鸡新城疫灭活疫苗免疫攻毒试验与血清学(HI)试验的平行关系研究

对 19批鸡新城疫 (ND)灭活疫苗进行了效力检验 ,在测定PD50 的同时 ,进行了HI抗体效价的测定 ,以寻找血清学与抗攻毒保护的平行关系。结果表明 ,免疫剂量与GMHI抗体效价和攻毒保护率呈正相关 :免疫 1/ 12 .5剂量组共保护 5 4/ 6 0 (90 % ) ,GMHI抗体效价为 5 .6log2 ;免疫 1/2 5剂量组共保护 15 2 / 191(79.6 % ) ,GMHI抗体效价为 4 .9log2 ;免疫 1/ 5 0剂量组共保护 12 3/ 183(6 7.2 % ) ,GMHI抗体效价为 4 .0log2 ;免疫 1/ 10 0剂量组共保护 4 6 / 139(33% ) ,GMHI抗体效价为 3.0log2 ;对照组保护 0 / 89(0 ) ,GMHI抗体效价≤ 2 .0log2。采用PD50 测定的 18批疫苗中 ,有 15批合格 ,3批不合格 ;按照我国现有质量标准 ,即免疫 1/ 2 5剂量攻毒的方法进行检验 ,19批疫苗中有 16批合格 ,3批不合格 ;血清学方法检验 19批疫苗中有 17批合格 ,2批不合格。其中免疫攻毒效检方法与PD50 测定方法的不合格疫苗批次完全相同 ,其中 2批为免疫胚制造的疫苗 ,1批为进口的灭活疫苗 ,血清学检验不合格的 2批疫苗包含在其中 ,三种检验方法结果基本一致。试验还发现 ,HI抗体效价和抗攻毒保护呈正相关 :未免疫对照组鸡血清HI抗体效价≤ 2 .0log2 ,攻毒保护率为 0 (0 / 89) ;免疫ND灭活疫苗后如果血清HI抗体效价 <3.0log2 ,?

SPF产蛋鸡IB HI抗体滴度与攻毒保护的相关性试验

[目的]探讨SPF产蛋鸡IB HI抗体滴度与攻毒保护之间的相关关系。[方法]将SPF产蛋鸡随机分成A1、A2、B1及B2 4组,A1组用H120活疫苗免疫,A2组先用H120活疫苗免疫后再用鸡新城疫—传染性支气管炎—减蛋综合征三联灭活疫苗加强免疫,B1组为不免疫攻毒对照组,B2组为正常对照组。在免疫前后对试验鸡定期采血,测定IB HI抗体。当鸡群产蛋达高峰时,A1、A2及B1组试验鸡用IBVM41株强毒攻击,观察各试验组鸡临床表现,记录鸡只产蛋情况。[结果]H120活疫苗免疫后第30天,HI抗体滴度达4.45log2;用三联苗加强免疫后第30天HI抗体滴度达7.35 log2;攻毒前A1、A2、B1及B2组试验鸡IB HI抗体滴度分别为4.24 log2、7.4log2、2.1 log2和2.1 log2;攻毒后,A1组个别试验鸡出现了短暂的呼吸道症状,产蛋下降11.7%;B1组试验鸡出现了明显的呼吸道症状,产蛋下降30.9%,并出现较多的软壳蛋、无壳蛋及畸形蛋等;而A2组和B2组试验鸡的产蛋始终均保持正常。将攻毒后不同IB HI抗体滴度的SPF产蛋鸡的产蛋情况进行统计分析证明,当鸡只的IB HI抗体滴度≥6 log2时,攻毒对产蛋率没有影响;抗体滴度为5 log2时,产蛋下降6%;抗体滴度为4 log2时,产蛋下降11.3%;抗体滴度≤3 log2时,产蛋下降29.6%。[结论]产蛋鸡的IB HI抗体滴度与攻毒保护力有很大关系。

蛋鸡抗IBV HI抗体效价与攻毒后产蛋性能的相关性

【目的】研究抗呼吸型IBV HI抗体水平与蛋鸡产蛋率的对应关系。【方法】将180只SPF鸡分为4组,第1组和第2组首免用鸡传染性支气管炎H120活疫苗免疫,1羽份/只,4周后采血,第2组鸡同时用3批次的鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+HN6株)分别进行加强免疫,试验同时设置攻毒对照第3组和不免疫攻毒对照第4组。灭活疫苗免疫4周后,当产蛋率稳定在80%以上时,对试验鸡采血测定抗体,同时使用M41株病毒进行攻毒,记录攻毒后4周内各组鸡的产蛋性能,分析抗IBV HI抗体水平与攻毒后产蛋性能的相关性。【结果】弱毒活疫苗和灭活疫苗联合免疫组抗IBV HI抗体水平在2-8.2~2-9.3时,免疫鸡能够耐受IBV强毒的攻击,其产蛋性能不受影响。弱毒活疫苗免疫组抗体为2-4.8,产蛋量下降了12.69%。攻毒对照组抗体水平为2-2.0,攻毒后产蛋量下降45.22%。【结论】蛋鸡抗IBV HI抗体效价与产蛋率对鸡传染性支气管炎强毒的攻毒保护之间呈正相关,可以用HI抗体检测来评价鸡传染性支气管炎灭活疫苗对产蛋鸡的免疫效果。

新城疫病毒HI抗体效价与流行株感染排毒之间的相关性

为了分析免疫鸡群中新城疫强毒感染流行的原因,明确抗体效价与流行株感染排毒率之间的关系,本研究以LaSota为抗原制备新城疫灭活疫苗,并以0.02mL和0.4mL的量分别免疫3周龄的SPF鸡10只。免疫后7、14、21d分别测定免疫鸡血清中的抗体HI效价。免疫后21d以基因Ⅶd亚型新城疫流行株JS5/05进行攻毒,攻毒后每天观察试验鸡的临床症状,并于攻毒后3、5、7d采集试验鸡的喉气管与泄殖腔棉拭样品进行病毒分离,结果显示,免疫3周后0.02mL和0.4mL疫苗免疫组鸡的血清HI抗体平均效价分别为5.4log2和8.2log2;0.02mL免疫组在攻毒后的排毒率达到100%,且排毒时间较长,而0.4mL免疫组在攻毒后的排毒率明显降低,且排毒时间较短。上述结果表明新城疫抗体效价与流行株感染排毒率之间存在明显的负相关。

感染CAA雏鸡ND免疫后三种体液中HI抗体变化

对１日龄感染ＣＡＡ雏鸡接种Ｌａｓｏｔａ弱毒疫苗后，其血清、泪液、胆汁中ＨＩ抗体滴度的变化进行了研究。结果发现，感染ＣＡＡ雏鸡Ｌａｓｏｔａ疫苗免疫后，三种体液中ＨＩ抗体滴度明显低于未感染ＣＡＡ的对照雏鸡。

不同抗原含量鸡减蛋综合征灭活疫苗的HI效价测定

为优化鸡减蛋综合征相关多联灭活疫苗的生产工艺,利用Pellicon切向流超滤系统,将制备的鸡减蛋综合征病毒液6.5倍浓缩,0.1%(V/V)甲醛灭活。将抗原液用灭菌生理盐水进行1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256稀释,按照常规生产工艺规程分别制备灭活疫苗,免疫21日龄SPF雏鸡。21d后翅静脉采血,HI试验检测免疫鸡的抗体水平。结果显示,免疫鸡HI抗体效价几何平均值均不低于7.0log2,符合鸡减蛋综合征灭活疫苗质量标准要求。

9种中药成分对新城疫Ⅳ系疫苗免疫雏鸡血清中血凝抑制抗体水平的影响

用新城疫 系疫苗免疫雏鸡,在免疫前、后分别注射高、低剂量的当归多糖、黄芪多糖、板蓝根多糖、淫羊藿多糖、蜂胶多糖、淫羊藿黄酮、蜂胶黄酮、黄芪皂甙和人参皂甙等9种中药成分,用β-微量法监测血清中血凝抑制抗体效价的动态变化。结果表明,9种中药成分均能不同程度地提高抗体效价,且与给药时间、剂量和免疫接种次数有一定关系。

云南省鸽新城疫病毒的分离鉴定

用SPF鸡胚从疑为鸽新城疫的云南省某信鸽场分离到一株毒株。该毒株能凝集鸡红细胞 ,且其凝集作用能被抗新城疫阳性血清抑制 ;该毒株对氯仿、酸敏感 ;在病毒中和试验中 ,抗NDV阳性血清对该毒株中和效价为 1∶2 1.75;将病毒分离物回归鸽子 ,复制出与自然病例相似的临床症状 ,且全部感染鸽都发生了血清学抗体转换 ;静脉接种 6周龄雏鸡 ,10天后HI价显著增高 ,且其IVPI为 0。试验结果表明该毒株为鸽新城疫病毒。

猪脾转移因子增强禽白血病病毒A/B亚群抗体阳性鸡群免疫水平的研究

为了解猪脾转移因子(TF)对禽白血病病毒A/B亚群(ALV—A/B)抗体阳性鸡群免疫水平的影响,本研究以新城疫(ND)HI试验和淋巴细胞增殖试验分别检测ND HI抗体效价(log2x)和刺激指数(SI)作为指示参数,采集特佳、罗曼、海兰和伊莎共4个品种蛋鸡血样,并从中选出各60羽份(ALV-A/B抗体阳性、阴性鸡各半,ALV p27抗原均为阴性),将4个品种的ALV-A/B抗体阳性蛋鸡均分为实验组(联合接种TF 0.02 mL+NDV La Sota疫苗1羽份/羽,TF多肽含量为3.5 mg/mL,核糖含量为72.0μg/mL,脱E受体法效力检验活力为15%)和对照组(单独接种NDV La Sota疫苗1羽份/羽),于接种后21 d采血检测。结果显示,ALV-A/B抗体阳性鸡群(120羽份)的ND HI抗体效价均值(6.1±1.3)与阴性鸡群(120羽份)均值(6.2±1.3)差异不显著,但其SI均值(1.20±0.10)显著低于阴性鸡群(1.35±0.10)(p<0.05);实验组(60羽份)的ND HI抗体效价和SI均值(9.0±1.3,1.73±0.15)显著高于对照组(60羽份)均值(7.8±1.2,1.39±0.16)(p<0.05)。研究结果表明,ALV-A/B抗体阳性与鸡ND HI抗体效价相关性不大,而对SI具有抑制作用;TF具有增强ALV-A/B抗体阳性鸡群免疫水平的作用。

芦荟多糖对肉鸡免疫器官指数和新城疫疫苗免疫效果的影响

为了观察芦荟多糖(Aloe polysaccharide,AP)对黄羽肉鸡免疫器官发育和新城疫(Newcastle disease,ND)疫苗免疫效果的改善和增强作用,在接种ND疫苗的同时颈部皮下注射AP溶液(AP实际注射剂量分别为每次3.75,7.50,11.25,15.00,0 mg.只-1),就AP不同质量浓度及其注射次数对肉鸡免疫器官指数和ND HI抗体滴度的影响进行了研究.结果表明,在5日龄接种ND活疫苗和半剂量灭活疫苗时1次注射AP,在一定程度上可促进免疫器官的发育,增加胸腺、脾脏和法氏囊的质量及其指数,但差异不显著(P>0.05).除个别处理外,AP处理可提高ND疫苗免疫肉鸡的HI抗体滴度,并以试验后期(35日龄)3.75 mg.只-1和7.50 mg.只-1AP处理者效果最显著(P<0.05).在5日龄和20日龄接种ND活疫苗时,2次注射AP对免疫器官的发育和免疫器官指数有一定的影响.除15.00 mg.只-1AP处理外,其余各处理胸腺指数显著高于对照(P<0.05);AP各处理及与对照之间脾脏指数差异不显著(P>0.05);各处理法氏囊指数均高于对照,但差异不显著(P>0.05).不同质量浓度的AP溶液对ND HI抗体滴度均有一定的影响.在第1次注射后15 d(20日龄),除15.00 mg.只-1AP处理外,其余各处理ND HI抗体滴度均高于对照,但只有3.75 mg.只-1AP处理者差异显著(P<0.05);而在第2次注射后15 d(35日龄),除11.25 mg.只-1AP处理外,其余各处理肉鸡ND HI抗体滴度均高于对照,且差异显著(P<0.05).由此证明,一定质量浓度的AP可改善免疫器官的发育,提高ND疫苗免疫效果,并可以作为免疫促进剂与ND疫苗同时使用.

禽Ⅱ型副粘病毒各种禽源分离株的免疫原性

分别制备了源于鸡、鹅、鸽、鹌鹑、孔雀、画眉鸟、珍珠鸡的禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-1）7个强毒分离毒株和商品弱毒疫苗株克隆30（C30）的灭活油乳剂苗，并用这8种灭活油乳剂苗和C30株的活疫苗分别在鸡、鹌鹑、鹅和鸽进行了免疫及交叉攻毒保护试验。免疫后（PI）分别测定试验禽血清的新城疫病毒（NDV）血凝抑制（HI）抗体的滴度，并于PI5周用强毒株进行攻毒。结果表明，鸽的HI抗体几何平均滴度（MAT）为9．00～10．0log2，鸡的为7．13～7．63log2，鹌鹑的为5．OO～5．13log2，鹅对灭活油乳剂苗的为5．63～6．38log2、而对C30株活疫苗的仅为3．38log2；除了C30株活疫苗免疫鹅提供的保护率比较低（20％）外，8种油乳剂苗都能对同源或者异源强毒株的攻毒提供比较高的保护率（66．75％～100％）。研究结果表明，经典疫苗株C30与近年来从各种不同禽类分离的致病性APMV-1野毒株之间、不同禽源分离株之间的抗原性，以及各种不同禽源分离株的之间的免疫原性差异均不大。

免疫蛋鸡携带新城疫病毒的调查研究

实验对江苏省某地区 2 2个免疫鸡场进行了新城疫病毒抗体随机抽样监测 ;并从所抽样的鸡只中无菌采集气管及泄殖腔棉拭子样品 ,接种非免疫鸡胚进行病毒分离与鉴定。结果表明 ,在不同新城疫病毒抗体水平的鸡群 ,均可分离到新城疫病毒 ;这提示了新城疫病毒抗体水平只能用于衡量机体的体液免疫状况 。

黄芪、岩藻和油菜3种植物提取多糖对新城疫弱毒疫苗免疫效果的影响

180只1日龄北京白鸡,饲养至21日龄随机分组进行新城疫弱毒疫苗的免疫,每组分别添加黄芪、岩藻和油菜3种植物提取多糖成分作为免疫增强剂,添加剂量为10mg/只,每种成分又分为滴鼻点眼和肌肉注射两种免疫途径。首免和二免后定期采血检测新城疫血凝抑制抗体效价和外周血淋巴细胞体外转化率。结果表明:黄芪和岩藻多糖能显著提高新城疫的血凝抑制抗体水平,三种多糖都能显著提高淋巴细胞体外转化率,这三种植物多糖能增强新城疫弱毒疫苗的免疫效果。

金鸡散对鸡新城疫免疫的辅助效果研究

本研究采用 13周龄父母代艾维菌种母鸡 80只 ,随机等分成 4组 ,研究中草药制剂金鸡散对新城疫免疫的辅助效果 ,以左旋咪唑作为免疫增效剂对照 ,在免疫后不同时间 ,分别采血测定血清中新城疫抗体滴度及免疫球蛋白G、A、M的含量。结果发现 ,免疫当日采用 2 5 %金鸡散拌料连用 5d对新城疫免疫有明显增效作用 ,可显著提高血清新城疫抗体滴度及免疫球蛋白G的含量 ,使IgG高峰持续时间延长 ,并延缓IgA、IgM的下降 ,其免疫增效作用优于左旋咪唑 。

鸭不同MHC单倍型对禽流感重组疫苗免疫效果的影响

目的不同品系的鸭对禽流感(AI)疫苗诱导的效价有差异,分析这种差异是否与主要组织相容性复合体(MHC)有关。方法用表达H5亚型禽流感HA基因重组鸭瘟活载体疫苗免疫抗原提呈相关转运体TAP基因等位基因型不同的4种SPF鸭,比较其血清HI动态变化。结果免疫后连续观察的9周中,B3群SPF鸭HI抗体效价始终显著高于另外3个群。结论鸭的不同MHC单倍型可能与AI疫苗的不同免疫效力相关。

H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体制备及鉴定

【目的】制备H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)单克隆抗体,为检测诊断AIV提供技术支持。【方法】以灭活H9亚型AIV广西分离株为免疫原,免疫6~8周BALB/c雌性小鼠,然后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经血凝抑制试验(HI)及间接免疫荧光试验(IFA)筛选H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞。【结果】经过4次亚克隆,获得3株稳定的H9单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为8A4、1B11和7F1细胞株,其细胞株培养上清液HI效价为2~7~2^(10),腹水HI效价为2^(16)~2^(19);单克隆抗体亚类鉴定结果表明,3株H9单克隆抗体均属于Ig G1亚类,其轻链均为K链。3株H9单克隆抗体只与H9亚型AIV发生特异性HI反应,而与其他HA亚型AIV及新城疫病毒(NDV)、减蛋综合症病毒(EDS)、传染性支气管炎病毒(IBV)无交叉反应。3株H9单克隆抗体细胞株的抗体分泌能力稳定性良好。【结论】用灭活H9亚型AIV为免疫原能成功制备针对H9亚型AIV血凝素的单克隆抗体,且具有良好的亚型广谱性和特异性。

甲壳素、油乳剂和蜂胶对鸡新城疫疫苗免疫调节作用的研究

本实验以肉用AA雏鸡和蛋用罗曼雏鸡为实验动物,从细胞免疫和体液免疫首次研究了甲壳素对鸡新城疫疫苗的免疫调节作用,并与油乳剂和蜂胶佐剂加以比较,以观察不同免疫佐剂对鸡新城疫的免疫调节作用。试验结果表明,三种佐剂的疫苗在肉鸡组免疫后5～10d,蛋鸡组免疫后5～15d,甲壳素疫苗组HI抗体效价显著高于其它组;在肉鸡组免疫后15～37d,蛋鸡组免疫后22～50d,油乳剂疫苗组HI抗体效价显著高于其它组。用三种不同佐剂的疫苗免疫后,肉鸡和蛋鸡甲壳素疫苗组的细胞免疫水平显著高于其它组。

口服重组鸡α-干扰素对鸡新城疫病毒感染和疫苗免疫的影响

通过点眼、滴鼻的方式使SPF鸡感染新城疫La Sota株,感染8 h后在饮水中添加1000 U/mL重组鸡α-干扰素,每只鸡每天饮用干扰素剂量为20000 U,分别饮用不同时间。于感染后第7天采集气管组织,制备病理切片。结果显示,连续3 d以上饮用重组鸡α-干扰素的试验鸡,其气管的病理损伤可得到明显改善;检测饮用重组鸡α-干扰素后试验鸡的新城疫抗体效价,结果表明口服高剂量的干扰素可明显下调新城疫抗体的滴度。

鸭坦布苏病毒病灭活疫苗血清学试验与免疫攻毒保护试验的相关性

【目的】评价鸭坦布苏病毒病灭活疫苗2种效力评价方法平行关系,为采用血清学检验技术替代鸭坦布苏病毒病灭活疫苗本动物攻毒效力检验奠定基础。【方法】3批疫苗实验室制品分别以0.15、0.3、0.5、1.0 mL经肌肉注射途径免疫51日龄青年鸭和260日龄产蛋鸭,首次免疫后14 d,按相同的剂量和途径进行二次免疫。二免后28日采血,分离血清并测定血清的HI抗体效价,根据抗体效价对试验鸭分组,并分别经肌肉注射途径接种0.5 mL(100 DID50)的鸭坦布苏病毒。攻毒后2 d采血,分离病毒,产蛋鸭攻毒后8 d剖检,观察卵巢病变。比较和分析HI抗体效价和攻毒保护结果的相关性。【结果】免疫青年鸭HI抗体效价≤1﹕5、1﹕10、1﹕20、1﹕40、1﹕80、1﹕160、1﹕320、1﹕640组保护率分别为50%(20/40)、43.8%(7/16)、74.3%(26/35)、86.7%(26/30)、96.6%(57/59)、92.7%(51/55)、95%(38/40)和100%(11/11),HI抗体效价低于1﹕20时攻毒保护率为48.2%,效价1﹕20时攻毒保护率为74.3%,效价1﹕40及以上时攻毒保护率达93.8%。免疫产蛋鸭HI抗体效价≤1﹕5、1﹕20、1﹕40和1﹕80组保护率分别为66.7%(12/18)、83.3%(10/12)、95.2%(20/21)和100%(15/15);HI抗体效价1﹕10、1﹕160、1﹕320和1﹕640组保护比例分别为2/3、7/7、1/1和2/2;HI抗体效价为1﹕10及以下时攻毒保护率为66.7%,效价1﹕20时攻毒保护率为83.3%,效价1﹕40及以上时攻毒保护率达97.8%。青年鸭和产蛋鸭的HI抗体效价与攻毒保护率之间均有极显著的正相关性,Spearman相关系数分别为0.905(P<0.01)和0.932(P<0.01)。【结论】鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)免疫后HI抗体与攻毒保护率存在正相关,可替代免疫攻毒法用于鸭坦布苏病毒病灭活疫苗的效力评价,初步将HI抗体效价1﹕20定为鸭坦布苏病毒病灭活疫苗免疫后产生抗体保护的标准。

新城疫特异性转移因子的免疫作用研究

将新城疫特异性转移因子（Newcastle disease-specific transfer factor，ND-STF）1mL单独或与La Sota弱毒疫苗一起，分别口服和注射试验鸡，然后用MTT法检测各组鸡外周血淋巴细胞转化率；用La Sota疫苗免疫鸡，同时口服或注射0．1、0．5、1mL 3种不同剂量的ND-STF，然后检测血清中新城疫病毒HI抗体效价。在使用ND-STF后第5天，试验组鸡的淋巴细胞转化率达到高峰，刺激指数（stimulation index，SI）可达1．68-1．71，对照组的SI值为1．24～1．34，试验组与对照组差异显著（P〈0．05），各试验组之间差异不显著（P〉0．05）；鸡的HI抗体效价（log2 X）在免疫后第28天达到高峰，口服或注射ND-STF 3种不同剂量组HI抗体效价分别为10、9．25、10和6．3、9、8．3，使用ND-STF各组与未使用组相比较差异显著（P〈0．05），且口服的效果更好。表明ND-STF能够增强鸡的细胞免疫和体液免疫能力。