小鼠胚胎干细胞来源的HPP-CFC体外和体内造血活性分析

小鼠的造血系统起源于胚胎发育 7d的卵黄囊胚外中胚层 ,研究表明胚胎干细胞 (Embryonicstemcells ,EScells)体外分化模型能够模拟卵黄囊造血的发生过程 ;此外 ,诱导ES细胞体外定向造血细胞分化对于建立治疗性克隆以治愈多种血液病具有重要的研究和应用价值。高增殖潜能集落形成细胞 (Highproliferativepotentialcolony form ingcells ,HPP CFC)是体外培养的最原始的多潜能造血前体细胞之一。本研究发现 :小鼠ES细胞在体外分化 5～14d形成的拟胚体中含有HPP CFC。其再生潜能与胚胎期 9d的卵黄囊来源的HPP CFC相似 ,与骨髓来源则不同。RT PCR分析表明 :ES细胞来源的HPP CFC表达与造血干细胞增殖相关的特异性转录因子和多种造血生长因子受体。但分化 12d的拟胚体细胞和HPP CFC集落细胞移植受致死剂量照射的小鼠不能产生典型的脾结节。因此 ,ES细胞来源的HPP CFC在体外和体内造血活性的差异值得更深入地研究。

骨髓高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)分化产生巨核细胞的研究

本研究用正常和5-FU处理的小鼠骨髓细胞,作血浆凝块培养,对一种称作HPP-mCFU-MK的HPP-CFC亚型细胞集落进行体外追踪。发现HPP-mCFU-MK不但能形成符合HPP-CFC标准的巨大集落,而且能产生大量的巨核细胞。该巨大集落的生长,依赖添加再生障碍性贫血猪血清(AAS)或合用三种以上的基因重组造血生长因子而增强,在体外不被TGF-β1和PF4抑制。原代培养12天所得到的HPP-mCFU-MK集落,用AAS刺激可再次形成集落。该结果提示HPP-mCFU-MK是小鼠骨髓中多能相细胞的一个亚型。

银屑病患者骨髓造血细胞体外增殖活性研究

目的进一步了解银屑病患者骨髓造血细胞是否有异常。方法采用密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照组骨髓单一核细胞,然后在含有甲基纤维素的半固体细胞因子培养体系中进行体外高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)、粒-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)及红系集落形成单位(CFU-E)集落形成实验,培养一定时期后计数集落。结果与正常对照比较,银屑病患者的HPP-CFC及CFU-GM的集落形成数显著减少,而CFU-E形成的集落数无统计学意义。结论银屑病患者骨髓造血细胞体外增殖能力明显降低,这种异常的造血细胞可能在银屑病的免疫发病机制中发挥一定作用。

人胎盘CD133^+、CD133^-细胞组份中高增殖潜能集落形成细胞及其表型特征的初步探讨

目的研究人胎盘CD133+、CD133-细胞亚群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)频率及表型特征。方法采用机械法制备人胎盘组织(PT)游离细胞悬液,用Histopaque-1077分离出单个核细胞(MNCs),经磁式分选(MACS)分离纯化CD133+和CD133-细胞。将分选的CD133+和CD133-细胞分别使用H4435培养基培养4wk后观察HPP-CFC集落形成能力,用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析。结果培养4wk后,PT-CD133+、CD133-细胞生成的HPP-CFC集落分别为32.4±11.2/5×103、2.0±2.3/5×103,前者细胞中HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01);PT-CD133+、CD133-细胞培养至28d时CD133+CD34+、CD133+CD34-和CD133-CD34+亚型均比培养前减少。结论人胎盘组织CD133+与CD133-细胞群中均存在HPP-CFC,但CD133+细胞群中的HPP-CFC明显多于CD133-细胞群,说明胎盘CD133+细胞群中存在更多的早期HSPC。

体外培养扩增的人脐血CD34^+细胞形成HPP-CFC的能力

目的 :评价CD34 +细胞体外扩增时高增殖潜能集落形成细胞 (HPP CFC)的变化。方法 :利用mini MACS分离脐血CD34 +细胞 ,流式细胞仪 (FACS)测定细胞纯度 ( 86%～ 95% )。应用含rhSCF、rhIL 3、rhIL 6和rhGM CSF的培养体系扩增CD34 +细胞。分别于培养的第 1,2和 4周收取细胞进行HHP CFC测定 ,测试体系为含重组人SCF、GM CSF、IL 3、IL 6、EPO等细胞因子的半固体甲基纤维素。结果 :测试体系中加入单个细胞因子不能产生HPP CFC ,含rhIL 3和rhGM CSF体系产生的集落小且主要为巨噬细胞集落 ,由所有因子组成的体系产生的集落大而致密 ,包含粒系 3种类型。此外 ,尽管细胞总数显著增加 ,扩增的CD34 +细胞HPP CFC形成率随培养时间的延长而减少。结论 :本方法显示 ,CD34 +细胞体外扩增中可以保持HPP CFC数量。

锂对小鼠高增殖潜能集落形成细胞和粒巨噬系祖细胞体外增殖的影响

本文观察了锂对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨髓高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰ－ＣＦＣ）和粒巨噬系祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ体外增殖的影响。ＨＰＰ－ＣＦＣ集落由ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＷＥＨＩ３条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ，含有ＩＬ－３）及Ｌ９２９条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ，含有Ｍ－ＣＳＦ）所支持，而ＣＦＵ－ＧＭ由ＷＥＨＩ３－ＣＭ所支持。结果显示，ＬｉＣｌ浓度在０．４－２ｍｍｏｌ／Ｌ时呈现剂量依赖性抑制ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖；而在０．４－１ｍｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内，则对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖起剂量依赖性促进作用。这些结果提示ＬｉＣｌ对ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ的作用不同。