共表达IL-7/CCL19的新抗原反应性T细胞对小鼠肺癌的抗肿瘤研究

背景与目的新抗原反应性T细胞(neoantigen reactive T cell,NRT)具有抑制表达特异性新抗原的肿瘤生长的能力。然而,由于免疫浸润困难和肿瘤微环境的抑制,NRT在实体瘤中的治疗效果有限。本研究针对小鼠肺癌细胞设计出可以同时表达白细胞介素7(interleukin 7,IL-7)和趋化因子19(chemokine C-C motif ligand 19,CCL19)的NRT细胞(7×19 NRT),并对7×19 NRT细胞和常规NRT细胞的抗肿瘤效果差异进行了评估。方法针对小鼠Lewis肺癌细胞(Lewis lung carcinoma,LLC)进行了新一代测序和新抗原预测,制备了RNA疫苗,培养了NRT细胞,构建了编码IL-7和CCL19的逆转录病毒载体,转导NRT细胞并成功表达IL-7和CCL19,成功获得了7×19 NRT,并在小鼠体内外对其抗肿瘤效果进行了评估。结果7×19 NRT细胞通过分泌IL-7和CCL19显著增强T细胞的增殖和侵袭能力,在小鼠肺癌中实现了显著的抑瘤作用,延长了小鼠的生存期。经7×19 NRT治疗后,T细胞浸润肿瘤组织及肿瘤组织坏死显著增加。此外,7×19 NRT治疗与常规NRT治疗均安全。结论通过IL-7和CCL19的表达,NRT细胞的抗实体瘤能力显著增强,这是一种对NRT安全有效的基因修饰。

IL-7的诱导表达增强靶向GPC3 CAR-T细胞的增殖及体外抗肿瘤活性

目的:探讨IL-7的诱导表达对靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞(CAR-T细胞)的增殖和体外抗肿瘤活性的影响。方法:通过无缝克隆将GPC3 CAR序列片段插入GV400载体的Bam HⅠ/Eco RⅠ位置,构建第二代CAR慢病毒载体GPC3-BBZ及GPC3-BBZ-NFAT-IL-7,以293T细胞包装相应的慢病毒载体后,感染人T细胞制备CAR-T细胞。实验分为未转导T细胞(NT)组、GPC3-BBZ CAR-T细胞组、GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞组。采用流式细胞术检测各组CAR-T细胞中CAR的表达水平,qPCR法检测经GPC3蛋白激活的CAR-T细胞中IL-7 m RNA的表达水平,细胞计数法检测CAR-T细胞在GPC3抗原刺激下的增殖能力,ELISA检测CAR-T细胞在受到肿瘤细胞刺激后IL-7、IFN-γ和TNF-α的分泌水平。应用实时细胞分析(RTCA)技术检测CAR-T细胞对人肝癌Huh-7细胞的杀伤作用。结果:成功构建慢病毒载体GPC3-BBZ和GPC3-BBZ-NFAT-IL-7,制备出靶向GPC3的CAR-T细胞。经GPC3抗原激活后,GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞可有效表达IL-7 mRNA(P<0.01),其表现出更强的增殖能力(P<0.05)。与GPC3-BBZ CAR-T细胞相比,GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞与GPC3阳性靶细胞Huh-7细胞共培养后,分泌更高水平的IL-7、IFN-γ和TNF-α(P<0.01或P<0.001)。RTCA结果显示,GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞对GPC3阳性Huh-7细胞的杀伤活性显著高于GPC3-BBZ CAR-T细胞(P<0.05)。结论:成功制备可诱导表达IL-7的靶向GPC3的CAR-T细胞,IL-7的诱导表达增强靶向GPC3 CAR-T细胞的免疫活性,在体外展现出较强的肿瘤细胞杀伤能力。

编码IL-7的溶瘤疱疹病毒通过激活CD8^(+)T细胞增强对肝癌的杀伤活性

目的:探究分泌IL-7的溶瘤疱疹病毒(HSV)是否可以通过激活CD8^(+)T细胞抑制肝癌生长。方法:Western blot检测IL-7表达情况;结晶紫染色法检测溶瘤病毒HSV以及HSV-IL-7对肿瘤细胞的体外裂解情况;皮下移植瘤模型检测HSV以及HSV-IL-7对肿瘤的抑制能力;ELISA法检测血清以及肿瘤组织中IL-7、IFN-γ、TNF-α含量;免疫组化法检测肿瘤组织中CD8^(+)T细胞的浸润情况;流式细胞术检测肿瘤浸润CD8^(+)T细胞Granzyme B的分泌水平。结果:HSV-IL-7感染的肿瘤细胞均高表达IL-7;HSV以及HSV-IL-7在体外均可以有效裂解B16-F10、CT-26以及H22肿瘤细胞系,且具有剂量依赖性;HSV-IL-7可以显著抑制H22肝癌细胞的体内生长(P<0.01),延长荷瘤小鼠的生存期(P<0.001);HSV-IL-7可以显著提高肿瘤部位IL-7的含量(P<0.0001),同时有效增加肿瘤浸润CD8^(+)T细胞的数目(P<0.001);HSV-IL-7可以显著增强肿瘤浸润CD8^(+)T细胞分泌Gran-zyme B的能力以及增加肿瘤组织中IFN-γ和TNF-α含量(P<0.0001)。结论:HSV-IL-7在体内外均具有良好的肿瘤抑制活性,同时其可以通过分泌IL-7,激活体内CD8^(+)T细胞的抗肿瘤性,从而进一步抑制肿瘤生长并延长荷瘤小鼠的生存期。

基于IL-7的甘草多糖抗肿瘤机制的研究

[目的]明确甘草多糖抗肿瘤作用及其作用机制。[方法]建立CT-26细胞荷瘤小鼠动物模型,随机分为正常组、模型组、甘草多糖组(甘草多糖灌胃500mg/kg)、香菇多糖组(阳性药组,香菇多糖灌胃195mg/kg)和白细胞介素-7(IL-7)抗体阻断组(甘草多糖灌胃500 mg/kg,IL-7抗体与0、5、10 d腹腔注射0.4 mg/kg)。连续给药14 d,计算小鼠肿瘤质量、抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数;检测小肠黏膜上皮细胞IL-7m RNA表达情况和血清中IL-7含量。[结果]灌胃给予甘草多糖14 d后,甘草多糖可以显著降低荷瘤小鼠肿瘤质量,其抑瘤率为21.56%;显著提高小鼠体质量和胸腺指数,改善其生活质量;提高小肠黏膜上皮细胞IL-7m RNA表达和血清中IL-7含量;IL-7抗体阻断后,其抑瘤率和胸腺指数显著降低,小肠黏膜上皮细胞IL-7m RNA虽高表达,但血清中IL-7含量低于试剂盒检测限。[结论]甘草多糖具有显著的抗肿瘤作用,其抗肿瘤机制可能与提高小肠黏膜上皮细胞分泌IL-7有关。

针灸对环磷酰胺化疗小鼠血清中IL-7和IL-18含量的影响

目的通过观察针灸治疗前后环磷酰胺(CTX)化疗模型小鼠血清中白介素-7(IL-7)和白介素-18(IL-18)含量的变化,探讨针灸改善化疗后所导致免疫抑制的分子生物学机制。方法选用清洁级昆明种雄性小鼠80只,按体重随机分为空白组、模型组、针刺组、艾灸组,每组20只。除空白组外,其余各组均腹腔注射CTX制备小鼠骨髓抑制模型。针刺组和艾灸组选取大椎、膈俞、肾俞、足三里进行针刺和艾灸治疗,空白组、模型组每日陪同抓取和固定,不做任何治疗。依次经过治疗后3d和5 d,在每组中分两次分别处死10只小鼠,摘眼球取血,采用ELISA法检测血清中IL-7和IL-18的含量。结果治疗3 d至5 d,针刺组和艾灸组白细胞均开始回升,且针刺组疗效优于艾灸组;在3 d组和5 d组中,针刺组和艾灸组血清中IL-7含量均高于模型组(P<0.05),且针刺组疗效优于艾灸组(P<0.05);在3 d组和5 d组中,针刺组和艾灸组血清中IL-18含量均高于模型组(P<0.05),且在5 d组中,针刺组疗效优于艾灸组(P<0.05)。结论针刺和艾灸可以明显上调CTX化疗小鼠血清中IL-7、IL-18的含量,减轻CTX引起的免疫抑制,提高机体的免疫功能。

IL-2、IL-7和IL-15联合对T细胞的体外扩增效应

为了建立一种快速有效的体外T细胞扩增方法,本研究比较了不同培养条件对T细胞增殖及其功能和特性的影响。取外周血T细胞,用自体的树突状细胞(DC)和EB病毒转化的B细胞进行周期性刺激,用细胞增殖试验、PI和AnnexinV双标记流式细胞术、Cr释放测定及ELISPOT试验分别测定不同培养条件下细胞的增殖程度、IFN-γ分泌细胞的频率、抗原特异性T细胞的杀伤活力、细胞的凋亡状态和分化能力。结果显示:T细胞在周期性刺激后,用CD3/28微珠的短期扩增效应最好,但多轮刺激后联合应用IL-2,IL-7和IL-15对细胞的扩增最强。Cr释放试验表明,CD3/28微珠扩增的T细胞不具有杀伤活力,高浓度IL-2诱导的T细胞杀伤活性最强,其次为联合应用IL-2,IL-7和IL-15。ELISPOT显示不同培养条件诱导出的分泌IFN-γ的T细胞频率从高到低依此为高浓度IL-2>联合应用IL-2,IL-7和Il-15>低浓度的IL-2>CD3/28微珠。细胞表型分析显示高浓度IL-2和联合应用IL-2,IL-7和Il-15扩增的细胞含有较高比例的CD3+CD8+T细胞。对细胞的凋亡测定表明联合应用IL-2,IL-7和IL-15获得的T细胞的存活率最高,处于凋亡早期的细胞比例最低。细胞增殖试验显示联合应用IL-2,IL-7和IL-15扩增的细胞分化能力最强。结论:本研究建立了一种快速有效地体外扩增T细胞的方法,其中联合应用IL-2,IL-7和IL-15对T细胞的扩增最显著,获得的T细胞存活率最高,分化能力最强,该细胞同时也含有较高频率的IFN-γ分泌细胞且表现出较强的杀伤活力。

GABA对热应激雏鸡小肠黏膜中IL-IL-7和sIgA含量的影响

为探究Y-氨基丁酸（GABA）对热应激雏鸡小肠黏膜中IL-7和slgA含量的影响，选择体重相近的1日龄文昌雏公鸡，随机分为对照（CK）组、热应激（HS）组、50mg／kgGABA（G50＋HS）组和100mg／kgGABA（G100＋HS）组，每组36只，每天13：00～15：00将HS组、（G50＋HS）组和（G100＋HS）组置于（40＋0．5）℃人工气候箱中进行热处理，利用ELISA法测定不同周龄雏鸡小肠黏膜液中IL-7和sIgA含量。结果：HS组的十二指肠、空肠及回肠中1L-7和sIn含量显著低于CK组（P〈0．05）；（G50＋HS）组和（G100＋HS）组十二指肠、空肠及回肠中IL-7和sIgA含量显著高于HS组（P〈0．05）；（G100＋HS）组部分肠段中的IL-7和slgA含量与（G50＋HS）组比较有显著差异（P〈0．05）。研究结果表明GABA对热应激造成的肠道损伤具有一定修复作用，能够有效提高热应激状态下雏鸡小肠黏膜的免疫功能，但其保护作用并不与浓度呈正比。

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中IL-37表达增高及临床意义

目的检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中IL-37的表达水平,进一步探究其在PBC致病过程中的临床意义。方法收集2013年6月~2015年8月于长海医院确诊的42例PBC患者和38例同期体检的健康对照者外周血,采用蔗糖密度梯度离心法分离PBMCs,以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PBMCs中IL-37的mRNA表达水平,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中IL-37,IL-6,IL-17,TNF-α,TGF-β,IL-18和IL-23的蛋白水平,同时记录PBC患者的病理性分期。对IL-37与IL-6,TNF-α,IL-17,TGF-β,IL-18,IL-23进行Pearson相关性分析,对IL-37与PBC疾病分期进行Spearman秩相关性分析。结果实验组与对照组IL-37的mRNA水平和蛋白水平分别为2.81±0.94 vs 1.09±0.56,356.14±169.36 pg/ml vs 86.68±48.23 pg/ml,差异具有统计学意义(t=9.811,9.462,P均<0.000 1)。相关性分析表明:IL-37与IL-17,TNF-α,IL-6,TGF-β呈正相关(r=0.561 2,0.661 9,0.672 1,0.765 3;P值均<0.001),与疾病分期(Ⅰ~Ⅳ)呈正相关(r_s=0.348 9,P<0.05)。结论 IL-37可能参与了PBC的致病过程,对疾病预测与诊断有重要意义。

骨髓中IL-7、IL-7R及EBF表达与运动性免疫抑制

IL-7在早期B细胞的增殖中起到了关键的促进作用,EBF在淋巴系干细胞向B系细胞分化中起着决定性的系谱特异定型作用。IL-7、IL-7R通过维持EBF表达,参与了B细胞增殖转录因子网络的形成,这与早期B细胞分化调控密切相关。运动中GC的升高会加快早期发育中B细胞的凋亡,研究B细胞的发育及其调控机制对寻求更有效的运动免疫调理措施具有重要意义。

伴有食物不耐受的腹泻型肠易激综合征患者IL-17和IL-23的表达及健脾法对其表达的影响

目的:观察伴有食物不耐受的腹泻型肠易激综合征(D-IBS)患者十二指肠黏膜IL-17和IL-23的表达及健脾法对其表达的影响。方法:选择60例伴有食物不耐受的D-IBS患者,随机分为治疗组30例和对照组30例,治疗组口服健脾法为主的中药,每日1剂;对照组口服匹维溴铵片,50mg,日3次,治疗4周后进行疗效评价。治疗前、后内镜下取十二指肠黏膜,应用免疫组化的方法检测IL-17和IL-23的表达。结果:治疗组总有效率为93.3%,显著高于对照组的70%的总有效率(P<0.01);各组治疗后主要症状评分均显著低于治疗前(P<0.01)。治疗前两组IL-17、IL-23免疫组化染色阳性细胞数无显著差异,治疗后治疗组IL-17、IL-23免疫组化染色阳性细胞数显著低于对照组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-17和IL-23参与伴有食物不耐受的D-IBS患者的发病,健脾法治疗伴有食物不耐受的D-IBS有效,有可能通过调节IL-17和IL-23在肠黏膜的表达达治疗效果。

IL-27对哮喘小鼠血清IgE的影响

目的研究白细胞介素27(IL-27)对卵白蛋白(OVA)激发哮喘小鼠血清IgE的影响。方法 24只雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及IL-27组,每组8只。应用OVA建立哮喘模型,IL-27组小鼠应用1μg IL-27(溶于50μL PBS中)滴鼻给药,ELISA法测定小鼠血清IL-4和IFN-γ浓度,荧光酶标法测定小鼠血清总IgE和OVA特异性IgE浓度;计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞数量。结果 IL-27组小鼠血清IL-4浓度为(45.6±10.1)μg/L,明显低于哮喘组的(79.3±14.8)μg/L(P<0.05);IL-27组小鼠血清IFN-γ浓度为(63.8±11.5)μg/L,明显高于哮喘组的(25.7±8.2)μg/L(P<0.05);IL-27组小鼠血清总IgE和OVA特异性IgE浓度分别为(2.77±0.51)KU/L、(0.48±0.09)KU/L,均明显低于哮喘组的(5.88±0.86)KU/L、(1.89±0.15)KU/L(P均<0.05);IL-27组小鼠BALF中嗜酸性粒细胞数量为(2.21±0.33)×107/L,明显低于哮喘组的(12.82±2.17)×107/L(P<0.01)。结论 IL-27可能通过促进IFN-γ合成、抑制IL-4合成,降低哮喘小鼠血清总IgE和OVA特异性IgE浓度,降低BALF中嗜酸性粒细胞数量。

鲑鱼鱼白DNA对老龄小鼠胸腺细胞IL-7 mRNA和CD127表达的影响

目的 探讨外源性核酸对自然衰老小鼠胸腺细胞IL 7mRNA和CD12 7(IL 7受体 )表达的影响。方法 10月龄雌性Balb c小鼠按体质量随机分为高剂量组 (每日灌胃 333.33mg·kg- 1 ·d- 1 鲑鱼鱼白DNA)、低剂量组 (每日灌胃 16 6 .6 7mg·kg- 1 ·d- 1 鲑鱼鱼白DNA)和对照组 ( 0 .1mol L的柠檬酸钠 )。 5周后测定胸腺脏器指数 ;原位杂交法检测胸腺内IL 7mRNA的表达 ,并用Image proPlus专业图像分析系统 ( 4 .0版 )对其表达面积百分比进行分析 ;间接免疫荧光流式细胞术检测老龄小鼠胸腺细胞CD12 7的表达。结果 鲑鱼鱼白DNA提取物对小鼠的体质量、胸腺质量和胸腺指数均没有影响 ,但高剂量SMD补充组可显著增加胸腺细胞IL 7mRNA表达和CD12 7淋巴细胞的数量 (分别P <0 .0 5 )。结论 补充鲑鱼鱼白DNA可能促进IL 7的产生及其受体的表达 ,从而延缓Balb

IL-7联合IL-2对脐血CD4^+CD25^-T细胞体外诱导扩增影响的研究

目的:初步探讨IL-7联合IL-2对脐血CD4+CD25-T细胞体外扩增的促进作用,建立稳定的体外培养扩增脐血CD4+CD25-Tregs的培养体系,比较诱导扩增后的CD4+CD25+Tregs和自然分选的CD4+CD25+Tregs对PBMCs功能活性的影响。方法:采用免疫磁珠分选法分选出脐血CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞;加入不同浓度的细胞因子IL-7结合适当浓度的IL-2作为诱导剂,分析IL-7体外诱导CD4+CD25-T细胞增殖的有效性及最适浓度。我们利用流式细胞术检测体外扩增后的CD4+CD25-T细胞表型变化;MTS法检测体外诱导扩增的CD4+CD25+Tregs及自然分选的CD4+CD25+Tregs分别对成人外周血中单个核细胞增殖的抑制作用;RT-PCR方法分析体外诱导扩增的CD4+CD25+Tregs及自然分选的CD4+CD25+Tregs FOXP3基因、IL-10基因和TGF-β基因的cDNA表达的变化。结果:经3周体外培养、各组细胞均有明显的扩增。IL-7诱导组的扩增最强。体外抑制试验显示体外扩增的Tregs对成人外周血中单个核细胞有明显的抑制作用,IL-7联合IL-2诱导CD4+CD25-T细胞生成的CD4+CD25+Tregs具有较自然分选的CD4+CD25+Tregs稍弱的免疫抑制功能,其中IL-7浓度为4 ng/ml,IL-2浓度为2 000 U/ml时诱导CD4+CD25-T细胞生成的CD4+CD25+Tregs杀伤活性最强。结论:成功建立了CD4+CD25+Tregs的体外培养体系,联合应用IL-7、大剂量的IL-2和CD3/CD28单抗是体外诱导扩增CD4+CD25-T细胞成为CD4+CD25+Tregs的优选方法,并且扩增倍数高、可持续高表达CD4及CD25细胞表型。

mda-7/IL-24对裸鼠肝癌移植瘤的生长抑制和促凋亡作用

目的:探讨mda-7/IL-24对裸鼠肝癌细胞移植瘤的生长抑制和促凋亡作用及其相关机制。方法:构建携带mda-7基因的重组腺病毒载体Ad.mda-7。以HepG2细胞皮下接种建立裸鼠肝癌移植瘤模型,采用瘤内单点注射的方法分别给予Ad.GFP、Ad.mda-7和ALLN(毒胡萝卜素,N-Ac-L-L-norleucinal)+Ad.mda-7,观察瘤质量和瘤体积的变化,通过免疫组化和TUNEL法检测肿瘤组织内凋亡相关蛋白caspase-3活化、细胞增殖相关抗原ki-67和微血管密度、细胞凋亡率,并通过Westernblotting检测caspase-12、caspase-3和Bax的表达。结果:Ad.mda-7治疗组和Ad.GFP对照组肿瘤体积分别为(312.6±30.2)mm3和(520.6±30.0)mm3(P<0.01),两组的肿瘤质量分别为(0.321±0.031)g和(0.534±0.030)g(P<0.01);Ad.mda-7治疗后瘤细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.01);Ad.mda-7可抑制肝癌组织ki-67表达、微血管密度和促进caspase-3的表达。经ALLN处理的裸鼠,明显抑制Ad.mda-7对肝癌细胞的致凋亡作用(P<0.05),并且下调Ad.mda-7诱导的caspase-12、caspase-3和Bax的表达。结论:Ad.mda-7可显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长和新生血管的形成,并通过内质网应激通路显著诱导肿瘤细胞的凋亡。

Mda-7/IL-24与C-myb在Burkitt淋巴瘤中的表达及其相关性研究

目的深入探讨Burkitt淋巴瘤患者瘤组织中Mda-7/IL-24与C-myb的表达水平、相关性及其临床意义。方法收集65例Burkitt淋巴瘤患者的瘤组织及33例正常淋巴结组织;通过免疫组化及Western blot技术检测各组织中Mda-7/IL-24与C-myb蛋白的表达水平,并对Mda-7/IL-24与C-myb表达水平进行相关性分析;收集患者临床资料,分析瘤组织Mda-7/IL-24及C-myb蛋白表达水平与患者年龄、性别、临床分期、是否骨髓浸润、Ecog评分及IPI指数之间的关系;分析瘤组织Mda-7/IL-24及C-myb蛋白表达水平与患者生存期之间的关系,并制作生存曲线。结果与正常淋巴结组织相比,Burkitt淋巴瘤组织中Mda-7/IL-24的表达水平明显降低,而C-myb的表达水平则明显增高;65例Burkitt淋巴瘤患者瘤组织中Mda-7/IL-24与C-myb蛋白表达水平呈明显的负相关(r=-0.474 9);瘤组织低表达Mda-7/IL-24、高表达C-myb的患者其临床分期晚、易骨髓转移、瘤细胞增殖活性强、IPI积分较高,同时患者生存期较短(P<0.05)。结论 Burkitt淋巴瘤组织中Mda-7/IL-24与C-myb的表达水平呈明显负相关,低表达Mda-7/IL-24或高表达C-myb是Burkitt淋巴瘤患者临床预后较差的指标。

血管生成抑制素和IL-7联合治疗的肿瘤抑制效应

目的 探讨采用裸质粒DNA肿瘤内直接注射入方法 ,以观察血管生成抑制素 (Angiostatin) ,和IL 7联合治疗肿瘤的可行性 ,及其可能机制。方法 将构建的血管生成抑制素、IL 7基因真核表达质粒 (每次 10 0 μg/只 ) ,分别或联合注射到接种U14肿瘤细胞 5天后的荷瘤鼠体内 ,以后每隔 7天注射一次 ,共三次。观察荷瘤鼠的存活率、肿块生长情况、以及小鼠整体免疫功能 ,并对肿瘤对照组与联合基因治疗组的肿瘤组织进行病理学及细胞凋亡分析。结果 血管生成抑制素、IL 7、以及两者联合治疗均可不同程度地增加荷瘤鼠的存活率、抑制肿瘤生长和转移、调节免疫功能 ,以联合基因治疗组更显著。病理分析表明联合治疗组肿瘤血管形成显著减少 ,基底部有大量的淋巴细胞浸润 ,肿瘤细胞的凋亡率明显升高。结论 直接裸质粒DNA注射血管生成抑制素和IL 7基因可能成为一种方便、有效的肿瘤治疗方法。

运动性免疫抑制中胸腺IL-7和TGF-β1应答性特征

通过胸腺细胞因子IL-7和TGF-β1及其mRNA进行研究,探讨运动性免疫抑制发生发展过程中胸腺细胞发育的调节机制。将128只8周龄雄性SD大鼠随机分为运动组和对照组,运动组进行递增负荷跑台训练6周,每周6次,周日休息,每次30 min。第1周负荷为10 m.min-1,第2周负荷为20 m.min-1,此后每周增加5 m.min-1,至6周时达40 m.min-1。分别于第0、2、4、6周利用ELISA和FQ-RT-PCR技术测相对安静状态、运动后即刻和运动后3 h IL-7和TGF-β1及其mRNA的表达水平。结果显示:6周递增负荷跑台运动过程中,IL-7和TGF-β1呈现几乎相反的应答性变化:IL-7及mRNA第0周、第2周末运动后明显降低,恢复3 h后升高,呈"V"型应答曲线;第4周末,运动前后没有显著性变化;第6周末,在运动后持续下降。TGF-β1在各周呈现倒"V"型变化,TGF-β1 mRNA对负荷初次应答时运动前后没有明显变化,其它各周呈倒"V"型变化。以上结果说明运动性免疫抑制发生发展中胸腺IL-7下降和TGF-β1升高可能导致胸腺微环境紊乱,从而影响胸腺细胞发育。

Mda-7/IL-24对B细胞淋巴瘤化疗敏感性的影响

目的研究Mda-7/IL-24对B细胞淋巴瘤化疗敏感性的影响并探讨其作用机制。方法构建稳定过表达Mda-7/IL-24的人B表型淋巴瘤Raji和Daudi细胞株,MTS法检测稳定转染Mda-7/IL-24对Raji和Daudi细胞在顺铂、表柔比星及长春新碱作用下化疗敏感性的影响,并计算IC_(50)值;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡水平及胞内罗丹明-123(rhodamine-123)聚集量;RT-PCR及Western blot技术分别从mRNA及蛋白水平检测转染Mda-7/IL-24对,Raji和Daudi细胞表达耐药相关基因MDR1、MRP1及BMI1水平的影响。Western blot技术检测转染Mda-7/IL-24对Raji和Daudi细胞总ERK1/2及p-ERK1/2表达水平的影响。结果在CDDP、epirubicin及VCR作用下,过表达Mda-7/IL-24的Raji和Daudi细胞株增殖水平明显下降,化疗敏感性明显增高,而化疗药物IC_(50)值明显下降,同时,细胞凋亡水平明显增加;过表达Mda-7/IL-24的Raji和Daudi细胞肿瘤耐药相关基因MDR1、MRP1、BMI1、总ERK1/2及p-ERK1/2的表达水平均明显下降,而胞内Rhodamine-123聚集量明显增加。结论转染Mda-7/IL-24可能通过调节ERK途径的活化改变肿瘤多药耐药相关基因的表达,从而促进B细胞淋巴瘤对化疗药物的敏感性。因此Mda-7/IL-24在B细胞淋巴瘤的治疗中可能具有防治多药耐药的作用。

IL-8通过上调Bcl-2的表达和下调caspase-3的表达抑制MCF-7乳腺癌细胞凋亡

目的探讨白细胞介素8(IL-8)对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响及其机制。方法 Western blot法检测MCF-7细胞IL-8受体CXC趋化因子受体1(CXCR1)、CXCR2的表达;反转录PCR、Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞Bcl-2、caspase-3表达的影响;CCK-8法检测(0、40、80)ng/mL IL-8对MCF-7细胞增殖的影响;相差显微镜下观察80ng/mL IL-8处理MCF-7后细胞形态的变化;Western blot法检测80ng/mL IL-8联合信号通路抑制剂10μmol/L PD980590、10μmol/L LY294002或50μmol/L AG490[分别为丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)、磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路抑制剂],共同处理MCF-7细胞后,细胞内Bcl-2蛋白表达的变化;Western blot法检测(0、20、40、80、160)ng/mL IL-8对MCF-7细胞磷酸化p-AKT表达的影响;流式细胞术、反转录PCR以及Western blot法分别检测80ng/mL IL-8联合10μmol/L LY294002共同处理MCF-7细胞后,细胞凋亡以及细胞内Bcl-2、caspase-3表达的变化。结果 IL-8受体CXCR1、CXCR2在MCF-7细胞中均有表达;在IL-8的作用下,MCF-7细胞Bcl-2表达升高,caspase-3表达下降,抗凋亡能力明显增强;IL-8能显著上调MCF-7细胞中p-AKT的表达;PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002能显著抑制IL-8抗MCF-7细胞凋亡的作用,且减少Bcl-2并增加caspase-3的表达。结论 IL-8可显著抑制MCF-7细胞的凋亡,其机制可能与IL-8激活PI3K/AKT信号通路而上调Bcl-2、下调caspase-3的表达有关。

bcr-abl融合基因片段和m IL-7基因双表达载体的构建与表达

利用重组DNA技术构建bcr-ab l融合基因片段和m IL-7基因双表达载体pV bcr-ab l/m IL 7,转染CHO细胞,通过IFA检测bcr-ab l融合基因片段和RT-PCR检测m IL-7基因,以探讨基因的双表达情况。结果表明:成功构建了双表达载体pV bcr-ab l/m IL 7,并检测到bcr-ab l和m IL-7在真核细胞的暂态表达,这为慢性粒细胞白血病bcr-ab l融合基因疫苗的研究提供了新的工具。