基于IKKβ/NF-κB通路探讨温胆汤对睡眠障碍小鼠的神经保护作用

目的 探讨温胆汤对睡眠障碍小鼠神经损伤的影响及其机制。方法 小鼠采用改良版水平转盘睡眠剥夺法构建失眠模型,造模成功后随机分为模型组、艾司唑仑片组(0.15 mg/kg)和温胆汤低、高剂量组(12.5、50 g/kg),每组6只,另取6只作为对照组。给药干预7 d后,HE染色观察大脑皮层组织、海马CA1区组织、下丘脑组织变化;尼氏染色观察神经元损伤情况;ELISA法检测脑组织和血清中神经丝轻链(NEFL)、神经特异性烯醇化酶(NSE)、S100钙结合蛋白B(S100B)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;免疫组化法检测脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;Western blot法检测脑组织中GFAP、磷酸化IκB激酶β(p-IKKβ)、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)蛋白表达。结果 与模型组比较,温胆汤高剂量组小鼠神经元细胞数量增加,结构完整,排列整齐,神经元细胞核皱缩变形数量减少,尼氏小体增多,血清和脑组织NEFL、NSE、S100B、TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低(P<0.01),脑组织GFAP表达降低(P<0.01),脑组织p-IKKβ和p-NF-κB磷酸化水平均降低(P<0.01)。结论 温胆汤能够减少睡眠障碍小鼠的神经损伤,减少促炎介质释放,其机制可能与抑制IKKβ/NF-κB通路的激活有关。

烙灸对兔激素性股骨头坏死组织中IKKβ、IκBα表达的影响

目的探讨烙灸治疗早期激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of the femoral head,SONFH)的作用机制。方法将新西兰兔按随机数表法分为空白组、模型组、烙灸组、抑制剂组,每组6只,采用内毒素联合激素的方法制备SONFH模型。烙灸组进行4周的烙灸治疗,抑制剂组给予IκBα磷酸化抑制剂Bay11-7082(1 mg·kg-1)腹腔注射3周。干预前后分别观察实验兔一般状况变化;HE染色观察各组实验兔股骨头组织病理学变化;Western blot和RT-qPCR分别检测股骨头组织中IKKβ、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白及mRNA的表达变化;ELISA检测血清中核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平。结果与空白组比较,模型组实验兔逐渐出现精神萎靡、毛发暗淡等情况,股骨头组织骨小梁出现断裂、稀疏等改变,IKKβ、p-IκBα蛋白水平,IKKβmRNA水平及血清中NF-κB、TNF-α、IL-6水平均升高(P均<0.05);与模型组比较,烙灸组股骨头组织病理学改善,IKKβ、p-IκBα蛋白水平,IKKβmRNA水平及血清中NF-κB、TNF-α、IL-6水平均降低(P均<0.05),而IκBα蛋白及mRNA表达均升高(P均<0.05)。结论烙灸可改善早期SONFH骨代谢,缓解骨坏死,其机制与抑制TLR4/NF-κB通路有关。

白细胞介素17C通过IKK/NF-κB通路调控慢性鼻窦炎的作用机制

[目的]探讨白细胞介素17C(IL-17C)通过IKK/NF-κB通路调控慢性鼻窦炎(CRS)的作用机制,旨在为临床治疗CRS提供参考.[方法]选择IL-17C刺激人鼻黏膜原代上皮细胞(HNEPCs),采用CCK-8法检测不同质量浓度的IL-17C对HNEPCs活力的影响;利用ELISA法检测IL-17C诱导的HNEPCs中相关因子的表达水平;采用Western blot法检测IL-17C诱导的HNEPCs中IKK/NF-κB信号通路中相关蛋白的表达情况.[结果]与对照组比较,不同质量浓度的IL-17C对HNEPCs活力无显著影响(P>0.05);IL-17C干预组HNEPCs中IL-4、IL-5、IL-13、IL-17及p-IKK表达水平均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);IL-17C干预组HNEPCs中p-IKK、p-IκBα及p-NF-κB表达均明显升高(P<0.05),IKK、IκBα及NF-κB蛋白表达无明显改变(P>0.05).与IL-17C干预组比较,IL-17C+地塞米松组p-IKK、p-IκBα及p-NF-κB蛋白表达均明显降低(P<0.05).[结论]IL-17C可诱导HNEPCs中Th2及Th17相关炎症因子的产生,机制认为可能是调控IKK/NF-κB信号通路.

当归芍药散调控IKK/IκBα/NF-κB通路对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响

目的探究当归芍药散调控核转录因子-κB抑制蛋白激酶(IKK)/核因子κB抑制蛋白(IκBα)/核因子-κB(NF-κB)通路对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响。方法将48只C57BL/6J小鼠随机分为老年性聋模型组(Model组)、低剂量当归芍药散组(中药-L组,3.2 g/kg生药)、高剂量当归芍药散组(中药-H组,6.4 g/kg生药)和高剂量当归芍药散+IKK/IκBα/NF-κB信号通路激活剂白藜芦醇(RES)组(中药-H+RES组,6.4 g/kg生药+43.33 mg/kg RES),每组12只小鼠;取12只2月龄的C57BL/6J小鼠作为对照组(Control组)。采用听性脑干反应(ABR)检测各组小鼠听阈值;HE染色观察小鼠耳蜗螺旋神经节的病理变化,并对小鼠耳蜗中回与底回的螺旋神经节细胞的数量进行计数;TUNEL染色法检测小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的凋亡。ELISA法检测小鼠耳蜗组织中丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)水平。qRT-PCR法检测小鼠耳蜗组织中IL-1β、IL-6与TNF-αmRNA水平。Western blot法检测小鼠耳蜗组织IKK/IκBα/NF-κB通路与凋亡相关蛋白的表达。结果Model组小鼠较Control组小鼠8 kHz、16 kHz、24 kH、32 kHz听阈值、耳蜗螺旋神经节组织TUNEL阳性细胞数、耳蜗组织MDA及IL-1β、IL-6与TNF-αmRNA水平、p-IκBα、凋亡蛋白(Bax、cleaved-Caspase-3)表达水平、IKK、NF-κB p65磷酸化水平均显著升高(均P<0.05),耳蜗螺旋神经节细胞数量、SOD水平、IκBα蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),耳蜗螺旋神经节细胞的形态异常、排列疏松紊乱,发生空泡化,出现病理学损伤。中药-L组、中药-H组小鼠较Model组相应指标变化程度较轻(均P<0.05)。RES减弱了当归芍药散对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的抑制作用。结论当归芍药散可能通过下调IKK/IκBα/NF-κB通路抑制老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡。

基于IKK/IκBα/NF-κB通路探讨葛根素对创伤后应激障碍大鼠行为学、单胺类递质、炎症的影响

目的探究葛根素对创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)大鼠行为学、单胺类递质、炎症的影响,并从抑制性核因子激酶κB/核因子κB抑制剂α/核转录因子κB(inhibitory nuclear factor kinase-κB/inhibitor nuclear factor-κBα/nuclear transcription factor-κB,IKK/IκBα/NF-κB)通路分析其作用机制。方法将120只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、消退组、舍曲林组和葛根素组各24只。除对照组外,其余各组采用声音和电击刺激来建立PTSD模型。采用恐惧消退保持实验、旷场实验(open field test,OFT)、高架十字迷宫实验(elevated plus maze,EPM)、水迷宫实验测试大鼠行为学变化,高效液相-电化学法测定海马和前额皮质中单胺类神经递质水平,ELISA检测大鼠海马组织炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,Western blot检测大鼠海马组织中NF-κB p65,抑制性核因子激酶κB-β(the kinase of nuclear factor-kappa B inhibitorβ,IKK-β),IκBα和磷酸化的IκBα(phosphorylation-IκBα,p-IκBα)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组呆滞时间、闭环时间占比、上台潜伏期明显增加,开环时间占比、旷场中心区运动时间、进入中心区次数、穿越象限次数、靶象限停留时间减少(P<0.05),而与模型组比较,葛根素组、舍曲林组呆滞时间、闭环时间占比、上台潜伏期减少,开环时间占比、旷场中心区运动时间、进入中心区次数、穿越象限次数、靶象限停留时间增加,且葛根素组改善效果优于舍曲林组(P<0.05);与对照组比较,模型组大鼠海马组织和前额皮质中5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindoleacetic acid,5-HIAA)、多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)水平及海马组织中IL-6、IL-1β、IFN-γ、NF-κBp65、p-IκBα蛋白表达显著升高,5-羟胺(5-hydroxylamine,5-HT)、IKK-β、IκBα蛋白表达降低,而与模型组比较,葛根素组、舍曲林组降低了海马组织和前额皮质中NE、DA、5-HIAA及海马中IL-6、IL-1β、IFN-γ、NF-κBp65、p-IκBα蛋白表达水平,提高了5-HT、IKK-β、IκBα蛋白表达水平,且葛根素组改善效果优于舍曲林组(P<0.05);而消退组与模型组上述指标比较无明显差异(P>0.05);Pearson相关性分析显示,海马组织中NF-κBp65、p-IκBα与海马组织和前额叶皮质中NE、DA、5-HIAA水平及海马组织中IL-6、IL-1β、IFN-γ水平呈正相关,与海马组织和前额叶皮质中5-HT呈负相关(P<0.05);海马组织中IKK-β、IκBα与海马组织和前额叶皮质中NE、DA、5-HIAA水平及海马组织中IL-6、IL-1β、IFN-γ水平呈负相关,与海马组织和前额叶皮质中5-HT呈正相关(P<0.05)。结论葛根素可能通过调控IKK/IκBα/NF-κB通路,改善创伤后应激障碍大鼠焦虑程度、自主运动和学习能力,降低大脑单胺类递质和炎症因子水平。

基于miR-429/IKKβ轴研究高丽参水提物对神经母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭的作用

目的:研究高丽参水提物对神经母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法:将微小RNA(miRNA)-429抑制剂转染至SH-SY5Y细胞,随机分为miR-429下调组(常规培养)、高丽参+miR-429下调组(50 g/L高丽参水提物培养)。另取SH-SY5Y细胞,分为空白组(常规培养)和高丽参组(50 g/L高丽参水提物培养)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-429相对表达量;CCK-8法、划痕实验、Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭能力;双荧光素酶实验验证miR-429与IκB激酶β(IKKβ)的靶系;蛋白质印迹法检测各组IKKβ蛋白表达。结果:与空白组对比,高丽参组miR-429表达量增加,24、48、72 h 3个时间点的细胞增殖能力、迁移率降低,侵袭细胞数量减少,IKKβ蛋白表达降低(P<0.05);miR-429下调组的miR-429表达量减少、3个时间点的细胞增殖能力增强,迁移率升高,侵袭细胞数量增加,IKKβ蛋白表达升高(P<0.05)。与高丽参组对比,高丽参+miR-429下调组miR-429表达量减少,24、48、72 h 3个时间点的细胞增殖能力增强,迁移率升高,侵袭细胞数增加,IKKβ蛋白表达升高(P<0.05)。与miR-429下调组对比,高丽参+miR-429下调组miR-429表达量增加,24、48、72 h 3个时间点细胞增殖能力增强,迁移率降低,侵袭细胞数减少,IKKβ蛋白表达量降低(P<0.05)。与转染IKKβ3′-UTR-WT和miR-429 mimic-NC的293T细胞对比,共转染IKKβ3′-UTR-MT与miR-429 mimic的293T细胞荧光素酶活性值升高(P<0.05)。结论:高丽参水提物可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,可能与调控miR-429进一步靶向下调IKKβ表达有关。

穿心莲内酯抑制IKK/IκBα/NF-κB信号通路改善抑郁症大鼠的抑郁样行为

目的探讨穿心莲内酯(Andro)通过抑制核转录因子-κB抑制蛋白激酶(IKK)/核因子κB抑制蛋白(IκBα)/核因子-κB(NF-κB)信号通路改善抑郁症(MDD)大鼠的抑郁样行为。方法随机取12只SD大鼠作为空白对照组(NC组),其余大鼠采用慢性不可预知轻度应激(CUMS)结合孤养模式造模,将造模成功大鼠随机平分为模型组(Mod组)、Andro组(25 mg·kg^(-1)·d^(-1))、Res组(30 mg·kg^(-1)·d^(-1)IKK/IκBα/NF-κB信号通路激活剂Res)、Andro+Res组(25 mg·kg^(-1)·d^(-1)Andro+30mg·kg^(-1)·d^(-1)Res),每组12只大鼠,Mod组和NC组灌胃等量0.9%氯化钠溶液。旷场实验、糖水偏好实验、强迫游泳实验、平衡木实验评估大鼠行为;ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平;免疫荧光染色检测小胶质细胞、星形胶质细胞活性;Western blot检测NLRP3、cleaved-Caspase-1以及IKK/IκBα/NF-κB信号通路蛋白水平。结果与NC组相比,Mod组站立次数、饮用蔗糖量显著减少(P<0.05),游泳不动时间、通过平衡木时间、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、Iba-1、GFAP阳性细胞数量、NLRP3、cleaved-Caspase-1、p-IKK/IKK、IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平显著增加(P<0.05);与Mod组相比,Andro组大鼠游泳不动时间、通过平衡木时间、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、Iba-1、GFAP阳性细胞数量、NLRP3、cleaved-Caspase-1、p-IKK/IKK、IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平显著降低(P<0.05),站立次数、饮用蔗糖量显著增加(P<0.05),而Res组以上指标趋势相反(P<0.05);Res逆转了Andro对MDD大鼠抑郁样行为的改善。结论Andro可能通过下调IKK/IκBα/NF-κB通路对MDD大鼠的抑郁样行为起到一定的改善作用。

IKK激酶的NF-κB非相关性功能研究进展

IKK复合物由IKKα、IKKβ和IKKγ组成,是NF-κB通路中的重要分子,主要调控NF-κB通路的活化。近年的研究发现,IKK复合物还存在许多NF-κB非相关性的功能,主要涉及肿瘤发生、应激反应、转录调控、免疫功能及细胞周期调控等方面。IKK复合物的NF-κB非相关性的功能研究集中于IKKα和IKKβ亚基,并且存在激酶活性依赖和非依赖2种作用方式。对于该功能的深入探讨,对全面理解IKK分子的生理病理功能十分重要,并且为IKK分子的研究提出了一个新的方向。

日本对虾IKKβ基因克隆及其表达分析

【目的】明确日本对虾NF-κB抑制蛋白激酶β基因(PjIKKβ)生物学特征及其在各组织和哈维弧菌刺激下的表达模式,为揭示IKKβ在日本对虾先天免疫中的作用机制提供理论依据。【方法】克隆PjIKKβ基因cDNA序列,通过ORF Finder、ExPASy ProtParam、SMART、SignalP 5.0、TMHMM、Prot-Comp等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测PjIKKβ基因在日本对虾各组织及哈维弧菌悬液刺激后的表达模式。【结果】PjIKKβ基因序列全长2794 bp,其开放阅读框(ORF)长2373 bp,共编码790个氨基酸残基。PjIKKβ蛋白包含1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域(S-TKc)、1个亮氨酸锌指结构域(LZ)和1个螺旋—环—螺旋结构域(HLH),定位于细胞质和细胞核中,无跨膜结构,无信号肽。PjIKKβ与凡纳滨对虾IKKβ氨基酸序列相似性最高(98%),其次是与斑节对虾IKKβ氨基酸序列(97%);多序列比对分析结果显示,各物种IKKβ蛋白序列在S-TKc结构域的保守性较高,而在其他区域的保守性低。基于IKKβ氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,在甲壳动物分支中日本对虾先与凡纳滨对虾聚在一起,再与斑节对虾聚为一个分支。PjIKKβ基因在日本对虾肝胰腺、肌肉、鳃、神经节、胃、心脏、血淋巴和眼柄等8个组织中均有表达,以神经节、肌肉、血淋巴和眼柄中的相对表达量较高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05);注射后24、48和72 h,PjIKKβ基因在注射哈维弧菌日本对虾血淋巴中的相对表达量上调,且与注射PBS日本对虾的相对表达量存在极显著差异(P<0.01)。【结论】PjIKKβ蛋白含有1个S-TKc结构域、1个LZ结构域和1个HLH结构域,在进化过程中非常保守;PjIKKβ基因的组织表达特征及其在哈维弧菌刺激后的表达变化,进一步证实PjIKKβ基因参与了日本对虾的先天免疫应答反应。

电针联合刮痧法对颈型颈椎病家兔颈肌炎症因子及NF-κB/IκB/IKKβ信号通路的影响

目的探讨电针联合刮痧疗法对颈型颈椎病家兔颈肌炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达及NF-κB/IκB/IKKβ信号通路的影响。方法将40只新西兰家兔随机分为正常组、模型组、电针组、刮痧组、联合组,每组各8只。采用寒湿刺激加长期低头位的方法建立颈型颈椎病家兔模型。造模8周后,电针组选取双侧颈夹脊穴进行电针治疗;刮痧组选取督脉及两侧足太阳膀胱经刮痧治疗;联合组给予电针联合刮痧治疗。于造模前、造模后进行颈椎X线拍摄并评分。治疗15 d后留取家兔颈部两侧后伸肌,采用苏木精-伊红(HE)染色观察肌肉组织形态的变化。实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测颈肌IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65、IκB、IKKβmRNA表达水平。Western blot法检测颈肌IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65、IκB、IKKβ蛋白表达水平。结果与正常组比较,造模各组家兔X线评分均增高(均P<0.05)。与模型组比较,各治疗组家兔颈肌的炎性损伤均有所改善,其中联合组改善最明显。各治疗组IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65、IKKβmRNA和蛋白表达水平低于模型组(均P<0.05),且联合组低于电针组、刮痧组(均P<0.05)。各治疗组IκB mRNA和蛋白表达高于模型组(均P<0.05),联合组高于电针组、刮痧组(均P<0.05)。结论电针联合刮痧疗法可改善颈部肌肉的病理损伤,作用优于单独电针或刮痧治疗。其作用机制可能是通过下调NF-κB/IκB/IKKβ信号通路相关因子的表达,进而降低IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达。

IκBα、IKKα、IKKβ与Tim-3在肿瘤患者中表达及相关性研究

核因子（NF）-κB是重要的转录调控因子,其广泛存在于各种细胞中,参与免疫应激、细胞增殖、生长分化及细胞凋亡。NF-κB通常与其抑制蛋白IκB相结合,以非活性状态储存于细胞质中,只有当激活IκB激酶（IKK）,水解IκB,解除了IκB的抑制作用,NF-κB才能进入细胞核中并与相应靶基因上的DNA序列（κB位点）结合,发挥基因转录功能。

人增生性瘢痕成纤维细胞IKKβ特异性siRNA表达载体构建及表达

目的:体外合成并筛选人增生性瘢痕成纤维细胞特异性IKKβ-siRNA,构建其表达载体并检测其表达.方法:化学合成3条IKKβ-siRNA,分别转染体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,采用RT-Q-PCR筛选出特异性IKKβ-siRNA,并采用PU6质粒构建载体,RT-Q-PCR检测其表达.结果:合成的3条IKKβ-siRNA链中,仅第二条有明显抑制IKKβ的mRNA表达的作用,并通过酶切鉴定和测序结果证明成功构建IKKβ-siRNA载体,经转染靶向IKKβ-siRNA的成纤维细胞,IKKβ的表达在转染后24h及48h均受到抑制.结论:应用RT-PCR可筛选出针对人增生性瘢痕成纤维细胞的特异性IKKβ-siRNA;可构建具有干扰效果的IKKβ-siRNA表达载体,转染后可以降低IKKβ的表达.

IKK抑制剂对大鼠颈动脉球囊损伤术后再狭窄的影响

目的:研究核转录因子κB抑制蛋白激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)抑制剂对大鼠颈动脉球囊损伤后再狭窄的影响。方法:将32只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、盐水组和药物组,盐水组和药物组建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型。盐水组与假手术组均给予生理盐水注射,药物组给予IKK抑制剂注射,造模成功后15 d,采用HE染色观察血管内皮形成及内膜的增生情况,采用蛋白质印迹法检测核转录因子κB(NF-κB)、IKK、NF-κB抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor kappa B,IκB)的表达情况,采用放射免疫法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,采用基质金属蛋白酶1(MMP-1)检测试剂盒检测MMP-1的含量。结果:假手术组、药物组及盐水组大鼠颈总动脉内膜均逐渐增厚。假手术组和药物组与盐水组内膜面积,NF-κB、IKK、IκB表达水平,及IL-6、TNF-α、MMP-1含量比较差异均有统计学意义(P<0.05或0.01),假手术组和盐水组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IKK抑制剂通过抑制IKK-IκB-NF-κB通道所诱导的炎症反应,可以抑制血管损伤后再狭窄的发生。

蒙花苷通过调控IKK/NF-κB信号通路抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭

目的:探究蒙花苷(LIN)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨可能的分子机制。方法:用不同浓度(5、10、20、40、80和160μmol/L)的LIN处理MCF-7、MDA-MB-231和MCF-10A细胞24 h后,CCK-8法和集落形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测Snail、E-cadherin、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκB激酶α/β(p-IKKα/β)和磷酸化p65(p-p65)的蛋白水平。结果:LIN可剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞活力(P<0.05),IC 50为55.89μmol/L;20μmol/L LIN作用24 h后,MDA-MB-231细胞集落形成率显著降低(P<0.05);与对照组相比,5μmol/L和10μmol/L LIN作用24 h后,MDA-MB-231细胞迁移率和侵袭率显著降低(P<0.05),Snail和MMP-9的蛋白水平下调(P<0.05),E-cadherin的蛋白水平上调(P<0.05),IKKα/β和p65蛋白的磷酸化水平降低,IκBα的蛋白水平上调(P<0.05);同时,IKK-16(IKKα/β抑制剂)和PDTC(NF-κB抑制剂)也可下调MDA-MB-231细胞中Snail和MMP-9的蛋白水平(P<0.05),并上调E-cadherin的蛋白水平(P<0.05)。结论:LIN可能通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化而下调Snail和MMP-9蛋白水平并上调E-cadherin蛋白水平,最终导致MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力降低。

连花清瘟胶囊对脂多糖致急性肺损伤小鼠IKK/IκB/NF-κB信号通路的影响

目的探讨连花清瘟胶囊对经气管内滴注脂多糖（LPS）致小鼠急性肺损伤引起的肺组织炎症因子和IKK/IκB/NF-κB信号通路的蛋白表达的影响。方法将急性肺损伤的100只SPF级18~20 g雄性KM小鼠随机均分为5组,LPS组,地塞米松组,连花清瘟胶囊高、中、低剂量组,另设正常对照组（n=20）。光镜下观察实验小鼠肺组织病理变化,流式细胞术检测外周血中白介素-6（IL-6）的阳性表达率,RT-PCR法检测肺组织中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA表达,Western blot检测肺组织中中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、NF-κB、IκBα、IKKβ的蛋白表达。结果与正常对照组相比,LPS组小鼠肺组织中有大量炎性细胞渗出,外周血中IL-6,肺组织中MCP-1 mRNA,NE、NF-κB、IκBα、IKKβ的蛋白表达均明显升高;与脂多糖组相比,外周血中IL-6的阳性表达率用药组均有所下降,肺组织中MCP-1mRNA表达用药组均改善明显,肺组织中NE、NF-κB、IκBα、IKKβ的蛋白表达为地塞米松组与高剂量组改善较明显,连花清瘟中、低剂量组也有不同程度改善。结论连花清瘟胶囊能够通过降低IKK/IκB/NF-κB信号通路的表达来减轻肺内炎症反应程度。

基于IKK/IκB/NF-κB信号通路探讨瘀血痹胶囊对动脉粥样硬化免疫与炎症作用机制研究

动脉粥样硬化(AS)相关的免疫与炎症反应是目前医疗研究的热点,在参与AS免疫炎症反应机制的众多通路中IKK/IκB/NF-κB信号通路是二者共同的信号通路。首先探讨了中医“痹病”中“内痹”与“外痹”的关系,又从现代医学角度阐述了免疫、炎症反应与动脉粥样硬化发生发展的关系,进一步深入探讨了IKK/IκB/NF-κB信号通路的作用途径。基于上述理论依据,从NF-κB信号通路入手通过体内实验探讨中药大品种瘀血痹胶囊对动脉粥样硬化免疫与炎症反应的作用机制,旨在为研究中医中药的“异病同治”提供科学依据,为中西医结合防治心血管病提供新思路。

NIK和IKKβ连接蛋白、C-myc和细胞周期蛋白D1在结肠癌组织中的表达及意义

目的检测结肠癌组织中NIK和IKKβ连接蛋白(NIBP)、磷酸化p65(p-p65)和C-myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达,并探讨其意义。方法收集广西医科大学第一附属医院结直肠外科2013年2月—2014年2月经外科手术切除及消化内科肠镜活检的部分标本151例,其中正常结肠黏膜16例、结肠腺瘤21例、结肠癌114例。采用SP免疫组化法分别检测正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织及结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率;分析结肠癌组织中NIBP、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率的相关性。结果正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织、结肠癌组织的NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率高于正常结肠黏膜组织和结肠腺瘤组织(P<0.017);正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织中NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异无统计学意义(P>0.017)。不同组织学类型、浸润深度及有无淋巴结转移、远处转移患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度越低、TNM分期越高、Duke's分期越高患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率越高(P<0.05)。NIBP、C-myc、cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率均呈正相关(P<0.05)。结论 NIBP可能通过激活核因子κB(NF-κB)信号转导通路上调C-myc和cyclin D1等的表达而影响结肠癌的治疗发生、发展、侵袭和转移,为临床发现结肠癌的治疗新靶点提供了参考依据。

灭幽汤对实验性幽门螺杆菌相关性胃炎IKKβ表达的影响及意义

目的探讨IκB分子的上游蛋白激酶(IKKβ)对幽门螺杆菌相关性胃炎(HAG)病理变化的可能机制及灭幽汤在治疗HAG时的影响效应。方法建立HAG模型,采用幽门螺杆菌(H.py-lori)菌液灌胃造模,将造模成功的小鼠按体重随机分为模型组、丽珠得乐组、灭幽汤组。采用免疫组化法检测胃黏膜组织中核转录因子(NF-κB)I、KKβ的蛋白表达情况。HE染色观察胃组织病理变化。结果灭幽汤组能明显减轻胃组织的炎症反应,能抑制HAG胃组织中NF-κBI、KKβ蛋白的活性。正常对照组小鼠胃黏膜组织细胞内均有少量IKKβ、NF-κB表达。与正常对照组比较,模型组小鼠胃黏膜IKKβ及NF-κB表达增加(P<0.05);与模型组比较,灭幽汤组小鼠胃黏膜IKKβ及NF-κB表达降低(P<0.05)。结论灭幽汤能抑制H.pylori,改善胃黏膜血流,减轻胃黏膜炎症。NF-κB和IKKβ在HAG的炎症反应中发挥重要的作用,灭幽汤治疗HAG的机制可能是通过抑制IKKβ的激活和阻止NF-κB的活化实现的。

芍药苷基于IKK/NF-κB信号通路对大鼠脊髓损伤后继发性损害的保护作用

目的探讨芍药苷对脊髓损伤(SCI)大鼠模型IKK/NF-κB信号通路的影响及神经保护机制研究。方法采用改良Allen法建立SCI模型,将大鼠随机分为5组:假手术组、SCI组、芍药苷低、中、高剂量(5、30、60 mg/kg)组,每组20只。芍药苷低、中、高组大鼠在建立SCI模型后给予相应剂量芍药苷,假手术组与SCI组给予等量生理盐水,连续28 d。采用斜坡、印迹试验检测大鼠行为学能力;取损伤区组织测定脊髓空洞率、水肿程度及病理变化;蛋白印迹分析检测pI-κBα、NF-κB、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果芍药苷中、高剂量组大鼠运动功能显著改善,呈现剂量-时间依赖关系,脊髓空洞率、水肿程度显著减少(P<0.05);在SCI后6、12 h两个时间点,芍药苷中、高剂量组IKKβ激酶活性下降近50%(P<0.05);SCI后72 h,与SCI组相比,芍药苷中、高剂量组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-18的含量显著降低(P<0.01);pI-κBα、NF-κB、Bax、Caspase-3蛋白表达显著下调,Bcl-2的蛋白水平显著上调(P<0.05)。结论芍药苷能够通过抑制IKK/NF-κB信号通路,减少大鼠脊髓损伤后炎症因子释放,抑制细胞凋亡,发挥神经保护作用。

齐墩果酸预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤过程中IKK/I-κB/NF-κB通路的影响

目的:探讨齐墩果酸(oleanolic acid,OA)预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemic/reperfusion injury,HIRI)过程中IKK/I-κB/NF-κB信号转导通路的影响。方法:将128只SD大鼠随机分为假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)、0.5%羧甲基纤维素钠组(CM组)和齐墩果酸预处理组(OA组)。OA组以100 mg/kg的齐墩果酸混悬液,SH和IR组以相同容积的水,CM组以相同容积的0.5%CMC-Na分别每日灌胃1次,连续7天。第8天建立70%肝脏缺血模型,缺血60 min后再灌注。于术前、再灌注0、3、6 h取肝组织。用Western blot法测定肝脏细胞内IKK2,I-κBα及细胞核内NF-κB p65蛋白含量。结果:术前、0 h,各组胞浆未检测到IKK2,核内仅检测到极少量NF-κB,各组I-κBα蛋白量之间没有统计学差异。3、6 h时,SH组胞浆IKK2和核内NF-κB的蛋白含量均分别明显低于其余3组(P<0.05);此时OA组该两个蛋白含量分别明显低于CM组和IR组(P<0.05)。3、6 h时,SH组I-κBα的蛋白含量均分别明显高于其余3组(P<0.05),OA组此值分别明显高于CM组和IR组(P<0.05),CM组和IR组各时点之间的细胞内IKK2,I-κBα及细胞核内NF-κB p65蛋白量均无统计学差异(P>0.05)。结论:HIRI能促进胞浆内IKK2蛋白的表达,使I-κB磷酸化水解,NF-κB活化进入细胞核内介导炎症反应,损伤肝细胞。缺血前使用OA可抑制IKK/I-κB/NF-κB信号传导通路的激活,这可能是OA预处理减轻HIRI的机制之一。