丙戊酸钠活化大鼠海马和额叶ERK-1/2信号传导通路

为探讨慢性服用丙戊酸钠对中枢神经系统细胞外调控激酶 (ERK) 1/ 2信号传导通路活性的影响 ,阐明丙戊酸钠治疗躁狂抑郁症作用的可能分子机制 ,将 4 0只雄性Wistar大鼠随机分为实验组和对照组 ,每组各 2 0只 .实验组大鼠用含丙戊酸钠的饲料喂养 ,对照组大鼠用常规饲料喂养 ,4周后取大鼠海马和额叶组织制备蛋白质样本 ,蛋白质印迹方法分析海马和额叶组织丝裂原活化的蛋白激酶激酶 (MEK)、ERK 1/ 2、MAPK活化的蛋白激酶 1(RSK1)、cAMP效应元件结合因子 (CREB)的磷酸化水平以及Bcl 2的表达水平 ,电泳迁移率变动分析(EMSA)方法分析海马和额叶组织激活蛋白 1(AP 1)的DNA结合活性 .与对照组比较 ,丙戊酸钠显著增强海马和额叶MEK、ERK 1/ 2、RSK1、CREB和AP1的活性 ,上调海马和额叶Bcl 2的表达 .结果表明 :慢性服用丙戊酸钠激活中枢神经系统ERK 1/ 2信号传导通路、上调中枢神经系统Bcl 2蛋白表达 。

锂盐对中枢神经系统ERK-1/2信号通道活性和Bcl-2家族蛋白表达的影响

目的 :分析长期服用锂盐对中枢神经系统ERK 1/ 2信号传导通道活性以及Bcl 2家族蛋白表达的影响 ,探讨锂盐治疗躁狂抑郁症作用的可能分子机制。方法 :将 40只健康的雄性Wistar大鼠随机均分为锂盐组和对照组。锂盐组大鼠用每公斤含 2 .4g碳酸锂的饲料喂养 ,对照组大鼠用常规饲料喂养 ,4周后取大鼠海马和额叶制备蛋白样本 ,WesternBlotting分析海马和额叶组织MEK ,ERK 1/ 2 ,RSK1,CREB的磷酸化水平 (活化程度 )以及Bcl 2和Bax蛋白的表达水平。结果 :与对照组比较 ,锂盐增强大鼠海马和额叶MEK ,ERK 1/ 2 ,RSK1和CREB的活性 ,上调海马和额叶Bcl 2表达 ,下调海马和额叶Bax表达。结论 :长期服用锂盐激活中枢神经系统ERK 1/ 2信号传导通道 ,调节中枢神经系统Bcl 2家族蛋白表达 ,这些作用可能与锂盐抗躁狂抑郁症的作用有关。

ERK-1/2对N/OFQ调节大鼠皮层神经元延迟整流钾电流激活动力学的影响

目的研究ERK-1/2对N/OFQ调节大鼠皮层神经元延迟整流钾电流(IK)激活动力学的影响,初步探讨N/OFQ调节大鼠皮层神经元IK的ERK-1/2途径。方法研究采用全细胞膜片钳技术,观察ERK-1/2特异性抑制剂U0126对N/OFQ调节大鼠皮层神经元IK激活动力学的影响。结果在ERK-1/2抑制剂U0126存在情况下,IK激活曲线的V1/2由给药前的(-42±3.7)mV向超极化方向移动为(-39.9±5.9)mV(P<0.01)。IK激活曲线的κ由给药前的(21.6±8.1)mV变为给药后的(22.9±3.8)mV(P<0.05)。结论 U0126可以显著抑制N/OFQ对IK激活曲线的影响。

补肺纳肾丸治疗慢性阻塞性肺疾病大鼠的效果及对肺组织ERK 1/2的影响

目的探究补肺纳肾丸(BFNSP)对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠模型的干预效果及对肺组织细胞外调节激酶(ERK 1/2)表达的影响。方法将38只SPF级SD雄性大鼠随机分成对照组(6只)、COPD组(8只)、BFNSP-H组(6只)、BFNSP-M组(6只)、BFNSP-L组(6只)、地塞米松组(6只)。除对照组外,各组大鼠通过香烟烟雾联合脂多糖(LPS)气管内滴注的方式制备COPD大鼠模型,以高、中、低浓度的BFNSP及地塞米松药物连续灌胃相应药物组大鼠8周,对照组和COPD组大鼠均给予等体积的生理盐水灌胃处理。对比各组大鼠造模后一般情况、HE染色肺组织、酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)水平,评价BFNSP对COPD大鼠的干预效应。采用Western blot法检测各组肺组织P-ERK 1/2蛋白水平,采用RT-qPCR检测ERK 1/2 mRNA表达情况。结果造模后,造模大鼠出现咳嗽、呼吸急促、精神及活动状态差等症状,HE染色见炎性细胞浸润、肺泡腔皱缩等改变;与COPD组比较,BFNSP各组及地塞米松组中支气管BALF的IL-1β水平均降低(P均<0.05);肺组织ERK 1/2mRNA和蛋白表达水平表达均下降(P均<0.05)。结论BFNSP可有效抑制COPD大鼠肺组织炎症,同时抑制肺组织中ERK 1/2的表达水平,延缓COPD进展。

结缔组织生长因子通过活化Erk-1/2信号通路促成肌纤维细胞生成

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)协同转化生长因子β1(TGFβ1)促进成肌纤维细胞生成分子机制。方法用TGFβ1预处理大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F),使部分细胞转化为成肌纤维细胞,然后将预处理后的细胞分为对照组,CTGF刺激组,TGFβ1刺激组和PD98059干预组。通过免疫细胞化学双染技术分别检测成肌纤维细胞标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和掺入的细胞增殖标志物5溴2'脱氧尿嘧啶(BrdU);并以Western免疫印迹法检测αSMA水平。结果TGFβ1预处理的各组细胞都有胞浆内αSMA染色阳性,CTGF刺激组αSMA蛋白表达均明显高于对照组(P<0.05);但CTGF组部分αSMA阳性细胞核内BrdU阳性率明显高于对照组和TGFβ1组。进一步实验显示CTGF刺激细胞30min能明显诱导细胞内Erk1/2磷酸化,TGFβ1组无此反应。用PD98059阻断Erk1/2磷酸化可以明显抑制CTGF引起的细胞核内BrdU阳性表达和αSMA蛋白表达(P<0.05)。结论CTGF通过Erk1/2信号通路促进TGFβ1诱导的成肌纤维细胞增殖。

大鼠胃黏膜细胞EGFR通过ERK-1/2信号传导通路激活AP-1

目的 探讨大鼠胃黏膜细胞EGFR活化AP -1的信号传导通路。方法 用EGFR配体TGF -α刺激分离的大鼠胃黏膜细胞 ,Westernblot和EMSA方法检测ERK -1/ 2信号传导通路的活化程度。结果 1nmol/LTGF -α刺激胃黏膜细胞 3 0min不仅显著诱导AP -1的活性 ,而且明显激活MEK和ERK -1/ 2 ;EGFR特异性抑制剂PD15 3 0 3 5或MEK特异性抑制剂PD980 5 9能完全阻断TGF -α诱导的胃黏膜细胞AP -1活化。结论 大鼠胃黏膜细胞EGFR通过ERK -1/ 2信号传导通路激活AP -1。

Raf-1、MEK-2、ERK-1在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨Raf-1、MEK-2、ERK-1在胃癌组织中的表达形式及其意义,并分析此种信号途径与胃癌的临床病理特征之间是否存在联系,并为胃癌抗EGFR靶向治疗的分子标志物筛选提供依据。方法通过免疫组化中SP法检测60例胃癌患者标本胃癌组织和正常的胃组织中Raf-1、MEK-2、ERK-1的表达水平并进行比对。结果经统计60例胃癌组织当中Raf-1、MEK-2、ERK-1的表达率分别为88.33%(53/60)、85.00%(51/60)、78.33%(47/60)。而正常的胃组织当中Raf-1、MEK-2、ERK-1均未见到阳性表达。被胃癌细胞转移的淋巴结组织中Raf-1、MEK-2、ERK-1的阳性表达率更为显著,分别高达95.12%(39/41),90.24%(37/41),87.80%(36/41)。未见癌细胞转移的淋巴结中Raf-1、MEK-2、ERK-1均无表达。实验证实Raf-1、MEK-2、ERK-1的表达水平与胃癌的临床特征中的肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期有明显相关性(P<0.05)。结论 (1)人体胃癌组织当中存在Raf/MEK/ERK信号通路的激活;(2)人体胃癌组织中Raf/MEK/ERK信号通路的活化程度与胃癌组织的临床病理特征相关,此信号通路活化程度越高的胃癌组织,其分化的程度越低,TNM分期越高。三者联合检测可为研究胃癌的生物学行为乃至对靶向治疗胃癌提供十分重要的参考依据及指标。

应激抑郁模型大鼠脑内ERK1/2含量和活性的变化

目的探讨慢性轻度不可预见性应激抑郁模型大鼠脑内ERK1/2含量和活性的变化,为进一步从信号传导的角度阐明抑郁症的分子病理机制提供线索.方法20只SD 2～3月龄雄性大鼠,随机分为正常对照组10只、应激抑郁模型组10只,应激抑郁模型组经过21 d慢性轻度不可预见性应激,以旷场行为总分评定其应激前后行为学改变.正常对照组和抑郁模型组在应激后即断头处死,采用蛋白印迹技术检测大鼠额叶皮质、海马、下丘脑、纹状体磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)和非磷酸化ERK1/2的表达.结果经过21 d的慢性应激,应激大鼠旷场行为总分较应激前显著减少(P＜0.001).应激后抑郁模型组额叶部位p-ERK1、p-ERK2含量较正常对照组低,差异有显著性(P＜0.001),ERK1/2的表达两组间比较差异无显著性(P＞0.05);海马部位p-ERK1、p-ERK2含量也较正常对照组低,但差异无显著性,海马部位ERK1/2的表达两组间比较差异无显著性(P＞0.05);纹状体和下丘脑部位p-ERK1/2、ERK1/2含量在应激前后均无明显变化.结论应激大鼠额叶部位p-ERK1/2含量的降低提示ERK信号传导通路的下调可能参与了应激所致抑郁的机制.

ACE2通过下调AT_1R和ERK1/2的磷酸化

目的探讨血管紧张素转换酶2(ACE2)对血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)和细胞外基质激酶(ERK)1/2磷酸化水平及细胞增殖的影响。方法荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达;将载有ACE2基因慢病毒表达载体(Lentiviral-ACE2)以感染复数为10(MOI=10)感染平滑肌细胞不同时间(24、48、72、96 h);采用CCK-8法检测平滑肌细胞增殖;Western blot检测ACE2、AT1R及ERK1/2磷酸化水平。结果目的蛋白GFP表达量明显增加,慢病毒ACE2的表达量成时间依赖性增加,并且在96 h时蛋白表达量较对照组和空载体组明显升高,(1.22±0.06 vs 0.53±0.03和0.53±0.09,P<0.05,n=4);AngⅡ(10-7 mol·L-1)可以促进平滑肌细胞的增殖,ACE2能够抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖(0.53±0.10 vs 0.68±0.03,P<0.05,n=5);AngⅡ(10-7mol·L-1)作用平滑肌细胞12 h后AT1R明显上调,同时ACE2明显抑制AngⅡ诱导的AT1R的上调(0.34±0.01 vs 0.73±0.07,P<0.05,n=4);ACE2能够明显抑制AngⅡ诱导的ERK1/2的磷酸化水平(0.43±0.06 vs 0.71±0.08,P<0.05,n=4)。结论 ACE2可以通过下调AT1R和/及ERK1/2的磷酸化水平而抑制平滑肌增殖,提示ACE2的过表达具有血管保护作用。

ERK_1、ERK_2在胃腺癌中的表达及临床意义

对 38例胃腺癌及其相应癌旁组织和 2 0例大致正常的胃粘膜组织进行 Western印迹检测 ,同时将其石蜡切片进行免疫组织化学染色 ,检测以上组织中细胞外信号激酶 1.2 (ERK1 、ERK2 )的表达 ,并结合胃癌临床病理资料进行分析。结果显示 ,ERK1 、ERK2 在胃癌组织中呈强阳性表达 ,而对照胃粘膜组织中呈弱表达或无表达 ,免疫组织化学与 Western印迹结果具有一致性 ;ERK1 、ERK2 的阳性表达与胃癌的组织学类型、TNM分期及有无淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。认为胃癌组织中 ERK1 、ERK2 的表达增强 。

漆黄素通过调节Apaf-1．ERK和COX-2信号通路诱导人宫颈癌细胞凋亡

【目的】探讨天然产物漆黄素抗宫颈癌细胞生长及其分子作用机制。【方法】以人宫颈癌Hela细胞为模型,将漆黄素作用于细胞,利用MTT、PI以及Annexin V方法观察细胞的生长和凋亡情况,通过Western blot、RT-PCR以及免疫荧光方法分别考察凋亡相关信号通路的关键蛋白caspase和Apaf-1的表达水平和活性变化,ERK/MAPK信号通路中ERK1/2蛋白的磷酸化水平的变化,以及COX-2蛋白和PGE2的表达水平的变化,并通过使用小分子抑制剂和RNA干扰技术等方法进一步分析上述关键蛋白在漆黄素抗肿瘤细胞生长中的作用。【结果】漆黄素(当作用浓度为80～200μmol/L时)可显著抑制20%～48%Hela细胞增殖和(当作用浓度为100～200μmol/L时)显著诱导细胞凋亡;使Caspase-3和Caspase-9的蛋白酶活性分别增加20%～50%和22%～38%;促进Apaf1蛋白的表达;能有效诱导Cytochrome-C的释放;降低ERK/MAPK信号通路中ERK1/2蛋白的磷酸化水平;与ERK抑制剂或siRNA联合使用可抑制60%～70%细胞增殖;减少COX-2蛋白的表达;明显减少PGE2的产生,仅1800～2600 pg/mL;减少p300、NF-κB、p50、p65与COX-2启动子的结合,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】漆黄素通过调控Apaf-1、ERK和COX-2的分子机制来诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡及抑制细胞生长。

牛膝多肽可能通过ERK1/2途径诱导PC12细胞向神经元分化

目的:研究牛膝多肽(ABPP)诱导PC12细胞向神经元分化的作用,初步探讨ABPP作用于PC12细胞的信号转导途径。方法:以体外培养的PC12细胞为研究模型,观察在低血清的情况下不同浓度ABPP(0.25、0.50、1.00μg/ml)诱导PC12细胞发生的形态学改变。采用免疫荧光细胞化学法,观察神经丝蛋白(NF-H)在ABPP诱导分化的PC12细胞中的表达;采用Western blot法观察ABPP(1.0μg/ml)加药后不同时间段(0、6、12h和1、2、3、7d)和不同浓度ABPP(0.25、0.50、1.00μg/ml)加药2 d后对PC12细胞ERK1/2活性的影响,同时应用ERK1/2特异性拮抗剂PD98059与ABPP共培养PC12细胞,分析ABPP对PC12细胞的作用与ERK1/2通路的关系。结果:ABPP处理3 d后,部分PC12细胞开始出现神经元样的形态。随着加药时间延长具有神经元样的细胞逐渐增多,到7 d时,可以见到神经生长因子(NGF)和ABPP处理组PC12细胞的突起都显著增多,能形成网络;14 d时,这种现象愈发显著。加药后7 d和14 d,ABPP各浓度组的细胞分化率以及细胞突起长度均明显提高,且存在明显的剂量反应关系。加药第7天和第14天,ABPP高剂量组与NGF组的PC12细胞均出现NF-H标记阳性的分化细胞。ABPP对ERK1/2的激活作用存在明显的量效关系,以1.0μg/ml作用2 d为最大。当用PD98059抑制ERK1/2的活化时,ABPP对ERK1/2的激活作用被部分阻断。结论:ABPP具有诱导PC12细胞神经元性分化的作用,此作用可能是通过ERK1/2信号转导途径实现的。

CB1受体激动剂WIN55212-2改善帕金森病运动并发症的实验研究

目的探讨CB1受体激动剂WIN55212-2对左旋多巴诱发的运动并发症的行为学及细胞学作用。方法通过6-OHDA立体定向注射至大鼠右侧前脑内侧束建立PD动物模型,成功的PD大鼠模型分别接受左旋多巴/苄丝肼(50mg/kg加12.5mg/kg苄丝肼,每天2次)+溶剂、左旋多巴/苄丝肼+WIN55212-2(1mg/kg)腹腔注射,共持续21d。评估用药后大鼠的旋转反应时间、剂峰旋转圈数变化和关期发生率;采用Western blot方法检测纹状体信号转导蛋白DARPP-32(Thr75)和ERK1/2(Thr202/Tyr204)的磷酸化表达。结果长期联合应用WIN55212-2和左旋多巴,缓解了左旋多巴单独用药所致的PD大鼠旋转反应时间缩短、剂峰旋转圈数增加的趋势,并明显降低关期发生频率。WIN55212-2与左旋多巴合用显著降低了纹状体内DARPP-32(Thr75)的磷酸化;但未使ERK1/2磷酸化表达降低至对照组水平。结论激动CB1受体可能有益于预防帕金森病运动并发症。

PTPIP51、p-Raf-1及ERK1/2在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的探讨PTPIP51和p-Raf-1及ERK1/2在口腔鳞状细胞癌中的表达及对口腔鳞癌侵袭、转移的影响。方法收集32例口腔鳞状细胞癌及其配对癌旁正常口腔黏膜组织。用免疫荧光组织化学染色激光共聚焦显微镜检测PTPIP51与p-Raf-1蛋白在组织切片内表达及定位;PBS冲洗后对标本进行苏木精-伊红染色,普通光镜对比观察组织结构及细胞形态,同时用免疫组织化学方法(SP法)检测PTPIP51蛋白在组织和细胞内的定位;Rea-ltime PCR检测PT-PIP51与ERK1/2基因mRNA在肿瘤组织及癌旁正常口腔黏膜组织的表达情况。结果 PTPIP51与p-Raf-1蛋白在癌巢周围增殖旺盛的肿瘤细胞、间质免疫细胞及部分脉管壁内皮细胞表达阳性且2种蛋白在细胞中共定位表达。同时发现PTPIP51与ERK1/2基因mRNA在口腔鳞癌组织表达高于配对癌旁正常口腔黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05);ERK1/2及PTPIP51基因mRNA表达呈正相关(r=0.641,P<0.05);两者的表达水平与患者的性别、年龄,病理分级无关,与肿瘤的TNM分级及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 PTPIP51与Raf-1可能通过Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与口腔鳞状细胞癌的发生、发展过程,且2种蛋白与肿瘤的侵袭、转移有密切关系。

Trans-10,cis-12, not cis-9,trans-11, conjugated linoleic acid decreases ErbB3 expression in HT-29 human colon cancer cells

瞄准：检验是否 trans-10， cis-12 CLA (t10c12 ) 或 cis-9， trans-11 CLA (c9t11 ) 禁止 heregulin (HRG )-beta-stimulated 细胞生长并且 HRG-beta-ErbB3 在 HT-29 细胞发信号。方法：我们在 CLA 异构体或 ErbB3 ligand HRG 贝它的缺席或存在的有教养的 HT-29 房间。MTT 试金，[3H ] 胸腺嘧啶核甙加入，染色的 Annexin V， RT-PCR，西方的弄污，免疫降水，和在试管内激酶试金被执行。结果：HRG 贝它增加了房间生长，但是没阻止导致 t10c12 的生长抑制。T10c12 禁止了 DNA 合成并且导致了 HT-29 房间的 apoptosis，而 c9t11 没有效果。T10c12 减少了以一种剂量依赖者方式的 ErbB1， ErbB2，和 ErbB3 蛋白质和抄本的层次，而 c9t11 没有效果。Immunoprecipitation/Western 污点研究表明 t10c12 禁止了 ErbB3，到 ErbB3 的 phosphoinositide 3-kinase (PI3K ) 的 p85 子单元的招募，联系 ErbB3 的 PI3K 活动，和 Akt 的磷酸化的 HRG-beta-stimulated 磷酸化。然而， c9t11 没在 phospho Akt 层次上有效果。既不 t10c12 也不 c9t11 在 ERK-1/2 的 HRG-beta-induced 磷酸化上有任何效果。结论：这些结果显示由 t10c12 的 HT-29 细胞生长的抑制可以经由它发信号导致 Akt 激活的抑制的 ErbB3 的调整被导致。

细胞外信号调节激酶1/2在Aβ_(25-35)引起体外培养星形胶质细胞炎症反应中的作用

目的观察Aβ诱导星形胶质细胞激活炎症细胞因子表达及细胞外信号调节激酶1/2的表达。探讨细胞外信号调节激酶1/2是否参与了星形胶质细胞激活炎症细胞因子作用及其作用机制。方法传代体外培养的大鼠星形胶质细胞,分别用终浓度为10μmol/L和20μmol/L的Aβ25-35作用30分钟。在PD98059组,加入Aβ25-3520μmol/L前1小时,加入PD培养。用Western blot分析iNOS、COX-2、IL-1β、P-ERK1/2的改变。结果Aβ25-35可使体外培养星形胶质细胞P-ERK1/2蛋白表达明显增加,同时,Aβ25-35也可使iNOS、COX-2、IL-1β表达明显增加,ERK1/2上游激酶MEK特异性阻滞剂PD98059可完全阻断Aβ25-35引起的ERK1/2表达增加,也可抑制Aβ25-35引起的iNOS、COX-2、IL-1β蛋白表达增加。结论ERK1/2信号转导通路参与Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应的作用。

莱菔硫烷抑制HepG-2细胞MMP-9的活性以及ERK1/2磷酸化

目的：探讨莱菔硫烷（su lforaphane,SFN）对肝癌细胞系HepG-2细胞基质金属蛋白酶（m atrix m etallo-prote inase,MMP）-9的活性及对细胞外信号调节激酶（extracelluar signal-regu lated k inase,ERK）1/2磷酸化的影响。方法：体外培养HepG-2细胞,用SFN预处理后,四氮唑盐酶还原法检测细胞的增殖情况,以及LDH的漏出率;明胶酶谱实验和实时荧光定量PCR检测MMP-9的酶活性和mRNA表达水平;W estern b lot检测ERK1/2的磷酸化情况;最后采用定量实时PCR法检测SFN对HepG-2细胞表达Raf激酶抑制蛋白（Raf k inase inh ib itorprote in,RK IP）,Spred-1和Spred-2 mRNA的影响。结果：0,20,40,50μM SFN处理24~72h后,均能抑制HepG-2的生长,LHD漏出率实验显示SFN对细胞无明显的毒性;SFN能明显抑制MMP-9的活性和mRNA的表达水平,同时能抑制ERK1/2的磷酸化。另外,SFN能明显提高RK IP、Spred-1和Spred-2 mRNA的表达水平。结论：SFN对HepG-2细胞生长以及MMP-9的活性具有抑制作用,它可能通过抑制ERK1/2磷酸化,诱导RK IP,Spred-1和Spred-2表达而发挥抗肿瘤的作用。

MAPK途径磷酸化在胰岛素样生长因子-1促进人骨髓瘤细胞株KM3增殖中的作用

本研究探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人骨髓瘤细胞株KM3增殖的影响以及MAPK途径磷酸化在该过程中的作用。采用流式细胞术检测不同浓度的重组人IGF-1处理后KM3细胞周期的变化,Western blot法检测细胞内MAPK信号转导途径主要分子Erk1/2磷酸化在IGF-1刺激及PD98059特异性抑制作用下的改变,TUNEL法检测特异性阻断Erk1/2磷酸化在抑制KM3细胞增殖和诱导凋亡中的作用。结果表明,IGF-1可以显著提高S期和G2/M期的KM3细胞比率和细胞内Erk1/2分子的磷酸化水平,阻断IGF-1引起的Erk1/2磷酸化可以显著抑制KM3细胞的增殖并引起其凋亡。结论:IGF-1引起的Erk1/2分子磷酸化在KM3细胞增殖过程中起着十分重要的作用。

Homer1a在机械性损伤神经元存活和凋亡中的作用及机制

目的探究Homer1a对机械性损伤神经元的保护作用及具体作用机制。方法分离并培养大鼠脑皮层神经细胞,随机分为:对照组、模型组、空载体组1(NC-V1)、Exp-Homer1a组、空载体组2(NC-V2)、sh-Hormer1a-2组、模型+SCH组和sh-Hormer1a-2+SCH组。构建机械性损伤细胞模型,分别感染Homer1a过表达或干扰慢病毒载体(ExpHomer1a或sh-Hormer1a),并用细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)抑制剂SCH772984(SCH)处理细胞。采用MTT法检测各组神经元的存活情况,使用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)测试盒测定细胞上清LDH含量,Western blot检测Hormer1a、cleaved-Caspase-3、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果与对照组比较,机械性损伤神经元存活率显著降低,LDH释放水平和凋亡率增加,且Homer1a mRNA和蛋白表达水平显著升高,cleaved-Caspase-3和p-ERK1/2表达增加(均P<0.05);与模型组比较,上调Homer1a可促进机械性损伤神经元存活,降低LDH释放量和细胞凋亡率,抑制cleaved-Caspase-3和p-ERK1/2表达(均P<0.05);与sh-Homer1a-2组比较,sh-Homer1a-2+SCH组细胞存活率明显升高,凋亡率显著下降(均P<0.05)。结论Homer1a可能通过抑制ERK1/2信号通路的活化促进机械性损伤神经元的存活,抑制细胞凋亡。

TGF-β_1诱导大鼠心肌细胞肥大中ERK信号途径的表达

目的:探讨转化生长因子-β_1诱导的大鼠心肌细胞肥大中ERK信号通路的蛋白表达。方法:建立TGF-β_1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大模型。PI染色标记细胞双链RNA法检测心肌细胞RNA表达量,间接检测心肌细胞肥大。实时荧光定量PCR(Real time PCR)检测心肌细胞肥大相关基因肌球蛋白重链β亚型(β-MHC)的表达。Western-blot检测心肌细胞中ERK1/2蛋白表达。结果:TGF-β_1可诱导体外培养心肌细胞肥大基因的表达,β-MHC的表达明显高于对照组(P<0.01)。TGF-β_1组PI含量明显增高(P<0.01),与对照组相比,TGF-β_1可明显上调ERK通路中磷酸化ERK1/2蛋白表达增加。RNA干扰技术抑制TGF-β_1的特异性通路Smad通路中Smad2蛋白表达后,磷酸化ERK1/2表达也被部分抑制(P<0.01)。结论:TGF-β_1可诱导心肌细胞肥大的形成,同时ERK通路中ERK1/2表达增加,TGF/Smad通路与ERK通路中ERK1/2可能存在交互作用。