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Hedgehog信号通路介导白藜芦醇对人胆囊癌GBC-SD细胞株凋亡和侵袭的影响
1
作者 秦洪莉 莫立军 +1 位作者 张瞳 高明 《药物流行病学杂志》 CAS 2023年第11期1250-1258,共9页
目的 探讨白藜芦醇(RSV)对人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡、侵袭能力和上皮间充质转化(EMT)的影响及其发生机制。方法 体外培养GBC-SD细胞,随机分成空白组和RSV低、中、高剂量组(0,20,50,100μmol·L-1RSV)。通过Annexin V FITC/PI双染... 目的 探讨白藜芦醇(RSV)对人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡、侵袭能力和上皮间充质转化(EMT)的影响及其发生机制。方法 体外培养GBC-SD细胞,随机分成空白组和RSV低、中、高剂量组(0,20,50,100μmol·L-1RSV)。通过Annexin V FITC/PI双染流式分析细胞凋亡情况,RT-PCR检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3 (Caspase 3)mRNA表达水平,Transwell侵袭实验检测GBC-SD细胞侵袭能力,Western blotting检测EMT标志物钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达水平和Hedgehog信号通路成员神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(Gli1)、Gli2、音猬因子(Shh)的表达。再将GBC-SD细胞随机分为空质粒组、Gli1过表达质粒组、Gli1过表达质粒+RSV组,通过Western blotting检测Gli1蛋白过表达情况,Annexin V-FITC/PI双染流式和Transwell侵袭实验分别检测上述各组的凋亡水平和侵袭能力。结果 与空白组相比,RSV各剂量组细胞凋亡率、Bax和Caspase 3 mRNA表达显著升高(P <0.05或P <0.01),细胞侵袭能力显著降低(P <0.01);RSV中、高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著降低(P <0.01)。与空白组相比,RSV高剂量组E-cadherin蛋白表达水平显著升高,N-cadherin、Vimentin、Gli1、Gli2和Shh蛋白表达水平显著降低(P <0.01)。与转染空质粒+RSV组相比,Gli1过表达质粒+RSV组细胞的凋亡率降低,侵袭能力增加(P<0.001)。结论 RSV促进GBC-SD细胞凋亡、抑制GBC-SD细胞侵袭及EMT,其作用机制可能与抑制Hedgehog信号相关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 胆囊癌 gbc-sd细胞株 Hedgehog信号通路 上皮间充质转化 凋亡 侵袭
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Celecoxib对胆囊癌细胞GBC-SD增殖的抑制作用 被引量:3
2
作者 吴高松 梅之南 +3 位作者 刘正人 唐启彬 邹声泉 裘法祖 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期237-239,共3页
目的 研究Celecoxib对人胆囊癌细胞GBC SD生长和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用免疫细胞化学SABC法检测GBC SD环氧合酶 2 (Cox 2 )蛋白表达 ,采用四唑氮蓝 (MTT)比色法检测细胞增殖 ,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡 ,酶联免疫吸... 目的 研究Celecoxib对人胆囊癌细胞GBC SD生长和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用免疫细胞化学SABC法检测GBC SD环氧合酶 2 (Cox 2 )蛋白表达 ,采用四唑氮蓝 (MTT)比色法检测细胞增殖 ,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测前列腺素E2 (PGE2 )含量。结果 Celecoxib可下调GBC SD细胞Cox 2蛋白表达。Celecoxib抑制GBC SD细胞增殖作用呈时间依赖性 ,作用 2天后就有轻度抑制 ,第 3、第 4和第 5天抑制作用已相当明显 (P <0 .0 5 ,与对照组相比 ) ,并且这种增殖抑制作用能被 2 0 0 pg/mlPGE2 拮抗。Celecoxib诱导GBC SD细胞G1 S期阻滞 ,4 0 μmol/L(P <0 .0 5 )和2 0 μmol/L(P <0 .0 5 )Celecoxib组G0 G1期细胞含量比对照组 ( 0 μmol/L)明显增高 ,而S期和G2 /M期细胞含量比对照组明显降低 (P <0 .0 5 )。 4 0 μmol/L(P <0 .0 5 )和 2 0 μmol/L(P <0 .0 5 )Celecoxib处理 4 8h后GBC SD细胞凋亡率明显上升。 结论 Celecoxib通过Cox 2和PGE2 途径抑制GBC SD细胞生长和诱导凋亡。 展开更多
关键词 胆道肿瘤 环加氧酶 环加氧酶抑制药 CELECOXIB gbc-sd细胞株 前列腺素E2
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茶多酚诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡的机制 被引量:4
3
作者 连超群 夏俊 +1 位作者 高琴 张静 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期2077-2080,共4页
目的探讨茶多酚体外诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡的机制。方法茶多酚作用GBC-SD细胞48 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst33258/PI双染色,激光扫描共聚焦显微镜观察茶多酚诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡作用;DCFH-DA为细... 目的探讨茶多酚体外诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡的机制。方法茶多酚作用GBC-SD细胞48 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst33258/PI双染色,激光扫描共聚焦显微镜观察茶多酚诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡作用;DCFH-DA为细胞内活性氧探针,激光扫描共聚焦显微镜检测茶多酚对人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞活性氧(ROS)水平的影响,分光光度法测定茶多酚对人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞内caspase-3活性的影响。结果 50、100、200μg/ml茶多酚作用GBC-SD细胞48 h后,人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞呈现典型的凋亡特征;激光扫描共聚焦显微镜下观察茶多酚作用后GBC-SD细胞ROS明显上升,细胞内caspase-3活性增强(P<0.01)。结论茶多酚能显著诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞发生凋亡作用,其机制可能是ROS过量积聚、激发caspase级联反应,从而诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 茶多酚 gbc-sd细胞 活性氧 CASPASE-3
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冬凌草甲素通过线粒体途径诱导人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡 被引量:5
4
作者 丁笑笑 罗文达 +2 位作者 张佳 洪叶 冯长伟 《医学研究杂志》 2013年第3期111-114,共4页
目的研究冬凌草甲素诱导人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡作用及其机制。方法 MTS法检测冬凌草甲素对GBC-SD细胞的生长抑制作用;瑞氏染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位改变、caspase-3活性变化;Western blot... 目的研究冬凌草甲素诱导人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡作用及其机制。方法 MTS法检测冬凌草甲素对GBC-SD细胞的生长抑制作用;瑞氏染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位改变、caspase-3活性变化;Western blot检测caspase-9活化情况。结果冬凌草甲素能显著抑制GBC-SD细胞增殖,呈时间剂量依赖性(P<0.05)。细胞形态学观察可见冬凌草甲素可诱导细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示28μmol/L药物处理GBC-SD细胞24h后,细胞凋亡率为51.28%±2.65%。随着药物浓度增加,GBC-SD细胞线粒体膜电位逐渐下降而caspase-3活性逐渐增强,56μmol/L组caspase-3活性是对照组的11倍。Western blot分析结果显示caspase-9酶原被激活,且活化条带随药物浓度的增加而增强。结论 冬凌草甲素可能通过细胞线粒体膜电位下降激活caspase-3并最终诱导GBC-SD细胞凋亡。 展开更多
关键词 冬凌草甲素 gbc-sd细胞 细胞凋亡 线粒体 CASPASE-3
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人胆囊癌细胞系GBC-SD p53基因突变的研究 被引量:2
5
作者 乌新林 王占民 +2 位作者 马道新 冯立民 吴小鹏 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2005年第1期66-68,71,共4页
目的:从蛋白质和分子水平研究人胆囊癌细胞系GBC-SDp53基因状况。方法:对体外培养的GBC-SD细胞,应用免疫细胞化学SP法定性了解其P53蛋白的表达情况;用PCR技术扩增GBC-SD细胞p53基因4~9外显子,对所得产物进行直接测序分析。结果:GBC-SD... 目的:从蛋白质和分子水平研究人胆囊癌细胞系GBC-SDp53基因状况。方法:对体外培养的GBC-SD细胞,应用免疫细胞化学SP法定性了解其P53蛋白的表达情况;用PCR技术扩增GBC-SD细胞p53基因4~9外显子,对所得产物进行直接测序分析。结果:GBC-SD细胞P53蛋白过表达;PCR产物第5外显子126位密码子有TAC→AAC的碱基颠换,因而使其编码的氨基酸从酪氨酸→天冬酰胺,产生错义突变。结论:人胆囊癌细胞系GBC-SD表达突变型P53蛋白,点突变是其p53基因功能失活的主要原因。 展开更多
关键词 胆囊肿瘤 gbc-sd细胞 基因 p53 点突变
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无血清培养胆囊癌GBC-SD细胞形成肿瘤细胞球的鉴定 被引量:2
6
作者 石程剑 秦仁义 +3 位作者 王敏 田锐 张志发 宫伟强 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2010年第9期865-870,共6页
目的:分离扩增肿瘤干细胞,并鉴定其生物学性质.方法:用无血清培养基培养人胆囊癌GBC-SD细胞得到肿瘤细胞球.将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基培养促使其分化;将肿瘤球和普通GBC-SD细胞分别种入96孔板,MTT检测增殖能力,并将肿瘤球... 目的:分离扩增肿瘤干细胞,并鉴定其生物学性质.方法:用无血清培养基培养人胆囊癌GBC-SD细胞得到肿瘤细胞球.将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基培养促使其分化;将肿瘤球和普通GBC-SD细胞分别种入96孔板,MTT检测增殖能力,并将肿瘤球和普通GBC-SD细胞分别植入裸鼠皮下,观察移植瘤的形成;流式细胞术检测CD15s和CD24在肿瘤球细胞和普通GBC-SD细胞中的表达,筛选细胞表面标志物.结果:在无血清培养基中,胆囊癌细胞可以形成少量的肿瘤细胞球,并显示很强的自我更新和增殖能力,含血清环境能够诱导其分化而贴壁生长;在动物实验中,肿瘤球细胞较普通GBC-SD细胞显示更强的致瘤能力(80.00%vs10.00%,P<0.05);标志物CD15s在肿瘤球的表达较普通GBC-SD细胞明显增高(2.56%±0.38%vs10.77%±0.93%,t=18.25,P<0.05).结论:人胆囊癌细胞GBC-SD的肿瘤干细胞可以通过无血清培养环境来分离和扩增,CD15s可能为其细胞表面标志物. 展开更多
关键词 胆囊癌 gbc-sd细胞系 无血清培养基 肿瘤干细胞 细胞表面标志物
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胆囊癌细胞系GBC-SD的生物学行为研究 被引量:7
7
作者 刘博 王占民 +3 位作者 吴小鹏 刘春生 李兆亭 刘军 《外科理论与实践》 2001年第3期146-148,共3页
目的:建立人体胆囊癌细胞系,研究胆囊癌细胞的生物学行为。方法:应用组织块法建立细胞系,通过细胞形态学、增殖动力学、染色体分析、细胞上清液CEA、CA19-9检测及异种种植等对其生物行为进行研究。结果:GBC-SD细胞... 目的:建立人体胆囊癌细胞系,研究胆囊癌细胞的生物学行为。方法:应用组织块法建立细胞系,通过细胞形态学、增殖动力学、染色体分析、细胞上清液CEA、CA19-9检测及异种种植等对其生物行为进行研究。结果:GBC-SD细胞以方形、多角形和梭形为主,倍增时间约21.4h,染色体37~145条,众数81条,具维持分泌CEA、CA19-9的功能,裸鼠种植肿瘤与来源肿瘤组织类型相似。结论:GBC-SD是一新的人体胆囊癌细胞系,可作为研究胆囊癌的实验模型。 展开更多
关键词 胆囊肿瘤 细胞系 异种种植 gbc-sd 生物学行为
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选择性Cox-2抑制剂Celebrex对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长的抑制作用 被引量:2
8
作者 阮潇舒 秦仁义 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2006年第5期365-368,共4页
目的探讨选择性环氧合酶-2(Cox-2)抑制剂Celebrex对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞系增殖的影响。方法采用MTT比色法检测Celebrex对细胞系生长的影响;TUNEL染色法观察细胞凋亡指数,并用流式细胞仪定量分析;透射电镜和荧光显微镜检测细胞... 目的探讨选择性环氧合酶-2(Cox-2)抑制剂Celebrex对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞系增殖的影响。方法采用MTT比色法检测Celebrex对细胞系生长的影响;TUNEL染色法观察细胞凋亡指数,并用流式细胞仪定量分析;透射电镜和荧光显微镜检测细胞凋亡。结果Celebrex抑制GBC-SD细胞系的生长呈剂量依赖性;4 0,8 0,1 2 0,1 6 0μmol/L浓度的Celebrex对GBC-SD细胞的生长抑制率分别是1 8.7 7%,2 5.3 2%,4 6.5 8%和5 2.1 9%(P<0.0 1)。流式细胞仪定量分析在4 0,8 0,1 2 0,1 6 0μmol/L浓度下的细胞凋亡率分别为(8.5 1±1.4 4)%,(1 2.4 0±0.8 7)%,(2 6.3 7±1.7 2)%和(4 3.2 1±0.3 9)%,与对照组(4.8 7±0.5 5)%比较有显著的统计学差异;各组间两两比较差异亦有显著性(均P<0.0 1)。透射电镜和荧光显微镜下能观察到胞核浓缩、碎裂以及凋亡小体的形成。结论Celebrex可以有效地抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系的增殖并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 胆囊癌细胞株gbc-sd 环氧合酶/拮抗剂和抑制剂
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人胆囊癌细胞系GBC-SD的建立 被引量:12
9
作者 刘博 王占民 +3 位作者 吴小鹏 刘春生 李兆亭 刘军 《山东医科大学学报》 2000年第3期332-333,共2页
关键词 胆囊肿瘤 肿瘤细胞 gbc-sd 细胞系建立
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二十二碳六烯酸对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长的抑制作用
10
作者 朱开成 王建 《齐齐哈尔医学院学报》 2009年第5期524-526,共3页
目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞增殖的影响。方法采用体外细胞培养的方法,在处于指数生长期的GBC-SD细胞培养剂RPMI 1640中分别添加12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的DHA,培养24~72小时后,采用噻唑蓝法(MT... 目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞增殖的影响。方法采用体外细胞培养的方法,在处于指数生长期的GBC-SD细胞培养剂RPMI 1640中分别添加12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的DHA,培养24~72小时后,采用噻唑蓝法(MTT法)检测GBC-SD细胞的增殖情况,光镜下观察细胞形态变化。采用DNA琼脂糖凝胶电泳、Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜检测GBC-SD细胞的凋亡情况。结果经12.5μg/ml的DHA作用24~72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05),光镜下细胞形态无明显改变.经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24~72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05),光镜下见细胞皱缩、核染色质凝聚、边集。细胞经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24小时后,DNA琼脂糖凝胶电泳显示DNA裂解片段出现阶梯状条带,经Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜下观察与对照组比较见较多绿色荧光。结论DHA可以抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系的增殖并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 二十二碳六烯酸 人胆囊癌gbc-sd细胞 增值 细胞凋亡
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冬凌草乙素诱导GBC-SD细胞的凋亡及对Bcl-2、p53、Fas/APO-1、C-myc表达的影响 被引量:10
11
作者 薛宏伟 潘祥麟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1247-1251,共5页
目的 探讨冬凌草乙素对人胆囊癌GBC SD细胞增殖抑制和诱导调亡的机制。方法 不同浓度的冬凌草乙素处理GBC SD细胞后 ,用MTT法检测GBC SD细胞的存活率 ,通过倒置显微镜、扫描电子显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计观察和分析凋亡细... 目的 探讨冬凌草乙素对人胆囊癌GBC SD细胞增殖抑制和诱导调亡的机制。方法 不同浓度的冬凌草乙素处理GBC SD细胞后 ,用MTT法检测GBC SD细胞的存活率 ,通过倒置显微镜、扫描电子显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计观察和分析凋亡细胞 ,用免疫组织化学法和流式细胞仪检测细胞内Bcl 2、p5 3、Fas/APO 1、C myc的表达。结果 冬凌草乙素浓度依赖性地抑制GBC SD细胞增殖及诱导其凋亡 ;药物作用 2 4h后 ,细胞内Bcl 2、p5 3、Fas/APO 1、C myc的表达有不同程度的下调 ;Caspase 3活性与凋亡程度相关。结论 冬凌草乙素抑制GBC SD细胞的增殖和诱导其凋亡与Bcl 2、p5 3、Fas/APO 1、C 展开更多
关键词 冬凌草乙素 DBC-SD 凋亡 BCL-2 P53 FAS/APO-1 C-myc
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沉默FAT10基因抑制人胆囊癌GBC-SD细胞增殖、侵袭及迁移
12
作者 宋聚星 齐文秀 +3 位作者 李小静 锅红芬 宋英 安琪 《肝胆外科杂志》 2019年第5期391-395,共5页
目的探究电转法沉默FAT10基因的表达对人胆囊癌GBC-SD细胞侵袭、增殖及迁移的影响.方法设计及合成靶向FAT10的siRNA序列(FAT10-siRNA)以及阴性对照序列(NC-siRNA),电转法转染至人胆囊癌GBC-SD细胞,分别形成FAT10-GBC-SD、NC-siRNA-GBC-S... 目的探究电转法沉默FAT10基因的表达对人胆囊癌GBC-SD细胞侵袭、增殖及迁移的影响.方法设计及合成靶向FAT10的siRNA序列(FAT10-siRNA)以及阴性对照序列(NC-siRNA),电转法转染至人胆囊癌GBC-SD细胞,分别形成FAT10-GBC-SD、NC-siRNA-GBC-SD细胞.通过RT-PCR、Western blotting检测电转后细胞中FAT10 mRNA与蛋白的表达情况,流式细胞术检验细胞凋亡及周期,迁移,细胞侵袭实验分别测定细胞增殖,划痕愈合实验,CCK-8增殖实验,以及侵袭的能力.结果FAT10-GBC-SD细胞中FAT10 mRNA和蛋白表达较NC-siRNA-GBC-SD细胞和空载组(Ctrl-GBC-SD细胞组)显著降低.FAT10-GBC-SD细胞的成长速度显著减慢,细胞周期阻止在G0/G1期,S期细胞数减少;与空载组相比,FAT10-GBC-SD细胞的凋亡率显然升高(P<0.05),迁移、增殖、侵袭能力明显下降(P<0.05).结论电转法沉默FAT10基因的表达可抑制胆囊癌细胞的迁移、侵袭及增殖能力. 展开更多
关键词 胆囊癌 类泛素蛋白基因 电转法 gbc-sd 细胞增殖
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转染过表达WWOX质粒的胆囊癌细胞株GBC-SD迁移、侵袭能力变化及其机制
13
作者 房立锐 魏东 +3 位作者 雷学芬 佟鑫 徐冬杏 张文 《山东医药》 CAS 2022年第9期22-26,共5页
目的观察转染过表达WW域的氧化还原酶(WWOX)质粒对胆囊癌细胞株GBC-SD迁移、侵袭能力的变化,并探讨其机制。方法胆囊癌细胞株GBC-SD分为实验组、NEG组、空白对照组,实验组转染WWOX过表达质粒,NEG组转染空载质粒,空白对照组不做处理。采... 目的观察转染过表达WW域的氧化还原酶(WWOX)质粒对胆囊癌细胞株GBC-SD迁移、侵袭能力的变化,并探讨其机制。方法胆囊癌细胞株GBC-SD分为实验组、NEG组、空白对照组,实验组转染WWOX过表达质粒,NEG组转染空载质粒,空白对照组不做处理。采用细胞划痕实验测算各组细胞迁移率,以细胞迁移率表示细胞迁移能力。采用Transwell实验测算各组穿膜细胞数,以穿膜细胞数表示细胞侵袭能力。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中WWOX、P73、E-cadherin、Vimentin mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞中WWOX、P73、Ecadherin、Vimentin蛋白。结果实验组、NEG组、空白对照组细胞迁移率分别为50.42%±3.47%、74.81%±1.04%、77.82%±2.71%,其中实验组细胞迁移率与NEG组、空白对照组相比,P均<0.05。实验组、NEG组、空白对照组穿膜细胞数分别为(77.33±8.65)、(173.33±6.18)、(187.33±6.94)个,其中实验组穿膜细胞数与NEG组、空白对照组相比,P均<0.05。实验组WWOX、P73、E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量均高于NEG组和空白对照组(P均<0.05),实验组Vimentin mRNA和蛋白相对表达量均低于NEG组和空白对照组(P均<0.05)。结论转染过表达WWOX质粒的GBC-SD细胞株迁移、侵袭能力降低,其机制可能与P73表达上调进而抑制GBC-SD细胞的上皮-间充质转化过程有关。 展开更多
关键词 胆囊癌 gbc-sd细胞株 质粒 细胞迁移 细胞侵袭 上皮-间充质转化
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Cx43基因修饰对人胆囊癌GBC-SD细胞增殖和迁移能力的影响 被引量:1
14
作者 任立刚 《中国实验诊断学》 2015年第11期1826-1829,共4页
胆囊癌恶性程度较高,其早期症状无明显特异性,发病率又呈现逐年升高的趋势[1,2]。肿瘤的增殖、迁移均存在着基因水平的调控参与,从而提示了一种新的控制肿瘤的方法[3]。Cx43是一种重要的缝隙连接蛋白,表达与多种细胞中,Cx43具有功能多样... 胆囊癌恶性程度较高,其早期症状无明显特异性,发病率又呈现逐年升高的趋势[1,2]。肿瘤的增殖、迁移均存在着基因水平的调控参与,从而提示了一种新的控制肿瘤的方法[3]。Cx43是一种重要的缝隙连接蛋白,表达与多种细胞中,Cx43具有功能多样化,在细胞间传递信息和能量,调控细胞的生长、增殖分化及内环境的稳定,因此推断如果阻断肿瘤细胞中Cx43的表达能有效抑制肿瘤[4]。 展开更多
关键词 胆囊癌 CX43 gbc-sd细胞 基因修饰 细胞生长 转染方法 功能多样化 细胞增殖 重组质粒 人胆
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顺铂诱导人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡的研究
15
作者 苏传伟 丛超 王艳斌 《山东医药》 CAS 北大核心 2004年第28期15-15,共1页
关键词 胆囊癌 D细胞 gbc-sd 顺铂 DDP 凋亡 诱导 研究
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Effect of norcantharidin on proliferation and invasion of human gallbladder carcinoma GBC-SD cells 被引量:24
16
作者 Yue-ZuFan Jin-YeFu +1 位作者 Ze-MingZhao Cun-QiuChen 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第16期2431-2437,共7页
AIM: To investigate the effect of norcantharidin on proliferation and invasion of human gallbladder carcinoma GBC-SD cells in vitro and its anticancer mechanism. METHODS: Human gallbladder carcinoma GBC-SD cells were ... AIM: To investigate the effect of norcantharidin on proliferation and invasion of human gallbladder carcinoma GBC-SD cells in vitro and its anticancer mechanism. METHODS: Human gallbladder carcinoma GBC-SD cells were cultured by cell culture technique. The growth and the invasiveness of GBC-SD cells in vitro were evaluated by the tetrazolium-based colorimetric assay and by the Matrigel experiment and the crossing-river test. Expression of PCNA, Ki-67, MMP2 and TIMP2 proteins of GBC-SD cells was determined by streptavidin-biotin complex method. RESULTS: In vitro norcantharidin inhibited the growth and proliferation of GBC-SD cells in a dose- and time-dependent manner, with the IC50 value of 56.18 μ/mL at 48 h. Norcantharidin began to inhibit the invasion of GBC-SD cells at the concentration of 5 μg/mL, and the invasive action of GBC-SD cells was inhibited completely and their crossing-river time was prolonged significantly at 40 μg/mL. After treatment with norcantharidin, the expression of PCNA, Ki-67, and MMP2 was significantly decreased. With the increase in TIMP2 expression, the MMP2 to TIMP2 ratio was decreased significantly (P<0.05). CONCLUSION: Norcantharidin inhibits the proliferation and growth of human gallbladder carcinoma cells in vitro at relatively low concentrations by inhibiting PCNA and Ki-67 expression. Its anti-invasive activity may be the result of decrease in MMP2 to TIMP2 ratio and reduced cell motility. 展开更多
关键词 NORCANTHARIDIN Gallbladder neoplasm Cell culture PROLIFERATION INVASION Oncoprotein PCNA Ki-67 MMP2and TIMP2 Immunohistochemistry
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紫檀芪调控微小RNA-340-5p/髓细胞白血病-1轴对胆囊癌SD细胞生物学行为的影响实验研究
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作者 王京京 李全福 +1 位作者 张立广 邵青龙 《陕西医学杂志》 CAS 2024年第3期322-326,330,共6页
目的:探究紫檀芪(PTS)调控微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/髓细胞白血病-1(MCL-1)轴对胆囊癌SD(GBC-SD)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人GBC-SD细胞,使用不同浓度PTS(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理GBC-SD细胞,然后... 目的:探究紫檀芪(PTS)调控微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/髓细胞白血病-1(MCL-1)轴对胆囊癌SD(GBC-SD)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人GBC-SD细胞,使用不同浓度PTS(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理GBC-SD细胞,然后检测细胞存活率。将GBC-SD细胞分为对照组(DMEM培养基常规培养GBC-SD细胞)、PTS组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞)、PTS+空载质粒组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染空载质粒)、PTS+miR-340-5p沉默组[加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染miR-340-5p小干扰RNA(siRNA)质粒]。分别检测各组GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-340-5p和MCL-1 mRNA表达。蛋白印迹法检测MCL-1及增殖凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-340-5p与MCL-1的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测PTS对裸鼠肿瘤生长及miR-340-5p/MCL-1轴的影响。结果:随着PTS浓度的升高,GBC-SD细胞存活率逐渐降低(均P<0.05)。与对照组比较,PTS组细胞存活率、集落形成数、细胞迁移率、细胞侵袭数、MCL-1 mRNA和蛋白、Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达降低,细胞凋亡率、miR-340-5p、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达升高(均P<0.05)。沉默miR-340-5p可逆转PTS对GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及miR-340-5p/MCL-1轴的作用效果(均P<0.05)。miR-340-5p与MCL-1存在靶向调控关系。PTS能抑制裸鼠肿瘤生长和MCL-1 mRNA和蛋白表达,促进miR-340-5p表达(均P<0.05)。结论:PTS可通过上调miR-340-5p表达下调MCL-1表达,抑制GBC-SD细胞增殖、迁移和侵袭,促进GBC-SD细胞凋亡。 展开更多
关键词 胆囊癌 紫檀芪 微小RNA-340-5p 髓细胞白血病-1 gbc-sd细胞 生物学行为
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去甲斑蝥素对人胆囊癌GBC-SD细胞系增殖及侵袭的影响 被引量:31
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作者 范跃祖 傅锦业 +1 位作者 赵泽明 陈春球 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期271-274,共4页
目的 探讨去甲斑蝥素 (NCTD)对人胆囊癌GBC SD细胞系增殖、侵袭的影响及其机制。方法 应用细胞培养技术培养GBC SD细胞 ;以MTT法检测NCTD对GBC SD细胞的杀伤抑制率 ;以Matrigel侵袭实验、过河实验和SABC法检测NCTD对GBC SD细胞的侵袭... 目的 探讨去甲斑蝥素 (NCTD)对人胆囊癌GBC SD细胞系增殖、侵袭的影响及其机制。方法 应用细胞培养技术培养GBC SD细胞 ;以MTT法检测NCTD对GBC SD细胞的杀伤抑制率 ;以Matrigel侵袭实验、过河实验和SABC法检测NCTD对GBC SD细胞的侵袭力和对PCNA、Ki 6 7、MMP2 、TIMP2 蛋白表达的影响。结果 NCTD可明显抑制GBC SD细胞的增殖和生长 ,且随浓度提高或时间延长作用增强 ,呈剂量 时间效应关系 ;IC50 为 5 6 .18μg/ml,最强抑制作用时间为第 4 8小时。Matrigel侵袭、过河实验显示 ,NCTD在 5 μg/ml时 ,即能抑制GBC SD细胞的体外侵袭和运动能力 ,随浓度提高 ,过膜细胞减少 ,过膜死亡细胞增多 ,过河时间延长 (P <0 .0 1)。免疫组化测定显示 ,NCTD(IC50 )作用 4 8h后 ,GBC SD细胞PCNA、Ki 6 7、MMP2 表达下降 ,TIMP2 表达上升 ,MMP2 /TIMP2 比值下降 (P <0 .0 5 )。结论 NCTD可抑制人胆囊癌GBC SD细胞的生长 ,低浓度下也能抑制其体外侵袭能力 ;其机制可能与直接抑制GBC SD细胞迁移运动 ,干扰GBC SD细胞增殖相关基因蛋白PCNA、Ki 6 7和细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2 、TIMP2 的表达有关。 展开更多
关键词 去甲斑蝥素 胆囊癌 gbc-sd细胞系增殖 肿瘤细胞 细胞增殖 肿瘤侵袭
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茶多酚诱导人胆囊癌细胞GBC-SD凋亡过程中细胞内游离钙离子浓度及线粒体膜电位的变化 被引量:5
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作者 连超群 张静 +1 位作者 陈振东 夏俊 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期449-452,457,共5页
目的探讨茶多酚(Tea polyphenols,TP)诱导人胆囊癌细胞GBC-SD凋亡过程中细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i及线粒体膜电位(△Ψm)的变化。方法采用MTT法检测TP对GBC-SD细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染色,激光扫描共聚焦显微镜(laser sc... 目的探讨茶多酚(Tea polyphenols,TP)诱导人胆囊癌细胞GBC-SD凋亡过程中细胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i及线粒体膜电位(△Ψm)的变化。方法采用MTT法检测TP对GBC-SD细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染色,激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning cofocal microscopy,LSCM)观察TP对GBC-SD细胞凋亡的影响;Fluo-3 AM和Rhodamine123染色标记,LSCM观察TP对GBC-SD细胞内[Ca2+]i及△Ψm的影响。结果 TP可明显抑制GBC-SD细胞增殖,并诱导细胞凋亡,且呈时间和剂量依赖性;TP能使GBC-SD细胞内[Ca2+]i增加,△Ψm降低,且呈剂量和时间效应关系。结论 TP对GBC-SD细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与其上调细胞内[Ca2+]i、降低△Ψm有关。 展开更多
关键词 茶多酚 胆囊癌 gbc-sd细胞 钙离子浓度 线粒体膜电位
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胆囊癌细胞株GBC-SD类肿瘤干细胞筛选的研究 被引量:4
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作者 殷保兵 宗华杰 +1 位作者 马保金 蔡端 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期857-859,共3页
目的 筛选胆囊癌GBC-SD系中具有干细胞特性的细胞克隆.方法 在肿瘤干细胞培养基加入不同剂量的顺铂悬浮培养GBC-SD,将悬浮细胞收集后注射裸鼠,并持续瘤内注射顺铂,成瘤后取瘤内细胞继续原培养基培养,获得悬浮生长的克隆,分别测定其干细... 目的 筛选胆囊癌GBC-SD系中具有干细胞特性的细胞克隆.方法 在肿瘤干细胞培养基加入不同剂量的顺铂悬浮培养GBC-SD,将悬浮细胞收集后注射裸鼠,并持续瘤内注射顺铂,成瘤后取瘤内细胞继续原培养基培养,获得悬浮生长的克隆,分别测定其干细胞标志物(CD133、CD44、CD24)、耐药基因ABCG2细胞株MDR-1和转录因子OCT-4、Nanog的表达.结果 在肿瘤干细胞培养基和顺铂的筛选压力下,GBC-SD细胞能有效形成悬浮生长的克隆球,流式检测结果表明克隆球高表达CD133+(97.6%)、CD44+(77.9%),低表达CD24+(2.3%),同时表达耐药基因ABCG2和MDR-1,定量聚合酶链反应(PCR)及免疫荧光方法检测发现,与普通胆囊癌细胞株GBC-SD比较,克隆球干细胞基因OCT-4、Nanog表达分别增强266、284倍.结论 顺铂结合无血清培养基悬浮培养法筛选GBC-SD,作为一种新的干细胞分选方法,可以分离出具有肿瘤千细胞特征的胆囊癌克隆球. 展开更多
关键词 gbc-sd 肿瘤干细胞 耐药 悬浮培养
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