旋毛虫FYVE锌指结构蛋白基因的克隆及表达

用旋毛虫新生幼虫差减cDNA文库中的T5 4克隆作为核酸探针 ,对旋毛虫成虫和新生幼虫混合cDNA文库进行筛选 ,获得 1个全长 14 6 4bp的cDNA分子。该cDNA含有 1个 12 90bp的开放阅读框架 (ORF) ,Blastn同源性分析表明 ,与其它已知生物基因序列无明显的同源性 ,为一新的cDNA。该ORF编码 1个 42 9个氨基酸残基组成的多肽 ,其分子质量理论推导值为 49.9ku ,等电点为 5 .6 ,在 12— 14及 10 3— 10 5氨基酸残基处分别有 2个糖基化位点NLS及NVS ,在C末端 344— 40 9氨基酸残基处有 1个FYVE锌指结构域 (ProfilePS5 0 178)。Blastp同源性分析表明 ,与广东管圆线虫 (Angiostrongyluscantonensis) 6 6 .0ku蛋白 ( gi/ 1743430 )同源性最高 ,为 39.0 %。在此基础上对旋毛虫FYVE锌指结构重组蛋白进行了表达 ,表达蛋白占菌体蛋白的 2 4%。