA19-9CLIA法检测可作为速检项目为临床鉴别诊断胰腺癌、胆囊及胆管癌、结直肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤及胰腺炎、胆囊及胆管非肿瘤疾病、肝硬化等疾病提供快速可靠的依据。

Determination of theophylline concentration in serum by chemiluminescent immunoassay

Objective: This study aimed to establish chemiluminescent immunoassay (CLIA) for quantitative determination of theophylline levels in human serum. Methods: To measure the concentration of theophylline (n=122) and evaluate the assay.Results: The linear range of the CLIA method was 0.51～40 mg/L (Y=1.02X+0.44, r=0.995). The intra and inter CV (coefficient variance) of CLIA were 3.20% and 3.57%, respectively. The average recovery rate was 102.3%. This method was free from interference by brilirubin (＜200 μmol/L), hemoglobin (＜10 g/L), and triglycerides (＜15 mmol/L). Conclusion: This method is simple, convenient and precise for clinical pharmacokinetics study oftheophylline.

一种化学发光检测试剂在血液筛查中的应用评估

目的通过与酶联免疫吸附法(ELISA)以及核酸(NAT)检测相比较,评估国产化学发光(CLIA)试剂在乙型肝炎表面抗原与艾滋检测上的表现。方法用酶联免疫吸附法、核酸检测以及化学发光法分别对2 163份无偿献血者血样进行平行检测,艾滋反应性标本采用免疫印迹进行确认,乙肝表面抗原化学发光法结果与血液中心结果不相符者,重测3次,重测结果仍不符者采用罗氏以及雅培表面抗原定量检测进行验证,分析比较结果。结果 2 163份无偿献血者标本中通过ELISA与NAT检测,共有3例艾滋和21例乙肝为反应性。CLIA检测,共有4例艾滋和9例乙肝为反应性,艾滋有1例标本不相符,乙肝有13例不相符。经确认,艾滋反应性标本全为阴性,13例乙肝不相符结果中,12例为阴性,1例为血液中心漏检。结论国产化学发光法在艾滋与乙肝的检测方面,具有良好的敏感性与特异性,可以有效缩短窗口期,减少漏检,值得推广。

化学发光酶免疫分析法检测食品中赭曲霉毒素

目的:建立检测食品中赭曲霉毒素(OA)快速灵敏化学发光酶免疫方法。方法:采用棋盘滴定法确定OA-BSA抗原的包被质量浓度、包被量以及一抗和二抗的工作稀释度,建立间接竞争抑制曲线,确定线性范围、检出限和回收率。结果:确定的检测工作条件为:OA-BSA最佳包被质量浓度60ng/mL,抗OA单克隆抗体的最佳工作稀释度1:400,校正曲线线性范围6～400ng/mL,赭曲霉毒素的检出限为0.02ng/mL,50%抑制质量浓度145ng/mL,在100～2000ng/g添加水平的回收率范围为83.6%～105.8%。用所建方法对质控样品进行了分析,检测结果符合率达到100%。结论:所建方法准确、灵敏,适用于食品中OA的筛选。

三种检测24小时尿游离皮质醇方法的比较

应用化学发光免疫测定法 (CLIA)和竞争性蛋白结合分析法 (CPBA)检测 2 4h尿游离皮质醇 (UFC)水平 ,比较方法的相关性、精密度及特异性。拟用CLIA替代CPBA检测UFC。采用CLIA提取法与CLIA未提取法和CPBA法检测 5 3名正常人 ,13例未经治疗的库欣综合征患者和 92例肥胖患者及 37例口服类固醇激素药患者的 2 4hUFC水平。对其结果进行相关性比较 ,并做重复性试验 ,同时进行了七种类固醇激素的交叉试验 ,以比较三种方法的精密度和特异性。CLIA提取法与CPBA法相比较 ,r =0 .814 ,P <0 .0 0 0 1;CLIA未提取法与CPBA法相比较 ,r =0 .70 6 ,P <0 .0 0 0 1;CLIA提取法和CLIA未提取法相比较 ,r =0 .90 1,P <0 .0 0 0 1。交叉试验显示 :除皮质醇外 ,强的松龙在CPBA法、CLIA提取法和CLIA未提取法中 ,均干扰UFC测定 ,其交叉百分率分别为 19.0 %、15 .4 %及 2 4 .9% ,高于其它五种类固醇激素 ,而后五种激素对UFC的测定干扰不大。两种CLIA法的批内和批间变异系数均小于CPBA法 ,而且均与CPBA法有很好的相关性。由于CLIA提取法的精密度和特异性均优于CPBA法和CLIA未提取法 ,本文建议用CLIA提取法代替CPBA法。

猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测试剂盒的应用研究

为了验证猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测试剂盒的临床应用效果,对6个地区的2200份血清样本进行检测,并采用进口试剂同步检测,比较2种试剂盒的一致性;田间筛选了391份猪瘟抗体阴性和阳性血清,采用该试剂盒与荧光抗体病毒中和试验同时进行检测,比较试剂盒的一致性;为了进一步验证对免疫抗体的检出情况,采用本试剂盒定期对猪瘟疫苗免疫后抗体消长情况进行检测。结果显示:本试剂盒与进口试剂盒具有高度的一致性(Kappa值为0.78);与荧光抗体病毒中和试验的结果几乎完全一致(Kappa值为0.908);免疫后18 d,所有免疫猪的抗体全部转阳。

化学发光免疫法检测血清CEA,CA199和CA125水平在恶性肿瘤诊断中的意义(英文)

目的探讨血清中CEA,CA199和CA125在恶性肿瘤中的临床应用价值。方法应用全自动化学发光免疫方法检测50例正常人,40例良性肿瘤患者及214例恶性肿瘤患者(其中肝癌40例、胃癌30例、结直肠癌42例,卵巢癌30例、胰腺癌20例、肺癌52例)血清中CEA,CA199和CA125水平并进行比较分析。结果肝癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌血清CEA,CA199和CA125含量显著高于正常对照组及良性肿瘤组(P<0.01),CEA,CA199和CA125单检的阳性率分别为50.0%,50.9%和50.4%,联检总的阳性率为85.5%。结论血清CEA,CA199和CA125联合应用于恶性肿瘤的诊断及提高总的检出率具有价值。

仿刺参体腔液补体类似物化学发光免疫检测

首次应用酶联化学发光免疫检测(Chemiluminesent Immunoassay,CLIA)技术测定仿刺参体腔液补体类似物AjC3和AjC4。羊抗人C3、C4抗体吸附到经过紫外线处理的聚苯乙烯管内,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体。过氧化氢和鲁米诺为辣根过氧化物酶的底物。捕获抗体包被最适浓度为1μg/ml,免疫反应20℃孵育2h达到平衡。HRP-IgC3、IgC4抗体复合物适宜稀释度为1:2000,HRP-IgC3I、gC4抗体复合物4℃下保存8d性能稳定,室温下5d内性能稳定。标准品浓度在0.1～10ng/ml范围内时与化学发光值之间具有良好的线性相关性,检测灵敏度为0.1ng/ml。结果表明应用酶联化学发光免疫检测技术能够检测到仿刺参体腔液中含有补体类似物,AjC3含量为6.58±1.4μg/ml,AjC4含量为0.67±0.3μg/ml。

神经生长因子的化学发光标记与检测

以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）和吖啶酯（ＡＥ）为化学发光标记试剂分别标记神经生长因子（ＮＧＦ）单克隆抗体，经分离纯化制成标记抗体（ＨＲＰ－Ａｂ，ＡＥ－Ａｂ），采用化学发光免疫分析法（ＣＬＩＡ）对ＮＧＦ进行检测，其检出限为０．５ｎｇ／ｍＬ，线性范围为２～１２８ｎｇ／ｍＬ．１０例样本分别用ＣＬＩＡ和ＲＩＡ进行检测，其结果无显著性差异．

输血前患者血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体检测结果临床研究

目的:观察输血前患者血乙肝表面抗原(HBsAg)、丙肝抗体(抗HCV)、艾滋病抗体(抗HIV)和梅毒抗体检测结果。方法:取医院输血治疗患者3542例,治疗前对患者采用化学发光免疫测定(CLIA)法和ELISA法检测血清标本中血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体指标,分析其检测结果并提出相应的解决对策。结果:3542例输血患者中704例血HBsAg阳性,52例抗HCV阳性、3例抗HIV阳性,200例梅毒抗体阳性;男性血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体感染率,高于女性(P<0.05)。3542例输血患者中不同年龄段均存在血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体感,对于血HBsAg、抗HCV多发生在21~40岁年龄段;抗HIV多发生在41~60岁年龄段;梅毒抗体发生在41~>60岁年龄段。959例血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体感染病例分布科室较多,排在前三位分别为消化内科、普外科及肿瘤科,分别占33.98%、20.96%及17.00%。结论:输血前加强患者血HBsAg、抗HCV、抗HIV和梅毒抗体指标检测,能降低血液传染性疾病发生率,值得推广应用。

增强化学发光法检测手术及输血感染标志物的临床应用

目的对增强化学发光法检测感染性标志物进行临床应用评价。方法采用美国强生增强化学发光技术检测系统及配套试剂对乙肝表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、抗人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)、抗梅毒螺旋体特异性抗体(抗-TP)进行初筛检测,阳性标本立即重新复查一次,仍为阳性者判断为初筛试验阳性。对于HBsAg、抗-HCV初筛阳性标本采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)进行确证;抗-HIV初筛阳性者送HIV确诊实验室进行确诊、抗-TP初筛阳性者采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)进行确证。结果增强化学发光法检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的阳性检出率分别是5.83%、0.75%、0.05%、2.73%,阳性检出率均高于各检测项目的复检确认方法的阳性率。41123例术前检查患者血清标本中,应用增强化学发光法共筛查出2399例HBsAg阳性标本、308例抗-HCV阳性标本、19例抗-HIV阳性标本、1123例抗-TP阳性标本。筛查的阳性标本经各项目的复检确认方法进行复检确认后,共确认出2325例HBsAg阳性标本、299例抗-HCV阳性标本、17例抗-HIV为阳性标本、1054例抗-TP阳性标本。应用增强化学发光法检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的S/CO值分别在5.71、9.24、15.9、10.82以上时,经复检后各检测项目均呈现100%的阳性。结论增强化学发光法HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的检测特异性大于99%,检测阳性预测值完全能够满足临床诊疗需求,检测过程和工作效率都优于常规免疫标记技术,值得临床推广应用。

不同检测方法对低水平乙型肝炎表面抗原的测定及其临床评估

目的:探讨免疫发光、电化学免疫发光、ELISA三种方法对检测低水平乙型肝炎表面抗原的价值。方法:以免疫发光测试系统Architect i2000检测结果为参考,把70例<50 IU/ml的标本分成三个级别:<1 ng/ml、1~5 ng/ml、≥5 ng/ml三组,用电化学免疫发光MODULAR〈E〉170、ELISA检测,对三种方法测定的结果进行比较。结果:免疫发光Architect i2000与电化学免疫发光MODULAR〈E〉170比较,<1 ng/ml组符合率79.2%(P(0.05),1~5 ng/ml组符合率100%,≥5ng/ml组符合率100%。免疫发光Architect i2000与ELISA比较,<1 ng/ml组符合率0%,1~5 ng/ml组符合率45.5%(P<0.05),≥5 ng/ml组符合率100%。结论:免疫发光Architect i2000与电化学免疫发光MODULAR〈E〉170对低水平HBsAg的检测效能基本一致,结果相对可靠,常规ELISA法对≥5 ng/ml的HBsAg检测结果可靠,但对低水平HBsAg漏检率高,特别是<1 ng/ml HBsAg很难检出。

急性心肌梗死病人肌钙蛋白I含量与梗死面积和部位的关系

目的 探讨急性心肌梗死(AMI)病人的肌钙蛋白I(cTnI)的含量与梗死面积和部位的关系 ,以评估AMI的病情程度及预后。方法 健康对照组 60例 ,于 0 9:0 0空腹抽静脉血 3ml,分离血清。AMI组 5 8例 ,于胸痛发作后 3h、6h、9h、12h时抽静脉血 3ml,分离血清。cTnI采用化学发光免疫分析法 (CLIA)定量检测。肌酸激酶同工酶 (CK -MB)采用连续监测法定量检测。结果 急性广泛前壁梗死病人的cTnI含量与对照组及急性前壁、间壁梗死、急性下壁、侧壁梗死组比较有统计学意义 (P <0 .0 1) ,与急性非Q波性梗死组比较无统计学意义 (P >0 .0 5 )。cTnI含量与CK -MB有良好的相关性。结论 用CK -MB计算梗死面积已得到病理和临床证实。cTnI含量与CK -MB有良好的相关性 ,说明cTnI含量越高AMI病人的梗死面积越大。实验结果表明 ,cTnI含量与AMI病人的梗死面积呈正相关 ,与梗死部位无明显相关性。

时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂临床应用研究

目的对自制时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂盒进行临床应用研究,为该试剂盒临床应用及临床疗效评价提供科学依据。方法收集血清标本326份,用自制试剂盒按试剂盒操作说明书对血样进行测定,并以化学发光法(R oche)为对照方法,W ALLAC公司的CEA时间分辨免疫测定药盒(A u toDELF IATMhCEA)作为复核试验,获取相关目标实验数据,并计算得“真实性”和“可靠性”等统计学数据。结果以化学发光法为对照试验,其阳性符合率为95.83%,阴性符合率为98.73%,检验无显著性差异;自制试剂盒的定量测定值与化学发光法的测定值较为一致,相关系数达0.93,相关性好。结论试剂盒检测性能与现在临床广泛应用的方法相仿,能满足临床应用的需要。

血清CA125水平与输卵管癌临床分期的相关性分析

目的探讨输卵管癌患者血清CA125水平与临床分期的相关性。方法选择1989年12月~2010年6月在我科住院的输卵管癌患者31例（输卵管癌组）,均经临床和病理证实,根据FIGO临床分期标准：Ⅰ期4例,Ⅱ期11例,Ⅲ期14例,Ⅳ期2例。选取同期本院健康体检女性50例（健康对照组）,采用化学发光法检测2组血清CA125水平,分析CA125水平差异及与肿瘤分期间的相关性。结果输卵管癌患者血清CA125水平显著高于健康对照组（P〈0.01）;输卵管癌组患者中,随着临床分期的增加,血清CA125水平逐渐增加,不同临床分期的输卵管癌患者之间,血清CA125水平差异有统计学意义（P〈0.01）。结论输卵管癌患者血清CA125水平与临床分期有密切相关性,血清CA125可作为输卵管癌的肿瘤标志物,对治疗效果监测,判断有无复发、转移具有重要临床价值。

C-肽化学发光免疫分析方法学研究

目的：建立人血清C-肽化学发光免疫分析法。方法：采用两株高特异的抗C-肽单克隆抗体，以一株包被微孔板制成固相抗体，另一株标记碱性磷酸酶，以金刚烷衍生物为底物，双抗体夹心法测定人血清C-肽浓度。结果：以5μg/ml单克隆抗体包被微孔板，酶结合物以1：5000稀释，在C-肽浓度0．1～15ng／ml范围内线性良好，线性方程为y=0．9575x-0．0869，相关系数0．99；灵敏度为0．01ng／ml，批内、批间变异系数分别为5．8％、8．4％；平均回收率98．4％，范围91．5％～105．0％。结论：文中建立的人血清C-肽化学发光免疫分析法，首次建立小分子人血清C-肽双抗体夹心化学发光免疫法测定。线性好，灵敏度较常规高出一个数量级，准确度和精密性高，能够满足一般临床诊断和科研的应用。