烟实夜蛾滞育蛹和非滞育蛹生化特性的比较研究

测定了烟实夜蛾滞育蛹和非滞育蛹甘油、血淋巴蛋白、糖原、脂肪等含量的变化.结果表明,在预蛹阶段,滞育蛹和非滞育蛹的甘油含量差异不显著,3日龄和5日龄的滞育蛹甘油含量显著高于非滞育蛹;滞育蛹血淋巴蛋白含量略高于非滞育蛹,但两者之间的差异不显著;滞育预蛹的糖原显著高于非滞育预蛹,但发育至3日龄时急剧下降,发育至5日龄时糖原含量仍保持在3日龄的水平,非滞育个体的糖原含量从预蛹发育到3日龄蛹时基本保持在一个水平,而发育至5日龄时,糖原含量急剧下降;滞育蛹脂肪含量高于非滞育蛹,二者在预蛹期的差异达显著水平.

柞蚕5龄幼虫血淋巴中蛋白质和糖类物质的动态变化

为探讨柞蚕壮蚕期体内物质代谢对滞育生理的影响,研究了不同蚕季的柞蚕5龄幼虫血淋巴中蛋白质和糖类物质含量的动态变化。结果表明:春、秋期柞蚕5龄幼虫血淋巴中总糖、海藻糖和蛋白质含量均随着生长发育而增加,总糖和海藻糖在5龄末期稍有下降;秋期柞蚕血淋巴中的总糖含量略高于春期柞蚕,海藻糖含量二者大致相似,而蛋白质含量却高于春期柞蚕,并且显示出特征蛋白质谱带。推测秋蚕期柞蚕体内物质的变化与发生滞育有关。

球孢白僵菌对葱蝇成虫血淋巴蛋白质及游离氨基酸的影响

【目的】球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是一种重要的昆虫病原真菌,在毁灭性害虫葱蝇(Delia antiqua)的防治上具有重大潜力。研究旨在明确球孢白僵菌侵染葱蝇成虫后,血淋巴中蛋白质和游离氨基酸的变化及其致病的关系,揭示球孢白僵菌对葱蝇的生理调控机制。【方法】基于球孢白僵菌对葱蝇成虫的室内生物测定的研究基础,使用菌株GZGY-1-3,采用点滴法,用浓度为1×10~8个孢子/mL的孢子悬浮液处理葱蝇初羽化成虫,采用BCA法及高效液相色谱——串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定球孢白僵菌侵染不同时间(12、24、36、48、60和72 h)后,侵染组与对照组葱蝇成虫血淋巴中蛋白质总量及20种游离氨基酸含量;分析不同处理时间蛋白质和游离氨基酸总量和重要氨基酸的含量变化。【结果】球孢白僵菌侵染12—36 h,侵染组与对照组血淋巴蛋白浓度变化趋势相近,均呈先下降后小幅度上升趋势。但侵染组血淋巴中蛋白含量高于对照组,侵染24 h后,侵染组血淋巴内蛋白质是对照组的1.20倍;侵染48 h后,侵染组中蛋白含量下降到最低,仅为对照组的0.83倍。侵染60—72 h,血淋巴蛋白含量升高。葱蝇成虫血淋巴中共检测出20种游离氨基酸。侵染12—36 h,葱蝇成虫血淋巴中游离氨基酸总量下降;侵染36 h,游离氨基酸总量下降到最低,仅为对照组的0.63倍;侵染48—60 h,游离氨基酸总量持续上升;侵染60 h后,游离氨基酸总量上升到最高,为对照组的2.01倍;感染72 h,游离氨基酸总量下降。侵染后,血淋巴内游离氨基酸种类没有变化,各种游离氨基酸的含量波动差异较大。球孢白僵菌对血淋巴重要氨基酸的含量变化有显著影响。【结论】球孢白僵菌的侵染引起葱蝇成虫血淋巴中蛋白质和游离氨基酸的一系列变化,严重阻碍了葱蝇成虫的正常生理活动,在葱蝇生物防治中具有应用潜力。

柞蚕微孢子虫侵染后柞蚕5龄雌雄个体血淋巴蛋白质含量和组成的变化及差异分析

以柞蚕5龄幼虫为材料添食柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi,Np),通过测定与分析不同性别5龄幼虫血淋巴蛋白质含量和组成变化的差异,为探究柞蚕对柞蚕微孢子虫感染的免疫应答提供依据。感染柞蚕微孢子虫的不同性别柞蚕5龄幼虫的血淋巴蛋白质含量随蚕体发育进程出现不同的变化:雌性个体与雄性个体分别在添食Np后24 h与48 h,血淋巴蛋白质含量极显著增加(P<0.01),且持续至添食后96 h,其中雌性个体的血淋巴蛋白质含量又极显著高于雄性个体(P<0.01);在添食Np后120 h,雌、雄个体的血淋巴蛋白质含量与对照组无显著性差异(P>0.05)。SDS-PAGE分析表明,添食Np后的柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质组成与对照组基本一致,均显示出20条分子质量在20.1～97.2 kD的蛋白条带,其中雌、雄个体在添食后96 h,大小约44 kD的蛋白条带明显加深,大小约28 kD的蛋白条带雌性个体在添食后144 h、雄性个体在添食后120 h明显加深,且雄性个体在添食后120～168 h大小约42 kD的蛋白条带明显加深,但在添食后192 h与对照组无明显差异。研究结果说明Np侵染后,柞蚕5龄幼虫血淋巴蛋白质的含量及组成均产生了一定的变化,并且雌雄个体间的变化存在差异。

前裂长管茧蜂寄生行为对桔小实蝇幼虫生理指标的影响

通过观察测定了桔小实蝇幼虫生长发育过程中血淋巴蛋白种类和血细胞的变化以及前裂长管茧蜂的寄生行为对桔小实蝇幼虫各项生理指标的影响。结果表明:不同日龄桔小实蝇幼虫的血细胞浓度随着虫龄的增加呈显著上升趋势,由2龄的16.53×106cells/mL,到3龄的30.14×106cells/mL直至蛹前期的35.94×106cells/mL,但血淋巴蛋白种类没有明显变化。和未寄生幼虫相比,寄生后的幼虫各类型血细胞的浓度均下降,但差异均不显著;血淋巴蛋白种类无明显增减,但浓度有所变化;寄生4 h后血淋巴蛋白质浓度显著降低,接近22 h时升高,至化蛹前期浓度再次下降;寄生行为使幼虫的发育历期从8 d延长至9～11d;4日龄幼虫在被寄生后的第4 d起体重显著高于未被寄生的桔小实蝇幼虫。

柞蚕感染微孢子虫后血淋巴免疫应答蛋白质的分离与鉴定

为了解柞蚕Antheraea pernyi感染微孢子虫初期血淋巴内免疫系统及刺激应答相关蛋白质种类,本研究以柞蚕5龄雌幼虫的起蚕(结束4眠,刚完成蜕皮的幼虫)添食柞蚕微孢子虫Nosema pernyi为材料,对感染后血淋巴利用SDS-PAGE进行分离后,利用LC-MS/MS质谱技术和蛋白质组学分析对差异蛋白质条带进行鉴定。结果显示:感染微孢子虫144h后,血淋巴中分子量约为44kD(AP44)和28kD(AP28)的蛋白质条带表达量增高。质谱分析AP28和AP44蛋白质条带样品,共鉴定117个不重复蛋白质,其中2个样品共有蛋白质12个,AP28独有蛋白质52个,AP44独有蛋白质53个。对质谱数据利用COG数据库进行搜寻鉴定,显示AP28和AP44的鉴定蛋白质中涉及柞蚕免疫系统及刺激应答生物过程的蛋白质共有29个,其中AP28中包括热激蛋白、泛素样蛋白、泛素结合酶E2、保幼激素环氧水解酶、微管结合蛋白、溶菌酶、ADP-核糖基化因子、防御蛋白、肽聚糖识别蛋白等15个,AP44中包括DRK、酚氧化酶原、类免疫球蛋白等10个;二者共有热激蛋白hsp21.4、酚氧化酶原、抗菌肽等4个。本研究结果可以为今后研究柞蚕对微孢子虫的免疫应答及防御机制提供参考。

灭幼脲对云斑天牛成虫血淋巴蛋白质的影响

用灭幼脲处理补充营养寄主植物连续饲养云斑天牛成虫，在产卵初期和中期，处理雌虫血淋巴蛋白质含量明显下降。在产卵末期，处理雌虫血淋巴蛋白质含量则高于对照组。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明：灭幼脲处理后血淋巴蛋白质种类无明显变化。灭幼脲对蛋白质含量的影响因蛋白质的种类而异，对雌性特异性蛋白（迁移率２．５％～１２．６％）含量有明显抑制作用，对迁移率３３．１％～３６．７％的蛋白质谱带有促进作用。结果表明：灭幼脲对云斑天牛成虫具有类似于保幼激素的效应，处理成虫血淋巴蛋白质含量变化则是这一效应的结果。

德国小蠊血淋巴和卵巢蛋白的分析

目的 :了解敏感品系 (S)和抗性品系 (R)德国小蠊血淋巴蛋白和卵巢蛋白的组成。方法 :聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)。结果 :(1)雌虫血淋巴蛋白显带分别为S 14、Rc 15、Rp 15、Rz 15条 ,它们有 2条相同的主带 ,迁移率分别为 0 .18、0 .2 9;R品系比S品系多 1条迁移率为 0 .14的谱带 ;(2 )雄虫血淋巴蛋白显带分别为S 9、Rc 10、Rp 10、Rz 10条 ,它们有 1条相同的主带 ,迁移率为 0 .3 2 ;R品系比S品系多 1条迁移率为 0 .6的谱带 ;(3 )卵巢蛋白显带均为 13条 ,但迁移率相同的谱带 ,R品系比S品系的染色淡、宽度窄 ,其相同的主带有 1条 ,迁移率为 0 .2 7。结论 :R品系增加的血淋巴蛋白带可能与抗性有关 ,某些卵巢蛋白带量的减少可能是造成繁殖率、孵化率低的原因。

九香虫血淋巴及其纯化蛋白抑菌活性的研究

对九香虫AsporgopuschinensisDallas血淋巴及其血淋巴蛋白质分离物的抗菌活性进行了研究,抗菌活性检测指示菌为大肠杆菌Escherichiacoli和金黄色葡萄球菌Staphilocalliesacereus。测定结果表明,九香虫血淋巴及其离心上清液都具有明显的抗菌活性。用凝胶过滤法从血淋巴蛋白分离提纯获得一种小分子肽,SDS PAGE电泳为单一带,分子量约为1～1 4 4kD。该小分子蛋白对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有抑菌作用,与血淋巴对2种细菌的抗菌性一致,表明其是九香虫血淋巴中具抗菌作用的主要物质之一。

家蚕对入侵蛹虫草菌的防御反应研究

为探明家蚕对入侵虫草菌防御反应,用从云南野生蛹虫草中分离的M05菌株,以菌液涂抹方式侵染云蚕7家蚕品种5龄第2天幼虫,对菌株入侵家蚕体壁部位显微观察,对家蚕体液免疫因子血淋巴酚氧化酶、血淋巴蛋白质含量进行测定。结果表明,家蚕气门是M05菌株入侵并发生体壁防御反应的主要部位;菌株侵入体腔,酚氧化酶防御因子被启动,酶活力增强且最大值达0.77 U;家蚕启动防御反应,血淋巴中蛋白质含量增加,当菌株侵入后消耗或破坏了血淋巴中部分蛋白质,血淋巴中蛋白质含量降低。

斑节对虾血淋巴低丰度蛋白双向电泳技术体系的优化

文章探索并优化了斑节对虾（Penaeus monodon）血淋巴双向电泳技术体系，对斑节对虾血淋巴总蛋白抽提方法进行优化，减小高丰度蛋白的影响；对双向电泳过程各步骤，如IPG胶条pH范围的选择、等电聚焦程序、上样量等进行了优化，得到高分辨率的2-DE图谱，用PDQuest软件进行了初步分析。结果表明，用PEG 6000能更快捷有效地去除血淋巴中的高丰度蛋白，增加低丰度蛋白的点数及浓度；在抽提蛋白过程中，利用预冷的80%丙酮洗涤，在一向电泳过程中设置100 V低压除盐，能更有效地去除蛋白中的盐分；采用18 cm、pH 3~10 NL 的中型胶条，能更好地显示低丰度蛋白点的分布；被动水化上样300 μg结合硝酸银染色方法，能有效提高双向电泳图谱中蛋白点的分离度和分辨率。该试验为斑节对虾及其他甲壳动物血淋巴蛋白质组学相关研究提供了稳定可重复的研究方法。

不同柞蚕品种幼虫期血淋巴雌特异蛋白的研究

对10个柞蚕品种的雌特异蛋白进行了测定,同时对血淋巴雌特异蛋白含量与若干经济性状的相关性进行了分析。结果表明,柞蚕雌特异蛋白含量与某些经济性状密切相关。因此,柞蚕雌特异蛋白含量可以作为一项生理指标,在柞蚕育种中加以应用,对某些经济性状进行早期预测或选择。

中国对虾血淋巴蛋白质、葡萄糖含量的研究

于1992－1993年5月和10月，在胶州湾捕捞中国对虾亲虾，9月在莱州和胶南采集的人工养殖中国对虾，采用双缩肥法测定其血淋巴中的血清总蛋白含量，用0－TB法测定血清葡萄糖含量。并研究注射灭菌海水、海洋弧菌后，对中国对虾血清总蛋白含量和血清葡萄糖含量的影响规律。结果表明，总蛋白含量秋天正在发育期的亲虾为132mg／ml，春天已产卵亲虾的为90mg／ml；向中国对虾腹部肌肉分别注射灭菌海水、弧菌在24,48h后，从（表面未发现异常变化的）中国对虾围心腔抽取血淋巴，测定其血清蛋白含量和葡萄糖含量，未发现明显差异。但已感染黑斑病的中国对虾，其血清蛋白含量为54mg／ml，血清葡萄糖含量为641μg／ml，说明感染黑斑病的虾，血清蛋白含量明显减少，而葡萄糖的含量急剧增大：这可以作为中国对虾感染黑斑病的一种血液化学监测指标。

家蚕追寄蝇寄生蚕体的血液蛋白质差异表达分析及质谱鉴定

由家蚕追寄蝇(Exorista sorbillans)寄生于家蚕幼虫体壁与肌肉间引起的多化性蚕蛆病对蚕业生产危害极大。基于家蚕血液在蚕体基础代谢、生长发育及先天免疫中的重要功能,采用双向电泳(2-DE)技术检测被家蚕追寄蝇寄生的家蚕5龄幼虫至蛹期第2天的血液蛋白质表达变化,并对表达水平具有显著差异的蛋白点进行质谱鉴定,明确家蚕在受到追寄蝇感染时与免疫应答以及生理、病理变化过程有关的血液蛋白质。在被追寄蝇寄生的蚕体血液中共检测到24个具有显著表达差异的蛋白点,表达上调的蛋白点有17个,包括在家蚕先天免疫系统中发挥重要作用的肽聚糖识别蛋白-S1、C-型凝集素-10和酚氧化酶-2等;表达下调的蛋白点有7个,包括与家蚕生长发育、体内物质代谢等生物学过程相关的蛋白质。血液蛋白质的表达变化提示,当蚕体受到追寄蝇感染时其先天免疫系统被激活,生长发育和体内物质代谢等也受到影响。

急性高渗胁迫对中华绒螯蟹雄蟹组织中可溶性蛋白质、血蓝蛋白、血糖与肝糖原含量的影响

实验以淡水(0.3‰)处理组为对照,研究了急性高渗胁迫(盐度16‰和30‰)对中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)雄蟹血淋巴和肝胰腺中可溶性蛋白质、血蓝蛋白、血糖及肝糖原含量的影响。结果显示,与对照组相比,进入16‰及30‰盐度后,蟹的血淋巴中可溶性蛋白质含量从6—48h显著降低(P<0.05),至72h时显著增加(P<0.05),而机体肝胰腺的可溶性蛋白质含量从12h开始至96h显著降低(P<0.05);血蓝蛋白含量在前24h显著降低(P<0.05),48h开始显著升高(P<0.05);肝糖原含量在6—96h与对照组相比有显著的降低(P<0.05);16‰盐度组蟹的血糖含量在24—48h时显著下降(P<0.05),到72h开始逐渐恢复(P>0.05),而30‰盐度组其血糖含量早在6—12h时就有显著的下降(P<0.05),到24h则开始逐渐升高。研究表明,在急性盐度胁迫下,糖类和蛋白质对中华绒螯蟹渗透压调节起重要的作用,其优先利用糖类的分解获得所需的能量,其中盐度越高,机体内葡萄糖的消耗越快,血糖水平的恢复也相应较快。对蛋白质的利用稍次之,机体可利用蛋白质的分解获得其渗透压调节的效应物游离氨基酸以维持渗透压平衡。

中华绒螯蟹蜕皮过程中血淋巴主要生化成分的变化

利用生物化学及原子吸收方法测定了中华绒螯蟹蜕皮过程中血淋巴主要生化成分的变化。研究结果显示:在中华绒螯蟹蜕皮前期,血淋巴中总糖、总脂、总蛋白和4种无机离子(Ca2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+)的含量都呈上升趋势。总糖含量在D0期达到高峰,Ca2+、Cu2+和Zn2+含量于D1期达到高峰,总脂和总蛋白含量于D3-4期达到高峰;蜕皮后,总糖、Ca2+、Mg2+含量升高,总脂、总蛋白和Cu2+、Zn2+含量开始降低。中华绒螯蟹蜕皮过程中血淋巴生化成分的变化与蜕皮周期密切相关。

斯氏按蚊血淋巴蛋白浓度的检测及其意义

目的 了解斯氏按蚊成蚊在不同食源条件下血淋巴蛋白浓度的变化。 方法 挤压法分别收集 4组 (吸蔗糖水组、吸正常血组、吸感染血组和吸硝喹组 )斯氏按蚊成蚊血淋巴 ,采用Bradford法测定血淋巴蛋白浓度 ,并进行Ex cel自动分析。 结果 吸血感染约氏疟原虫 8d后 ,吸感染血组血淋巴蛋白浓度高于吸蔗糖水组和吸正常血组 ,平均分别为 4.43 6、3 .0 80和 3 .0 92 μg/μl ,通常硝喹组浓度 ( 2 .2 64 μg/μl)低于吸感染血组。 结论 吸硝喹组蚊体内血淋巴蛋白浓度下降 ,提示蚊血淋巴蛋白可能参与疟原虫卵囊的黑化包裹反应。

桑天牛成虫血淋巴蛋白质组分中除虫脲的检测

为探明除虫脲(DFB)在桑天牛(Apriona germari)血淋巴中的存在形式,用喷施了DFB的构树(Broussonetia papyrifera)枝条喂养桑天牛雌虫,采用高效液相色谱法检测其血淋巴中各组分DFB的质量浓度。结果表明:三氯乙酸处理的解冻血淋巴的上清液、蛋白质和血凝块中均检出DFB;加入PBS解冻的血淋巴经硫酸铵处理后,蛋白质组分中DFB检出量约为上清液中的3倍;加入1%柠檬酸钠的冷冻血淋巴和新鲜血淋巴经硫酸铵处理后,蛋白质组分中DFB检测量分别为171.41、109.47μg/L,两者上清液中均未检出DFB。由此分析得出,DFB在桑天牛雌虫血淋巴中可能主要以与蛋白质结合形式存在。

Bt+灭幼脲混剂对美国白蛾幼虫中肠蛋白酶、血淋巴蛋白的影响

【目的】通过测定Bt、灭幼脲及其混剂对美国白蛾4龄幼虫体内中肠有关生化指标的影响,探讨用混剂防治幼虫的增效机制。【方法】分别将Bt、灭幼脲及其混剂设置为5个浓度;采用生化测定法分别测定药剂对美国白蛾4龄幼虫血淋巴蛋白和中肠蛋白酶活力的影响。【结果】5个浓度的Bt、灭幼脲及其混剂处理4龄幼虫后,混剂对幼虫中肠蛋白酶、血淋巴蛋白的抑制效果均优于单剂。混剂处理6 h后,幼虫体内中肠蛋白酶活力低于对照,各浓度处理间差异显著;24 h后各浓度处理的幼虫中肠蛋白酶的活性较对照明显降低,且与处理浓度呈负相关关系,说明Bt+灭幼脲混剂处理明显抑制白蛾4龄幼虫的中肠蛋白酶活力,进而直接影响到幼虫的取食。混剂处理美国白蛾4龄幼虫6 h后,幼虫的血淋巴蛋白含量分别为11.8,18.0,19.7,23.4和13.9 mg·m L-1,高于对照的14.0 mg·m L-1,处理组血淋巴蛋白含量增加,说明美国白蛾4龄幼虫启动防御反应;处理12 h后,血淋巴中部分蛋白质被消耗或破坏,其含量降低明显,且与处理时间呈负相关关系;至72 h后处理组幼虫体内血淋巴蛋白含量分别为6.2,8.9,2.3,3.2和9.0 mg·m L-1,均明显低于72 h对照的13.3 mg·m L-1,与对照相比下降显著(P<0.01)。【结论】Bt+灭幼脲混剂对白蛾4龄幼虫体内中肠蛋白酶活力和血淋巴蛋白的抑制作用均大于单剂,混剂有较强的增效作用,可加速白蛾4龄幼虫的死亡,提高死亡率。

热激条件下家蚕血液30K蛋白磷酸化研究

本试验旨在研究热激条件下家蚕血液磷酸化蛋白的表达变化,为深入研究其功能提供参考。试验设对照组和热激组,每组选取五龄第3天家蚕幼虫各30头(雌雄各占1/2),在40℃条件下分别热激处理0、10 min,然后利用双向电泳、Pro-Q Diamond染色、质谱技术对表达差异的磷酸化蛋白进行研究。结果表明:1)银染图谱30 ku区积累了大量蛋白,经Pro-Q Diamond染色后发现它们属于磷酸化蛋白。2)经过多次取样和质谱鉴定,最终获得了3个30K蛋白,分别是PBMHPC-6、PBMHPC-19和PBMHPC-12。3)热激处理10 min后,3个30K蛋白的表达量与热激处理0 min相比显著上调(P<0.05)。由此得出,五龄家蚕血液富含30K蛋白,它们不仅在脂质运输方面承担着重要的角色,而且很可能参与热激应答。