对硝基苯酚降解产物与FK506结合蛋白相互作用分子机制

对硝基苯酚(p-nitrophenol,p-NP)作为典型内分泌干扰物,其环境污染与人体健康问题一直是环境领域的研究热点.环境中对硝基苯酚降解产物(p-NP degradation products,p-NP-DPs)与FK506结合蛋白(FK506 binding protein,FKBP5)结合形成p-NP-DPs-FKBP5加合物是p-NP-DPs产生雌激素和抗雄激素活性的主要机制.然而,p-NP-DPs与FKBP5相互作用的分子水平机制尚未引起足够的重视.本文采用分子对接技术模拟计算p-NP-DPs与FKBP5相互作用的结合能和结合面积.结果表明,p-NP-DPs与FKBP5相互作用结合面积顺序为213Å^(2)(4-硝基邻苯二酚)>200Å^(2)(p-NP)>184Å^(2)(邻苯二酚)>175Å^(2)(对苯二酚)>173Å^(2)(苯酚)>171Å^(2)(对苯醌),结合能顺序为−3.69 kcal·mol^(−1)(4-硝基邻苯二酚)>−3.76 kcal·mol^(−1)(p-NP)>−3.81 kcal·mol^(−1)(对苯二酚/邻苯二酚)>−3.83 kcal·mol^(−1)(对苯醌)>−3.91 kcal·mol^(−1)(苯酚),高频氨基酸残基为Pro221、Gly224、Glu227、Ala228、Gly282、Lys283、Tyr284、Met285和Gln286,p-NP-DPs药效团主要包括氢键供体(—OH)、氢键受体(—NO_(2)和C=O)、芳香中心(苯环)和疏水中心(C原子).p-NP-DPs理化性质对p-NP-DPs与FKBP5相互作用强度的影响主要取决于分子量和拓扑极表面积(100%)、氢键受体数量(75%)、密度(50%)和闪点(25%).本研究对认识水环境中p-NP-DPs分子水平健康效应和环境风险具有重要科学意义.

FK506结合蛋白样蛋白在疾病中的作用的研究进展

FK506结合蛋白样蛋白(FK506-binding protein like,FKBPL)是亲免素家族的一员,其功能十分广泛,可以调控类固醇受体的信号转导,抑制肿瘤干细胞及肿瘤细胞的生长,并且能够作为肿瘤预后的生物学标志物。最新研究发现,它的N端区域存在抗血管生成结构域,可在体内和体外发挥抗血管生成作用。此外,FKBPL还与炎症、眼部疾病、心理疾病等诸多问题相关。文章主要从FKBPL的结构和功能出发,对FKBPL的功能研究进展进行综述,并探讨其在临床应用中的前景。

以FK506结合蛋白52为靶点的高通量药物筛选模型的建立及应用

目的发现新的FKBP52抑制剂类药物,建立以人FKBP52为靶点的高通量药物筛选模型。方法通过大肠埃希菌表达系统重组表达FKBP52蛋白,并进行纯化。基于FKBP52的肽基-脯氨酰顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)的活性特性,建立FKBP52高通量药物筛选体系。对本公司化合物库中的31558个放线菌及真菌次级代谢产物粗提物进行筛选。结果成功构建重组表达菌株BL21(rosetta)/pET-30a/FKBP52。纯化后的重组表达人FKBP52蛋白纯度大于90%,并具有很好的PPIase活性。阳性药FK506能剂量依赖地抑制FKBP52活性,IC50为12.035ng/m L。筛选得到121个抑制率大于80%的样品,其中11株放线菌的次级代谢产物中含FK506,6株放线菌的次级代谢产物中含FK520,7株放线菌的次级代谢产物中含雷帕霉素。对随机抽取的100块96孔板筛选数据进行统计,模型的信号/本底比平均值为2.35±0.26,Z'因子平均值为0.78±0.1。结论本研究成功建立了人FKBP52抑制剂高通量药物筛选模型,该方法具有快捷、灵敏度高、稳定性好的特点,不仅可以快速进行新FKBP52抑制剂的筛选,还可以实现对FKBP52已知抑制剂如FK506、FK520和雷帕霉素等产生菌的定向筛选。

联苯双酯对肾移植患者FK506血浓度的影响

目的 探讨联苯双酯对肾移植患者FK5 0 6血浓度的影响。方法 将 4 0例肝功能异常 ,ALT介于 4 0～ 10 0U/L之间 ,术后两周内的同种异体肾移植患者 ,随机分为两组 ,2 0例为观察组 ,服用联苯双酯护肝治疗 ,2 0例为对照组 ,服用安慰剂。服用联苯双酯前及服用联苯双酯 1周后 2次测FK5 0 6血浓度 ,两次测定间FK5 0 6剂量不变。结果 与对照组相比 ,观察组服用联苯双酯 1周后FK5 0 6血浓度显著降低 (P <0 0 5 )。结论 联苯双酯可使FK5 0 6血浓度降低 ,增加患者FK5 0 6用量及费用。

FK506治疗儿童不同病理类型肾病综合征临床观察

为研究FK506治疗儿童不同病理类型肾病综合征的临床疗效及意义 ,对12例患儿入院后逐渐减用激素 ,给予口服FK506,剂量0.1～0.15mg/(kg·d) ,疗程3～6月 ,并监测血浓度。结果12例患儿经FK506治疗2个月后 ,完全缓解8例(MCDN4例,MsPGN4例),部分缓解3例(MsPGN1例 ,MPGN1例 ,FSGS1例) ,总有效率91.67% ,无效1例(MsPGN1例) ,显效时间为10～38d。治疗1个月后12例中有9例血清白蛋白升到正常 ,胆固醇、甘油三酯均有不同程度的下降 ,2个月后11例患儿生化指标恢复正常 ;FK506有效血浓度维持在5～12ng/ml;治疗过程中出现胃肠道症状3例 ,一过性尿肌酐增加2例 ,NAG轻微增加3例 ;2例患儿随访仅2例复发。提示用小剂量皮质激素与FK506联合使用 ,以及在FK506减量时加用作用较轻的免疫抑制剂维持 ,可起到巩固疗效、防止复发的作用。因此 ,FK506有可能成为治疗肾病综合征的有效方法。

狼疮性肾炎患者外周血中IL-18的表达以及FK506、CsA和DEX的抑制作用

目的 :探讨IL 18在活动性狼疮性肾炎 (LN)患者中的表达以及免疫抑制剂FK5 0 6、环孢霉素A(CsA)和地塞米松 (DEX)对其表达的抑制作用。方法 :取 16例活动性LN患者和 10例正常人空腹静脉全血 ,分为未刺激组、脂多糖 /植物血凝素(LPS/PHA)刺激组、LPS/PHA +FK5 0 6组、LPS/PHA +CsA组和LPS/PHA +DEX组在体外培养 2 4h ,采用ELISA法检测培养上清中IL 18的水平 ,应用半定量的RT PCR检测全血培养细胞中IL 18mRNA的表达 ,以及FK5 0 6、CsA和DEX对其表达的抑制作用。结果 :活动性LN患者全血培养的细胞自发及以LPS/PHA刺激后 ,IL 18mRNA和其蛋白的表达显著高于正常对照组 (P <0 .0 1) ;FK5 0 6、CsA和DEX对LPS/PHA刺激的LN患者全血培养细胞IL 18mRNA及其蛋白表达的抑制作用明显大于对正常对照组的抑制作用。结论 :IL 18在活动性LN患者LN的发病机制中可能起着重要的作用 ,抑制IL

FK506纳米粒对大鼠角膜移植排斥反应的影响

目的观察FK506纳米粒对大鼠角膜移植排斥反应模型的作用。方法Wistar大鼠为供体,对70只SD大鼠行异体穿透角膜移植,14只SD大鼠接受自体角膜移植,观察不同组别植片的存活时间及免疫病理改变。结果各组植片存活时间分别为Ⅰ组(不用药)(7.90±1.20)d;Ⅱ组(PLGA)(8.44±0.88)d;Ⅲ组(0.05%地塞米松)(10.44±1.42)d;Ⅳ组(0.05%FK506)(11.60±2.55)d;Ⅴ组(0.01%FK506纳米胶体)(15.09±4.81)d。Ⅰ组与Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组植片存活时间有显著统计学差异。Ⅴ组与Ⅲ、Ⅳ组植片存活时间也有显著统计学差异。排斥反应的植片有多量CD8+、中等量CD4+T细胞浸润和巨噬细胞浸润,ICAM、VEGF等免疫分子与炎症和排斥反应程度吻合。Ⅴ、Ⅳ组植片的炎性细胞较少。结论FK506局部滴眼可延长植片存活时间,FK506纳米胶体较FK506滴眼液能维持更长时间的植片透明。

FK506预处理下骨髓移植诱导同种异体小鼠皮肤移植耐受的实验研究

目的探讨短期大剂量FK506作为宏嵌合诱导供体特异性耐受中,骨髓移植前对受体预处理方法的可行性及临床实用性。方法100只雄性C57BL/6和60只雌性BALB/C小鼠分别作为皮肤移植的供体和受体,雄性ICR小鼠15只作为无关第三品系用以检测移植耐受状态的特异性。将60只受体小鼠随机分为5组,即无处理对照组、单纯FK506组、单纯骨髓细胞移植(BMT)组、实验组(FK506+BMT)和无关供体对照组,每组12只。FK506诱导及维持方案是皮肤移植前对受体小鼠先给予大剂量FK506腹腔注射(3mg/kg×2d),移植当天尾静脉输注2×107个骨髓细胞,再以小剂量FK506(05mg/kg×7d)短期维持治疗。观察皮肤移植存活时间、对第三方皮肤的排斥反应及对供体鼠的单向混合淋巴细胞反应,并用多聚酶链式反应(PCR)检测嵌合体的形成。结果常规剂量的骨髓输注或短期FK506治疗并不能延长移植物的存活时间,也没有宏嵌合形成。实验组皮肤移植物存活时间(240±15)d比无处理对照组(96±11)d、单纯FK506组(105±16)d、单纯骨髓细胞移植组(103±15)d、无关供体对照组(98±11)d明显延长(P<005)。混合淋巴细胞反应实验组供者特异性抑制率8055%±1410%明显高于单纯FK506组3865%±1243%及单纯骨髓细胞移植组3541%±899%(P<005),实验组宏嵌合呈阳性。

小肠移植术后肠内营养因素对FK506血药浓度的影响

目的 探讨小肠移植术后 FK5 0 6血药浓度的影响因素 ,为临床合理化用药提供依据 .方法 观察活体部分小肠移植术后肠内营养等因素对 FK5 0 6血药浓度的影响 .结果 肠内营养物质重量、移植肠造口排出量与 FK5 0 6血药浓度关系密切 .结论 小肠移植术后应常规性的监测 FK5 0 6血药浓度 。

肾移植受者FK506治疗窗浓度的临床观察

目的 :寻求适合国人肾移植受者FK5 0 6理想治疗窗浓度范围。 方法 :应用MEIA法测定口服FK5 0 6 1 2h后全血谷浓度。 结果 :统计资料显示 ,术后第 1个月应为 1 2～ 1 8μg/L ,第 2～ 3个月为 8～ 1 3μg/L ;第 4个月后为 5～ 8μg/L。 结论 :此浓度范围既能达到满意的免疫抑制效果 ,又能减少排斥反应和FK5 0

FK506纳米粒制备及在兔眼组织中的分布

目的 研究FK5 0 6 PLGA纳米粒溶液滴眼时在眼组织中的药物浓度和分布。方法 以盐析法制备FK 5 0 6 PLGA纳米粒 ,进行形态和粒径大小考察。酶联免疫方法检测FK5 0 6 PLGA纳米粒滴眼后 ,全血和眼组织FK5 0 6含量。结果 FK5 0 6 PLGA纳米粒均匀圆整 ,粒径为 166 5 6nm± 5 3 96nm。FK5 0 6纳米粒 10 μg滴眼后 ,16h内房水中的药物质量浓度 15～ 2 9ng/mL。FK5 0 6在角膜组织中含量最高 ,结膜中药物质量浓度次之 ,角膜、结膜和巩膜组织均可测到有效治疗质量浓度的KF5 0 6。全血中未检测到FK5 0 6(低于 0 3ng/mL)。 结论 FK5 0 6 PLGA可以促进和延长眼局部的FK5 0 6吸收。

免疫抑制剂FK506对肺癌细胞增殖和迁移的作用研究

背景与目的 FK506(他克莫司,tacrolimus)是一种大环内酯类的新型免疫抑制剂。研究报道FK506对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究旨在观察FK506对肺癌细胞增殖和迁移的作用,并探讨其可能的机制。方法体外培养A549和H1299细胞,采用CCK-8法测定FK506对A549和H1299细胞增殖的作用;EDU标记法检测DNA合成;流式细胞术检测细胞的周期分布情况;Transwell和细胞划痕实验检测细胞的体外迁移能力;Western blot技术检测P27、RB1、CDK4、CDK6和MMP9蛋白的表达。结果 FK506可抑制A549和H1299细胞的增殖、诱导细胞周期G_0期/G_1期阻滞;与对照组比较,FK506处理后A549和H1299细胞迁移能力明显降低,且呈剂量依赖性。此外,与对照组相比,FK506处理组中P27和RB1表达上调,而CDK4、CDK6和MMP9表达显著下降。结论 FK506对人肺癌A549和H1299细胞的增殖和迁移能力有明显的抑制作用,其机制可能与上调p27表达、抑制CDK4、CDK6和MMP-9表达有关。

肾移植术后FK506血药谷浓度的临床观察

目的 :建立FK5 0 6理想治疗窗谷浓度范围 ,初步了解影响FK5 0 6谷浓度的因素以及FK5 0 6谷浓度与急性排斥反应和肾中毒的关系 .方法 :78例同种尸肾移植受者应用FK5 0 6 +骁悉 (MMF) +强的松 (Pred)三联免疫抑制治疗 ,采用竞争性酶联免疫吸附法 (ELISA)测定服药 12h后FK5 0 6的全血浓度 (即谷浓度 ) ,对术后不同时期的FK5 0 6血药浓度进行分析 .结果 :FK5 0 6的全血谷浓度 ,正常组术后 1mo内(13.1± 2 .6 ) μg·L-1,2mo (10 .9± 2 .4 ) μg·L-1,3mo (10 .6± 1.9) μg·L-1,4 / 6mo (8.2± 1.2 ) μg·L-1,7mo以后 (6 .6± 1.1) μg·L-1.抗痨组术后 3mo内FK5 0 6谷浓度显著低于正常组 ,肝功损害组术后各时期的FK5 0 6谷浓度显著高于正常组 .急性排斥反应 1例 ,FK5 0 6谷浓度为 3.2 μg·L-1.急性肾中毒 6例 ,平均谷浓度为 18.7μg·L-1.结论 :FK5 0 6理想的全血谷浓度治疗窗范围为 :术后 1mo内 10～ 15 μg·L-1,术后 2～ 3mo 9～ 12 μg·L-1,4～ 6mo 7～ 10 μg·L-1,7mo以后5～ 8μg·L-1.肝损害可显著提高FK5 0 6血药浓度 ,利福平显著降低FK5 0 6血药浓度 .FK5 0 6低浓度易致急性排斥反应 。

免疫抑制剂FK506所致血糖升高副作用的机制研究

目的:探讨FK506对血糖调节的副作用,并研究其机制。方法:健康SD大鼠12只,随机分为2组:对照组(生理盐水,1 mL·kg-1·d-1)、给药组(FK506,1 mg·kg-1·d-1)。每天监测体重,每2 d测空腹血糖。在第15天取脂肪组织,实时荧光定量PCR检测脂联素(adiponectin)、瘦素(leptin)、内酯素(visfatin)、抵抗素(resistin)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)及氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)mRNA的表达;Western blotting检测PPAR-γ及脂联素蛋白的表达。结果:第10天开始,给药组大鼠空腹血糖逐渐升高,显著高于对照组(P<0.05);第14天,给药组空腹血糖由(5.10±0.62)mmol/L升到(7.73±0.73)mmol/L,对照组空腹血糖无明显变化;与对照组相比,给药组大鼠脂肪组织adiponectin和leptin mRNA的表达量显著降低(P<0.01),而visfatin、resistin和RBP4 mRNA表达明显升高(P<0.05);与对照组相比,给药组脂肪组织PPAR-γmRNA表达量降低(P<0.01);与对照组相比,给药组脂肪组织PPAR-γ及脂联素蛋白表达量明显降低(P<0.01)。结论:FK506可能通过抑制PPAR-γ的表达,影响脂肪因子的表达,影响血糖。

葡萄柚汁对FK506血药浓度的影响

选取6例肝移植术后口服FK 506(血药浓度在治疗窗范围内或以下,且已达稳态浓度)的患者,予葡萄柚汁(GF J)250 m l,与FK 506同服,1周后检测FK 506谷值浓度。结果加服GF J 1周后FK 506谷值浓度显著提高(P=0.008),每日服用FK 506的量及所需费用明显降低(P=0.013、0.019)。提示GF J可作为增效剂提高FK 506的生物利用度。

FK506对大鼠面神经损伤后面运动神经元凋亡及bcl-2,bax表达的影响

目的研究FK506对大鼠面神经损伤后运动神经元凋亡及bcl-2和bax表达的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,制作大鼠单侧面神经总干切断模型,实验组每日腹腔注射FK506注射液,对照组给予相同剂量的盐水,在术后各时间点,通过Nissl染色观测面神经核神经元的形态学变化;TUNEL检测细胞凋亡;免疫组化检测bcl-2和bax表达的变化。结果面神经损伤后,FK506组与盐水组相比较,FK506组运动神经元凋亡明显减少,bcl-2表达增加,bax表达降低。结论 FK506有助于增加面神经损伤后运动神经元bcl-2的表达、降低bax表达,抑制细胞凋亡,为药物在神经损伤疾病的临床应用提供了实验依据。

FK506和环孢素A对肾移植患者血脂的影响

目的 :研讨FK5 0 6和环孢素A(CsA)对肾移植术后患者脂质代谢的影响。 方法 :对我们近三年以FK5 0 6或CsA为主要免疫抑制剂的肾移植患者术后 1年血脂变化进行统计及初步分析 ,明确两组患者脂质代谢的不同之处。 结果 :CsA组 (1 98例 )术后患者血脂增高的比例明显高于FK5 0 6 (36例 ,1 7 1 7%vs 2 78% ,P <0 0 5 )且CsA组血脂增高患者的手术前、后血脂水平亦有明显差异 (4 3± 1 2mmol/Lvs 4 9± 1 6mmol/L ,P <0 0 1 )。 结论 :肾移植患者术后应用FK5 0

不同血药浓度FK506在肝移植术后应用的比较

目的总结肝脏移植术后应用免疫抑制药他克莫司(FK506)的经验。方法回顾性分析52例乙肝后肝硬化失代偿期肝移植患者的临床资料,依据术后应用FK506的浓度分为两组,观察其两组的术后存活率、移植肝功能及并发症发生情况。结果术后1年人/肝存活率、急性排斥反应及HBV再感染发生率,两组差异无统计学意义,肝功能在术后3、6个月两组之间差异有统计学意义,其余时间点差异无统计学意义,而术后肺部感染、新发糖尿病及高血脂发生率情况,两组差异有统计学意义。结论肝移植术后应用低剂量FK506更安全有效,术后一些并发症的发生和该药物的浓度有一定的相关性。

FK506和RS-61443对大鼠异体肢体移植的联合免疫抑制作用

目的 通过大鼠异体肢体移植模型 ,旨在分析 FK5 0 6和 RS- 6 14 4 3对大鼠异体肢体移植中急性排斥反应的免疫抑制作用。 方法 选择雄性 Wistar和 SD大鼠为供、受体 ,以 FK5 0 6和 RS- 6 14 4 3为免疫抑制剂 ,对照组为术后不用药组 ,实验组根据用药剂量和药物不同分为 6组 ,各组用药时间均为 5周 (每日 1次共 2周 ,然后每周 2次共 3周 ) ,进行了 10 1例异体肢体移植动物实验。观察大鼠一般情况、移植肢体排斥反应及存活时间。 结果 对照组肢体平均存活时间为 (7.0 0± 0 .78)天 ;实验组 1～ 6组移植肢体平均存活时间分别为 (17.0 8± 4 .5 0、2 3.2 0± 5 .0 5、11.19±2 .2 8、16 .33± 1.83、13.33± 3.2 2和 5 8.76± 6 .81)天。 结论 FK5 0 6和 RS- 6 14 4 3能抑制大鼠同种异体肢体移植术后急性移植排斥反应的发生 ,并能延长移植肢体的存活时间。

FK506对雪旺细胞体外增殖能力的影响

目的 研究普乐可夫(FK506)促进周围神经再生的作用和机制。方法 将纯化的兔雪旺细胞分3组:10μg/L FK506、100μg/L FK506和空白对照组,继续培养10 d,相差显微镜观察计数,绘制各自的增殖曲线。在24和72 h对各组细胞进行流式细胞分析。结果 FK506组雪旺细胞生长良好,而成纤维细胞可以发现细胞肿胀,胞质内出现空泡;活细胞计数对照组雪旺细胞的倍增时间为8d,10μg/L组和100μg/L组倍增时间6.2d。用FK506培养24、72 h后对雪旺细胞增殖的流式细胞分析处于S期的雪旺细胞较对照明显增高(P< 0.01)。结论 FK506有促进体外培养的雪旺细胞快速增殖和抑制成纤维细胞生长的作用。免疫抑制剂FK506的双重作用在神经再生治疗中具广阔的应用前景。