肝癌H-22细胞膜抗原肽提取物对小鼠免疫功能的影响及其抑瘤作用

目的 应用小鼠肝癌H 2 2细胞膜相关抗原肽 (TAP)提取物免疫小鼠 ,观察其对小鼠自身移植肿瘤生长及免疫学参数的影响 ,为制备肿瘤疫苗提供实验依据。方法 采用微酸洗脱法制备分子量≤ 30 0 0Da的细胞膜TAP提取物 ,皮下免疫小鼠 ,检测胸腺细胞增殖反应、T细胞亚组百分数的变化 ,脾细胞ConA反应性、IL 2和IFN γ活性、CTL杀伤活性的变化及抑瘤效应。结果 TAP提取物免疫后 ,移植肿瘤的发生率降低 (P <0 .0 1) ,平均出现时间延迟 (P <0 .0 0 1) ,生长速度减慢 ;同时 ,脾细胞ConA反应性 (P <0 .0 1)、IFN γ(P <0 .0 5 )和IL 2分泌活性和CTL杀伤活性 (P <0 .0 5 )不同程度增强 ;胸腺细胞3 H TdR自发掺入率 (P <0 .0 5 )及CD4 + 和CD8+ T细胞百分数 (P <0 .0 5 )也有不同程度增高。结论 小鼠肝癌H 2 2细胞膜TAP提取物具有免疫原性 ,能有效激发免疫系统功能 ,抑制自身移植肿瘤的生长。

CIK细胞与LAK细胞对H-22腹水瘤的抑瘤作用

目的 观察CIK细胞及LAK细胞对H 2 2荷瘤鼠的抗肿瘤作用。方法 建立H - 2 2荷瘤鼠肿瘤动物模型 ,静脉输入CIK细胞 3周做抗肿瘤治疗 ,同时设LAK对照 ;用同位素法检测经治疗后荷瘤鼠T细胞增殖及NK细胞毒活性。结果 CIK细胞对H 2 2荷瘤鼠的抗肿瘤作用显著强于LAK细胞 (抑瘤率分别是 5 4%vs2 7% ) ;并且CIK疗法的抗肿瘤作用可能与荷瘤鼠T细胞增殖活性增高有关。结论 CIK细胞对H 2

雷公藤甲素脂质体透皮制剂对H-22实体瘤的影响

目的观察雷公藤甲素脂质体透皮制剂对H-22肝瘤细胞实体瘤的作用及其对机体的毒副作用。方法采用脂质体包裹雷公藤甲素并制成凝胶透皮制剂;建立H-22荷瘤模型,观察几种雷公藤甲素制剂对H-22肝瘤细胞实体瘤的作用及其对机体几种组织器官的病理作用。结果几种雷公藤甲素制剂均具有促进H-22瘤体增长的作用;雷公藤甲素脂质体透皮制剂具有较高的全身生物活性,但与大剂量的口服给药相比,器官及生殖毒性大为降低。结论不能盲目的将雷公藤甲素制剂用于肿瘤的治疗;雷公藤甲素开发成脂质体透皮制剂具有良好应用前景。

血卟啉在H-22肝癌荷瘤小鼠体内的分布

目的探讨声敏剂血卟啉衍生物在肿瘤组织中的富集情况，以便在给药后超声结合血卟啉治疗肿瘤时选择最佳的超声处理时间。方法H-22肝癌荷瘤小鼠尾静脉注射HpD后，不同时间点取材，采用荧光分光光度法测定不同组织提取液中HpD的荧光强度，研究HpD在不同组织中的分布以及代谢变化。结果给药后2h肿瘤组织以外的其他各组织内（血浆、肝、肾、皮肤、肌肉）血卟啉含量均达到其代谢过程的最高点，后逐渐下降；肿瘤组织中的HpD含量注射后不断上升，6h时达到顶峰，随后又开始下降，10～24h代谢比较缓慢，表现为肿瘤组织中对HpD的滞留作用，24h时肿瘤组织中的HpD含量高于其他各组织，48～72h趋于稳定在较低水平。结论提出了不同部位的肿瘤应选择各自适当的时间点进行超声处理。

超声激活血卟啉诱导H-22细胞凋亡的分子机制

目的从分子水平上探讨超声激活血卟啉诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法接种H-22腹水瘤细胞于10只昆明系小白鼠腹腔1周后,随机取5只小鼠,抽取腹水细胞,分为对照组(CT)、血卟啉组(H)、超声组(U)和超声加血卟啉组(UH),H组和UH组加入血卟啉,每管4μl,使其终浓度为0.01mg/ml,U组和UH组分别置频率为1.8MHz、强度为2W/cm2的超声装置中声照处理1min,各实验组分别于声照后即时、1h、3h、5h取材,进行细胞涂片。以SP法进行免疫组织化学染色,检测细胞FAS/FASL的表达变化。采用χ2检验进行统计学处理。结果各组FAS的表达在处理3h后开始下降,FASL的表达在处理后1～3h均提高,表达变化有统计学意义(p<0.05)。处理5h后,FAS、FASL的表达水平开始下降。结论FAS/FASL系统参与了超声激活血卟啉引发的肿瘤细胞的凋亡诱导。

含金属硫蛋白蛋奶粉对H-22小鼠肝癌的预防作用

目的:观察含金属硫蛋白(MT)蛋奶粉对BALB/c小鼠H-22肝癌的预防作用。方法:雌性BALB/c纯系小鼠70只随机分为正常对照组(10只)、荷瘤鼠对照组(20只)、含MT蛋奶粉预防肿瘤低剂量及高剂量组(各20只)。将MT低和高剂量蛋奶粉给小鼠灌胃2周后,皮下接种H-22细胞,建立小鼠移植肿瘤模型,观察MT蛋奶粉对肿瘤出现时间及肿瘤大小和生长的影响;观察1个月后处死小鼠,MTT法检测脾脏淋巴细胞转化功能,流式细胞术检测脾脏CD4+、CD8+和CD25+T细胞百分率以及细胞周期进程和凋亡的变化,3H-TdR掺入法检测CTL和NK细胞杀伤活性。结果:与荷瘤对照组相比,含MT蛋奶粉组小鼠其肿瘤生长速率显著降低(P<0.05),淋巴细胞增殖率显著增加(P<0.01),脾脏CD4+和CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值显著升高(P<0.05或P<0.01),CD25+T细胞百分率和淋巴细胞凋亡百分率均显著降低(P<0.05或P<0.01),NK细胞毒性显著提高(P<0.05或P<0.01),CTL细胞毒性亦显著增高(P<0.01)。结论:含MT蛋奶粉可明显增强荷瘤小鼠的免疫功能,对小鼠移植性肿瘤的生长起到一定程度的抑制作用。

低剂量X射线照射对小鼠肝癌H-22细胞膜相关抗原肽提取物抑瘤作用的影响

目的:观察低剂量X射线照射对小鼠肝癌H22细胞膜相关抗原肽(TAP)提取物抑瘤作用的影响,为低剂量辐射与肿瘤疫苗联合治疗肿瘤提供实验依据。方法:采用微酸洗脱法制备分子量≤3000的细胞膜TAP提取物,皮下免疫小鼠,免疫前12h给予75mGyX射线全身照射,检测胸腺细胞周期时相、脾细胞ConA反应性及脾T细胞CD4、CD8亚组的变化,同时观察体内抑瘤效应。结果:TAP提取物免疫小鼠后,移植肿瘤的发生率降低,平均出现时间延迟,生长速度减慢;脾细胞ConA反应性增强,胸腺细胞周期百分数无显著变化。小鼠免疫前12h给予75mGy全身照射可增强TAP提取物的抑瘤效应,与单纯TAP组相比,胸腺细胞S期百分数明显增加,脾细胞CD8+T细胞百分数增高。结论:低剂量辐射能进一步激发免疫系统功能,增强小鼠肝癌H22细胞膜TAP提取物的抑制肿瘤作用。

CIK细胞对S180及H-22抑瘤作用的实验比较

目的观察CIK(cytokine induced killer)细胞对S180和H-22荷瘤鼠的抑制肿瘤作用。方法建立S180和H-22荷瘤鼠动物模型,静脉输入CIK细胞做抗肿瘤治疗,同时设LAK对照,用同位素法检测经治疗后荷瘤鼠T细胞增殖及NK细胞毒活性。结果 CIK细胞对S180和H-22荷瘤鼠的抗肿瘤作用显著强于LAK细胞。结论 CIK细胞对S180和H-22荷瘤鼠有明显的抗肿瘤作用,并且优于LAK细胞。

原卟啉Ⅸ-声动力学方法对H-22肿瘤细胞损伤机制的研究

研究了频率为1.43 MHz、强度为1 W/cm2的聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对H-22肿瘤细胞的损伤作用,并探讨其生物学机制.应用台盼蓝拒染法检测不同处理后肿瘤细胞的存活率,环境扫描电镜和透射电镜观察细胞表面和内部的超微结构变化,荧光标记技术检测肿瘤细胞内活性氧的产生,硫代巴比妥酸(TBA)法检测肿瘤细胞脂质过氧化水平的变化.发现原卟啉Ⅸ-声动力学方法对H-22细胞产生的损伤效应表现为:细胞存活率明显下降,细胞表面和内部的超微结构改变,胞内活性氧和脂质过氧化水平增高.结果表明:原卟啉Ⅸ-声动力学方法能够使肿瘤细胞产生活性氧自由基,造成膜脂质过氧化,直接或间接地破坏细胞的膜系统,从而杀伤肿瘤细胞.

超声结合二氢卟吩e6对小鼠H-22肝癌肿瘤的氧化损伤效应

实验在研究聚焦超声结合二氢卟吩e6抑制小鼠肝癌H-22移植瘤增殖的基础上,通过酶化学方法检测不同处理后小鼠肝癌H-22移植瘤组织内超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性的变化,利用硫代巴比妥酸法检测丙二醛活力变化.结果显示,超声结合二氢卟吩e6能有效抑制H-22肿瘤组织的生长,同时其处理后肿瘤组织内MDA的含量显著升高,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活性均有不同程度的下降,提示超声激活二氢卟吩e6诱导的氧化损伤可能在抑制肿瘤组织生长过程中起主要作用.

奥曲肽对H-22细胞株小鼠皮下移植模型的抑制作用

目的 评价奥曲肽对H-22细胞株小鼠皮下移植肿瘤模型的抑制作用，探讨奥曲肽抑制肿瘤的可能机制。方法 本实验共入选20只昆明小鼠，随机分为：A组(实验组)及B组(对照组)。每组包括10只小鼠。H-22细胞株(2×10^6)皮下注射于小鼠左前腋窝。注射后A组每只小鼠接受奥曲肽(100μg／kg／day×14days)腹腔注射。B组的小鼠接受相同剂量的生理盐水腹腔注射。每天测量小鼠皮下肿瘤的大小。皮下移植14d后所有小鼠均断颈处死，切除皮下肿瘤应用免疫组化染色检测VEGF,PCNA，bcl-2的表达及微血管密度(MVD)。应用TdT酶介导的dUTP缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)及ANNEXIN-V标记的流式细胞计检测细胞凋亡。结果移植后7d及14d，A组皮下肿瘤的平均大小明显小于B组(0．13±0．02)cm^3 VS．(0．21±0．04)cm^3，P＜0．05；(0．36±0．11)cm^3 VS．(0．72±0．11)cm^3，P＜0．01。B组VEGF及PCNA的表达模型高于A组(Ridit检验，P＜0．05)。B组bcl-2的表达亦高于A组，但无统计学显著性差异(Ridit检验，P＞0．05)。B组MVD亦高于A组，但无统计学显著性差异(23．30±1．81) VS．(30．6±3．41)，P=0．075。流式细胞计及TUNEL均可检测到A组细胞凋亡水平较B组显著性升高(P＜0．05)。结论 奥曲肽对H-22细胞株小鼠皮下移植肿瘤模型具有抑制作用。除了抑制细胞增殖之外，抑制肿瘤血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡可能亦是抑制肿瘤的机制之一。

益气活血软坚解毒方对肝癌H-22细胞增殖的影响

目的:探讨益气活血软坚解毒方(YHRJ)抑制肝癌H-22细胞生长、增殖的作用及对调控细胞周期、抑制细胞增殖过程的相关蛋白、基因表达的影响。方法:建立肝癌H-22细胞移植瘤小鼠模型,分为阴性对照(NS)组,奥沙利铂(OXA)组,等效剂量YHRJ组,高剂量YHRJ组,等效剂量YHRJ+OXA组,高剂量YHRJ+OXA组,通过测量肿瘤大小,计算肿瘤抑制率;HE染色观察细胞坏死形态变化;免疫组化法观察并检测细胞增殖核抗原(PCNA)的蛋白表达;RT-PCR法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、转录因子NF-KB、细胞周期蛋白Cyclin D1的mRNA的表达。结果:①高效剂量YHRJ可显著抑制肝癌H-22细胞移植瘤的生长(P<0.05);高剂量YHRJ+OXA组对肝癌H-22细胞移植瘤生长的抑制作用较OXA单药组有统计学差异(P<0.01),两联合组的抑瘤率均达到35%以上。②HE染色后,各给药组肿瘤细胞均发生坏死,坏死程度从高到低依次为:等效剂量YHRJ+OXA组、高剂量YHRJ+OXA组、OXA组、高剂量YHRJ组、等效剂量YHRJ组。③高剂量YHRJ组可下调PCNA的表达(P<0.05),两联合组中PCNA的表达较OXA组均有显著性下降(P<0.05)。④YHRJ可下调肝癌细胞中PCNA、NF-KB及Cyclin D1三种mRNA的表达(P<0.05)。结论:YHRJ可以抑制H-22肝癌细胞移植瘤的生长,促进H-22肝癌细胞发生坏死;YHRJ能降低肿瘤组织中PCNA的蛋白表达,下调肝癌组织细胞中PCNA、NF-KB、Cyclin D1的mRNA的表达。

聚焦超声激活血卟啉对H-22肿瘤细胞的杀伤作用

目的研究声动力学疗法(SDT)杀伤肿瘤细胞的最佳声照处理时间点,探讨不同强度的聚焦超声激活血卟啉对H-22肝癌腹水瘤细胞的杀伤作用。方法采用荧光分光光度法测定血卟啉衍生物(HpD)在H-22肿瘤细胞内的富集时间,选择最佳声照处理时间点。采用频率为1.43 MHz,强度分别为1W/cm^2、2 W/cm^2和3 W/cm^2的聚焦超声结合血卟啉作用于H-22肿瘤细胞,于不同时间段取材,通过扫描电镜观察细胞表面的超微结构变化,并与单纯血卟啉或单纯超声处理后的细胞进行比较。结果加入HpD后45 min,肿瘤细胞内药物含量最高,作为最佳声照处理时间点。形态学观察显示:单纯血卟啉处理对H-22肿瘤细胞仅有轻微影响;单纯超声处理对细胞有一定的损伤作用,并且细胞受损程度随着超声强度的增大和取材时间的延迟而逐渐加重;超声结合血卟啉对细胞的协同杀伤效应在同等条件下显著高于单纯超声处理的细胞。结论SDT对H-22肿瘤细胞的损伤效应依赖于超声强度以及声敏剂在细胞内的含量,并且表现出一定的时间相关性变化。

H-MCM-22和H-MCM-36分子筛对苯与异丙醇烷基化反应的催化性能

由同一前驱体合成了H-MCM-22和H-MCM-36分子筛.采用X射线衍射、N2吸附、程序升温脱附和红外光谱等方法,结合不同的表面后处理手段,研究了分子筛的结构和表面酸性.结果表明,H-MCM-22的B酸中心主要分布在内表面,H-MCM-36的B酸中心主要分布在外表面.H-MCM-36的总B酸量小于H-MCM-22,但其外表面B酸量相对较大.在苯与异丙醇的烷基化反应中,两个分子筛都表现出较为优异的催化性能.与H-MCM-22相比,H-MCM-36具有更高的反应活性和稳定性,对主产物异丙苯具有更好的选择性.结合各种表征结果表明,两个分子筛的外表面B酸中心是苯与异丙醇烷基化反应的主要活性中心.

维生素E促进小鼠H-22移植瘤的作用及机制

[目的]利用H-22荷瘤小鼠研究维生素E(vitamin E,VE)对肿瘤发生发展的作用及机制。[方法]建立H-22小鼠荷瘤模型,计算肿瘤指数与肝脏指数,利用试剂盒检测血糖、血清低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、总胆固醇(total cholesterol,TC)以及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)水平,利用苏木素-伊红染色与Real-time PCR检测VE对肿瘤发展和转移的作用及分子机制。[结果]肿瘤-VE组LDL水平、肿瘤组和肿瘤-VE组TC、AKP水平显著高于对照组(LDL,P <0.05;TC,P <0.01;AKP,P <0.001)。肿瘤组织中肿瘤-VE组小鼠p27K ip1、Stat3以及Cxcl12基因表达水平显著高于肿瘤组(p27Kip1和Stat3,P <0.05,Cxcl12,P <0.01)。肝脏组织中肿瘤-VE组Jak2、Pigf及Cxcl12基因表达水平显著高于肿瘤组(P <0.05),且肿瘤组Jak2、Pigf及Cxcl12基因表达水平显著高于对照组(P <0.05)。[结论] VE处理的H-22荷瘤小鼠肿瘤组织中p27Kip1、Stat3及Cxcl12表达水平显著升高,肝脏组织中Jak2、Pigf及Cxcl12表达水平显著升高,VE可能通过调控细胞周期、肿瘤转移及炎症相关基因的表达促进小鼠H-22肿瘤的发展。

H-MCM-22沸石分子筛中Brnsted/Lewis酸协同效应的~1H和^(27)Al双量子魔角旋转固体核磁共振研究

采用各种固体核磁共振 (NMR) 技术详细研究了 H-MCM-22 分子筛中 Brnsted/Lewis 酸的协同效应. 二维 1H 双量子魔角旋转 (DQ-MAS) NMR 结果表明, 在脱铝 H-MCM-22 分子筛中 Brnsted 酸位 (骨架桥式羟基) 和 Lewis 酸位 (非骨架铝羟基) 之间是空间邻近的, 暗示着可能存在 B/L 酸协同效应. 二维 27Al DQ-MAS NMR 结果揭示了各种铝物种之间的空间邻近性, 表明 B/L 酸协同效应优先发生在 H-MCM-22 分子筛超笼中的骨架 T6 位铝和非骨架铝物种之间. 2-13C-丙酮探针分子实验发现, 因 B/L 酸协同效应而导致脱铝 H-MCM-22 分子筛酸性明显增强, 氘代吡啶探针分子实验也证实在 H-MCM-22 分子筛的超笼中发生了 B/L 酸协同效应. 上述结果将有助于我们理解在脱铝 H-MCM-22 分子筛上发生的多相催化机理.

2,2,4-三甲基戊烷在H-MCM-22和H-MCM-36上的吸脱附性能研究

在固体酸催化异丁烷与丁烯的烷基化反应中,烷基化产物(2,2,4-三甲基戊烷)及时从催化剂表面脱附有利于催化反应特性和催化剂寿命的改善。用智能重量分析仪(IGA)研究了2,2,4-三甲基戊烷在H-MCM-22和H-MCM-36上的吸附/脱附等温线及动力学,以分析孔道结构对2,2,4-三甲基戊烷吸附脱特性的影响。结果表明,2,2,4-三甲基戊烷在H-MCM-22和H-MCM-36上的平衡吸附量均随平衡压力增大而增大,总体上随温度升高而降低。等温平衡吸附线可用Langmuir-Freundlich模型进行描述。H-MCM-36比H-MCM-22具有更强的酸性中心和更大的平衡吸附量。H-MCM-36的孔道中介孔比例高达55.4%,介孔结构有利于减小粒内扩散阻力,使2,2,4-三甲基戊烷脱附比H-MCM-22更彻底。吸脱附动力学研究结果表明,在303K时,2,2,4-三甲基戊烷在H-MCM-22上的吸附主要由粒内扩散控制,当温度升至323K和343K时,吸附过程受表面吸附速率控制。在测定的三个温度条件下,2,2,4-三甲基戊烷在H-MCM-22上的脱附均受粒内扩散控制,而2,2,4-三甲基戊烷在H-MCM-36上的吸脱附行为均受表面吸附速率控制。研究结果表明,采用具有介孔结构的MCM-36为基体进行C4烷基化反应催化剂的制备,可有效改善产物2,2,4-三甲基戊烷在催化剂颗粒内的扩散特性和脱附特性,将有利于改善反应的选择性及催化剂寿命。

高强度聚焦超声制备小鼠(H_(22))肝癌固化瘤苗免疫性的实验研究

目的 对比研究经高强度聚焦超声 (HIFU)及经 6 5℃高温水浴 1小时处理后制成的固化瘤苗的细胞免疫效应。方法 将小鼠H2 2 肝癌细胞分别用HIFU及 6 5℃高温水浴 1小时处理 ,制成固化瘤苗 ,并将两种方法制得的瘤苗同时接种于不同的小鼠 ,以抵抗同源H2 2 癌细胞 1.0× 10 7/ml攻击 ,比较其抑瘤率和 6周内生命延长率。结果 经HI FU处理制成的瘤苗其抑瘤率和 6周内生命延长率均显著高于经高温水浴法制得者 (P <0 .0 0 5 )。结论 HIFU瘤苗组具有明显优于高温瘤苗组的细胞免疫效应 。