能量可控陡脉冲联合H-ras干扰性RNA治疗卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的 利用陡脉冲电场的可逆性电穿孔电转基因,观察陡脉冲治疗仪联合基因治疗对肿瘤生长的影响。方 法 构建抗H- ras基因表达的小发夹状RNA重组质粒载体(pshRNA H- ras);建立卵巢癌荷瘤裸鼠模型,光、电镜观察陡脉 冲对肿瘤组织的病理学改变,荧光报告质粒观察陡脉冲电场的可逆性电穿孔;实验分为4组:对照组、陡脉冲治疗组、陡脉 冲加基因单次干扰治疗组和加基因重复干扰治疗组,记录治疗后21d各荷瘤鼠肿瘤的体积和体质量。结果 陡脉冲对肿 瘤组织有明显的破坏作用,肿瘤边缘残存有活性的癌细胞;各治疗组肿瘤体积与体质量明显低于对照组,差异具有极显著 性(P<0.01),其中,陡脉冲加基因重复干扰治疗组肿瘤体积和重量显著低于仅用陡脉冲治疗组(P<0.01)。结论 陡脉 冲是一种新型有效的治癌工具,联合基因治疗能更有效地抑制肿瘤生长。

长期雌激素替代治疗对大鼠子宫内膜bcl-2和H-ras基因与蛋白表达的影响

目的:探讨长期雌激素替代治疗对子宫内膜bcl 2和H ras基因和蛋白表达的影响。方法:将30只5 月龄雌性SD大鼠随机分成3组:对照组(假手术+注射溶剂,n=10)、去势组(双侧卵巢切除术+注射溶剂,n= 10)和雌激素替代组(双侧卵巢切除术+注射雌二醇,n=10)。第13周处死动物,取其子宫称重,HE染色进行病 理分析,测量子宫内膜厚度。用原位杂交和免疫组织化学的方法检测子宫内膜bcl 2mRNA,H rasmRNA及Bcl和 H ras蛋白的表达。结果:去势组子宫湿重、内膜厚度均低于假手术组(P<0.01)和雌激素替代组(P<0.01)。替 代组出现1例单纯性增生和1例鳞状细胞化生。替代组bcl 2和H rasmRNA和Bcl和H ras蛋白表达量明显高于 去势组(P<0.01),与假手术组差异无统计学意义。结论:长期雌激素替代治疗能抑制子宫内膜萎缩,且会出现单 纯性增生或鳞状细胞化生,具有潜在增加子宫内膜癌的发病风险。雌激素可通过增加bcl 2和H rasmRNA及Bcl 和H ras蛋白的表达,抑制子宫内膜细胞的凋亡,促进细胞增殖。

RNAi沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达对细胞增殖能力的影响

目的:构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的H-ras癌基因的短发夹状RNA重组质粒,研究它对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达的抑制作用以及H-ras基因与卵巢癌发生和耐药的关系。方法:运用基因克隆技术构建靶向于H-ras基因的重组质粒pshRNA/H-ras并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM,通过W est-ern blot、RT-PCR检测H-ras蛋白的表达及mRNA转录水平的变化;MTT法检测它对SK-OV3/ADM细胞增殖的抑制作用,AO/EB实验检测pshRNA/H-ras对SKOV3/ADM细胞凋亡的影响。结果:构建的两重组质粒pshRNA/H-ras1、2均能明显抑制H-ras基因的表达。蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pshRNA/H-ras1、2的SKOV3/ADM细胞靶蛋白的抑制率分别为86.87%和92.21%,RT-PCR检测到H-ras基因mRNA转录水平下降;pshR-NA/H-ras1、2明显抑制SKOV3/ADM细胞的增殖,MTT检测转染48h后的抑制率分别为62.4%和47.9%,AO/EB实验观测到转染24h和48h的细胞凋亡率分别为20.3%和35.6%。结论:H-ras基因在耐药的卵巢癌细胞增殖与凋亡过程中发挥作用,重组质粒pshRNA/H-ras可有效地抑制SKOV3/ADM细胞内源H-ras基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增殖和促进凋亡的发生,为化疗耐受的肿瘤细胞提供了新的基因治疗手段。

妊娠早期小鼠子宫内膜原癌基因H-ras的表达

目的 :本实验检测原癌基因 H-ras的转录和翻译水平在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达规律。方法 :采用反转录聚合酶链反应 ( RT-PCR)、免疫转移印迹 ( Western-blot)和免疫斑点印迹 ( Dot-blot)法。结果 :原癌基因 H-ras在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达呈现两个峰值 ,分别为妊娠的第 1和第 6、7天。结论 :提示原癌基因

nm23-H_1和H-ras基因在大肠癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的:探讨nm23-H_1和H-ras基因对大肠癌淋巴结转移的预测价值。方法:采用原位分子杂交法检测57例大肠癌组织中nm23-H_1、H-ras的表达状况。结果:nm23-H_1的阳性表达率为42.1％(24/57),H-ras阳性表达率为61.4％(35/57),与组织学分类无相关性;Dukes A+B组的nm23-H_1表达率显著高于C+D组(P<0.05),而H-ras则相反。结论:nm23H_1和H-ras基因的表达率与大肠癌淋巴结转移率分别呈正负相关(P<0.005),可用于淋巴结转移状况的预测,nm23-H_1的灵敏度为82.8％(24/29),H-ras的灵敏度为79.3％(23/29),联合检测则可相对提高预测的灵敏度(87.5％)。

H-ras和pERK1/2蛋白在舌鳞癌中的表达及相互关系

目的:研究H-ras和pERK1/2蛋白在舌鳞癌组织中的表达及其相互关系。方法:采用免疫组化方法检测58例原发性舌鳞癌及20例正常癌旁组织中H-ras和pERK1/2蛋白的表达水平。结果:H-ras和pERK1/2蛋白表达在舌鳞癌阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05)。H-ras蛋白过表达与淋巴结转移有关(P<0.05),pERK1/2蛋白过表达与病理组织学分级有相关性(P<0.05)。结论:Ras/MAPK信号转导途径中H-ras和pERK1/2蛋白的过表达与舌鳞癌的恶性程度有密切关系。

喉粘膜上皮异型增生p53、H-ras过度表达与预后的关系

目的：探讨喉粘膜上皮异型增生p53、H－ras过度表达与预后的关系。方法：应用免疫组化ABC法对63例喉粘膜上皮异型增生（经随访其中40例恶变为癌）、56例喉鳞癌和7例喉正常组织进行检测。结果：p53蛋白阳忖率在喉粘膜卜皮异型增生恶变组为50．0％，未恶变组为17.4％，喉癌组为51.8％，正常组织无表达。恶变组与未恶变组间，未恶变组与喉癌组间的p53蛋白表达差异有统计学意义（分别为P＜0．05和p＜0.01）。H－ras蛋白阳性率在喉正常组织、异型增生恶变组、未恶变组、喉癌组依次为0％、52．5％、522％和73．2％。恶变组和未恶变组间H－ras表达差异无统计学意义。结论：p53蛋白的过度表达与喉粘膜上皮异型增生的预后有密切关系。H－ras的表达与喉粘膜上皮异型增生的预后无关。

沉默H-ras基因对人涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:构建H-ras靶向短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒,研究其对人涎腺腺样囊性癌裸鼠成瘤的抑制作用及其对移植瘤细胞增殖活性及细胞凋亡率的影响。方法:构建含H-ras靶向特定序列的真核表达质粒pHRAS,稳定表达pHRAS质粒的细胞为实验组,未处理的SACC-M细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型,计算成瘤率;移植瘤原代培养检测质粒表达及瘤细胞增殖活性;免疫组织化学法检测瘤内H-ras蛋白表达;采用组织学观察、流式细胞术及TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况。结果:pHRAS质粒转染组成瘤率及肿瘤体积显著低于对照组,原代培养可见大量瘤细胞表达绿色荧光。实验组瘤内H-ras蛋白表达量明显减少,实验组肿瘤细胞凋亡率为(41.55±4.25)%,明显高于对照组的(4.73±1.35)%(P<0.05)。结论:shRNA沉默H-ras基因能抑制SACC-M细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,在体内有效下调H-ras蛋白的表达,且对肿瘤细胞具有促凋亡作用。

二十二碳六烯酸(DHA)复合物对胃腺癌细胞内H-Ras和p16 mRNA含量的影响

目的研究DHA复合物抗肿瘤作用机理。方法用RT-PCR法研究DHA复合物对胃腺癌细胞内H-Ras和p16mRNA含量的影响。结果与阴性对照组相比,DHA复合物使胃腺癌细胞内H-RasmRNA含量明显降低(P<0.05),p16mRNA含量明显增加(P<0.05).结论DHA复合物能显著降低H-Ras癌基因的转录,并能显著增加p16押癌基因的转录,从而抑制肿瘤细胞的增殖。

人乳头状瘤病毒和p53基因及H-ras基因在喉癌细胞中的表达

目的 :研究喉癌细胞 p5 3基因、H - ras基因突变及其与人乳头状瘤病毒 (HPV)感染的关系 ,探讨其在喉癌发生发展中可能起的作用。方法 :采用分子生物学技术 ,包括聚合酶链反应、单链构型多态性分析、限制性内切酶长度多态性分析 ,及 DNA序列分析等方法 ,对 2 8例喉癌进行人乳头状瘤病毒、p5 3基因及 H - ras基因检测。结果 :2 8例喉癌中有 5 0 %在 p5 3基因的第 7～ 8外显子有突变 ,其中 4例行 DNA序列分析表明均有碱基替换、插入或丢失 ;而 H- ras基因第 12密码子的突变率仅 3.5 7% ;高危型 HPV(HPV- 16或 - 18)感染在喉癌细胞中有一定的特异性 ,且与 p5 3基因突变有一定的相关性。结论 :在喉癌的发生发展过程中高危型 HPV感染和 p5 3基因突变起着重要的作用 ,且两者之间可能存在某种内在的联系。

维甲酸对胃癌裸鼠移植瘤中p53、H-ras和C-myc基因表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸（ATRA）对胃癌裸鼠移植瘤中p53、H-ras和C-myc表达的影响。方法:采用免疫组化ABC法测定p53、H-ras、C-myc基因蛋白产物在胃癌裸鼠移植瘤中的表达水平。结果:MKN28和SGC7901胃癌裸鼠移植瘤经ATRA治疗后,突变型p53、C-myc基因表达水平降低,H-ras基因表达水平提高,但MKN45胃癌移植瘤细胞中p53、H-ras、C-myc基因表达与ATRA治疗无关。结论:ATRA抑制胃癌细胞增殖及诱导胃癌细胞分化的分子机制之一可能是通过调控P53、H-ras、C-myc的表达实现的。

应用PCR-SSCP银染检测膀胱癌中H-ras基因突变

目的 :了解膀胱癌中H ras基因突变情况。方法 :应用PCR SSCP银染和DNA测序技术对 31例膀胱癌组织进行检测。结果 :H ras基因突变发生率为 38 7% ,突变位点在H ras基因的第 1外显子的第 12位密码子 ,由GGC变为GTC。结论 :H ras基因突变与膀胱癌的发生发展存在着一定的联系 ,H ras基因突变可望作为膀胱癌早期临床诊断有价值的指标。

癌基因C-erbB-2和H-ras在骨巨细胞瘤中的表达

目的 探讨 C- erb B- 2和 H- ras癌基因在骨巨细胞瘤 (GCT)的表达及与 GCT有关临床指标的关系。方法 应用 SP免疫组织化学方法检测 C- erb B- 2和 H- ras在 5 2例 GCT(GCT按 Jaffe分级 : 级 15例、 级 2 5例、 级 12例 )中的表达。结果 11例 C- erb B- 2表达阳性 ,阳性率 2 1.2 % ,7例 H- ras表达呈阳性 ,阳性率 13.5 %。其阳性表达与病理分级均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 C- erb B- 2和 H- ras在复发和无复发的病例中 ,阳性表达率分别为 38.5 %、15 .4%和 2 3.1%、10 .3% ,两者同时阳性表达的有 2例。C- erb B- 2和 H- ras的阳性表达与 GCT复发无显著性差异。结论 C- erb B- 2和 H- ras在

胃癌PCNA、CyclinD_(1)、H-ras表达与临床意义

目的 :探讨 PCNA、Cyclin D1 、H- ras在胃癌中的表达规律与临床意义。方法 :运用 SP免疫组织化学技术对 6 8例胃癌标本进行检测。结果 :胃癌 PCNA L I平均为 6 1.88± 16 .0 0 ,显著高于正常粘膜 ,良性溃疡和癌旁粘膜。 Cyclin D1 在胃癌中的阳性率为 80 .88% ,Cyclin D1 高表达与淋巴结转移呈正相关 ;H- ras在胃癌阳性表达率为73.5 3% ,与 Cyclin D1 表达相似 ,H- ras过表达与淋巴结转移呈正相关 ;H- ras与 Cyclin D1 之间显示出正相关 ,P值<0 .0 0 1;PCNA与预后关系密切 (P<0 .0 0 1) ,PCNA L I越高 ,术后生存时间越短 ,预后越差。结论 :(1) PCNA是反映细胞增殖状态的良好指标 ,PCNA L I对估计胃癌恶性程度 ,判断预后及指导临床治疗有重要价值 ;(2 ) H- ras,CyclinD1 过表达是胃癌发生的早期变化 。

大鼠结肠癌模型H-ras和KISS-1表达与其病理分期及复发转移的关系

目的探讨H-ras、KISS-1表达与大鼠结肠癌病理分期及复发转移的关系。方法选取60只SD大鼠均颈背部皮下注射二甲肼,每周注射1次,连续注射5周,构建结肠癌大鼠模型,并给予奥沙利铂15 mg/kg,腹腔注射,每周2次,连续给药8周。免疫组织化学法检测大鼠结肠癌组织H-ras、KISS-1蛋白表达;Western blot法和RealTime PCR检测结肠癌组织H-ras、KISS-1蛋白含量和mRNA含量的表达;并分析H-ras、KISS-1表达与大鼠结肠癌病理分期及复发转移的相关性。结果与治疗前相比,大鼠结肠癌组织内H-ras平均光密度、H-ras蛋白表达及H-ras mRNA含量显著降低;KISS-1平均光密度、KISS-1蛋白表达及KISS-1 mRNA含量显著升高(P<0.05)。H-ras和KISS-1阳性表达和结肠癌的淋巴结转移、浸润深度、分化程度、有无远处转移、Dukes分期和TNM分期具有明显的相关性(P<0.05)。结论大鼠结肠癌组织中H-ras和KISS-1异常表达与肿瘤转移转移密切相关,可作为预测结肠癌分期和淋巴结转移的分子生物学靶点。

口腔癌中H-ras癌基因第12位密码子的G→T突变

癌基因是目前肿瘤研究中的活跃领域,口腔癌癌基因的研究正在引起人们的兴趣和重视。1989年,国外学者曾在两个口腔癌细胞株中发现H-ras癌基因的点突变,有关口腔癌实体瘤中H-ras癌基因的点突变研究,国内外尚未见报道。本研究采用分子生物学新技术——聚合酶链反应(PCR),先在体外放大口腔癌DNA中H-ras的亚基因片段,H-ras第12位密码子顺序位于该放大片段内。

急性髓系白血病H-ras表达和点突变─流式细胞术和聚合酶链反应比较研究

目的：了解急性髓系白血病细胞H－rasP21表达与点突变的相关性，以及免疫组化法的临床实用价值。方法：用流式细胞术（FCM）分析67例初治急性髓系白血病（AML）H－rasp21表达；对所有P21阳性和部分P21阴性者作聚合酶链反应（PCR），观察H－ras15位密码子点突变。结果：67例AMLFCMP21阳性者45例（67．2％），P21阴性者22例（32．8％）。P21阳性45例中高表达者22例（48．9％），16例（72．7％）检出H－ras15位密码子点突变，11例（50％）完全缓解（CR）。10例P21阴性和23例P21＋低表达均无H－ras15位密码子点突变，CR率分别为77．2％和87．2％。结论：FCMP21高表达者常有H－ras15位密码子点突变，CR低，H－ras点突变与免疫组化P21＋高表达相关良好，提示AML转归不良。

H-ras原癌基因在乳腺癌转移中的作用研究

目的 研究H ras基因在乳腺癌转移中的作用及作为预测乳腺癌转移潜能指标的价值。方法 采用免疫组织化学LSAB法观察 76例乳腺癌、34例淋巴结转移灶和 8例乳腺纤维腺瘤组织中 p2 1蛋白、PCNA、CD44、ⅧRAg的表达情况 ;采用PCR RFLP法检测 42例乳腺癌、6例乳腺纤维腺瘤H ras 12位密码子点突变状态。结果 76例乳腺癌 p2 1蛋白阳性 5 8例 ,有淋巴结转移组阳性率明显高于无转移组 ,2组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。p2 1蛋白与CD 44、PCNA表达均呈正相关 (γ =0 .6 337,P <0 .0 1;γ =0 .30 44,P <0 .0 5 )。p2 1蛋白阳性组肿瘤间质血管密度 (IMVD )明显高于阴性组 ,2组比较有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 p2 1蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移密切相关 ;与CD 44、IMVD联合检测可作为预测乳腺癌转移潜能敏感且准确的指标。