日本血吸虫成虫和虫卵排泄分泌抗原对Ⅰ型糖尿病模型小鼠的影响

目的观察日本血吸虫成虫排泄分泌抗原(adult-worm excretory-secretory protein,AES)和虫卵排泄分泌抗原(excretory-secretory antigen of eggs,ESA)对Ⅰ型糖尿病小鼠的影响,并初步探讨其作用机制。方法将24只雄性昆明鼠随机分为空白对照组、PBS组、AES组和ESA组,每组6只。空白对照组不作任何处理,后3组给予链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液注射制备Ⅰ型糖尿病模型,建模成功后分别用PBS、AES、ESA腹部皮下多点免疫,1周免疫1次,持续免疫4周。免疫干预1周后开始检测小鼠血糖,持续检测4周;免疫干预4周后采用ELISA法测定小鼠血清中IL-4和IFN-γ水平变化,采用HE染色法检测小鼠胰腺组织病理变化。结果与PBS组相比,AES组和ESA组小鼠血糖水平从免疫后第2周起出现下降趋势,且ESA组小鼠血糖水平低于AES组,免疫后第2、3、4周小鼠血糖水平组间差异有统计学意义(F=1214.00、1055.00、683.64,P均<0.05)。各组小鼠血清IL-4和IFN-γ水平组间差异有统计学意义(F=146.84、21.11,P均<0.05),ESA组小鼠血清中IL-4水平[(61.45±6.14)pg/mL]高于PBS组[(21.96±3.98)pg/mL]和AES组[(49.31±3.19)pg/mL],IFN-γ水平[(129.48±36.75)pg/mL]低于PBS组[(316.43±66.38)pg/mL]和AES组[(212.09±70.89)pg/mL],差异均有统计学意义(P均<0.05)。PBS组小鼠的胰岛萎缩,数量减少,空泡样变性;ESA组小鼠有轻微胰岛萎缩;AES组介于PBS组和ESA组之间。结论日本血吸虫ESA对Ⅰ型糖尿病小鼠有一定保护作用,其机制可能是ESA刺激机体导致Th1反应抑制和Th2反应增强,表现为IL-4升高和IFN-γ下降,在一定程度上减轻小鼠胰腺组织的病理损伤。

鸭蛋清溶菌酶的分离纯化及致敏性评估

鸭蛋中含有丰富的蛋白质和营养成分,但鸭蛋清中含有溶菌酶,溶菌酶具有致敏性,食用鸭蛋后有可能产生过敏的风险。采用超滤法与离子交换层析法结合的方法分离纯化鸭蛋清溶菌酶,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法比对,能得到纯度较高的溶菌酶。采用免疫印迹的方法,分析抗溶菌酶的兔多抗血清和禽蛋过敏患者混合血清池分别与鸭蛋清溶菌酶的IgE结合能力,进行鸭蛋清溶菌酶的致敏性评估,实验证明IgE结合能力非常显著,溶菌酶存在交叉反应。同时证实了食用鸭蛋会引起过敏反应,也为过敏患者能否食用鸭蛋提供了依据。

重组Sj26(rSj26)抗原免疫酶测定新方法诊断日本血吸虫病的研究

将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)值测定两种方法判断反应结果。结果显示,分别采用上述两种抗原检测所获的阳性率或假阳性率间无显著性差异。此结果首次提示rSj26抗原的血清诊断效果与目前血吸虫病血清学方法常用抗原SEA相似。本文报告的免疫酶测定新方法,可同时采用两种方法判断结果,迄今尚未见到类似报道。试验结果均表明用D-IEA检测时显示高度的敏感性(92.1％—94.7％)和特异性(0.0％—2.9％),具有实用价值。

日本血吸虫未成熟虫卵67kDa分子抗原诊断血吸虫病的研究

本文通过SDS－PAGE和电渗方法，从日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（SIEA）中分离纯化出67kDa蛋白分子，以该分子包被微板进行ELISA，检测了急、慢性日本血吸虫病人血清，其阳性检出率达100％和94．6％，与60例正常人血清、30例肝吸虫和31例肺吸虫病人血清均未出现明显交叉反应，慢性血吸虫病人治疗后3个月、半年和1年的阴转率分别为58．1％，75．4％和84．6％。提示SIEA67kDa分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。

日本血吸虫SIEA26-28kDa的抗雌虫生殖免疫作用——HGPRT是否是主要的靶抗原(英文)

目的 观察日本血吸虫SIEA2 6 2 8kDa抗原的抗雌虫生殖作用。方法用AcA柱层析纯化日本血吸虫早期胚卵中的SIEA和SIEA2 6 2 8kDa成分 ,并以此纯化产物免疫BALB/c小鼠。将小鼠分为三组 ,分别用SIEA、SIEA2 6 2 8kDa和免疫佐剂免疫动物 ,然后进行尾蚴攻击感染。 4 6天后剖杀动物 ,冲虫 ,然后作虫荷测定及虫卵分类计数。结果 SIEA2 6 2 8kDa免疫组雌虫子宫内减卵率为 5 4 .8% ,与对照组比较有极显著性差异 ;该实验组动物肝脏和小肠组织内的虫卵数比对照组分别降低了 4 8.0 7%和 77.4 1% ,且以成熟虫卵数的下降较为显著 ,分别降低了 83.6 %和 93.3% ;粪卵数的下降幅度最为显著 ,达87.2 6 %。结论 SIEA2 6 2 8kDa可作为一种抗卵胚发育及抗雌虫生殖的候选抗原分子。

检测日本血吸虫抗体标准化间接血凝试剂盒的研制

目的研制检测日本血吸虫抗体(IHA)的标准化间接血凝试剂盒。方法通过不同筛目尼龙绢和低频超声等方法制备、纯化日本血吸虫可溶性虫卵抗原,致敏人"O"型血红细胞;按医学决定水平确定免疫学质量控制标准及参考,优选原材料质量,规范生产工艺,研究制定反应体系的标准化,生产IHA试剂盒并进行鉴定。结果用生产的IHA试剂盒检测50例急性血吸虫病人血清全部阳性,检测201份慢性血吸虫病患者血清,193份阳性,敏感性96.0%;200份健康人血清均为阴性,特异性100%;肝吸虫、姜片虫、钩虫及乙肝患者血清均为阴性,肺吸虫病的交叉反应率为19.4%(6/31)。IHA试剂盒批内变异和批间变异小,有效诊断率为97.9%。同一批试剂盒在室温、4℃条件下保存3年未见效价明显改变。结论研制的IHA试剂盒具有较高的特异性和敏感性,可标准化生产。该试剂盒具有操作方便、快速、结果判断容易,不需要特殊的仪器设备,价格低廉等优点,可广泛用于现场查病。

芍药苷对小鼠巨噬细胞产生TGF-β1的影响

目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PAE)对血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)产生转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中,培养24h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT-PCR检测PMs内TGF-β1基因的表达,Western blotting检测PMs内TGF-β1蛋白的表达;在含PMs的培养瓶和培养皿中分别加入10mg/LSEA5ml,培养12h,再分别加入不同浓度的PAE(0、7.5、15、30、60及120mg/L),继续培养12h和24h。RT-PCR与蛋白质印迹(Westernblotting)分别检测PAE对SEA刺激的PMs内TGF-β1基因与蛋白的表达。结果10mg/L的SEA可明显刺激PMs产生TGF-β1(235.86±3.43ng/L),PAE呈浓度依赖性地抑制TGF-β1mRNA的表达(r=-0.827,P<0.01)和TGF-β1蛋白的表达(r=-0.952,P<0.01)。结论PAE能抑制SEA刺激的PMs产生TGF-β1。

日本血吸虫尾蚴成虫及虫卵的早期诊断组分抗原分析

目的寻找具有血吸虫病早期诊断价值的组分抗原。方法以感染后不同时间的兔血清,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Westernblotting)方法,对日本血吸虫尾蚴、成虫和虫卵中的可溶性抗原的成分进行免疫分析。结果可溶性尾蚴抗原(SCA)94、48、41、40kDa和38kDa组分抗原最早出现免疫印迹反应,能被感染后2周兔血清所识别,可被感染后3周兔血清识别的SCA71、23kDa组分抗原反应最强。可溶性成虫抗原(AWA)最早出现反应的组分抗原是71、58kDa,能被感染后3周兔血清所识别。可溶性虫卵抗原(SEA)最早出现反应的组分抗原是270、151、73、69、50kDa和24kDa,能被感染后4周兔血清所识别。结论SCA94、71、48、41、40、38、23kDa,AWA71、58kDa和SEA270、151、73、69、50、24kDa能被急性感染兔血清所识别,是具有潜在早期诊断价值的组分抗原。

黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响

目的观察黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响。方法小鼠腹腔注射日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Solub le egg antigen,SEA),制备SEA活化的腹腔巨噬细胞条件培养基(Solub le egg antigen inducedm acrophage cond itioned m ed ium,SEA-MCM)。采用肝星状细胞株HSC-T6细胞,以细胞增殖抑制率为指标,用噻唑蓝(MTT)测定黄芪总苷对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖的影响;通过3H-脯氨酸参入法测定黄芪总苷对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞胶原合成的影响。结果SEA-MCM能明显促进HSC-T6细胞的增殖和胶原合成。黄芪总苷(32.5、65和130 mg.L-1)对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖及胶原合成有明显的抑制作用,且呈药物浓度依赖性关系。结论黄芪总苷对SEA-MCM诱导的肝星状细胞增殖及胶原合成有明显的抑制作用。

卵黄抗体IgY检测血吸虫病人循环抗原的初步研究

目的探讨抗可溶性虫卵抗原(SEA)卵黄抗体(IgY)检测血吸虫循环抗原的应用价值。方法以纯化的鸡IgY作为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(S-ELISA)检测急、慢性血吸虫病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验法(SEA-ELISA)作比较。结果S-ELISA测得SEA浓度(y)与吸光度(A450)值(x)呈明显的正相关(y=459.22x-108.14,r=0.9481)。急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100.00%(9/9),慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84.44%(38/45),健康人的特异性为96.00%(48/50)。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论S-ELISA具有较好的敏感性和特异性,可用于血吸虫病免疫诊断。

日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及初步应用

运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28ku特异性scFv大量表达.随后以此为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,以期获得SIEA26～28ku天然分子候选疫苗相关的编码基因.结果显示,所获得的SIEA26～28ku特异性scFv,表达量高,采用该探针初步筛选出相关基因核糖体蛋白S4.SIEA26～28ku特异性scFv的获得,为进一步筛选、分析鉴定抗日本血吸虫病天然分子候选疫苗SIEA26～28ku的编码基因奠定了基础.

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS-PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AWA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。

过碘酸钠氧化可溶性虫卵抗原ELISA诊断血吸虫病的研究

目的 改进可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA),进一步提高其诊断血吸虫病的敏感性、特异性及疗效考核价值。方法 应用过碘酸钠(sodium Perodate,SP)处理SEA,氧化其糖基化表位,建立SP-SEA-ELISA,检测血吸虫病患者血清中的特异性抗体,并与常规SEA-ELISA进行比较。结果 分别用两种方法检测患者血清,其中慢性血吸虫病64例、华支睾吸虫病34例、卫氏并殖吸虫病33例、囊尾蚴病36例,检测健康人血清119例。SP-SEA-ELISA特异性为99.2％,高于SEA-ELISA,敏感性为98.4％,与SEA-ELISA比较无明显降低。用SP-SEA-ELISA及SEA-ELISA检测治疗后12个月的慢性血吸虫病患者血清,阴性率为89.0％,明显优于SEA-ELISA(42.1％)。结论 过碘酸钠处理SEA,可提高免疫诊断特异性,降低交叉反应,有一定的疗效考核价值。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子Dipstick快速诊断模式的初步建立

目的 建立简便的血吸虫病Ｄｉｐｓｔｉｃｋ快速诊断比方法 以纯化的日本血吸虫虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）３８ｋＤａ分子为诊断抗原，以胶体金标记的鼠抗人ＩｇＧ为二抗，建立 Ｄｉｐｓｔｉｃｋ快速诊断体系；检测日本血吸虫病人血清，急性期３７例、慢性期３０例，正常人５２例，肝吸虫病人血清３０例。结果 所测得的阳性率分别为９４．６％、８６．７％、１．９％、０％．伯论 以 ＥＡ ３８ｋＤａ纯化分子建立的血吸虫病Ｄｉｐｓｔｉｃｋ快速诊断法具有较好的敏感性和特异性，且简便快捷。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原38kDa分子的纯化及诊断价值的初步评估

[目的 ]探讨日本血吸虫虫卵可溶性抗原 (SEA) 38k Da分子诊断血吸虫病的应用价值。 [方法 ]用 SDS-PAGE配合电渗洗脱技术分离纯化了诊断靶抗原 SEA38k Da,并经 SDS- PAGE和 Western blot鉴定 ;将 SEA38k Da分子和 SEA用于 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清 ,急性期 31例、慢性期 31例 ,正常人 6 0例 ,华支睾吸虫病患者血清 30例 ,并殖吸虫病患者血清 30例。 [结果 ]SEA38k Da分子抗原和 SEA所测得的阳性率分别为90 .3%、90 .3%、1.7%、0、0和 90 .3%、83.9%、3.3%、0、0。将 SEA 38k Da分子和 SEA在 EL ISA中的 P/N比值进行比较 ,经 t检验 ,发现在检测急性血吸虫病患者 ,慢性血吸虫病患者和正常人血清时 ,两者间的 P/N比值在 3组间差异均有显著性意义 (P值均 <0 .0 0 1) ;SEA 38k Da分子在检测患者血清时的 P/N比值显著高于 SEA,而检测正常人血清时的 P/N比值显著低于 SEA。 [结论 ]纯化 SEA38k Da具有较好的敏感性和特异性 。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原经两种免疫途径获得的鸡卵黄抗体IgY动态观察

目的对比两种免疫途径产生抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的特异性IgY抗体水平动态变化。方法7只新西兰兔感染日本血吸虫尾蚴(1500/只)42d后解剖收集虫卵,制备SEA。将SEA分别经皮下和静脉注射免疫健康海蓝蛋鸡(3只/组),首次和第2次免疫间隔2周,之后每次间隔4周,共免疫5次,50μg/(只·次)。取两组免疫前,以及首次免疫后2～18周生产的鸡蛋,用水稀释法粗提IgY,ELISA检测每2周IgY的动态变化。IgY纯化试剂盒(EGGstract IgY Purifiction System)纯化静脉组首次免疫后8～18周的IgY,紫外吸收法检测抗体浓度,琼脂糖双扩散法和ELISA检测IgY峰值水平的抗体效价,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析比较免疫前后抗体特异性。结果静脉组和皮下组分别在首次免疫后8和12周IgY抗体水平达高峰,A492值分别为1.28和0.78,静脉组IgY水平至18周仍维持较高水平,皮下组抗体水平达到峰值后逐渐下降。纯化后IgY浓度约为6.5～9.0mg/ml,琼脂糖双扩散法和ELISA测得静脉注射组峰值水平抗体效价分别为1∶16和1∶51200。经SDS-PAGE和Western blotting分析,纯化后的IgY在相对分子质量(Mr)25000和68000处各有一条清晰条带,且免疫后IgY可与SEA发生特异性反应。结论静脉注射法比皮下注射法能获得更高水平的鸡抗日本血吸虫SEA特异性IgY抗体,且纯化后的IgY抗体具有较好的特异性。

快速诊断家畜日本血吸虫病免疫层析试纸条的研制与初步应用

目的开发研制敏感、简便、快速、经济的日本血吸虫病诊断试纸条。方法利用双抗原夹心法,以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)为检测抗原,以胶体金标记SEA为探针,采用自行设计的免疫层析试纸条装置,检测家畜血清中血吸虫特异性IgG抗体,并用ELISA方法进行比较。结果用该试纸条检测107份人工感染血吸虫病羊血清,其检出率为91.6%;检测80份健康绵羊血清,阴性符合率为87.5%;检测20份粪检阳性水牛血清及15份粪检阴性血清,其阳性符合率为100.0%,阴性符合率为86.7%;检测24份肝片形吸虫病羊血清,交叉反应率为12.5%,与锥虫病牛血清未见交叉反应;与ELISA检测结果比较,两种方法具有良好的一致性。结论应用试纸条诊断家畜日本血吸虫病敏感性高、特异性强,且操作简便、快速,不需特殊仪器设备,适合于基层使用。

日本血吸虫初产卵体外培养的研究(英文)

目的 观察日本血吸虫未成熟虫卵超免疫血清对虫卵胚胎发育及雌虫生殖力影响的效果。方法 本研究通过体外培养系统 ,观察日本血吸虫成虫离体产卵及虫卵发育全过程中形态学特点的变化 ,检测抗未成熟虫卵超免疫血清对虫卵胚胎发育及雌虫生殖力的影响。结果 在含正常兔血清的培养基中 ,初产卵经 12～ 14天培体外培养后 ,能完成发育至成熟期 ,对照组雌虫每周产卵总数为 176 5 7个 (n =2 0 )。但在含有抗未成熟虫卵超免疫兔血清的培养基中 ,雌虫产卵数量较正常兔血清培养对照组有显著降低 (P <0 0 0 1) ;在培养后第 10天 ,试验组雌虫即停止产卵 ,部分初产卵卵胚的发育和成熟过程被完全阻断 ;免疫荧光染色显示 ,抗卵免疫血清可作用于卵胚细胞及雌虫卵黄腺、肠腔内膜组织。结论 体外培养结果表明 ,日本血吸虫未成熟虫卵抗原诱导的免疫应答 ,在抗虫卵胚胎发育及抗雌虫生殖产卵中起重要作用。

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性。方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原。分别以SDS-PAGE和W estern b lot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较。结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原。SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带。AWA-f见15条蛋白带,其中Mr26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带。AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带。SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带。结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠。该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白。