黏膜组织内Runx3蛋白、HIF-1α表达水平与不同类型胃息肉幽门螺杆菌感染的关系分析

目的 探讨黏膜组织内Runt相关转录因子3(runtrelated transcription factor 3,Runx3)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia-Inducible Factor 1-Alpha,HIF-1α)蛋白表达水平与不同类型胃息肉及幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)感染的关系。方法 选取2018年1月至2022年1月在本院诊治的胃息肉患者154例为病例A组,慢性萎缩性胃炎患者120例为病例B组,胃癌患者120例为病例C组。通过胃黏膜活检确诊,检测各组Runx3、HIF-1α蛋白和Hp阳性表达率,并分析胃息肉患者中Runx3、HIF-1α蛋白与Hp感染的相关性。结果 Runx3、HIF-1α蛋白在A、B、C组中的阳性表达率分别为62.99%vs47.40%、75.33%vs33.33%、31.67%vs85.83%(P<0.001)。增生性息肉组与病例C组的Runx3、HIF-1α蛋白阳性率差异显著(P<0.001),与病例B组无显著差异(P>0.05);腺瘤性息肉组与病例C组无显著差异(P>0.05),与病例B组有差异(P<0.05)。Hp感染阳性率在A、B、C组分别为45.45%、40.83%、84.17%(P<0.001)。增生性息肉组与病例C组差异显著(P<0.001),与病例B组无差异(P>0.05);腺瘤性息肉组与病例C组无差异(P>0.05),与病例B组差异显著(P<0.05)。Hp感染阳性患者中Runx3和HIF-1α蛋白阳性率分别为24.29%和52.86%;Hp感染阴性患者中分别为95.24%和42.86%。相关性分析显示,胃息肉患者的Runx3表达与Hp感染呈负相关(r=-0.732,P<0.001),HIF-1α与Hp感染无显著相关性(r=0.100,P=0.213)。结论 Runx3和HIF-1α蛋白在胃息肉患者黏膜组织中呈高阳性表达,Hp感染可能参与胃息肉发生发展,其中Runx3与Hp感染呈负相关性。

缺氧微环境下HIF-1α通过PD-L1调控肝癌恶性生物学行为和上皮间质转化的机制研究

目的探讨缺氧微环境下,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)通过程序性死亡配体1(PD-L1)调控肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的机制。方法选取2016年9月至2018年9月在徐州医科大学附属盐城临床学院确诊治疗的57例肝癌病人作为研究对象。免疫组织化学检测HIF-1α、PD-L1的表达水平,统计学分析HIF-1α、PD-L1与肝癌病人临床病理及总生存期之间的关系。通过氯化钴建立肝癌细胞缺氧模型,用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测不同浓度氯化钴作用下细胞存活率;划痕实验、Transwell实验检测缺氧细胞及亲本细胞迁移、侵袭能力的变化;蛋白质印迹法检测缺氧细胞及亲本细胞HIF-1α、PD-L1蛋白表达水平。设计针对HIF-1α的siRNA(小干扰RNA,small interfering RNA)及PD-L1质粒,脂质体转染肝癌细胞氯化钴缺氧细胞,划痕实验、Transwell侵袭实验检测转染前后细胞迁移、侵袭能力的变化;蛋白质印迹法检测转染前后细胞HIF-1α、PD-L1、上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果与癌旁组织相比,HIF-1α、PD-L1在肝癌组织中高表达(P<0.05)。肝细胞癌中HIF-1α高表达组与低表达组在肿瘤长径、肿瘤分化程度和CNLC分期差异有统计学意义(P<0.05);PD-L1高表达组与低表达组在肿瘤数目、AFP表达水平和CNLC分期差异有统计学意义(P<0.05);且log-rank检验方法显示:HIF-1α、PD-L1高表达组病人的总生存期较低表达组明显降低(P<0.05)。与常氧细胞相比,缺氧细胞穿透小室的细胞数显著增加[(429.33±12.01)个比(244.3±8.14)个,t=−22.08,P<0.001],氯化钴缺氧肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力增强,HIF-1α、PD-L1表达水平明显增加(P<0.05)。与亲本细胞相比,HIF-1αsiRNA作用后肝癌缺氧细胞增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05),且PD-L1、波形蛋白(Vimentin)及扭曲相关蛋白1(Twist1)蛋白表达明显降低,而上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白表达明显增加(P<0.05);HIF-1αsiRNA和PD-L1质粒共转染后,可逆转HIF-1αsiRNA介导的侵袭、迁移能力的改变及EMT相关指标的改变。结论HIF-1α、PD-L1在肝癌中高表达,两者高表达预示肝癌病人预后较差。缺氧微环境下,HIF-1α可通过PD-L1调控肝癌恶性生物学行为及上皮间质转化进程。

通过HIF-1α/NLRP3信号通路探讨血府逐瘀胶囊治疗急性脑梗死的作用机制

目的该研究旨在通过HIF-1α/NLRP3信号通路探讨血府逐瘀胶囊治疗急性脑梗死的作用机制,以期为临床防治脑梗死提供新的依据。方法分析2022年12月—2023年12月于医院收治的62例急性脑梗死患者为研究对象,随机分为研究组(给予血府逐瘀胶囊治疗)和对照组(给予阿替普酶治疗)各31例,统计两组疗效及不良反应,对比治疗前及治疗后的中医证候积分、血流速度、HIF-1α、NLRP3、caspase-1水平及血液流变学指标。结果研究组和对照组治疗有效率分别为96.77%(30/31)和77.42%(24/31),两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后半身不遂、口角歪斜、吞咽困难、言语不利、头晕恶心、口唇紫暗、肌肤甲错、气短乏力评分均明显升高(P<0.05),且研究组治疗后Vs、Vd、Vm水平明显高于对照组(P<0.05)。两组治疗后Vs、Vd、Vm水平均明显升高(P<0.05),且研究组治疗后Vs、Vd、Vm水平明显高于对照组(P<0.05)。两组治疗后HIF-1α、NLRP3、caspase-1水平均明显降低(P<0.05),且研究组治疗后HIF-1α、NLRP3、caspase-1水平明显低于对照组(P<0.05)。两组治疗后FIB、HSV、PSV水平均明显降低(P<0.05),且研究组治疗后FIB、HSV、PSV水平明显低于对照组(P<0.05)。治疗期间两组均未出现不良反应。结论血府逐瘀胶囊能够通过HIF-1α/NLRP3信号通路发挥治疗急性脑梗死的作用。

麝香通心滴丸调控HIF-1α/HO-1通路抑制铁死亡缓解心肌缺血再灌注损伤研究

目的:探究麝香通心滴丸(STDP)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用及其潜在机制。方法:采用AnaeroPack方法构建H9c2细胞缺氧复氧损伤(H/R)模型以模拟MIRI。将细胞随机分为对照组、模型组和麝香通心滴丸组,分别在不含药或含药的培养液中培养24 h后收集细胞。采用细胞计数试剂盒法(CCK-8)检测细胞增殖与活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平,荧光探针法检测活性氧(ROS)水平以评估细胞的氧化应激状态,透射电镜(TEM)观察线粒体超微结构变化,Western blot检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路相关蛋白的表达水平。结果:麝香通心滴丸在H9c2心肌细胞中未表现出明显细胞毒性,同时在H/R条件下显著抑制了细胞损伤。麝香通心滴丸通过降低ROS生成和LDH释放,显著缓解了H/R诱导的氧化应激。TEM观察显示,与对照组相比,模型组的线粒体呈现明显的萎缩并伴随典型的铁死亡特征,而麝香通心滴丸组的线粒体形态显著改善,趋于正常。进一步通过Western blot检测发现,模型组HIF-1α和HO-1蛋白表达显著上调,而麝香通心滴丸组显著抑制了这些蛋白的过度表达(P<0.05)。结论:麝香通心滴丸可能通过抑制HIF-1α/HO-1信号通路介导的铁死亡,减轻心肌缺血再灌注损伤。

Trx-1及HIF-1α在胃癌腹膜转移中的表达及意义

目的检测Trx-1及HIF-1α在胃癌腹膜转移者、未转移者中的表达情况,分析其在胃癌腹膜转移中的临床意义。方法免疫组化法检测Trx-1及HIF-1α在胃癌腹膜转移患者原发灶、未转移患者原发灶中的表达情况;利用相关分析分析Trx-1及HIF-1α的相关关系;采用Kaplan-Meier法分析Trx-1及HIF-1α阳性和HIF-1α阴性表达者的平均生存时间;Logistic回归分析胃癌腹膜转移的危险因素。结果Trx-1及HIF-1α在胃癌腹膜转移组与胃癌腹膜未转移组中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析提示,Trx-1与HIF-1α表达呈正相关。Trx-1及HIF-1α在胃癌腹膜转移灶中的阳性表达与肿瘤的Borrmann分型及T分期相关。Trx-1及HIF-1α表达阳性的患者术后生存时间短于Trx-1及HIF-1α表达阴性的患者。Logistic回归分析提示,原发肿瘤Borrmann分型、T分期,以及原发灶中Trx-1及HIF-1α的阳性表达是胃癌腹膜转移的危险因素。结论Trx-1及HIF-1α的表达与胃癌腹膜转移有关,且高表达者预后不良。

隐丹参酮调节HIF-1α/BNIP3信号通路对兔膝骨关节炎模型软骨细胞自噬和凋亡的影响

目的 探究隐丹参酮调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞自噬和凋亡的影响。方法 取新西兰兔并以改良Videman法构建兔KOA模型,随机分为模型组、空载组、隐丹参酮组、HIF-1α敲低组、隐丹参酮+HIF-1α敲低组,每组9只;另取9只新西兰兔为对照组。分组干预后以Lequesne MG的膝关节级别评估法对兔膝关节临床症状(局部疼痛、步态、关节活动、关节肿胀)进行评分;HE染色检测兔膝关节软骨组织的退变情况并进行改良Mankin's评分;TUNEL染色检测兔膝关节软骨组织细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测兔血清炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-18、IL-10水平;蛋白免疫印迹实验检测兔膝关节软骨组织自噬(LC3、Beclin-1)、凋亡(Bax、Cleaved Caspase-3)和HIF-1α/BNIP3信号通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组兔膝关节软骨组织出现明显退变症状,局部疼痛、步态、关节活动及关节肿胀评分、改良Mankin's评分、凋亡率、血清IL-18及IL-6水平、软骨组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Bax、Cleaved Caspase-3、BNIP3蛋白表达水平升高,血清IL-10水平、软骨组织HIF-1α蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,隐丹参酮组兔膝关节软骨组织退变症状减轻,局部疼痛、步态、关节活动及关节肿胀评分、改良Mankin's评分、凋亡率、血清IL-18及IL-6水平、软骨组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Bax、Cleaved Caspase-3、BNIP3蛋白表达水平降低,血清IL-10水平、软骨组织HIF-1α蛋白表达水平升高(P<0.05);HIF-1α敲低组兔膝关节软骨组织退变症状加重,局部疼痛、步态、关节活动及关节肿胀评分、改良Mankin's评分、凋亡率、血清IL-18及IL-6水平、软骨组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Bax、Cleaved Caspase-3、BNIP3蛋白表达水平升高,血清IL-10水平、软骨组织HIF-1α蛋白表达水平降低(P<0.05);空载组兔各指标无明显变化(P>0.05)。隐丹参酮+HIF-1α敲低组较隐丹参酮组兔膝关节软骨组织退变症状加重,局部疼痛、步态、关节活动及关节肿胀评分、改良Mankin's评分、凋亡率、血清IL-18及IL-6水平、软骨组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Bax、Cleaved Caspase-3、BNIP3蛋白表达水平升高,血清IL-10水平、软骨组织HIF-1α蛋白表达水平降低(P<0.05);较HIF-1α敲低组上述指标变化相反。结论 隐丹参酮可通过上调HIF-1α、下调BNIP3表达,抑制炎症及自噬,减轻KOA兔膝关节软骨组织退变,改善其临床症状。

小檗碱调节HIF-1α/VEGF信号通路对皮肤溃疡大鼠血管生成和创面愈合的影响

目的:探究小檗碱(BR)调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路对皮肤溃疡大鼠血管生成和创面愈合的影响。方法:取SD大鼠采用创面局部多次涂抹冰醋酸建立皮肤溃疡模型,随机数字法分组,包括模型组(M组)、小檗碱低剂量组(BR-L组)、小檗碱高剂量组(BR-H组)、小檗碱高剂量+空载组(BR-H+pc-DNA组)、小檗碱高剂量+HIF-1α敲低组(BR-H+pc-HIF-1αKD组),每组10只,另选10只SD大鼠作为对照组(C组)。以药物分组处理3周后,测定各组大鼠创面愈合率;HE染色检测各组大鼠皮肤溃疡创面组织病理形态;免疫组织化学染色检测各组大鼠皮肤溃疡创面组织微血管密度(MVD)及胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)与纤维结合蛋白(FN)表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)各组大鼠血清及皮肤溃疡创面组织炎性因子IL-6、IL-8表达水平;免疫印迹法检测各组大鼠皮肤溃疡创面组织HIF-1α/VEGF通路蛋白表达水平。结果:与C组相比,M组大鼠创面组织MVD、血清及创面组织IL-6、IL-8水平升高(均P<0.05)。与M组相比,BR-L组、BR-H组、BR-H+pc-DNA组大鼠创面愈合率、创面组织MVD、HIF-1α及VEGF蛋白表达均升高(均P<0.05),血清及创面组织IL-6、IL-8水平均降低(均P<0.05),且高剂量小檗碱作用更强。敲低HIF-1α可减弱BR对模型组大鼠各指标的作用。结论:小檗碱可通过上调HIF-1α/VEGF通路而降低炎性因子表达,抑制炎症,增强皮肤溃疡大鼠血管生成和胶原形成,促进其创面愈合。

基于HIF1A/EZH2/ANTXR2通路探讨罗氏内异方治疗子宫内膜异位症大鼠的作用机制

目的基于缺氧诱导因子1A(HIF1A)/zeste增强子同源物2(EZH2)/炭疽热毒素受体2(ANTXR2)信号通路探讨罗氏内异方(又名益母调经化瘀合剂)对子宫内膜异位症(EMs)大鼠在位子宫内膜增殖及血管生成的干预作用及机制。方法将SD大鼠随机分为伪手术组、模型组、达那唑组(4.2 g·kg^(-1))及罗氏内异方低、高剂量组(15.74、31.48 g·kg^(-1)),每组8只。采用自体子宫内膜移植联合多因素干预法复制气滞血瘀型EMs病证结合大鼠模型。灌胃给药,每天1次,连续28 d。采用HE染色法观察子宫内膜组织病理变化;免疫组化法检测子宫内膜组织中增殖细胞蛋白67(Ki67)和血小板内皮细胞黏附分子1(CD31)蛋白表达水平;qRT-PCR及Western Blot法检测子宫内膜组织中HIF1A、EZH2、ANTXR2 mRNA及蛋白表达水平;Western Blot法检测子宫内膜组织中Yes关联蛋白1(YAP1)、吞噬细胞糖蛋白1(CD44)、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平。结果与伪手术组相比,模型组大鼠在位子宫内膜组织上皮细胞增厚,间质细胞排列紊乱,炎性细胞增多;子宫内膜组织中Ki67、CD31的表达水平均显著升高(P<0.01),HIF1A、ANTXR2 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),而EZH2 mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.01),YAP1、CD44及β-catenin蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠在位子宫内膜组织上皮层变薄,间质部细胞紊乱和炎症浸润均有改善,子宫内膜组织中Ki67、CD31的表达水平均显著降低(P<0.01);达那唑组与罗氏内异方高剂量组大鼠子宫内膜组织中HIF1A、ANTXR2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),EZH2 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01);各给药组大鼠子宫内膜组织中YAP1、CD44及β-catenin蛋白表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论罗氏内异方可通过抑制在位子宫内膜细胞的增殖及血管生成能力来发挥治疗EMs的作用,其机制可能与抑制HIF1A/EZH2/ANTXR2信号通路有关。

温经通络汤含药血清对小鼠软骨细胞损伤及IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴的影响研究

目的研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制。方法采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型,检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)以及糖酵解相关酶乳酸脱氢酶A(LDHA)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶2(NOX2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(NOX4)的mRNA表达;测定细胞内MMP3、MMP13、P65、IκB-ζ、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)以及LDHA蛋白表达水平;进一步检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和乳酸的浓度,测定细胞内辅酶Ⅰ(NAD)的还原态(NADH)和氧化态(NAD+)的比率,以及细胞内活性氧(ROS)水平。结果温经通络汤含药血清可显著抑制IL-1β软骨细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达(P<0.01),降低细胞上清液中NO浓度(P<0.05,P<0.01),下调IκB-ζ(P<0.05)和P65蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。温经通络汤含药血清可显著下调MMP3、MMP9、MMP13以及ADAMTS4 mRNA表达(P<0.01),抑制MMP13(P<0.05,P<0.01)和MMP3(P<0.05)的蛋白表达。氧化应激方面,它可显著抑制软骨细胞内ROS的产生,提高NADH/NAD+比率,降低上清液中MDA浓度,下调HIF-1α蛋白表达(P<0.01)。温经通络汤含药血清可显著降低乳酸浓度,下调LDHA、PKM2、NOX2、NOX4的表达,降低细胞内糖酵解水平(P<0.05,P<0.01)。结论温经通络汤含药血清可通过抑制炎症、软骨降解、氧化应激和糖酵解,缓解IL-1β诱导的小鼠原代软骨细胞损伤,其机制可能与调控IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴有关。

HIF-1α通过调控上皮-间充质转化对胆囊癌侵袭转移的影响

目的探讨HIF-1α对胆囊癌细胞迁移侵袭的影响及其相关调控机制。方法构建GBC-SD细胞,使用慢病毒转染,分别得到实验组(HIF-1αshRNA)、阴性对照组(空载慢病毒转染)和空白对照组(未处理)。蛋白质免疫印迹法检测E-Cadherin、N-Cadherin蛋白的表达水平,GBC-SD细胞的迁移能力用细胞划痕实验检测,GBC-SD细胞的侵袭能力用Transwell侵袭实验检测。结果与对照组相比,实验组E-Cadherin蛋白的表达水平明显升高(P<0.001),N-Cadherin蛋白的表达水平明显降低(P<0.001),对照组之间E-Cadherin、NCadherin蛋白的表达水平无明显差异(P>0.05)。实验组细胞划痕愈合度较对照组低(P<0.001)、穿模个数较对照组少(P<0.001),而对照组之间细胞划痕愈合度、穿模个数无明显差异(P>0.05)。结论靶向敲低HIF-1α可以降低GBC-SD细胞的迁移侵袭能力,其作用机制可能与调控上皮-间充质转化有关。

沉默HIF-1α调控SLC7A11对喉癌细胞生长的实验研究

目的:本研究旨在探究沉默HIF-1α对喉癌中SLC7A11的具体作用,为临床诊断喉癌寻找新的肿瘤标志物和寻找潜在治疗的靶点。方法:培养UMSCC5喉癌细胞,转染HIF-1α-siRNA,Western blot筛选最佳转染效率,针对转染后的细胞CCK-8检测增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Transwell法检测细胞侵袭和迁移,Western blot检测HIF-1α和SLC7A11表达。结果:成功沉默HIF-1α的表达,其中HIF-1α-siRNA1组的转染效率最高、最稳定(P<0.05)。沉默HIF-1α可以显著抑制人喉癌UMSCC5细胞的增殖(P<0.05)、促进细胞凋亡(P<0.05)以及抑制喉癌细胞侵袭、迁移(P<0.05)。沉默HIF-1α可以明显下调SLC7A11蛋白表达量(P<0.05)。结论:沉默HIF-1α可抑制人喉癌UMSCC5细胞增殖、侵袭、迁移行为以及凋亡,同时抑制SLC7A11的表达。为将来基于HIF-1α进行喉癌临床分子靶向治疗提供新的思路和理论依据。

罗沙司他对腹膜透析大鼠腹膜HIF-1α/VEGF信号通路表达及纤维化的影响

目的评估罗沙司他(Roxadustat,ROX)对腹膜透析(Peritoneal dialysis,PD)大鼠腹膜组织的缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factors-1α,HIF-1α)以及血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,同时探讨其对腹膜纤维化程度的潜在作用及其机制。方法购入30只雄性SPF级大鼠,采用5/6肾脏切除法成功构建尿毒症腹膜透析大鼠模型27只,随机分为空白对照组、PD组、PD+ROX组(联合给予5 mg/kg ROX,每周3次),每组9只,持续给药1个月,在灌胃后6、12、24 h以及4周时,采用ELISA法检测腹膜透析液、血液中HIF-1α和VEGF的浓度。利用HE和Masson染色观察大鼠腹膜组织病理变化,WB和免疫组化检测腹膜组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达变化。结果HE和Masson染色观察各组大鼠腹膜组织,与空白对照组比较,PD组大鼠的腹膜组织出现了明显的纤维化和血管增生现象;与PD组相比,PD+ROX组大鼠的腹膜组织纤维化和血管增生现象明显改善。PD组腹膜组织中HIF-1α和VEGF蛋白表达水平显著高于空白对照组(P均<0.05),增加ROX干预后,PD+ROX组大鼠腹膜组织中HIF-1α和VEGF蛋白表达水平显著降低(P均<0.05)。PD+ROX组血清中HIF-1α和VEGF浓度均高于空白对照组和PD组(P均<0.05)。PD+ROX组腹膜透析液中HIF-1α和VEGF浓度均低于空白对照组和PD组(P均<0.05)。结论ROX治疗能有效降低腹膜组织及腹膜透析液中的HIF-1α和VEGF表达水平,缓解由葡萄糖腹膜透析引起的腹膜组织纤维化和血管增生。同时,血清中HIF-1α和VEGF水平的提升有助于改善腹膜组织的缺氧状况,抑制HIF-1α/VEGF信号通路,对抗腹膜纤维化。

姜黄素通过调控HIF-1α/miR-760/LTBP2机制轴抑制口腔黏膜下纤维化的效果研究

目的:探究姜黄素通过调控缺氧诱导因子-1α/微小RNA-760/潜在转化生长因子结合蛋白2(HIF-1α/miR-760/LTBP2)机制轴抑制口腔黏膜下纤维化的效果。方法:40只SD大鼠中随机取10只作为正常组,正常饲养不作处理;另30只大鼠采用槟榔碱诱导建立口腔黏膜下纤维化模型。将30只模型大鼠随机分为模型组、姜黄素组和阳性对照组,每组10只。姜黄素组和阳性对照组大鼠分别予以相应药物,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续给药8周。比较各组大鼠张口度、颊黏膜组织变化、纤维化标志物及HIF-1α/miR-760/LTBP2信号轴表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠张口度明显减小(P<0.05),颊黏膜评分、颊黏膜组织TGF-β1、ColⅢ、IFN-γ水平、miR-760 mRNA、HIF-1αmRNA、LTBP2 mRNA及HIF-1α、LTBP2蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组比较,姜黄素组和阳性对照组张口度均明显增大(P<0.05),颊黏膜评分、TGF-β1、ColⅢ、IFN-γ水平、miR-760 mRNA、HIF-1αmRNA、LTBP2 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05),且姜黄素组张口度大于阳性对照组(P<0.05),颊黏膜评分、TGF-β1、ColⅢ、IFN-γ、miR-760 mRNA、LTBP2 mRNA及HIF-1α、LTBP2蛋白表达均低于阳性对照组(P<0.05)。结论:姜黄素可能降低HIF-1α、miR-760、LTBP2表达,抑制口腔黏膜下纤维化。

超声监测心功能参数及SENP-1/HIF-1α通路变化预测OSAHS合并心脑血管疾病患者疗效的研究

目的:探讨超声监测心功能参数与血清SUMO特异性蛋白酶1(SENP-1)/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)通路表达水平的相关性及二者对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)合并心脑血管疾病患者疗效的预测价值。方法:回顾性选取2021年1月至2023年6月新疆医科大学第一附属医院收治的100例OSAHS合并心脑血管疾病患者,均采取持续气道正压通气(CPAP)治疗,根据治疗效果将其分为有效组(65例)和无效组(35例)。采用超声测定心功能参数,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清SENP-1/HIF-1α通路表达水平,比较两组治疗前后的心功能参数和SENP-1/HIF-1α通路水平。采用皮尔逊(Pearman)法分析治疗前心功能参数与SENP-1/HIF-1α通路水平的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估治疗前心功能参数与SENP-1/HIF-1α通路单独和联合检测对OSAHS合并心脑血管疾病疗效的预测效能。结果:有效组治疗后的左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室收缩末内径(LVESD)及心肌做功指数(Tei)指数均低于治疗前,且有效组低于无效组,差异有统计学意义(t=4.257、3.400、5.454,P<0.05);有效组治疗后的左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、二尖瓣舒张早期血流峰速度(E)与晚期血流峰速度(A)比值(E/A)均高于治疗前,且有效组高于无效组,差异有统计学意义(t=4.517、2.280、4.952,P<0.05)。有效组治疗后的血清SENP-1、HIF-1α水平均低于治疗前,且有效组低于无效组,差异有统计学意义(t=2.648、4.520,P<0.05)。Pearman相关性分析显示,LVEDD、LVESD及Tei指数与SENP-1呈正相关(r=0.523、0.572、0.513,P<0.05),与SENP-1/HIF-1α呈负相关(r=-0.508、-0.411、-0.479,P<0.05);LVEF、LVFS及E/A与HIF-1α呈正相关(r=0.453、0.511、0.426,P<0.05),LVEF、LVFS、E/A与SENP-1/HIF-1α呈负相关(r=-0.489、-0.479、-0.421,P<0.05)。心功能参数与血清SENP-1/HIF-1α通路联合检测预测OSAHS合并心脑血管疾病患者疗效的ROC曲线下面积(AUC)为0.909(95%CI:0.843~0.975)。结论:超声测定心功能参数与SENP-1/HIF-1α通路二者联合检测对OSAHS合并心脑血管疾病患者疗效具有较高的预测价值。

荜茇酰胺调控STAT3/HIF-1α通路诱导乳腺癌和乳腺细胞凋亡的机制

目的:探究荜茇酰胺对乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7和正常乳腺细胞MCF-10A增殖、凋亡和细胞周期的影响及其潜在的分子机制。方法:采用不同浓度荜茇酰胺干预MDA-MB-231、MCF-7、MCF-10A细胞,MTT法检测细胞增殖能力;细胞克隆形成法检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;Western Blot检测细胞中cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyclin D1、p53、p-JAK2、p-STAT3、HIF-1α、Survivin蛋白表达。结果:荜茇酰胺可呈浓度依赖性抑制MDA-MB-231、MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,而对MCF-10A细胞无明显抑制作用;荜茇酰胺可下调MDA-MB-231细胞p53、Bcl-2、Cyclin D1、p-STAT3、Survivin、HIF-1α及MCF-7细胞p53、p-STAT3、Survivin、HIF-1α蛋白表达,上调MDA-MB-231细胞cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达。结论:荜茇酰胺能抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7增殖并诱导其凋亡,其机制可能与负向调控STAT3/HIF-1α通路有关。

补肾活血方对复发性流产患者血清VEGF、HIF-1α、TGF-β_(1)、sflt-1影响研究

目的 研究补肾活血方对APL阳性RSA患者外周血VEGF、HIF-1α、TGF-β_(1)、sflt-1、miR-423-5p蛋白表达量影响。方法 选取APL阳性RSA患者60例,分别于孕前给予药物调理。其中观察组服用补肾活血方,对照组服用肠溶阿司匹林,均治疗3个月。两组治疗前后分别检测血清VEGF、HIF-1α、TGF-β_(1)、sflt-1、miR-423-5p蛋白表达及中医证候积分。结果 两组治疗后VEGF蛋白表达均显著升高;与对照组比较,观察组VEGF蛋白表达量显著高于对照组;两组治疗前后,HIF-1α蛋白表达量均无显著性差异;治疗后两组TGF-β1蛋白表达显著升高,与对照组比较,观察组TGF-β1蛋白表达显著升高;治疗后两组sflt-1蛋白表达显著降低;与对照组比较,观察组sflt-1蛋白表达显著降低。两组治疗后miR-423-5p相对表达量均降低,观察组优于对照组(P<0.05)。观察组中医证候疗效比较,治疗组优于对照组(P<0.05)。结论 补肾活血方应用于RSA患者孕前调理,可以通过上调VEGF、TGF-β_(1)蛋白表达,下调sflt-1、miR-423-5p蛋白表达等途径,改善APL对子宫内膜的不良影响;同时可有效降低中医证候积分,从而降低再次妊娠后流产的发生率。

消瘀泄浊饮对糖尿病肾病小鼠肾脏足细胞凋亡及HIF1α表达的调控作用

[目的]探讨消瘀泄浊饮对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)小鼠肾脏足细胞凋亡的保护作用及对低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF1α)的影响。[方法]选用6只db/m小鼠为阴性对照组,18只db/db小鼠随机分为DKD模型组、低剂量消瘀泄浊饮组、高剂量消瘀泄浊饮组,每组6只。灌胃12周后,检测尿液中尿蛋白、β_(2)-微球蛋白(β_(2)-microglobulin,β_(2)-MG)、尿白蛋白/肌酐(albumin/creatinine ratio,Acr)、尿β_(2)-微球蛋白/肌酐(β_(2)-microglobulin/creatinine ratio,β_(2)-MG/Ucr)及血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、白蛋白(albumin,Alb)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)的水平。分离肾组织,光镜及电镜下观察肾组织病理变化;组织匀浆后用实时聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测HIF1α、nephrin mRNA水平。[结果]与阴性对照组比较,DKD模型组小鼠的尿蛋白、尿β_(2)-MG、Acr、β_(2)-MG/Ucr,血清TG、TC、BUN、Scr水平升高(P<0.01),血清Alb下降(P<0.01);肾小球体积增大,毛细血管袢呈分叶状,系膜细胞及基质增生,间质炎症及纤维化程度加重,足突融合增加,基底膜增厚,足细胞凋亡增加;肾组织HIF1αmRNA表达升高(P<0.01),nephrin mRNA表达下降(P<0.01)。与DKD模型组比较,高、低剂量消瘀泄浊饮组的尿蛋白、尿β_(2)-MG、Acr、β_(2)-MG/Ucr,血清TG、TC、BUN、Scr水平下降(P<0.01),血清Alb水平升高(P<0.01);肾小球、肾间质、足突病变明显改善,足细胞凋亡减少;肾组织HIF1αmRNA表达下降(P<0.01),nephrin mRNA表达升高(P<0.01)。高、低剂量消瘀泄浊饮组间尿蛋白、β_(2)-MG、Acr、β_(2)-MG/Ucr,血清TG、TC、BUN、Scr、Alb水平和肾组织HIF1α、nephrin mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]消瘀泄浊饮能改善DKD小鼠尿蛋白、肾功能及肾脏结构病变、足细胞凋亡等指标,其可能通过调节HIF1α表达发挥作用。

电针通过HIF-1α和SOX-9维持兔膝骨关节炎软骨稳态及抗炎机制研究

目的观察电针对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型软骨缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、性别决定区Y框蛋白9(SRY-box transcription factor 9,SOX-9)、基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)、Ⅱ型胶原蛋白和炎症因子表达的影响,探讨电针干预改善KOA软骨稳态以及抗炎的可能作用机制。方法采用随机数字表法将实验兔分为对照组、模型组和电针组,每组10只。对模型组和电针组实验兔的右膝关节采用木瓜蛋白酶制造兔KOA模型。制模完成后,电针组给予电针犊鼻及内膝眼穴干预,每次30 min,每天1次,共14 d。模型组每天在固定器上固定15 min。对照组右膝关节注射等量0.9%氯化钠溶液。使用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)检测软骨组织的病理情况,原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)检测软骨细胞的凋亡情况,免疫组化检测软骨中Ⅱ型胶原蛋白的表达情况,酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测软骨中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的水平,蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)检测HIF-1α、SOX-9、MMP-1和MMP-13的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测HIF-1α、SOX-9、MMP-1和MMP-13的mRNA水平。结果HE染色结果显示,与对照组相比,模型组软骨细胞数量明显减少,细胞核皱缩,基质染色呈浅色,潮线不完整,而电针组较模型组显著改善;改良Mankin's评分结果显示,模型组较对照组显著升高,电针组较模型组显著降低;TUNEL结果显示,电针组软骨细胞凋亡率显著低于模型组;免疫组化结果显示,与模型组相比,电针组的Ⅱ型胶原蛋白表达明显升高;ELISA结果显示与模型组相比,电针组的TNF-α、IL-1β表达明显降低;WB和qRT-PCR结果显示,与对照组相比,模型组的HIF-1α和SOX-9蛋白表达水平和mRNA水平显著降低(P<0.05),与模型组相比,电针组显著升高(P<0.05)。结论电针可能通过上调HIF-1α和SOX-9的表达,减少MMP-1、MMP-13、TNF-α、IL-1β的表达,增加Ⅱ型胶原蛋白的形成,从而发挥缓解软骨损伤、减少炎症反应的作用。

紫癜肾煎剂对过敏性紫癜性肾炎大鼠PI3K/AKT及HIF-1α/VEGFA信号通路的影响

目的 观察紫癜肾煎剂对过敏性紫癜性肾炎(Henoch Schonlein purpura nephritis, HSPN)模型大鼠的治疗作用,并基于PI3K/AKT和HIF-1α/VEGFA信号通路探讨其作用机制。方法 随机选7只SD大鼠分为正常对照组,其余大鼠应用“BSA+LPS+CCL4”联合干姜建立HSPN大鼠模型,12周后随机抽取正常对照组和造模组的大鼠各1只,取肾组织固定包埋,采用免疫荧光检测造模组大鼠肾组织中IgA沉积并伴有蛋白尿,正常组无上述表现,提示造模成功。将造模成功的HSPN大鼠模型随机分模型组、紫癜肾煎剂低、高剂量(6.10、24.40 g/kg)组和西药(3.93 mg/kg)组,每组6只。给药结束后,采用溴甲酚紫法测定尿蛋白浓度,计算24 h尿蛋白定量;各组大鼠肾组织病理和免疫荧光检测;采用Western blotting法检测SD大鼠肾组织PI3K、AKT、HIF-1α、VEGFA蛋白表达情况。结果 紫癜肾煎剂可以显著降低24 h尿蛋白(P<0.05),减少肾小球系膜区免疫复合物沉积;与模型组比较,中药方组和西药组大鼠肾组织PI3K、AKT、HIF-1α、VEGFA蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 紫癜肾煎剂能减少HSPN大鼠24 h蛋白尿,改善肾功能及肾组织病理损伤,延缓HSPN病情进展,其机制可能与调控PI3K/AKT和HIF-1α/VEGFA信号通路有关。

WIN55212-2通过调控mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路抑制糖酵解并减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的:探究大麻素受体激动剂WIN55212-2(WIN)对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)的影响,并探讨其通过糖酵解发挥作用的可能机制。方法:采用腹腔注射脂多糖(LPS)创建小鼠脓毒症ALI模型。将雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照(control)组、LPS组(腹腔注射10 mg/kg LPS)、LPS+WIN组(注射LPS前30 min腹腔注射1 mg/kg WIN)和LPS+WIN+MHY1485[哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化剂]组(LPS造模前1 d腹腔注射10 mg/kg MHY1485,并在造模前30 min腹腔注射1 mg/kg WIN和10 mg/kg MHY1485),每组6只。造模24 h后取材,计算肺指数;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA检测肺组织炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-10表达水平,以及血清乳酸和乳酸脱氢酶A(LDHA)水平;Western blot检测mTOR/缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶3(PFKFB3)信号通路相关蛋白水平。结果:相比于control组,LPS组小鼠肺指数增加,HE染色显示肺组织受损,肺组织中IL-10水平降低(P<0.05),IL-1β水平升高(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平升高(P<0.05),磷酸化mTOR(p-mTOR)、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平升高(P<0.05)。相较于LPS组,LPS+WIN组肺指数降低(P<0.05),HE染色显示肺组织受损减轻,肺组织IL-1β水平降低(P<0.05),IL-10水平升高(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平降低(P<0.05),p-mTOR、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平降低(P<0.05)。相较于LPS+WIN组,LPS+WIN+MHY1485组肺指数增加,HE染色显示肺组织受损,肺组织IL-1β水平升高(P<0.05),IL-10水平降低(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平升高(P<0.05),p-mTOR、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平升高(P<0.05)。结论:WIN55212-2可以减轻脓毒症小鼠ALI,其机制可能是通过调控mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路,抑制糖酵解,减轻炎症反应。