丁酸梭菌在不同肠道内微生物环境下对雏鸡空肠发育、肠屏障功能和生长性能的影响

本研究旨在探究丁酸梭菌在不同肠道微生物环境下对宿主的影响效果。通过粪菌移植将雏鸡肠道内微生物环境改造为成年鸡肠道内微生物环境,每只雏鸡饲喂0.5 m L菌液。在饲料中添加丁酸梭菌测试其对雏鸡的影响,丁酸梭菌浓度为109CFU/kg。将144只1日龄雏鸡平均分为四组:对照组(CON组)、粪菌移植组(FMT组)、丁酸梭菌组(CB组)和联合处理组(CT组)。CON组饲喂生理盐水和正常雏鸡饲料,FMT组饲喂菌液和正常饲料,CB组饲喂生理盐水和加了丁酸梭菌的饲料,CT组饲喂菌液和添加丁酸梭菌的饲料。结果表明:CB组14日龄雏鸡体重显著高于CON组8.45%(P <0.05),7日龄雏鸡肠道重量极显著低于CON组22.45%(P <0.01),7日龄空肠绒毛高度比隐窝深度(绒腺比)显著高于CON组20.20%(P <0.05),7日龄和14日龄雏鸡空肠claudin-1基因相对表达量显著高于CON组32.10%和50.49%(P <0.05),7日龄雏鸡空肠MUC2基因相对表达量极显著低于CON组56.44%(P <0.01);CT组14日龄雏鸡体重显著高于FMT组7.25%(P <0.05),21日龄雏鸡肠道重量显著高于FMT组10.06%(P <0.05),7日龄雏鸡空肠MUC2基因相对表达量极显著低于FMT组60.82%(P <0.01)。总的来说,添加丁酸梭菌会对生命早期的雏鸡肠道发育造成一定的不良影响,却会促进肠道绒毛的发育,并促进雏鸡肠道连接蛋白claudin-1基因高表达,抑制黏蛋白基因的表达并促进14日龄左右的雏鸡体重增长速率。在成年鸡肠道菌群环境下,丁酸梭菌对生命早期的雏鸡肠道发育没有负面影响,对雏鸡肠道绒毛的发育也没有明显的促进作用,只是促进了雏鸡体重增加,并在雏鸡7日龄左右抑制了肠道黏蛋白的基因表达。

鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白(Etmic-2)与鸡泛素融合蛋白基因的DNA疫苗表达载体的构建

本文用RT_PCR技术从鸡的肌肉组织中扩增出泛素 (ubiquitin_Ub)编码基因 ,再将其定向克隆到真核表达载体pCMV_Script中多克隆位点的BamHⅠ、HindⅢ之间 ,构建成重组质粒pCMV_Ub。经酶切和测序确定为正确后 ,再将来源于E .teella裂殖子的Etmic_2基因克隆到pCMV_Ub质粒中Ub基因下游的SalⅠ位点上 ,经酶切鉴定 ,获得编码Etimc_2基因的真核表达载体pCMV_Ub_mic_2。该载体中的Etmic_2基因与Ub融合表达 ,并将用于DNA疫苗免疫鸡 ,希望融合了Ub的Etmic_2蛋白能更有效的进入MHC_Ⅰ循环 。

北京油鸡和矮脚鸡心脏型、脂肪型脂肪酸结合蛋白基因多态性的研究

根据不同物种间同一基因核苷酸序列的保守性及相似性,设计特异性引物,利用聚合酶链式反应技术(PCR),扩增鸡心脏型脂肪酸结合蛋白(H FABP)基因第二内含子序列;根据已经发表的鸡脂肪型脂肪酸结合蛋白(A FABP)基因mRNA序列,设计特异性引物,扩增鸡A FABP基因第三内含子序列。选用HhaⅠ、HaeⅢ、HinfⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、PstⅠ、XmnⅠ和HindⅢ8种限制性内切酶对扩增产物分别进行单酶切,发现H FABP基因第二内含子HhaⅠPCR RFLP及A FABP基因第三内含子HinfⅠPCR RFLP。

脂肪型脂肪酸结合蛋白基因多态性与鸡肉品质性状的关系研究

采用PCR-SSCP技术分析了A-FABP基因在北京油鸡、矮脚鸡、泰和乌骨鸡、崇仁麻鸡、鹿苑鸡、霞烟鸡等6个地方品种鸡和AA肉鸡中的多态性,发现的3个多态位点的基因型频率和等位基因频率在不同品种之间存在显著差异。测序分析表明:多态位点的产生分别是由碱基C→T、G→A以及C→T的变异引起的。在北京油鸡、矮脚鸡群体中对各多态位点不同基因型与体重、肌内脂肪、腹脂率等脂肪相关性状进行关联分析,结果显示不同基因型间在部分肉品质相关性状上差异显著。

葛根素对子宫内膜异位症细胞恶性行为调控机制研究

目的:观察葛根素对子宫内膜异位症(endometriosis,EM)血管形成的影响以及葛根素对EM肿瘤相关基因的调控作用。方法:利用子宫内膜细胞原代培养技术、鸡胚绒毛尿囊膜(chicken chorioallantoic membrane,CAM)模型、基因芯片等方法,了解EM肿瘤相关基因表达的情况,观察葛根素对EM血管生成、肿瘤相关基因的调控作用。结果:葛根素可明显抑制种植内膜组织囊泡及周边血管形成,其血管阳性面积显著小于模型组(P<0.05)。基因芯片结果显示,增殖期EM在位内膜组织较之正常在位内膜组织、EM异位内膜组织较之EM在位内膜组织,在癌基因,抑癌基因,细胞黏附、侵袭、转移、血管生成相关基因及细胞凋亡相关基因表达方面有明显不同。100μmol/L葛根素可明显上调EM在位基质细胞凋亡基因BAD、BAX、CASP8、CASP9和TNFRSF6表达,并增强细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子CDKN1B、CDKN2A及IFNA1、IFNB1基因表达;减少癌基因FOS、CHEK2、SRC和黏附侵袭基因ITGB5、MMP9及生长、转录因子基因PDGFA、NFKBIA表达。结论:葛根素能够抑制异位灶新生血管的形成,减少异位灶的血液供应;通过调整EM癌基因、抑癌基因、细胞周期相关因子基因表达,并通过影响凋亡相关基因的表达,促进细胞凋亡,从而改变EM内膜细胞类似肿瘤细胞的恶性行为。

基于RNA-Seq筛选禽致病性大肠杆菌损伤雏鸡小肠差异表达基因

为筛选禽致病性大肠杆菌(APEC)感染雏鸡后其小肠损伤的差异表达基因,本研究利用APEC菌株经腿部肌肉途径接种两周龄雏鸡,对照组鸡以相同的途径注射相同体积的生理盐水,选取病变严重的肠道与对照组肠道,利用高通量RNA-Seq技术筛选出雏鸡小肠受APEC损伤后的差异表达基因,对其进行生物信息学GO功能分类和KEGG信号通路分析,并利用荧光定量PCR验证部分差异表达基因。结果显示差异变化在2倍以上的基因共有131个,其中74个上调表达,57个下调表达。GO功能分类结果显示,这些基因主要涉及到蛋白结合、免疫反应、转运活动等功能。KEGG分析表明这些差异表达基因参与PPAR、新陈代谢、细胞因子受体相互作用、Jak-STAT、RIG-I-样受体、吞噬体等信号通路。本研究为进一步研究APEC的致病作用及宿主抗病机制奠定了基础。

羽速基因对万载康乐黄鸡肉用性能的影响

试验以万载康乐黄鸡为研究材料 ,研究羽速基因对万载康乐黄鸡肉用性能的影响 ,其中包括报道甚少的有关羽速基因对鸡体尺、屠宰性能的影响 ,也包括未见报道的羽速基因对鸡肌肉品质的影响、常规营养成分的影响。研究发现 :羽速基因对鸡早期增重影响有显著差异 ,而对后期影响差异不显著 ,二者达到不显著的周龄与品种、营养及保温措施等有关 ,同一品种在不同生长速度的情况下 ,达到不显著的周龄不一样。快慢羽基因对万载康乐黄鸡肌肉品质、常规营养成分。

羽速基因对莱芜黑鸡早期生长速度和蛋用性能的影响

试验选用1日龄健康雏鸡,根据羽毛生长速度进行快慢羽分群饲养,研究羽速基因对莱芜黑鸡早期生长速度和蛋用性能的影响,结果表明,羽速基因对早期生长速度有一定的影响,初生重、2、4、7、10周末快羽系鸡体重显著高于慢羽,但对蛋用性能方面影响差异不显著。

APEC感染雏鸡小肠炎症相关基因的RNA-Seq分析

【目的】研究禽致病性大肠杆菌(APEC)感染雏鸡小肠炎症相关基因表达的变化。【方法】对14日龄雏鸡腿部肌肉注射0.5mL/羽1×106 CFU/mL的APEC菌液,观察雏鸡的发病情况,并取病变严重雏鸡空肠为测序样品,同时以注射等量生理盐水为对照,采用RNA高通量测序(RNA-Seq)技术,筛选分析感染和未感染APEC雏鸡小肠炎症相关基因表达的变化。【结果】以差异倍数在2倍及以上为标准,从试验组与对照组共筛选出差异表达基因131个。GO分类结果显示,有87个差异基因得到491个GO功能注释,这些基因主要富集在炎症反应、肝素整合、白细胞介素-6的生物合成等过程。基于KEGG分析,仅有29个差异基因得到注释,涉及41个信号通路,主要参与的信号通路有PPAR、花生四烯酸代谢、MAPK等。【结论】APEC感染雏鸡后会引起机体炎症相关基因表达的变化,从中筛选出10个可能在炎症反应中具有重要影响的炎症相关基因。

Cdk2ap1在不同性别鸡胚中的表达

为研究通过抑制消减杂交筛选出的cdk2ap1基因在鸡胚胎发育过程中的表达,设计cdk2ap1引物并通过RT-PCR扩增cdk2ap1基因片段,构建cdk2ap1/pGEM-T重组质粒。以构建的重组质粒为模板,使用Sp6和T7RNA聚合酶合成地高辛(dig)标记的正、反义RNA探针,借助胚胎整体原位杂交技术研究了cdk2ap1在雌雄鸡胚中的表达。结果表明cdk2ap1基因在4.0d两性胚胎的脑间质、菱脑、听囊、脊神经管、前肢等部位均有表达,且在雄性鸡胚中的表达量高于雌性;在雄性鸡胚的生殖脊、后肢部位中该基因有表达但在雌性胚胎对应部位却基本没有表达。鉴于该基因在雌雄鸡胚中的差异表达,推测cdk2ap1基因在鸡胚性别分化及性腺发育过程中起一定调节作用。

小鼠endostatin基因的克隆、表达及表达产物的活性鉴定

目的 克隆并表达小鼠 endostatin基因 ,并初步检测其血管生长抑制功能 ,为胶质瘤的基因治疗探索新的途径 .方法 从小鼠肝组织用 RT- PCR法扩增 endostatin基因 ,重组入 p UC19质粒 ,经测序证实无误后 ,重组入表达载体p DH,经温度诱导表达 ,并用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)实验检测表达产物活性 .结果 从小鼠肝组织中成功扩增到endostatin基因 ,测序与报道序列一致 .重组进 p DH后经温度诱导表达 ,在 SDS- PAGE电泳上得到一条新的蛋白表达带 ,分子质量为 2 0 ku.纯化后的蛋白能明显抑制 CAM的血管生长 .结论 成功构建了小鼠 endostatin c DNA的重组克隆p DH- Endo,并在大肠杆菌中获得高效表达 .在 CAM实验中表明纯化后的蛋白具有明显血管抑制作用 .

京海黄鸡MC4R基因新突变位点的分析

黑素皮质素受体(melanocortin-4 receptor,MC4R)基因突变与动物的食欲、肥胖、生长等性状有关,而鸡MC4R基因突变的研究甚少。本研究利用PCR-SSCP和DNA测序的方法,对京海黄鸡鸡群MC4R基因多态性进行了分析,发现存在2个单核苷酸多态位点,分别为第662位碱基G→C点突变和第733-734位碱基间插入一个C碱基。

IBDV感染SPF雏鸡法氏囊中TLR3表达的动态变化

为了研究鸡Toll样受体3(ch TLR3)基因在传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的雏鸡法氏囊内的表达情况,试验用IBDV感染14日龄SPF雏鸡,采用荧光定量PCR技术及间接免疫荧光技术检测法氏囊中TLR3基因及蛋白的表达情况。结果表明:感染组雏鸡法氏囊中TLR3 mRNA及蛋白表达均呈先升高后降低的趋势。说明TLR3参与雏鸡抵抗IBDV入侵的过程。

羽速基因对万载康乐黄鸡蛋用性能的影响

以万载康乐黄鸡为研究对象 ,研究羽速基因对万载康乐黄鸡蛋用性能的影响。结果发现 :慢羽鸡开产日龄迟于快羽鸡 6 .5 d(P<0 .0 5 ) ,而开产体重大于快羽鸡 86 .5 g(P<0 .0 1) ,开产蛋重慢羽大于快羽 1.8g(P<0 .0 5 ) ;2 80日龄时 ,快羽鸡蛋重比慢羽鸡蛋重 2 .1g(P<0 .0 5 ) ,至 5 0 0日龄时 ,二者差异不显著。羽速基因对 2 80日龄、5 0 0日龄产蛋数影响差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,快羽鸡比慢羽鸡有较高蛋黄百分比和较低蛋白百分比 ,差异显著 (P<0 .0 5 ) ;蛋壳厚度、蛋壳重、蛋形指数、蛋白高度及哈氏单位等指标无显著差异。

碱性磷酸酯酶基因在鸡胚和人乳腺癌细胞中的表达

通过PCR方法从pSEAP2-control质粒获得人胎盘碱性磷酸酯酶(PLAP)基因,并克隆到鸡输卵管特异性表达载体(pAB-Sig-SV40)卵清蛋白基因调控区下游。pSEAP2-control和pAB-Sig-AP-SV40质粒转染鸡胚细胞和乳腺癌细胞(MCF-7),转染48h后以对硝基苯磷酸钠(pNPP)为底物检测PLAP的活性,结果pSEAP2-control在鸡胚细胞和MCF-7细胞中表达PLAP,pAB-Sig-AP-SV40在鸡胚细胞中不表达,而在MCF-7细胞中表达。说明鸡胚细胞可以表达有活性的人源糖蛋白,另外也说明在雌激素受体细胞中,鸡卵清蛋白基因启动子可启动外源基因表达。

胚蛋注射甲氨蝶呤和叶酸对雏鸡屠宰性能、血清生化指标和肝脏叶酸代谢相关基因表达的影响

本试验旨在研究胚蛋注射甲氨蝶呤(MTX)和叶酸(FA)对鸡胚孵化率以及雏鸡屠宰性能、FA代谢相关血清指标和肝脏FA代谢相关基因表达的影响。选用300枚琅琊鸡商品代种蛋,随机分为4组,每组5个重复,每个重复15枚种蛋,孵化至7胚龄时分别注射0.1 mL 0.85%生理盐水(对照)、0.1 mL MTX(5μg)溶液、0.1 mL FA(90μg)+MTX(5μg)溶液、0.1 mL FA(90μg)溶液。出雏后统计总出雏数,计算孵化率;雏鸡出壳后禁食12 h,每个组随机选择雏鸡10只,测定血清生化指标、屠宰性能以及肝脏FA代谢相关基因的表达水平。结果表明:1)与对照组相比,胚蛋注射5μg MTX显著降低了鸡胚孵化率(P<0.05);注射MTX和FA均未对雏鸡屠宰性能和器官指数产生显著影响(P>0.05)。2)与对照组相比,胚蛋注射5μg MTX极显著降低了雏鸡血清中FA含量(P<0.01);注射90μg FA+5μg MTX或90μg FA极显著增加了雏鸡血清中FA含量(P<0.01);注射5μg MTX极显著升高了雏鸡血清中同型半胱氨酸(Hcy)含量(P<0.01),注射90μg FA极显著降低了雏鸡血清中Hcy含量(P<0.01);注射5μg MTX、90μg FA+5μg MTX或90μg FA极显著增加了雏鸡血清中二氢叶酸还原酶(DHFR)、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)活性与胰岛素样生长因子2(IGF2)含量(P<0.01)。3)与对照组相比,胚蛋注射90μg FA极显著降低了MTHFR基因在肝脏中的表达量(P<0.01);注射5μg MTX极显著提高了还原型叶酸载体(RFC)在肝脏中的表达量(P<0.01);注射90μg FA+5μg MTX或90μg FA对肝脏中RFC、DHFR、IGF2、质子耦合叶酸转运体(PCFT)的表达量均无显著影响(P>0.05)。由此可见,MTX能干扰鸡胚FA代谢,导致孵化率下降;鸡胚孵化期注射MTX和FA对雏鸡血清FA代谢酶活性和Hcy含量有重要调控作用,并对肝脏中MTHFR和RFC的表达具有显著影响。

21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的PCR检测

为检测某鸡场21日龄鸡胚金黄色葡萄球菌感染情况,针对其特有的耐热核酸酶基因(Nuc)设计并合成1对引物进行PCR扩增,建立特异性检测金黄色葡萄球菌的PCR方法.对18个21日龄鸡胚培养、分离,获得18株疑似金黄色葡萄球菌菌落.用建立的PCR方法对18份疑似样品进行扩增获得4份金黄色葡萄球菌的阳性扩增,证实该鸡群21日龄鸡胚中金黄色葡萄球菌的感染率为22%(4/18).本文中基于Nuc基因建立的PCR检测方法是检测鸡胚中金黄色葡萄球菌快速、特异的分子生物学方法.

以组织锌、金属硫蛋白及其基因表达指标评价肉仔鸡对锌源的相对生物学利用率

研究了有机锌源和无机锌源条件下肉仔鸡组织中金属硫蛋白(MT)的基因表达。在肉仔鸡饲粮中以锌蛋白盐或硫酸锌形式添加锌200mg/kg饲喂6d或12d,比较肝、小肠MT和MTmRNA与骨锌作为评价锌源利用率的指标。3种指标均随锌量的增加而增加(P<0 001)。以骨锌为指标,锌蛋白盐的相对生物利用率为124%。此值在一定范围内类似于以几种组织MT和MTmRNA水平为指标的测定结果,对于肉仔鸡,MT基因的调控可能是评价锌相对生物利用率的敏感指标。这种方法可减少试验所需的时间和动物数量。

基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞相关基因功能方法的建立

目的建立一种基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞（NSCs）相关基因功能的方法。方法 RT-PCR检测鸡胚发育不同时期脊髓NSCs表面标志物;在鸡胚胚龄（E）E2.5~E3时,利用活体电转基因技术将p CAGGSGFP质粒转染到鸡胚脊髓,E6时体视荧光显微镜下筛选绿色荧光蛋白（GFP）阳性胚胎,每组至少取材5个;通过脊髓横切及open-book技术观察神经纤维投射情况;普通光学显微镜下剥离出3~5条脊髓,经胰蛋白酶消化、离心后,无血清NSCs培养基重悬获得细胞铺板,于37℃、5%CO_2细胞培养箱内培养,定时观察GFP阳性脊髓NSCs的形态变化。结果 RT-PCR结果表明,鸡胚脊髓中阳性表达NSCs表面标志物;随后的脊髓横切及open-book结果表明,GFP阳性转染侧的神经纤维能穿过底板,投射到脊髓对侧;而脊髓NSCs体外培养结果显示,GFP标记的脊髓细胞具有典型的NSCs形态,继续培养后有明显突起产生。结论本实验成功建立了一种基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞相关基因功能的方法。

鸡胚营养组合物对衰老大鼠基因损伤修复的影响

目的:观察鸡胚营养组合物对衰老大鼠基因损伤修复的影响,探讨其延缓衰老的可能机制。方法:采用D-半乳糖建立衰老SD大鼠动物模型,每日1次颈背部皮下注射D-半乳糖500mg/(kg·d),连续造模90天,对照组颈背部皮下注射等剂量的生理盐水注射液。从第1天起,鸡胚营养组合物组、鸡胚组、营养组合物组、蛋清组,分别以相应剂量对大鼠进行灌胃,每天1次,直至第90天,拉颈处死大鼠。取各组大鼠肝脏、骨髓和脑组织,采用RT-PCR法检测各组织修复基因的表达情况。结果:与衰老模型组相比,鸡胚营养组合物组衰老大鼠肝脏和骨髓组织中错配修复基因MSH2表达量升高(P<0.05);鸡胚营养组合物组衰老大鼠肝脏组织中同源重组修复基因Xrcc1、Xrcc2、骨髓中同源重组修复基因Rad51以及脑组织中同源重组修复基因Rad51、Xrcc1表达量升高(P<0.05)。结论:鸡胚营养组合物能够修复衰老大鼠肝脏、骨髓和脑组织基因的损伤,此可能为其延缓衰老的作用机制之一。