HCCR接地材料在光伏发电项目应用的可行性

随着太阳能产业的飞速发展,光伏发电项目的接地问题日益受到重视。文章介绍了我国接地系统的现状及存在的问题,对HCCR接地材料与传统接地材料在热稳定性、耐腐蚀性及接地效果等方面进行了对比,并提出了HCCR技术作为改善方案的可行性。该研究不仅为光伏发电项目接地系统设计提供了新的思路,更对保障光伏电站稳定运行有重要的指导意义。

4-苄基哌啶类拮抗剂选择性识别hCCR3的分子模拟

以牛视网膜紫质X射线衍射晶体结构为模板,参考定位突变实验数据,采用配体支持同源模建(Ligand-supported homology modeling)方法构建了拮抗剂键合(Antagonist-bound)的人类趋化因子受体hCCR3和hCCR1的三维结构模型.将一系列1,4-二取代哌啶类拮抗剂分别对接进优化后的hCCR3和hCCR1模型中,以配体在hCCR3中的结合自由能理论值对-lgIC50值进行线性回归,确定性系数r2为0.94.分析对接结果发现,配体主要通过疏水芳香作用与hCCR3结合,而4-苄基哌啶类拮抗剂对hCCR3产生选择性的主要原因在于配体的哌啶环与hCCR3中Tyr255(TM7)的苯酚侧链产生面对面的范德华作用,而且hCCR3中处于结合口袋的EL2区的疏水性也为拮抗剂对hCCR3的选择性做出了贡献.

人HCCR蛋白表达载体的构建、表达及其蛋白纯化

目的:构建人HCCR蛋白表达载体,并探讨其体外表达及表达产物的纯化。方法:培养人肝癌细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR合成插入片段,连接至载体pMBP-C,转化到大肠杆菌Top10F′中,进行诱导表达。表达产物通过Ni-NTA螯合层析进行纯化。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,Westernblot和电喷雾电离串联飞行时间质谱(ESI-TOFMS)鉴定表达产物。结果:构建的表达载体经限制性内切酶酶切分析和DNA测序,证明所构建的质粒含有HCCR基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳发现该重组质粒经IPTG诱导后表达一种新的蛋白,这种蛋白不存在于诱导后的空载体表达产物中,表达产物经Westernblot和蛋白质谱鉴定含有HCCR蛋白的部分肽段。结论:成功构建了HCCR蛋白表达载体并进行体外表达及纯化。

siRNA干扰人宫颈癌基因(HCCR)的表达对胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:建立稳定转染人宫颈癌癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)siRNA真核表达质粒的人胰腺癌PANC1细胞株,探讨siRNA干扰HCCR的表达后对人胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:通过脂质体转染法将含HCCRsiRNA的真核表达质粒pGCsi-HCCR稳定转染至人胰腺癌细胞株PANC1,抗生素G418筛选获得稳转细胞株;Western blot检测PANC1细胞中HCCR的表达,同时检测肿瘤相关基因p53蛋白表达的变化;流式细胞仪检测PANC1细胞的细胞周期和凋亡率变化;MTT比色法检测siRNA干扰后对PANC1细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验观察siRNA干扰后对PANC1细胞侵袭能力的影响。结果:Western blot证实siRNA稳转组的PANC1细胞株和空载体稳转组比较HCCR蛋白表达水平下调,稳转细胞株建立成功。siRNA稳转组p53蛋白表达下降。siRNA稳转组的S期细胞数目减少而G0/G1期细胞数目增加,细胞凋亡增加。MTT结果显示siRNA稳转组1和稳转组2细胞吸光度分别为空载体组细胞的0.65倍和0.68倍,细胞增殖能力下降。Transwell侵袭实验显示siRNA稳转组细胞和空载体组细胞穿膜数分别为24.4±9.9和49.1±15.4(P<0.01),稳转组细胞侵袭能力下降。结论:siRNA干扰HCCR的表达后能抑制胰腺癌PANC1细胞增殖和侵袭,促进其凋亡。

HCCR-2干扰真核表达载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

目的构建HCCR-2干扰真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系。方法人工合成HCCR-2基因干扰序列并定向插入到RNAi真核表达载体pGenesil-1,通过测序鉴定。将干扰质粒用脂质体法转染HepG2细胞,经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。RT-PCR检测筛选克隆HCCR-2 mRNA的表达水平。结果测序表明HCCR-2干扰序列及读框完全正确,干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光。RT-PCR结果显示RNAi-H1、RNAi-H3序列对HCCR-2 mRNA有较好的抑制效果。结论成功构建了HCCR-2干扰真核表达载体,HCCR-2干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系的建立为进一步研究HCCR-2在肝癌细胞中的作用奠定了基础。

HCCR1和HCCR2可溶性蛋白在细菌中表达、纯化及在早期肝癌诊断中的应用(英文)

目的评估HCCR1和HCRR2克隆、细菌表达及可溶性蛋白的纯化及应用于早期肝癌诊断的可行性。方法cDNA克隆、表达、蛋白质的纯化、Westernblot分析用于评估HCCR1和HCCR2蛋白的生产,Elisa方法用检测血清抗原。结果HCCR1和HCCR2能够高水平地在细菌中表达,纯化的可溶性蛋白能用于生产抗体并应用于肝癌的早期诊断。结论HCCR1和HCCR2蛋白质可以在细菌中生产,并能成功地用于肝癌的早期诊断。

人子宫颈癌基因HCCR-2反义真核表达载体的构建及鉴定

目的克隆人子宫癌基因HCCR-2并构建其反义真核表达载体。方法从人肝癌细胞株HepG2提取RNA,利用RT-PCR方法,克隆出一包括HCCR-2编码区的长约1kb的片段,并将其与T载体连接,测序证实无误后,用SalⅠ、SacⅡ双酶切重组T载体,然后将该片段反向插入真核表达载体pIRES2-EGFP的多克隆位点,最后对重组真核表达载体进行双酶切鉴定。结果RT-PCR扩增出一长约1kb的HCCR-2片段,琼脂糖凝胶电泳显示目的片段成功反向连接到pIRES2-EGFP载体上。结论成功克隆了HCCR-2基因并构建了其反义真核表达载体pIRES2-EGFP/HCCR-2(-)。

HCCR-2反义真核表达载体对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响

目的构建HCCR-2反义真核表达载体,研究其对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响。方法通过MTT实验、流式细胞技术、平皿克隆形成实验、Millicell迁移实验分别检测HepG2肝癌细胞经HCCR-2反义真核表达载体转染前后细胞生长速度、单个细胞形成克隆能力、迁移能力的变化。结果MTT实验表明反义转染组细胞HepG2-H增殖能力明显低于HepG2组和HepG2-P组;流式细胞生长周期实验表明,与HepG2和HepG2-P细胞相比,HepG2-H组细胞增殖指数下降,细胞阻滞于G0/G1期,HepG2-H组单个细胞形成克隆的能力与HepG2组和HepG2-P组相比显著降低;Millicell迁移实验表明,HepG2-H细胞较HepG2和HepG2-P细胞迁移明显减少。结论HCCR-2反义真核表达载体可以明显抑制HepG2肝癌细胞增殖速度、单个细胞形成克隆能力、体外迁移能力。

反义HCCR-2转染对肝癌细胞HepG2形态的影响

目的研究HCCR-2反义基因转染对肝癌HepG2细胞株形态学的影响。方法用脂质体法将HCCR-2反义真核表达载体导入HepG2细胞,从光镜、HE染色、荧光显微镜、电镜水平观察转染前后细胞形态学的改变。结果与亲本细胞相比,光镜及HE染色下转染HCCR-2反义基因的HepG2细胞变得狭长,胞体增大,胞浆丰富,分裂相减少,核浆比下降,异型性减少;荧光显微镜下反义基因转染细胞发出绿色荧光,透射电镜下反义基因转染细胞出现凋亡。结论 HCCR-2反义基因可以促进HepG2细胞的分化。

人子宫颈癌基因HCCR-2真核表达载体的构建及鉴定

目的:克隆人子宫癌基因HCCR-2并构建其真核表达载体,为研究其在人胃癌细胞中与P53的相互作用关系奠定基础.方法:从人肝癌细胞株HepG2提取RNA,利用RT-PCR方法,先克隆出一包括HCCR-2编码区的长约1kb的片段,并将其与T载体连接并转化,测序证实无误后,以HCCR-2/T载体为模板,再通过PCR克隆出HCCR-2的编码区序列,将其连接到pIRES2-EGFP真核表达载体,并通过测序获得证实.结果:RT-PCR扩增出一长约1kb的HCCR-2片段,PCR扩增出约0.9kb大小的目的片段,HCCR-2/T,pIRES2-EGFP/HCCR-2(+)DNA测序均表明编码序列及读框完全正确.结论:成功构建HCCR-2真核表达载体pIRES2-EGFP/HCCR-2(+),为进一步研究其致癌机制打下基础.

HCCR、pERK及pELK1蛋白在胃癌组织中的表达及其相关性

目的检查胃癌组织及癌旁组织中HCCR、pERK及pELK1的表达,探讨之间的相关性。方法通过免疫组化方法检测60例胃癌及癌旁组织中HCCR、pERK及pELK1的表达情况。结果 HCCR、pERK及pELK1在胃癌组织中的阳性表达率分别为75.0%(45/60)、73.3%(44/60)及71.7%(43/60),均高于其在癌旁组织中的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HCCR、pERK及pELK1三者之间具有一定的协调表达率,在肿瘤组织中表达明显增高,可用来作为胃癌临床免疫组化的辅助指标。

HCCR-2基因的克隆及原核表达

目的：克隆HCCR-2基因、原核表达并鉴定。方法：从培养的人骨肉瘤细胞SOSP-9607中提取总RNA，经RT—PCR获得HCCR-2基因。将该基因克隆到pGEM—T—Easy克隆载体中，测序、鉴定。将测序正确的HCCR-2基因亚克隆到pET-28a（＋）表达载体中，构建HCCR-2表达载体，IPTG诱导表达1～5h，做SDS—PAGE分析，鉴定HCCR-2蛋白的表达。结果：DNA测序证明，获得了HCCR-2基因，其序列与GenBank中报道序列完全一致。SDS—PAGE分析表明，HCCR-2蛋白获得高效表达，其相对分子质量为39kDa，表达量约占菌体总蛋白的25％。结论：HCCR-2基因的克隆和表达均获得了成功，为进一步探讨HCCR基因在骨肉瘤诊治中应用奠定了基础。

抗HCCR单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗人宫颈癌癌基因(HCCR)单克隆抗体(mAb),并进行鉴定。方法以HCCR重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,常规筛选杂交瘤细胞。腹水诱导法制备抗人HCCR单克隆抗体,并经蛋白A亲合层析进行纯化。用Western blot和免疫荧光等方法检测HCCR mAb的特异性。用纯化HCCR蛋白进行包被,建立间接ELISA方法,检测系列稀释的HCCR mAb,确定其灵敏度。结果筛选出2株分泌抗人HCCR mAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果表明抗人HCCR抗体能与HCCR蛋白特异性结合,免疫荧光结果显示肝癌HepG2细胞中胞浆和胞膜均呈阳性染色。间接ELISA方法检测HCCR mAb的灵敏度可达到1μg/L。结论成功制备并鉴定了特异性抗人HCCR mAb的杂交瘤细胞株,为进一步深入研究HCCR的生物学特征和临床应用打下基础。

结肠癌中HCCR和Survivin的表达及临床意义

目的探讨HCCR与Survivin在结肠癌组织中的表达及临床意义。方法选取30例正常结肠组织和75例结肠癌组织,利用免疫组化法检测HCCR和Survivin蛋白的表达,通过分析二者在正常结肠组织和结肠癌组织中的表达水平及其与临床表现的关系,了解其表达及临床意义。结果 HCCR在正常组织阳性表达率为3.3%,结肠癌组织中阳性表达率为70.7%,两者比较差异有显著意义（χ~2=38.893,P〈0.05）,其阳性表达与分化程度、淋巴结转移情况、Dukes分期有关（P〈0.05）。Survivin在30例正常组织均呈阴性表达,在结肠癌组织中的阳性表达率为78.7%,两者比较差异有显著意义（χ~2=53.870,P=0.000）,其阳性表达与分化程度、淋巴结转移情况、Dukes分期有关（P〈0.05）。HCCR在癌组织中与Survivin的表达呈显著正相关（γs=0.308,P=0.007）。结论 HCCR和Survivin在结肠癌组织中表达异常,其与癌组织的发生、发展密切相关。

肝癌候选标志物HCCR单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备肝癌候选标志物HCCR蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:重组表达HCCR-1167-360蛋白用于动物免疫,用含有HCCR蛋白抗原表位YLGTRR的重组蛋白(Ep-HCCR)检测血清抗体效价及筛选阳性克隆。通过ELISA、Western blot、免疫荧光和免疫组化方法鉴定制备的HCCR抗体的性质。结果:获得1株分泌HCCR抗体杂交瘤细胞株,通过ELISA方法测定抗体的亲和力常数为5.4×106L/mol;Western blot结果显示,该抗体能特异识别肝癌HepG2细胞中HC-CR-1和HCCR-2蛋白;免疫荧光检测显示,HCCR蛋白主要分布在细胞质和细胞膜中;免疫组化检测到肝癌组织中有HCCR蛋白表达但在正常组织中没有。结论:成功制备了1株抗HCCR特异性mAb,为建立基于HCCR的肝癌检测方法奠定了基础。

结肠癌中PTEN和HCCR-1的表达及临床意义

目的探讨PTEN与HCCR1在结肠癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学sP法检测66例结肠癌组织、30例正常结肠组织中PTEN和HCCR1的表达，分析HCCR1的表达与临床病理特征的关系。结果PTEN在30例正常结肠组织中28例阳性表达．表达率为93．4％；在66例结肠癌组织中14例为阳性表达，表达率为36％。HCCRI在30正常组织中无阳性表达，表达率为O％．在66结肠癌组织中有49例阳性表达，阳性率74．2％，其阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位均无明显相关fP〉O05），与组织分化程度、有无淋巴结转移和Dukes分期相关（P〈0．05）。癌组织中PTEN与HCCR1的表迭呈负相关（F=-0．531，n=66，p=0．000）。结论结肠癌组织中HCCR-1处于过度表达状态与结肠癌的发生密切相关，PTEN作为抑癌基因在结肠癌的发生发展中发挥作用，PTEN可能通过P13K／Akt信号转导通路调节HCCR1的表达。

宫颈脱落细胞中HCCR的表达及意义

目的研究人宫颈癌基因(HCCR)在宫颈脱落细胞中的表达情况,探讨其对宫颈癌及癌前病变诊断的意义。方法采用Western blot及免疫组化SP法对79例宫颈脱落细胞中HCCR蛋白进行检测,其中正常宫颈上皮脱落细胞11例、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)53例、宫颈癌(CCa)15例。所有标本均来自中国医科大学附属第一医院。结果HCCR基因在正常宫颈脱落细胞中不表达或阳性率较低,在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中表达阳性率随病变加重而逐级升高。结论HCCR与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发生密切相关,检测宫颈脱落细胞中HCCR蛋白的水平对宫颈癌的筛查和诊断可能具有重要意义。

HCCR和HPV16/18在宫颈脱落细胞中的表达及意义

研究HCCR在宫颈脱落细胞(来自宫颈液基细胞学残液)中的表达及其与HPV16/18感染的关系,探讨其对宫颈上皮内瘤变和宫颈癌诊断的意义。选取570例宫颈上皮内瘤变和宫颈癌液基细胞学残液标本中具有相应组织学标本者31例,并随机选取10例正常标本作对照,采用免疫组化法和原位杂交法检测HCCR和HPV16/18。结果可见,HCCR在正常宫颈细胞及组织中呈现低表达,在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌细胞和组织中阳性率随着病变的升级而升高;HPV16/18 DNA的检出率随着宫颈病变的升级而升高;HCCR和HPV16/18在宫颈病变中的表达呈正相关(rs=1,P<0.005);无论是HCCR还是HPV16/18,在宫颈液基细胞学残液和相应宫颈组织中的检出率都是一致的。结论利用宫颈液基细胞学残液检测HCCR和HPV16/18对认识二者之间的关系及对宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的筛查诊断具有重要意义。

HCCR-2基因沉默后HepG2肝癌细胞形态变化

目的研究HCCR-2基因表达沉默后肝癌细胞HepG2形态学的变化.方法将经测序证实的干扰质粒用脂质体法转染HepG2细胞,经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.分别用光镜、HE染色、荧光显微镜、透射电镜观察HepG2细胞转染前后形态学的改变.结果与亲本细胞相比,HCCR-2沉默后,HepG2细胞呈梭形,核浆比例有所下降,透射电镜下可观察到细胞核收缩变圆,胞质浓缩,细胞核中染色质边集、皱缩,密度增高.结论 RNAi介导的HCCR-2基因沉默可以促进HepG2细胞形态的改变及凋亡.