葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的差异表达

为探讨葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的生物学意义,利用蛋白质免疫印迹、免疫荧光及RNA印迹技术,检测了发育不同时期小鼠脑组织中GRP78、GRP94的表达及分布情况.结果显示:小鼠脑发育过程中GRP78、GRP94的表达在时间和空间上呈现出显著差异,在脑发育的早中期GRP78表达水平高于GRP94,随发育的进程GRP78不断下降而GRP94逐渐升高,至胚胎发育晚期GRP94表达水平高于GRP78.在E16.5的不同脑区,GRP78的表达呈现出从端脑到后脑逐渐递减的“浓度梯度”分布,而GRP94在不同脑区中表达相同.小鼠出生后,二者作为应激蛋白在脑组织中的表达没有明显的差异性.免疫荧光结果显示,GRP78和GRP94在大脑组织中的分布基本相同,神经细胞和神经胶质细胞的细胞质均有分布.这些观察得到的结果提示,GRP78和GRP94与神经细胞分化和脑的形态建成有关,它们分别在脑发育的不同时期起作用.

RNAI沉默Grp94基因对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响

目的探讨RNAI沉默Grp94基因表达对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响和可能机制。方法设计、合成靶向Grp94基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染食管癌ECA109细胞,采用Real-time PCR和Western blot法分别检测转染后的细胞内Grp94、基质金属蛋白酶MMP2及MMP9的表达,采用Transwell实验检测沉默Grp94基因对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果Si Grp94组中Grp94mRNA和蛋白水平显著下调(P<0.01),MMP2、MMP9表达明显下调(P<0.05);Si Grp94组细胞迁移及侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默Grp94基因可明显抑制ECA109细胞的迁移及侵袭能力,Grp94可能通过影响MMP2、MMP9参与其中。

GRP78、GRP94蛋白和mRNA在人胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨GRP78及GRP94蛋白和mRNA在人胃癌组织中的表达及临床意义。方法收集胃癌手术标本183例,制成组织芯片,用免疫组化法检测GRP78和GRP94的蛋白表达;取30例胃癌新鲜组织用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测GRP78、GRP94 mRNA相对表达。结果免疫组化法检测结果显示:GRP78、GRP94蛋白的阳性表达率分别为80.1%和73.8%,与癌旁正常胃黏膜比较差异有统计学意义(P<0.05);与肿瘤的大小、浸润、转移、分期有关(P<0.05);与性别、年龄和组织分化无关。半定量RT-PCR结果显示癌组织和癌旁组织中的GRP78、GRP94mRNA均有表达,胃癌组织的表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。结论 GRP78、GRP94蛋白在人胃癌中呈高表达并与胃癌的转移和侵袭有关,可作为判断胃癌恶性程度的有用指标。GRP78、GRP94 mRNA的高表达可能与胃癌组织中的转录调控相关。

沉默GRP94基因对乳腺癌MCF7细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究沉默葡萄糖调节蛋白GRP94(Glucose regulated protein,GRP94)对乳腺癌MCF7细胞增殖、凋亡的影响及潜在机制。方法:设计并化学合成靶向沉默GRP94基因的小干扰RNA,通过脂质体转染入MCF7细胞中,采用qRTPCR和Western blot分别检测GRP94、cyclin D1、Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平;通过流式细胞术检测细胞凋亡比例变化,Hoechst 33258染色检测凋亡细胞核变化、CCK8实验检测细胞增殖能力的变化。结果:GRP94 siRNA组GRP94基因的表达水平被有效抑制;与对照组相比,GRP94-siRNA转染组的细胞凋亡比例明显增加;凋亡细胞核形态发生变化;增殖能力明显下降;mRNA及蛋白水平cyclin D1、Bcl-2表达明显下调,Bax表达增加。结论:沉默GRP94基因可明显抑制乳腺癌MCF7细胞增殖能力,促进细胞凋亡的发生,且其可能通过下调cyclin D1、Bcl-2和上调Bax表达参与其中。

幽门螺杆菌感染者胃黏膜中内质网分子伴侣Grp94的表达

目的:探讨幽门螺杆菌感染对胃黏膜组织中内质网分子伴侣Grp94mRNA及蛋白水平表达的影响及意义.方法:应用半定量RT-PCR方法及Westernblot方法检测感染与未感染幽门螺杆菌的胃黏膜组织中Grp94mRNA及蛋白的表达情况.结果:未感染组28例,Grp94mRNA表达量为0.424±0.055,感染组32例,Grp94mRNA表达量为0.882±0.082.两组相比感染组Grp94mRNA的表达量明显高于未感染组(P<0.01);未感染组Grp94蛋白表达量为0.427±0.036,感染组Grp94蛋白表达量为0.671±0.072,两组相比感染组Grp94蛋白表达量明显高于未感染组(P<0.01).结论:幽门螺杆菌感染可使胃黏膜增加Grp94mRNA的表达及蛋白的合成,这可能有利于胃黏膜的自身保护作用.

胆囊良恶性病变组织中GRP78和GRP94蛋白表达及临床病理意义

目的研究胆囊腺癌、癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和94(GRP94)蛋白表达水平及其临床病理意义。方法应用EnVisionTM免疫组化法检测108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、15例腺瘤性息肉和35例慢性胆囊炎组织中GRP78和GRP94蛋白的表达;分析两者表达与胆囊腺癌临床病理特征的相关性及患者生存期的关系。结果胆囊腺癌中GRP78和GRP94蛋白表达明显高于癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎(P<0.01);GRP78和/或GRP94蛋白阳性表达的良性病变胆囊上皮呈不同程度非典型增生。高分化腺癌、淋巴结未转移及未侵犯周围组织器官病例GRP78和GRP94蛋白表达明显低于低分化腺癌、淋巴结转移及侵犯周围组织器官病例(P<0.05或P<0.01)。Kaplan-Meier单因素生存分析显示GRP78(P=0.009)或GRP94(P=0.022)蛋白阳性表达与生存期减少密切相关,Cox回归多因素因素分析显示GRP78(P=0.014)或GRP94(P=0.020)蛋白阳性表达是胆囊腺癌预后不良的独立评估指标。结论 GRP78和GRP94蛋白表达水平可能是反映胆囊腺癌发生发展、临床生物学行为及预后的重要标记物,检测胆囊腺癌中GRP78和GRP94蛋白表达水平可能对指导临床辅助治疗有重要临床价值。此外,检测胆囊良性病变组织中GRP78和GRP94蛋白表达水平对早期发现胆囊腺癌可能有较重要的临床意义。

人乳腺癌中葡萄糖调节蛋白94(Grp94/Gp96)的表达及意义

目的 探讨人乳腺浸润性导管癌中葡萄糖调节蛋白 94 (glucose -regulatedprotein ,GRP94 )的表达与乳腺癌生长、浸润及转移的关系。方法 采用DakoEnvision免疫组织化学染色法对 30例乳腺癌中的GRP94进行免疫组化染色。结果 乳腺浸润性导管癌 30例 ,其中有淋巴结癌转移的 15例 ,GRP94阳性 1例 ,弱阳性 5例 ,阴性 9例 ;无淋巴结癌转移的 15例 ,GRP94阳性 10例 ,弱阳性 2例 ,阴性 3例 ;有淋巴结癌转移组GRP94表达低 ,无淋巴结癌转移组GRP94表达高 ;(P <0 0 5 ) ,两组之间存在显著差异。结论 在乳腺浸润性导管癌中GPR94的表达与转移有关 ,低表达者往往有转移。

宫颈癌组织中MHC-Ⅰ类抗原呈递相关蛋白CNX HSP90 GRP94的表达及意义

目的:探讨宫颈炎和宫颈癌组织中CNX、HSP90、GRP94蛋白和HPV16感染在维吾尔族和汉族妇女中的表达及相关关系。方法:采用免疫组化SP法和PCR技术检测宫颈炎组织66例(汉族39例,维吾尔族27例)以及宫颈癌组织92例(汉族30例,维吾尔族62例)中CNX、HSP90、GRP94蛋白的表达和HPV16的感染情况。结果:CNX蛋白在维、汉宫颈癌组织中的阳性率低于维、汉宫颈炎组织中阳性率表达(67.39%,86.36%)(P<0.05)。并且,CNX蛋白的阳性率在宫颈炎组织中维吾尔族高于汉族(100%,76.92%)(P<0.05)。HSP90和GRP94蛋白在维、汉宫颈癌组织中的阳性率表达高于维、汉宫颈炎组织(77.17%,56.06%;77.17%,60.60%)(P<0.05)。宫颈癌组织中HSP90蛋白阳性率表达维吾尔族低于汉族(74.19%,83.33%)(P<0.05)。HPV16感染在宫颈炎及宫颈癌中的阳性率均为维吾尔族高于汉族(P<0.05)。通过相关性研究发现,在维吾尔族妇女宫颈癌组织中HSP90与GRP94呈正相关性(r=0.249,P<0.05)。HSP90蛋白的阳性表达率与HPV16型感染在宫颈癌组织中呈显著正相关(r=0.361,P<0.05)。结论:通过对CNX、HSP90、GRP94蛋白和HPV16联合检测能提高宫颈癌的检出率。

老年非小细胞肺癌患者GRP94及GRP78蛋白表达及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)中细胞应激因子GRP94及GRP78蛋白表达及其与临床分期及生存期的关系。方法选取该院接受外科手术切除治疗的64例NSCLC患者,应用电话随访的方式了解患者的术后情况和生存期;使用免疫组化技术检测研究对象的病理切片标本中GRP78和GRP94的表达水平。结果 GRP94与GRP78蛋白在NSCLC肿瘤细胞中明显高表达状态;GRP94、GRP78蛋白的表达与NSCLC病理类型有关,与分化程度、肿瘤T分期、肿瘤N分期、WHO临床分期具有不同程度的联系,也与肿瘤的大小、浸润、转移有关;与性别和年龄无关。GRP94及GRP78蛋白的高表达与NSCLC患者生存期及生存率呈明显负相关,其蛋白表达水平越高,患者的生存期越短,生存率越低。结论 GRP78和GRP94是NSCLC发生、发展中的重要因子,可作为肿瘤分期和预测预后的一项指标。

GRP94表达在肺癌细胞对VP-16化疗耐药中的作用

[目的]检测在Ca2＋拮抗剂A23187诱导下,人肺腺癌细胞SPCA1中GRP94的表达水平,并分析其表达在肺癌细胞对VP-16耐药中的作用。[方法]采用RT-PCR、免疫荧光细胞化学方法检测不同浓度A23187处理组细胞的GRP94核酸及蛋白表达,用MTT法测定细胞在VP-16作用下的生存率。[结果]A23187可明显诱导SPCA1细胞GRP94核酸和蛋白表达,且表达水平随A23187呈浓度依赖性增加。MTT法测定结果显示：诱导组细胞（A23187浓度为0.5~6μmol/L）对VP-16的IC50值明显高于对照组,而且IC50值的升高亦对A23187呈一定的浓度依赖性,当A23187浓度为6μmol/L时IC50值最大。[结论]GRP94的表达与肺腺癌细胞SPCA1对VP-16的耐药性有关,有针对性地抑制GRP94基因表达或功能可能成为肺癌治疗的新方法。

GRP94表达在大细胞肺癌NCI-H460细胞对顺铂耐药中的作用

[目的]检测在诱导剂A23187与抑制剂BAPTA-AM作用下,大细胞肺癌细胞NCI-H460中GRP94的表达水平,并分析其表达在肺癌细胞对顺铂耐药发生中的作用。[方法]将NCI-H460细胞分为诱导剂A23187组、抑制剂BAPTA-AM组和对照组,RT-PCR、Western blot方法检测各组癌细胞的GRP94核酸和蛋白表达,MTT法测定顺铂作用下癌细胞的生存率,分析GRP94表达在NCI-H460细胞对顺铂耐药产生中的作用。[结果]与对照组相比,GRP94的核酸和蛋白表达在A23187组均明显升高,而在BAPTA-AM组均明显降低。MTT法测定结果显示:A23187组、对照组、BAPTA-AM组对顺铂的IC50值分别为3.34±0.12、4.82±0.29与8.12±0.21(P<0.05)。[结论]GRP94表达可提高NCI-H460细胞对顺铂的敏感性。

内质网分子伴侣GRP94在瘢痕疙瘩中的表达

目的:观察内质网分子伴侣GRP94在瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中的表达,探讨GRP94在瘢痕疙瘩发生中的作用。方法:用免疫组织化学法和免疫印迹法分别检测12例瘢痕疙瘩与12例正常皮肤组织中GRP94的表达。结果:①GRP94在瘢痕疙瘩和正常皮肤组织的角质形成细胞、成纤维细胞、炎症细胞、血管内皮细胞以及毛囊、汗腺、皮脂腺等细胞质及少数细胞的核中表达。②表皮中GRP94的表达量在两种组织无显著性差异(P>0.05);真皮中GRP94阳性成纤维细胞数在瘢痕疙瘩组明显高于(1283.33±565.10/mm2)正常皮肤组(238.33±255.62/mm2),(P<0.05)。免疫印迹法实验结果进一步证实了GRP94的含量在瘢痕疙瘩组(0.50±0.07)高于正常皮肤组(0.15±0.03),(P<0.05)。结论:GRP94在瘢痕疙瘩成纤维细胞中高表达,提示内质网应激与瘢痕疙瘩的过度增殖有关。

GRP94在人增生性瘢痕组织中的表达及曲安奈德对其影响

目的观察GRP94在人增生性瘢痕组织中的表达及曲安奈德对其影响,探讨GRP94在增生性瘢痕形成中的作用。方法以10例正常皮肤组织作为对照,采用免疫组化法和免疫印迹法检测10例增生性瘢痕组织中GRP94蛋白的表达;建立人增生性瘢痕移植于裸鼠的模型,以注射生理盐水作为对照,采用免疫组化法检测曲安奈德对GRP94表达的影响。结果①GRP94主要在增生性瘢痕和正常皮肤组织的角质形成细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞和炎症细胞的胞浆表达,在少数细胞的胞核中也有表达;在正常皮肤的毛囊、汗腺、皮脂腺中表达。②GRP94在增生性瘢痕和正常皮肤组织中的表达:在表皮中,两者比较其差异无统计学意义(P>0.05);在真皮中,增生性瘢痕组的GRP94阳性成纤维细胞数(731.67±148.31/mm2)高于正常皮肤组(202.00±188.43/mm2),两者比较,其差异有统计学意义(P<0.05)。免疫印迹结果进一步证实,增生性瘢痕组的GRP94含量(0.43±0.25)高于正常皮肤组(0.14±0.03),两者比较,其差异有统计学意义(P<0.05)。③注射曲安奈德后,增生性瘢痕组织的GRP94阳性成纤维细胞数(平均值为247.50±81.82/mm2)显著减少,与对照组(平均值为485.00±88.18/mm2)比较,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论①成纤维细胞中GRP94的表达增高可能是增生性瘢痕发病机制之一;②抑制成纤维细胞GRP94的表达可能是激素治疗瘢痕增生的作用机制之一。

沉默GRP94抑制宫颈癌细胞的侵袭和迁移

目的:探究GRP94在不同宫颈癌细胞株中的表达情况,及GRP94对细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用Western blot和qRT-PCR检测不同类型的宫颈癌细胞株中GRP94的表达水平。选择高表达GRP94的细胞株,应用RNA干扰技术下调GRP94的表达,采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞侵袭和迁移能力的改变。结果:与正常的宫颈细胞相比,GRP94在不同的宫颈癌细胞株(C33A、CaSki、HeLa、HeLa229、MS751、ME-180、SiHa和HCC 94)中表达均升高,且GRP94在CaSki和MS751中表达量高,在ME-180、SiHa和HCC 94中表达量中等,在C33A、HeLa和HeLa 229中表达量低。选用GRP94高表达的CaSki细胞,下调GRP94的表达后,划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示细胞的侵袭和迁移能力显著下降。结论:GRP94在宫颈癌细胞中高表达,沉默GRP94的表达能抑制宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力。

高血压大鼠血管平滑肌细胞GRP94和CHOP的表达及替米沙坦的影响

观察替米沙坦对高血压大鼠动脉血管平滑肌细胞内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达,以及血管中层厚度的变化的影响。将48只成年雄性SD大鼠随机等分为假手术对照组(对照组)、手术模型组和替米沙坦组。对照组分离腹主动脉,但不行狭窄术;模型组行腹主动脉狭窄术(TAC);替米沙坦组行腹主动脉狭窄术并给予每天替米沙坦1.5 mg/kg。喂养6周用颈动脉插管法测定各组大鼠的动脉压(MAP);利用图像分析软件测量血管中层的厚度。用免疫组织化学法和western-blot法检测GRP94和CHOP的表达水平。结果:①手术模型组大鼠的MAP显著高于相应的对照组和替米沙坦组,有统计学意义(P<0.05)。②手术模型组的GRP94表达量高于对照组和替米沙坦组,有统计学意义(P<0.05)。③手术模型组的CHOP蛋白表达量高于对照组和替米沙坦组,有统计学意义(P<0.05)。④手术模型组大鼠血管平滑肌中层厚度厚于对照组和替米沙坦组,有统计学意义(P<0.05)。说明腹主动脉狭窄致高血压可引起血管平滑肌细胞内质网应激反应,导致GRP94表达及CHOP表达的增加。替米沙坦可能通过减轻内质网应激,逆转高血压所致的血管平滑肌细胞的损伤作用,对血管平滑肌细胞有保护作用。

益气除痰方对肺癌移植鼠内质网分子伴侣蛋白GRP94表达的影响

目的观察益气除痰方对脾虚Lewis肺癌移植鼠内质网分子伴侣蛋白GRP94表达的影响,探讨其抗癌的可能作用机制。方法采用苦寒泻下加饥饱失常方式建立脾虚小鼠模型,再将无血清培养基制备的癌细胞悬液接种至脾虚C57BL/6小鼠背侧,制作脾虚Lewis肺癌小鼠模型。将48只成模小鼠随机分为模型组、化疗组、联合用药组及益气除痰方低、中、高剂量组,每组8只。各给药组给予相应药物干预。给药14 d后处死小鼠,检测肿瘤体积和质量;HE染色观察各组移植瘤组织形态,免疫组化、Western blot和RT-PCR检测肿瘤组织GRP94蛋白和基因表达。结果与模型组比较,化疗组、联合用药组及益气除痰方中、高剂量组肿瘤体积、肿瘤质量明显降低(P<0.05,P<0.01),肿瘤细胞大量坏死,GRP94蛋白表达明显降低(P<0.01);与化疗组比较,联合用药组GRP94蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论益气除痰方联合化疗可有效治疗Lewis肺癌小鼠,其机制可能与其下调内质网分子伴侣蛋白GRP94表达、逆转肿瘤细胞自身保护机制相关。

GRP78、GRP94在乳腺癌中的表达及其意义

目的:在对乳腺癌的临床研究中,探讨GRP78和GRP94表达水平所提示的临床意义。方法:将符合临床研究标准的患者的病理样本统一采用免疫组化法检测其GRP78、GRP94的表达,将检测结果数值用SPASS统计软件中卡方、spearman法和方差分析进行统计分析。结果:1乳腺癌组织中GRP78阳性表达高于癌旁组织,具有统计学意义(P<0.01);GRP94表达也具有统计学意义。2在乳腺癌癌组织中,肿瘤大小≤2cm组与>2cm组GRP78表达无统计学意义(P>0.05);GRP94同样。3在肿瘤的高、中、低分化组比较GRP78表达具有统计学意义(P<0.05);GRP94同样。4在淋巴结转移的分析中,有淋巴结转移组较无淋巴结转移组GRP78的阳性表达明显增高,且具有统计学意义(P<0.01);GRP94表达同样。5在临床分期的比较中,临床分期越靠后GRP78的含量越高,具有统计学差异性(P<0.01);GRP94表达也同样6GRP78、GRP94在乳腺癌肿的表达存在正相关。结论:1GRP78、GRP94在乳腺癌组织中呈高表达。2.GRP78、GRP94可能与乳腺癌的发生、发展及预后有关。

人癌细胞内质网分子伴侣Grp94基因近3′端的初步分析

采用PCR及RT－PCR方法结合核酸分子杂交技术，首次确定了与Grp94cDNA2231～2500碱基片段对应的Grp94基因序列上有内含子．含有内含子的扩增片段长约708bP．对三种癌细胞系进行了PCR和RT－PCR反应，电泳结果显示存在差异．研究结果为进一步探讨Grp94基因3'端精细结构及其在正常细胞和肿瘤细胞中表达的改变打下了基础．

GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表达及意义

目的:探讨不同临床分期的乳腺癌组织中GRP94及Caspase-9的表达情况及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测符合研究规定标准的50例乳腺癌患者的病理及其癌旁正常组织中的GRP94及Caspase-9的表达。结果:GRP94及Caspase-9在乳腺癌组织中、不同分化程度中、不同临床分期中、有无淋巴结转移中阳性表达率的比较,差异有统计学意义(P<0.05)。GRP94及Caspase-9在不同病理类型、不同肿瘤大小中的阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1在乳腺癌组织中:GRP94高表达,Caspase-9低表达。2二者表达情况可能与乳腺癌发生及进展密切相关。