基于自动化提取HCV RNA荧光定量检测系统的性能验证

目的 基于Stream SP96全自动核酸提取仪、ABI7500实时荧光定量PCR仪对丙型肝炎病毒(HCV)RNA定量检测系统的性能指标进行验证。方法 依据《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》WS/T 420-2013性能验证方案,采用Stream SP96全自动核酸提取平台及ABI7500荧光定量PCR仪检测HCV RNA,对其准确度、精密度、线性区间、检测限、定量限和抗干扰能力等进行方法学性能验证。结果 低、高浓度标准物质的均值与靶值的误差分别为0.20和0.25,均小于靶值对数值±0.4 log;低浓度样本的批内、批间不精密度变异系数值分别为0.79%、1.01%,高浓度样本的批内、批间不精密度变异系数值分别为0.52%、1.22%,均<5%;线性相关系数r>0.980,线性区间可达20~1.0×10^(8),呈良好线性(R^(2)=0.997 3);检出限为20 IU/mL,最低定量限为50 IU/mL;含胆红素(300 mg/L)、血红蛋白(300 g/L)、甘油三酯(3 000 mg/L)的干扰物质对样本检测结果无影响。结论 HCV RNA实时荧光PCR定量法检测系统准确度、精密度、线性范围、检出限、定量限、抗干扰能力均符合厂家声明,能够满足临床对HCV RNA定量检测的需求。

DA3200-ABI7500全自动核酸提取平台高敏HCV RNA定量检测性能验证

目的验证DA3200-ABI7500全自动核酸提取高敏检测HCV RNA方法性能。方法参考美国临床实验室标准化协会批准指南(CSLI-EP),采用DA3200全自动核酸提取平台及荧光定量PCR检测HCV RNA,评价检测方法的核酸提取纯度、精密度、正确度、线性范围、分析灵敏度、特异度和抗污染能力等性能指标。结果核酸提取后A260nm/A280nm比值为2.02。高、低两个浓度样本的批间精密度和批内精密度CV值均≤5%。正确度与抗干扰能力方面,标本实测值与靶值之间的偏离度≤±0.4lg。在13~1.3 E+06 IU/ml范围内,检测结果与靶值有良好的线性关系(Y=0.984X-0.186,r^2=0.998)。最低检出限为20 IU/ml的检出率为100%,且系统具有较强的特异度和抗污染能力。结论基于DA3200-ABI7500全自动核酸提取高敏检测HCV RNA各项分析性能指标均较好,高敏检测对治疗过程的监测及治疗终点判定具有重要意义。

丙型肝炎患者HCV RNA定量与基因分型的相关性

目的:探究丙型肝炎患者HCV RNA定量与基因分型的相关性。方法:收集2016年1月~2019年1月300份丙型肝炎患者HCV RNA的定量标本,采用RT-PCR和型特异性引物法对标本进行基因分型。结果:300份标本中,174份HCV1b型,占比58.00%;70份2a型,占比23.33%;8例2b型,占比2.67%;4例1b/2a混合型,占比1.33%;44例6a型,占比14.67%。通过对285例HCV单基因型患者的基因型与首次血清病毒RNA定量进行单因素方差分析,丙型肝炎患者抗-HCV水平与病毒基因型具有一定的相关性,但还需进行更多的研究对此结论进行证实。结论:丙型肝炎病毒感染主要是以1b型为主,治疗前,患者1b型病毒感染患者的HCV RNA定量明显高于丙型肝炎疾病的其他基因型。

丙型肝炎抗体阳性患者HCV RNA和肝功能指标联合检测的价值

目的:探讨丙型肝炎抗体阳性患者HCV RNA和肝功能指标结合检测的价值。方法:选择于2019年9月~2020年8月期间收治的丙型肝炎抗体阳性患者120例作为资料,均行HCV RNA检测,并同步检测肝功能指标,比较不同HCV RNA结果的肝功能指标水平及阳性率,分析相关性。结果:低中病毒组、高病毒组ALT、AST、GGT均显著高于阴性组,ALB显著低于阴性组,高病毒组ALT显著高于低中病毒组,差异有统计学意义(P<0.05);ALT、AST、GGT比较,高病毒组阳性率78.57%、71.43%、64.29%及低中病毒组阳性率53.23%、54.84%、58.06%均显著高于阴性组13.33%、10.00%、23.33%,高病毒组ALT阳性率显著高于低中病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。HCV RNA与ALT、AST、GGT水平呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HCV RNA、肝功能指标联合检测在丙型肝炎抗体阳性患者中可评估感染程度及肝脏的损害程度,实现病情监测及预后判断,应用价值较高。

高灵敏度HCV RNA检测在术前筛查中的应用

目的探讨高灵敏度HCV RNA检测在术前筛查中的应用。方法收集2019年1月至10月间本院术前筛查患者血清标本1005例,同时采用化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)和高灵敏度实时荧光定量PCR法分别检测血清中的HCV抗体和HCV RNA载量。对HCV抗体S/CO值与高灵敏度HCV RNA定量检测结果进行比较与相关性分析,并对HCV抗体S/CO值预测丙型肝炎病毒血症的效能进行评价。结果1005例血清标本中,HCV抗体阳性标本228例,阳性检出率为22.7%,未检出HCV抗体阴性而HCV RNA阳性标本;在HCV抗体阳性的样本中,高灵敏度实时荧光定量PCR法检测出HCV RNA阳性样本83例,检出率为36.4%;HCV抗体S/CO值的高低与HCV RNA定量值之间无相关性。以HCV抗体S/CO值≥10.7作为预测丙型肝炎病毒血症的临界值,其灵敏度与特异度分别为92.59%和77.93%,可较好地预测HCV病毒血症。结论高灵敏度HCV RNA定量检测用于术前筛查丙型肝炎患者,可以准确反映患者体内病毒的复制情况和传染性,与传统的术前筛查方法相比,可区分现症感染和既往感染,并具有快速、灵敏和特异的优点,有良好的临床应用价值。

HCV相关肝细胞癌组织内HCV RNA及核心蛋白水平表达研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)相关肝细胞癌组织内HCV RNA及核心蛋白表达的临床意义。方法纳入54例HCV相关肝细胞癌患者作为研究对象,检测HCV相关肝细胞癌癌组织和癌旁组织HCV RNA与HCV核心蛋白阳性率,比较癌组织与癌旁组织HCV RNA及HCV核心蛋白阳性率。比较不同分期、分化程度患者癌组织HCV RNA和HCV核心蛋白阳性率。结果癌组织与癌旁组织HCV RNA阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织与癌旁组织HCV核心蛋白阳性率比较,差异显著(P<0.05)。HCV相关肝细胞癌癌组织内HCV RNA阳性率与HCV核心蛋白阳性率分布具有良好的一致性(Kappa值=0.951,P=0.000)。不同病理分期癌组织HCV RNA阳性率差异显著(P<0.05)。不同分化程度癌组织HCV RNA阳性率差异显著(P<0.05)。不同分期患者HCV核心蛋白阳性率差异显著(P<0.05)。不同分化程度癌组织HCV核心蛋白阳性率差异显著(P<0.05)。结论HCV RNA及核心蛋白阳性率与HCV相关肝细胞癌发生相关,监测HCV RNA含量与HCV核心蛋白有助于HCV相关肝细胞癌的诊疗。

不同处理和保存条件下体外HCV RNA稳定性研究

对献血者或病人进行HCV核酸检测时，如果标本的采集、处理、保存不当，会造成病毒核酸降解，从而影响检测结果的真实性。本研究的目的是对不同抗凝剂、不同温度、不同保存时间下的HCV RNA病毒稳定性进行研究，以考察常规采供血过程中，标本采集及保存方式对NAT检测的影响。采集7例HCV RNA阳性献血者的血样，采用不同的抗凝剂、经不同的温度和不同的时间保存后，采用荧光定量PCR方法测定HCV RNA病毒含量，考察HCV RNA的稳定性。结果表明：①不同抗凝剂抗凝的全血于4℃保存48小时过程中，病毒含量下降至原滴度的42．7％；EDTA抗凝组各时间点的滴度均低于其它3组（分别相当于其它3组的67．6％-25．1％）。②ACD抗凝的全血在4、25和37℃保存48小时．病毒含量分剐下降到原滴度的53．8％、72．5％、29．8％。③ACD抗凝的全血离心分离出血浆，4℃或25℃继续保存7天，病毒含量分别下降至原滴度的70．9％和25．1％。④ACD抗凝的全血分离的血浆，反复冻融4次，病毒含量下降到原滴度的38．9％。结论：①用于核酸检测的标本应该用无菌采血管采样；②在无菌采血管采样的前提下，核酸检测标本用未抗凝血、EDTA、ACD、CPDA抗凝血均可；③采集的全血应避免放置37℃以上，ACD抗凝全血在4℃、25℃保存48小时内、37℃保存14小时内，HCV RNA病毒仍较为稳定；④分离后的血浆应避免放置25℃以上，ACD抗凝全血分离后的血浆在4℃保存7天，25℃保存3天，HCV RNA病毒仍比较稳定；⑤血浆标本应避免多次冻融，但冻融3次的血浆HCV RNA病毒含量仍然较为稳定；⑥无菌采样对维持病毒的稳定性非常重要；单纯的机械性溶血并不会明显导致病毒的降解；只要注意无菌的问题和有合适的核酸提取方法去除血红素，HCV RNA病毒实际上比以前认为的要稳定得多。

HCV RNA载量与肝脏组织损伤的关系

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)RNA复制水平与肝功能丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)之间的相互关系。方法收集1182例疑似丙肝病人血清标本,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HCV RNA,利用酶动力法测定ALT、AST,采用ELISA测定抗HCV抗体。数据采用SPSS16.0统计软件处理。结果病人血清样本中,HCV RNA阳性801例(64.8%),其中抗HCV阳性766例(95.6%);HCV RNA阴性381例(32.2%),其中抗HCV阳性100例(26.2%)。HCV RNA阳性样本中同时抗-HCV阳性者ALT,AST异常率分别为59.0%和60.8%;抗-HCV阴性者为31.4%和34.2%。HCV RNA阴性样本中同时抗-HCV阳性者ALT,AST异常率分别为24.0%和15.0%,抗-HCV阴性者为13.9%和12.1%。HCV RNA含量与ALT、AST水平明显成正相关,r=0.62,P<0.05。结论 HCV RNA含量与肝组织损伤程度成正相关。

实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床意义

目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法,初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性. 方法:HCV抗体阳性样本80例,包括慢性肝炎(CH) 39例,肝硬化(LC)23例,肝癌(HCC)18例,献血员样本40例为正常对照.在HCV基因组5’非编码区(5’UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的套式RT-PCR进行定性分析. 结果:本法检测HCV RNA含量的线性范围为1012-104copies/L,批内和批间重复性测定的v分别为1.68-5.97%和6.40-10.58%.在HCV抗体阳性患者中, 肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(7.75±0.29,7.86±0.32 vs 4.67±0.41,P<0.05), 而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.89, t=8.29,P<0.05). 结论:RFQ-RT-PCR检测HCV RNA含量具有较好的灵敏度和特异性,其含量与丙型肝炎患者的病情变化及严重程度有一定相关性.

荧光定量两探针法检测HCV RNA的研究

目的建立荧光定量两探针检测HCVRNA方法。方法对105例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本,用荧光定量两探针法和2种商品荧光定量试剂进行检测,并对检测结果进行比较。结果荧光定量两探针法阳性率分别为89.5((94/105)和2.3((5/220)。两种商品荧光定量试剂阳性率分别为71.4((75/105)和0.45((1/220);69.5((73/105)和1.8((4/220)。结论荧光定量两探针法检测HCVRNA有较高的敏感性和特异性。

检测HCV RNA的PCR试剂质控试行参考品的建立

选慢性丙型肝炎病人中HCVRNA含量不等的阳性血清作为阳性标准，采用选自HCV基因5’端非编码区的不同引物来扩增病毒基因，扩增产物与分子量标准进行比较，部分产物用酶切初步分析进行确证。选国家HCV抗体诊断试剂盒临床验证参考品中的阴性样品作为阴性标准，经反复检测显示HCVRNA为阴性。选强阳性血清经5%小牛血清稀释作为灵敏度标准，检测范围为10－5～10－7。应用该参考品对北医肝病研究所的三批HCVRNA诊断试剂盒进行检测，阳性和阴性标准均符合要求，灵敏度为10-5～10-6。

HCV RNA含量与肝脏组织病理学损伤之间的关系

目的:探讨丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA含量和ALT浓度与肝脏组织病理学损伤之间的关系。方法:应用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测681例HCV感染患者血清HCV RNA,电化学发光分析技术检测HBsAg,ELISA检测抗HAV IgM、抗HCV IgG和抗HEV IgM,Bayer全自动生化分析仪检测ALT浓度。H-E染色,光学显微镜观察组织病理损伤程度。结果:681例血清标本中,HCV RNA和抗HCV抗体均阳性和均阴性者分别是150例和420例,HCV抗体阴性而HCV RNA阳性40例,HCV RNA阴性而HCV抗体阳性71例。在排除了甲型、乙型和戊型肝炎病毒感染后,190例HCVRNA阳性患者中,36例患者在HCV RNA检测前后7 d内,曾进行过肝脏组织病理学检测,轻度、中度和重度肝脏病理学损伤患者血清中,HCV RNA浓度及ALT浓度相差均不显著。结论:血清学标志物和病毒核酸都是监测HCV感染的重要指标。HCV RNA浓度、血清ALT浓度与肝脏病理损伤相关性不显著,HCV RNA水平不能反映肝脏病理损伤程度。

丙肝患者血清HCV RNA与TNF-α之间的关系及其与肝损伤程度相关性的研究

目的 研究不同临床分型HCV感染者血清中HCV RNA与TNF-α之间的差异,探讨HCV RNA和TNF-α含量与肝损伤程度的关系.方法 收集HCV感染者45例,其中慢性肝炎轻度组11例,慢性肝炎重度组14例,肝硬化组11例,肝癌组9例,健康对照组20例.用ELISA法检测HCV IgG和TNF-α,制作标准曲线计算TNF-α含量.荧光定量PCR方法检测HCV RNA含量.血清ALT水平用HITACHI 7600型全自动生化分析仪采用速率法进行检测.HCV感染者血清HCV-RNA含量的对数值、TNF-α含量和ALT水平与正常对照组比较用t检验,各组之间的TNF-α含量和ALT水平及lg HCV RNA比较用方差分析,HCV RNA含量的对数值、TNF-α含量和ALT之间的相关性用直线相关性分析,用相关系数（r）表示.结果 丙肝患者各组之间ALT水平和TNF-α含量差异有统计学意义,F值分别为9.75和14.69,P〈0.001;用t检验得出：各组丙肝患者血清TNF-α水平均明显高于健康对照组（P〈0.001）,t值分别为6.596,9.857,6.673和8.358;各组患者血清ALT水平均明显高于健康对照组（P〈0.001）,t值分别为12.031,6.61,3.971和6.857;慢性肝炎重度组、肝癌组与慢性肝炎轻度组之间ALT含量比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,t值分别为3.242和3.246;慢性肝炎重度组和肝癌组HCV RNA的对数值分别为6.05±0.8和5.76±1.05,均低于慢性肝炎轻度组,t值分别为2.573和2.393,差异有统计学意义（P〈0.05）.ALT水平与TNF-α含量之间呈正相关,r=0.341,P〈0.05.结论 不同临床类型HCV感染者血清中TNF-α和ALT含量存在差异,慢性肝炎轻度HCV感染者ALT水平明显低于其他临床类型组,HCV感染者血清ALT水平和TNF-α含量之间呈正相关.

无偿献血者HCV RNA与抗-HCV及ALT检测结果的相关性

目的：讨论无偿献血人群丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）、HCV RNA、丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测结果之间的相关性。方法采用ELISA法检测抗-HCV阳性标本235份，荧光定量PCR法检测病毒RNA，速率法测定ALT，并对抗-HCV（＋）/HCV RNA（–）标本进行追踪回访。结果235份抗-HCV阳性标本中，HCV RNA阳性140例（阳性率59.57%）；抗-HCV S/CO值1～5实验组和5.01～9.99实验组，HCV RNA阳性率分别为34.29%、26.47%；S/CO≥10时，HCV RNA阳性率为81.68%，与其他2组的差异有统计学意义（χ^2=45.15，P〈0.05；χ^2=39.41，P〈0.05）。抗-HCV （＋）/HCV RNA（＋）与抗-HCV（＋）/HCV RNA（–）组的ALT异常率分别为2.86%、1.05%，两组的差异无统计学意义（χ2=0.88，P＆gt;0.05）。抗-HCV（＋）/HCV RNA（＋）与抗-HCV（＋）/HCV RNA（–）组献血者的年龄分别是38.05±11.35岁和33.81±11.50岁，两组的差异有统计学意义（t=2.79，P〈0.05）。95份抗-HCV（＋）/HCV RNA（–）标本成功回访23例，其中1份标本回访检测抗-HCV转阴。结论 HCV RNA阳性率与抗-HCV的S/CO值有一定相关性，抗-HCV阳性的无偿献血人群中，ALT异常率与HCV RNA无相关性，感染者年龄与HCV RNA有一定相关性。

丙肝患者治疗前后HCV RNA与抗-HCV及丙氨酸氨基转移酶水平的分析

目的分析丙型肝炎患者治疗前血清HCV RNA、抗-HCV和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及治疗后HCV RNA和ALT水平的变化规律。方法对87例丙型肝炎患者血清进行实时荧光定量法(PCR)检测HCV RNA、ELISA法检测抗-HCV和酶速率法检测ALT浓度水平,并对所得数据进行统计学分析。结果丙型肝炎患者血清抗-HCV抗体滴度显著高于健康对照组,大部分患者的ALT水平均有显著性升高;HCV RNA含量与ALT水平具有显著相关性(r=0.673,P<0.01),而与抗-HCV的S/OD值无显著相关性(r=0.122,P>0.05);在治疗早期,患者HCV RNA含量在第2天显著性下降,而ALT浓度呈一过性上升。结论在HCV诊断与疗效观察中,血清HCV-RNA、抗-HCV和ALT指标各有利弊,3者有机结合在正确诊断和预测肝脏损伤及早期疗效观察中具有重要的临床意义。

HCV RNA水平对HCV/HIV合并感染自然进程的影响

目的探讨HCV RNA PCR水平对丙型肝炎病毒(HCV)/人类免疫缺陷病毒(HIV)合并感染自然进程的影响。方法采用实时荧光定量PCR方法检测HCV RNA,比较初次就诊高效反转录病毒治疗(HAART)前的HCV/HIV合并感染(HCV/HIV组)、HCV单纯感染(HCV组)、HIV单纯感染(HIV组)患者的HCV RNA、HIV RNA、CD4+T淋巴细胞计数、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)、甘胆酸(CG)、Ⅲ型胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、年龄等指标。结果 HCV/HIV组与HCV组和HIV组CD4+T淋巴细胞计数分别为139.75±91.586、647.16±363.379、288.0±219.6个/微升(P<0.01)。与HCV组患者的发病年龄分别为37±15和52±13岁(P<0.01)。HCV RNA分别为6.0417±0.93524和5.2553±1.62773log/ml(P<0.05);CⅣ分别为105.30±24.630和95.41±52.889ng/ml(P<0.05);CG分别为1444.98±1721.597、139.00±165.640μg/ml(P<0.01);PCⅢ分别为285.52±244.558、159.82±86.928ng/ml(P<0.01);ALT分别为104.42±107.90、46.22±32.589U/L(P<0.01)。与HIV组HIV RNA分别为4.8±0.9和4.1±1.0log/ml(P<0.01)。结论 HCV/HIV合并感染可以加重和加快HCV、HIV疾病的自然进程。高水平的HCV RNA是HCV/HIV合并感染患者的HCV、HIV疾病自然进程的危险因素之一。

血清HCV RNA阴性慢性丙型肝炎的诊断及抗病毒治疗

目的:探讨血清HCV RNA阴性慢性丙型病毒性肝炎(CHC)的诊断,抗病毒治疗及效果.方法:2004-02以来连续收治的血清HCV RNA阴性CHC患者11例.免疫组织化学检查HCV RNA5例均阳性.无其他肝病依据.予干扰素α300万U,肌注,1/2d;利巴韦林900mg/d,分次口服,疗程1年后随访.结果:10例患者治疗1年,1例患者治疗9mo后自行停药.所有患者血清ALT和AST均于4wk内降至正常.11例患者均有不同程度的干扰素不良反应,均未影响治疗.治疗结束后随访17-35mo患者血清ALT和AST未再升高(含治疗9mo者),HCV RNA及抗-HCV无变化.结论:血清HCV RNA阴性HCV感染者体内仍可能存在低水平HCV RNA.有创伤史,抗-HCV阳性或以前曾有过阳性,ALT、AST持续或反复升高当考虑HCV RNA阴性CHC诊断.排除其他肝病及/或肝组织等,检测到HCV时,当诊断HCV RNA阴性CHC并积极进行抗病毒治疗,其对干扰素α和利巴韦林反应良好.

不同浓度HBV DNA和HIV-1 RNA对多重PCR检测HCV RNA的干扰验证分析

目的探讨多重聚合酶链式反应(PCR)技术在献血者血液标本中不同浓度HBV DNA和(或)HIV-1 RNA对低浓度HCV RNA检测结果的影响。方法采用阴性血浆对HCV RNA标准物质、已定量的HBV DNA和HIV-1 RNA血浆进行稀释,配制成2种病毒或3种病毒的混合液,HCV RNA浓度稳定在20.4 IU/mL[该PCR检测系统95%平均检测下限(LoD)的3倍],HBV DNA浓度为20 IU/mL、200 IU/mL、2000 IU/mL和(或)HIV-1 RNA浓度为50 copies/mL、500 copies/mL、5000 copies/mL的混合液,同时设置对照组(只有3×LoD的HCV RNA溶液),模拟献血者血液样本,分别在Roche Cobas s201核酸检测系统进行单检模式和混样模式(与5个阴性标本混合)至少检测20次,统计分析不同浓度病毒核酸检测Ct值差异以及单检模式与混检模式的漏检率。结果不同浓度HIV-1 RNA和(或)HBV DNA在单检模式下对HCV RNA检测的Ct值差异无统计学意义(P>0.05);HCV RNA在单检模式下的Ct值中位数36.60(36.20,37.10)明显低于混检模式的Ct值39.30(38.60,40.00)(P<0.05),10个分组中HCV RNA在单检模式的漏检率均为0%,而在混检模式的平均漏检率为12.62%,差异有统计学意义(P<0.05);此外,浓度20 IU/mL的HBV DNA进行单检的漏检率为7.55%,进行混检的漏检率为81.4%;50 copies/mL的HIV-1 RNA和20.4 IU/mL的HCV RNA在单检时漏检率为0%,而混检漏检率分别为28.57%和12.62%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同浓度HBV DNA和HIV-1 RNA对多重PCR检测HCV RNA结果无影响,但弱阳性HCV RNA、HBV DNA和HIV-1 RNA标本在单检模式下的漏检率低于混检模式,为提高血液安全,血液核酸检测应尽可能采用单检模式。

Ultrio和Ultrio plus 2种核酸试剂对献血者HCV RNA筛查的一致性分析

目的追踪分析Ultrio和Ultrio plus 2种核酸试剂对抗-HCV阳性献血者血液标本筛查结果不一致的原因,并评价此2种核酸试剂检测HCV RNA的一致性。方法 6 254份ORTHO抗-HCV ELISA阴性及158份ORTHO抗-HCV ELISA阳性的无偿献血者血液标本,应用Procleix TIGRIS核酸检测系统的Ultrio、Ultrio plus试剂分别进行核酸筛查,对2种核酸试剂筛查HCV RNA结果不一致的献血者进行追踪,重新采集追踪标本补充Procleix Ultrio Elite、HCV Blot、HCV RNA定量检测,综合分析此2种核酸筛查试剂检测HCV RNA的临床灵敏度。结果 6 254份ORTHO抗-HCV ELISA阴性标本Ultrio、Ultrio plus试剂均未检出HCV RNA反应性。158份ORTHO抗-HCV ELISA阳性标本Ultrio反应性48例,Ultrio plus反应性51例,2种核酸试剂均为反应性47例。2种核酸试剂检测结果高度线性相关(Spearman相关系数rs=0.940,P<0.001),Kappa检验显示一致性极强(Kappa=0.940,P<0.001),配对卡方检验差异无统计学意义。6例核酸检测不一致标本分别为:2例Ultrio+/Ultrio plus-中1例HCV Blot阳性、1例HCV Blot可疑,1例HCV病毒核酸定量检测有结果;4例Ultrio-/Ultrio plus+标本中HCV Blot阳性3例、阴性1例,HCV病毒核酸定量检测3例有结果。追踪标本分析:1例Ultrio+/Ultrio plus-标本检测结果HCV Blot确证试验可疑,Ultrio Elite无反应性、HCV病毒核酸定量检测无结果;2例Ultrio-/Ultrio plus+追踪标本Ultrio Elite检测均无反应性,HCV Blot均阳性。结论 Ultrio与Ultrio plus核酸试剂检测HCV RNA一致性好,对临近检出限的低病毒载量标本均存在概率性检出。

双探针实时荧光定量法检测HCV RNA抗原的临床意义

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,分析其定量检测HCV RNA的灵敏度和特异性以及HCV RNA含量与患者病情的相关性。方法选取100例抗HCV抗体阳性样本,包括慢性肝炎患者45例、肝硬化患者30例、肝癌患者25例,并选取献血员50例为对照,用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行HCV RNA检测。结果双探针荧光定量法阳性率为93%(93例);两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为84%(84例)和79%(79例)。结论双探针荧光定量提高HCV RNA检测的灵敏度和特异性,HCV RNA含量与丙型肝炎患者病情变化及严重程度相关。