原位杂交检测HOXA-10基因在人子宫内膜的表达

目的 :探讨正常生育妇女月经周期不同时期子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞中HOXA-1 0基因的表达。方法 :采用原位杂交的方法。结果 :HOXA-1 0基因在子宫内膜腺上皮细胞、间质细胞均有表达 ;中晚分泌期的表达高于增殖期及分泌早期 ,且间质细胞的表达高于腺上皮细胞。结论 :( 1 ) HOXA-1 0基因在分泌中期子宫内膜高表达提示其可能在人胚胎着床过程中起某种作用。 ( 2 ) HOXA-1 0基因可能在人子宫内膜蜕膜化过程中有重要作用。

GnRHR-Ⅱ在人类子宫内膜的表达

目的探讨促性腺激素释放激素Ⅱ型受体(GnRHR-Ⅱ)在子宫内膜的分布及表达变化规律,分析GnRHR-Ⅱ与子宫内膜容受性的关系。方法通过诊断性刮宫技术,获取106名因"输卵管因素不孕"入院行宫腹腔镜手术的正常月经周期患者的子宫内膜组织,其中增生期形态子宫内膜54例,分泌期形态子宫内膜52例。采用免疫组化SP染色法,分别检测增生期、分泌期内膜基质细胞及腺上皮中GnRHR-Ⅱ的表达。根据表达强度及阳性率进行量化评分(HSCORE),采用SPSS 17.0统计分析软件对各组差异进行独立样本t检验。结果无论增生期还是分泌期,子宫内膜上均可见GnRHR-Ⅱ表达。增生期内膜基质细胞GnRHR-Ⅱ表达量明显高于腺上皮,差异有统计学意义(P<0.01)。分泌期腺上皮GnRHR-Ⅱ表达量明显高于基质细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。增生期内膜基质细胞GnRHR-Ⅱ表达量明显高于分泌期内膜基质细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。分泌期腺上皮GnRHR-Ⅱ表达量明显高于增生期腺上皮,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 GnRHR-Ⅱ的分布及表达变化规律与子宫内膜为适应胚胎着床发生的形态、生理生化改变相一致,证实在一定范围内GnRHR-Ⅱ与子宫内膜对胚胎的容受性密切相关。

克罗米酚对继发性不孕患者子宫内膜腺上皮纤毛细胞数量的影响

利用形态计量学的方法测定８名继发性不孕患者克罗米酚治疗前后子宫内膜腺上皮纤毛细胞比例和百分率，同时用放射免疫分析法测定血清Ｅ２和Ｐ水平。发现克罗米酚可能通过拮抗雌二醇或占据雌激素受体的作用使子宫内膜腺上皮纤毛细胞数量减少，纤毛细胞百分率下降，造成宫腔粘液状态不利于精子的运送和获能，亦不利于胚泡的植入，可能是克罗米酚诱发排卵治疗后低妊娠率的重要原因。

Survivin和MMP-9在子宫上皮和间质细胞中的表达与子宫内膜异位症间的关系

目的研究Survivin蛋白和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在子宫腺肌症(ade-nomyosis,AM)、腹壁子宫内膜异位症(abdominal wall endometriosis,AWEMS)、卵巢子宫内膜异位症(ovary endometri-osis,OEMS)的在位、异位内膜的腺上皮细胞和间质细胞中的表达,并与对照组进行比较,探讨其在子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)的发生发展中的作用。方法采用免疫组化法检测各组织标本中Survivin和MMP-9的表达。结果 (1)在正常子宫内膜组织中Survivin、MMP-9均呈弱表达或无表达。在EMS三个病例组中,无论是在位内膜还是异位内膜组织Survivin、MMP-9的表达均有不同程度的上调,分别与正常子宫内膜组织表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)在AM、AWEMS、OEMS三个病例组中,仅在增生期异位内膜腺上皮细胞和间质细胞中Sur-vivin、MMP-9的表达分别高于在位内膜同类细胞的表达,差异均有统计学意义(P<0.05);分泌期则呈不规律表达。(3)在AM、AWEMS、OEMS三个病例组中,限定相同组织部位、相同细胞类型,增生期与分泌期Survivin、MMP-9的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)且无周期性。(4)在AM、AWEMS、OEMS三个病例组中,限定相同生理期、相同组织部位比较腺上皮细胞与间质细胞Survivin、MMP-9的表达:腺上皮细胞显著高于间质细胞的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)EMS三个病例组之间,限定相同生理期、相同组织部位、相同细胞类型,组间分别比较Survivin或MMP-9的表达水平:Survivin表达差异无统计学意义(P>0.05),异位内膜仅分泌期MMP-9在AWEMS腺上皮细胞的表达(4.45±0.18)和AM腺上皮细胞的表达(4.68±0.17)高于OEMS异位内膜腺上皮细胞的表达(2.13±0.12),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Survivin和MMP-9在EMS在位内膜和异位内膜腺上皮细胞和间质细胞中高表达可能是内异症发生发展的重要因素并有协同作用,在位内膜异常是EMS发病的决定性因素,腺上皮细胞高表达在EMS的发生发展中起主导作用,AM、AWEMS、OEMS三个病例组中的生物学特性不同可能受发病诱因、腹腔内环境及多种相关因子影响。

植物雌激素两种单体对子宫内膜腺上皮细胞作用的比较

目的 探讨植物雌激素两种单体在浓度 5～ 80 μmol/L对人子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。 方法 2 0 0 3年 8～ 12月应用胶原酶阶梯消化法 ,原代培养人子宫内膜腺上皮细胞 ,用MTT方法观察植物雌激素的主要成分金雀黄素和大豆甙元对细胞体外增殖的影响。结果 低浓度的大豆甙元能促进子宫内膜腺上皮细胞轻度生长 ,随浓度的增加其作用明显 ,但当浓度达到 4 0 μmol/L ,抑制细胞生长 ;不同浓度的金雀黄素均抑制子宫内膜腺上皮细胞的增殖。结论 植物雌激素两种单体对人子宫内膜腺上皮细胞的作用是明显不同的 ,提示在应用植物雌激素时要考虑不同成分的差别。

人表皮干细胞体外诱导分化为汗腺样上皮细胞的研究

目的探讨体外人表皮干细胞向汗腺样上皮分化的影响条件,并对诱导成的管腔样结构进行鉴定。方法将人表皮干细胞接种到复方壳多糖真皮基质上和胶原凝胶中,加入不同浓度的表皮生长因子(EGF),体外垂直震荡培养,进行三维培养和定向诱导分化,采用HE染色、免疫荧光等手段观察表皮干细胞定向分化为汗腺样上皮的条件及形态、表型改变。结果 15~20ng/mL的EGF可诱导组织工程真皮上的表皮干细胞向真皮内生长并可出现腺样结构。HE染色该结构,显示为单层细胞连接为环状,中间见明显的腔隙,细胞质嗜酸性。利用CK19荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察到细胞团中央有管腔结构,同时此结构表达CK18、癌胚抗原(CEA)。结论体外培养的人表皮干细胞接种在组织工程真皮上,在一定浓度的EGF诱导条件下,能形成管腔样结构,该管腔样结构在形态学、组织学上与在体汗腺分泌部细胞相似。

Wnt-1重组腺病毒对人表皮干细胞分化的影响

目的了解Wnt-1重组腺病毒对人表皮干细胞（ESC）分化趋势的影响。方法将Wnt-1重组腺病毒导入人ESC（实验组）后，检测细胞直径及增殖情况、ESC多种分子标记物的表达、培养上清液中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-7的含量。以正常ESC为对照组。结果对照组、实验组ESC直径接近（P〉0．05）。对照组ESC为（1．18±0．10）×10^5个／mL，实验组为（1．45±0．09）×10^5个／mL，后者明显高于前者（P〈0．05）。2组ESC分子标记物角蛋白5（K5）、K6、K7、K8、K14、CD44、癌胚抗原、雌激素受体、孕激素受体的表达量组间比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）；对照组K10表达量为0，实验组为（60±3）％；对照组K18为（13．8±1．7）％，实验组表达明显增强[（34．3±2．1）％，P〈0．05]；对照组K19为（24．4±1．5）％，实验组减弱至（17．1±1．8）％（P〈0．05）。实验组ESC培养上清液中MMP-2和MMP-7含量均明显高于对照组（P〈0．01）。结论Wnt-1重组腺病毒具有诱使人ESC向腺样上皮细胞分化的趋势。

子宫腺肌病发病机制中Survivin的表达及其作用

目的检测Survivin在子宫腺肌病组织中的表达情况,探讨Survivin与子宫腺肌病发病的关系。方法选择2009年2月—2013年1月收治的子宫腺肌病病灶标本50例作为研究对象(观察组),同期选择正常子宫内膜标本50例作为正常对照(对照组),2组都进行Survivin表达检测,然后进行表达得分与阳性率对比。结果 Survivin在观察组及对照组中均有表达,主要表达在内膜腺上皮细胞的胞质中,其得分分别为(1.52±0.23)vs(0.45±0.22)。经过对比,观察组的survivin表达得分显著高于对照组(t=23.772,P<0.01);观察组的Survivin表达阳性率(60.0%)明显高于对照组(14.0%),2组的差异均有统计学意义(χ2=22.694,P<0.01)。随访6个月,观察组患者的复发率(20.0%)明显高于对照组患者,2组的差异有统计学意义(χ2=19.852,P<0.05)。结论 Survivin在子宫腺肌病组织中异常表达对子宫腺肌病的发生起重要作用,其过度表达可能是导致子宫腺肌病的原因之一。